早期干预改善宫内缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆能力的效果评价

新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)发病率高，常导致智能迟缓等严重后遗症。对急性期发生的脑损伤尚缺乏有效的治疗方法。有研究发现早期干预可改善宫内缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的脑功能。本研究对宫内HIBD干预组及正常干预组新生大鼠进行早期干预28d，通过“Y”臂迷宫检测学习分辨能力、记忆保持百分率判断干预效果，并观察额皮质和海马CA2区、     

视觉诱发电位监测丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤疗效的研究

视觉诱发电位 (VEP)属脑功能学检查 ,近 10年来国外学者研究认为 ,测试新生儿闪光视觉诱发电位 (F- VEP)以评估评其中枢神经系统功能状态有灵敏反应。关于 VEP在新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)发生早期动态改变特征的报道国内外尚不多见 ,因此本课题建立了缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型 ,并设丹参治疗组 ,对其 F- VEP改变进行研究。一、材料和方法1.研究对象 :选择正常 7日龄、体重 14～ 18g SD新生大鼠 ,雌雄不拘 ,由南京医科大学动物实验中心提供。2 .实验方法 :实验动物分组 :SD新生鼠共 12 0只 ,按同窝随机分为 3组 :假手术组…     

银杏提取物对新生大鼠缺氧缺血性肝损伤的治疗作用

目的　评价银杏提取物 (extract of ginkgo biloba,EGB)对新生大鼠缺氧缺血性肝损伤的治疗作用。　方法　将 4 6只 SD新生大鼠分为 4组 :缺氧缺血组 (n=30 ) ,EGB治疗组 (n=2 4 ) ,生理盐水组 ,假手术组 (n=6 ) ,建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)模型 ,再给氧后 2、2 4、4 8、72、16 8h后分别进行免疫组织化学及组织 HE染色 ,观察不同时间肝组织粘附分子 1(ICAM- 1)的表达、中性粒细胞浸润和肝细胞的形态学变化 ,并腹腔注射梯度剂量的 EGB治疗 ,以生理盐水和段手术作对照。　结果　肝微血管内皮细胞 ICAM- 1的表达于再给氧后 2 4 h免疫反应开始增加 [(5 2 .5±17.0 ) % ],4 8h达高峰 [(76 .5± 11.9) % ](H =2 3.9,P<0 .0 1) ,16 8h恢复正常 [(6 .9± 4 .3) % ],同时中性粒细胞浸润也随之增加 ,在时程上与 ICAM- 1表达同步。 EGB组以 5 0 mg/ (kg· d)的剂量为最佳 ,当再给氧 4 8h后 ICAM- 1免疫阳性内皮细胞数 [(17.5± 14 .9) % ]及中性粒细胞浸润比同时间缺氧缺血组明显降低、肝细胞损伤减轻 (H =2 0 .8,P<0 .0 1;D=87,P<0 .0 5 )。　结论　 ICAM- 1与缺氧缺血后肝组织中性粒细胞浸润密切相关 ,5 0 m g/ (kg· d)的 EGB对新生大鼠缺氧缺血性肝损伤可能有一定保护作用。     

丹参对窒息脑损伤的神经元保护作用

大量研究已证明 ,在新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)中凋亡是迟发性神经元死亡的主要机制 ,通过一些措施 (如药物 )可使神经细胞凋亡过程减弱或停止 ,从而减少神经元的损伤和丢失 ,降低后遗症的发生率。本实验使用流式细胞仪和原位末端标记法测定正常 7日龄大鼠在细胞凋亡高峰期 ,即缺氧缺血后 4 8h[1 ] 以及给予丹参干预后的脑细胞凋亡率 ,以观察丹参的治疗效果。一、材料和方法1.动物和方法 :新生 7日龄 SD大鼠 ,性别不拘 ,体重(15± 2 ) g,共 4 0只 ,由江西医学院医学实验动物中心提供。缺氧缺血性脑病模型的制作 :参照吴婉芳等 [2 ]的方法…     

HPV58型E2蛋白表达纯化与多克隆抗体制备

目的:表达纯化重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型E2蛋白,制备多克隆抗体。方法:构建重组质粒p ET-28b-E2,转化至BL21(DE3)p Lys S中诱导表达,包涵体洗涤后经镍柱亲和层析分离得到纯化目的蛋白。用纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗HPV58型E2蛋白多克隆抗体,ELISA分析多克隆抗体的效价,免疫印迹检测抗体的特异性。结果:表达纯化了重组HPV58型E2蛋白,制备了高滴度和高特异性的多克隆抗体。结论:制备的多克隆抗体可用于对HPV58型E2蛋白进行精细B细胞线性表位鉴定。     

地塞米松对缺氧缺血新生大鼠脑内诱生型一氧化氮合酶基因表达的调节

目的　探讨新生大鼠缺氧缺血后脑内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)基因表达的变化及地塞米松 (DEX)对其的调控作用 ,从而阐明 DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。　方法　建立新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)标准化的动物模型 ,应用快速竞争性逆转录 PCR技术 ,分别对缺氧缺血、DEX预处理后予缺氧缺血、缺氧缺血后即刻予 DEX、DEX加假手术及正常对照 5组新生大鼠的实验 ,对大脑组织中 i NOS m RNA的表达进行半定量分析。　结果　新生大鼠缺氧缺血后 ,缺血侧大脑 i NOS m RNA表达自 6 h开始 ,2 4h达高峰 ,7d时回至基线水平。DEX预处理可以抑制缺血侧大脑 i NOS m RNA的表达 ,而缺氧缺血后即刻注射 DEX对 i NOS m RNA的表达无明显调节作用。　结论　一氧化氮的产生可能在缺氧缺血后脑组织损伤的演变过程中起着重要的病理作用 ,EDX预处理对中枢神经的保护作用部分可能是通过抑制 i NOS m RNA的表达来实现的。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病脑组织氨基酸含量变化及脑活素的治疗作用

兴奋性氨基酸(EAA)在缺氧缺血性脑病(HIE)发病中的地位逐渐引起人们的重视^[1]。近年来，国内在临床上常用脑活素治疗新生儿HIE，作用机制尚不明确。我们在建立新生大鼠HIE动物模型的基础上，采用氨基酸自动分析仪测定脑组织氨基酸含量，结合病理切片和透射电镜观察脑组织病理改变，初步探讨EAA在新生大鼠HIE发病过程中的地位及脑活素的作用机制。     

D-乳酸与缺氧缺血性脑病新生大鼠肠屏障功能的关系

随着危重医学的发展,诸多学者关注胃肠道,尤其关注肠道的屏障功能。但目前针对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠肠屏障功能改变的研究较少。本研究通过测定血浆D-乳酸水平的变化来了解HIE新生大鼠的肠屏障功能,为临床诊治提供理论依据。一、材料和     

沙棘总黄酮对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是新生儿常见疾病，致死、致残率较高。现代药理学研究表明沙棘总黄酮具有阻滞钙离子内流、清除自由基、抗生物膜过氧化等作用。因此，本研究以新生大鼠缺氧缺血性脑病模型，观察沙棘总黄酮对神经细胞的保护作用。     

染色体数目异常滋养层细胞中CENP-I基因的的异常表达

目的:探讨人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常与着丝粒特异性蛋白质CENP-I表达水平的相关性。方法:T-A克隆制备CENP-I、GAPDH定量PCR标准品;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化CENP-I重组蛋白,免疫兔制备抗人CENP-I多克隆抗体;采用FQ-PCR和Western-blot检测23例染色体数目异常的滋养层细胞(实验组)和30例具有正常核型的滋养层细胞(对照组)中CENP-ImRNA和蛋白表达水平。结果:成功制备CENP-I、GAPDHFQ-PCR标准品,表达和纯化CENP-I重组蛋白,获得兔抗人CENP-I多克隆抗体;FQ-PCR和Western-blot结果显示CENP-I在实验组和对照组中均有表达,但实验组中CENP-I的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CENP-I表达的降低可能是导致人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常的原因之一。     

改良神经行为学评分量表评估新生兔神经行为表现的效果

目的 研究改良的神经行为学评估结果量表对新生兔神经行为学评分的效果. 方法 妊娠29 d健康新西兰白兔12只,随机分为3组,每组4只.缺氧缺血25 min组、缺氧缺血28 min组分别阻断孕兔子宫血流25、28 min,对照组不阻断子宫血流.记录新生兔的一般情况.每组活产新生兔随机分为顺向评分亚组、反向评分亚组、改良评分亚组,分别按神经行为学评分量表顺向和反向顺序以及改良的神经行为学评分量表顺向顺序进行评估,记录神经行为学评分结果,比较不同评分方法对评估结果的影响.同时行病理学观察,分析存活新生兔神经行为学得分与缺氧缺血时间和脑细胞凋亡数量的相关性.采用Spearman秩相关检验、单因素方差分析、Kruskal-Wallis H检验、Wilcoxon秩和检验或x2检验进行统计学分析. 结果 对照组和缺氧缺血25、28 min组的死胎率分别为0.0％(0/28)、16.7％(6/31)与37.9％(11/29),x2=21.33,P=0.00;纹状体单位面积内脑细胞凋亡数量逐渐增多[分别为0(0～1)、7(6～10)与25(22～28)个,H=54.39,P＜0.05]；神经行为学得分依次降低[对照组、缺氧缺血25和28 min组相比,姿势:3.00(2.25～3.00)分、2.00(1.00～2.00)分与1.00(1.00～1.00)分,H=38.47;翻正次数:9.00(8.00～9.75)次、4.00(3.00～5.00)次与1.00(0.00～1.00)次,H=52.30;翻正得分:2.90(2.80～2.98)分、2.10(1.90～2.20)分与1.30(1.00～1.40)分,H=53.53;运动能力:3.00(2.00～3.00)分、1.50(1.00～2.00)分与0.00(0.00～1.00)分,H=38.97；吮吸和吞咽协调能力:3.00(2.00～3.00)分、1.50(1.00～2.00)分与1.00(0.00～1.00)分,H=42.87;嗅觉刺激:3.00(3.00～3.00)分、2.00(2.00～2.00)分与1.00(1.00～2.00)分,H=38.43;P均=0.00].反向评分亚组神经行为学得分与顺向评分亚组间存在一定的差异,顺向评分亚组姿势项得分、翻正次数高于反向评分亚组,以对照组和缺氧缺血25 min组孕兔所产新生兔姿势项得分下降最明显[顺向评分亚组与反向评分亚组相比,姿势项:对照组:3.00(3.00～3.00)分与2.00(2.00～3.00)分,T=69.00,P＜0.05；缺氧缺血25 min组:2.00(1.25～2.00)分与1.00(1.00～1.75)分,T=52.00,P＜0.05.翻正次数:缺氧缺血25 min组:4.50(4.00～5.75)次与3.00(2.25～4.00)次,T=47.00,P＜0.05]；反向评分亚组嗅觉刺激项、吮吸和吞咽协调能力项得分略高于顺序评分亚组,但差异无统计学意义(P＞0.05).改良评分亚组各评估项得分与顺向评分亚组相近,表现出高度的一致性(P＞0.05).相关性分析发现,存活新生兔神经行为学评分分别与缺氧缺血时间、纹状体单位面积内脑细胞凋亡数量呈负相关关系(r均＜0,P均＜0.05),其中顺向评分亚组和改良法评分亚组新生兔神经行为学各项得分与缺氧缺血时间、纹状体区域单位面积内凋亡的脑细胞数量间相关系数接近,相关性强(｜r｜≈0.8,P均＜0.05). 结论 对新生兔反复被动运动检查可导致低估新生兔的神经行为学评估结果；经改良的神经行为学量表可准确反映缺氧缺血性脑损伤后新生兔的神经行为学损害程度.     

精子蛋白32(sp32)/OY-TES-1在生精细胞中的分布及其抗体的血清学检测

目的:了解精子蛋白(sperm protein32,sp32)/OY-TES-1蛋白在生精细胞中的分布及抗sp32/OY-TES-1抗体在不育症患者血清中的出现情况。方法:用重组表达的OY-TES-1麦芽糖融合蛋白免疫新西兰白兔,制备sp32/OY-TES-1多克隆抗体,且经纯化鉴定后用于检测人精子和大鼠正常睾丸组织;用ELISA试验,检测不育症患者和正常人血清中抗sp32/OY-TES-1抗体。结果:①免疫后的兔血清含高效价的sp32/OY-TES-1多克隆抗体,并可与OY-TES-1麦芽糖融合蛋白特异性地结合;②免疫组化染色显示人精子头部、大鼠精子和精子细胞中呈免疫反应阳性。③ELISA检测结果显示76例正常人血清中无抗sp32/OY-TES-1抗体,而不育症患者血清其抗体的阳性率高达70.77%(46/65),并有较高的抗体水平。结论:本实验制备的sp32/OY-TES-1多克隆抗体可用于大鼠睾丸生殖细胞的检测,为后续用大鼠进行sp32/OY-TES-1的相关研究奠定了基础。sp32/OY-TES-1特异性地表达于精子细胞和精子,其抗体的出现意义与不育症的关系有待进一步研究。     

两组生源大学生入学时的血清抗精子抗体检测

目的:了解外招生源和内地生源的大学生入学体检时的血清抗精子抗体的状况。方法:640名大学新生按生源和性别分为4组:外招生男性组96例(A组),女性组115例(B组);内地生男性组256例(C组),女性组173例(D组)。结合新生入学体检获取血清,应用浅盘精子凝集试验(SAT)、浅盘精子制动试验(SIT)和间接免疫珠试验(iIBT),检测血清抗精子抗体。结果:A、B和D组分别检出SAT抗精子抗体阳性各2例,C组检出4例;这10例iIBT的免疫珠附着率为20%-55%。A-D组的SAT抗体阳性率分别为2.1%,1.7%,1.6%和1.2%。B组检出SIT阳性1例。A组与C组、B组与D组的SAT抗体阳性率比较无显著性差异(P>0.05)。结论:外招生源和内地生源的大学生,入学时可检出血清抗精子抗体,需对大学生开展生殖健康和性健康的教育。     

Caspase-3 持续激活时程与新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的　探讨Caspase 3在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后期的表达情况及其与神经元凋亡的关系。　方法　新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型 ,在损伤后不同时间 (2、3和 4周 )随机分为 3组 ,每组每个时间点各 5只鼠。用半定量RT PCR观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后期Caspase 3mRNA表达及用免疫组化方法观察Caspase 3蛋白表达情况 ;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡情况。　结果　缺氧缺血后 3周时Caspase 3mRNA水平为 (0 .771± 0 .0 74 ) ,仍高于对照组的(0 .6 2 0± 0 .0 38,P <0 .0 1) ,Caspase 3蛋白表达 (平均吸光度A值 0 .375± 0 .0 38) ,亦强于对照组(0 .35 6± 0 .0 2 0 ) (P <0 .0 5 )。缺氧缺血后 4周时 ,缺氧缺血性脑损伤组与对照组比较 ,Caspase 3mR NA表达及其蛋白表达差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。HI后 3周时左脑凋亡细胞数为 (8.0 0± 1.0 0 )个 ,与正常组 (4 .2 0± 1.30 )个比较 ,差异有显著性 (t=5 .17,P <0 .0 1) ;在HI后 4周时左脑凋亡细胞数 (4 .0 0± 1.0 0 )个 ,与对照组比较差异无显著性 (t=0 .2 7,P >0 .0 5 )。HI后 3周时脑组织DNA断裂百分率为 (8.19± 2 .4 9) % ,与正常组 (3.0 4± 0 .12 ) %比较 ,DNA断裂百分率之间差异有显著性 (t =4 .6 2 ,P <0 .0 5 ) ,而HI后 4周时则差异无显     

新生儿缺氧缺血性脑病血管活性因子变化及其临床意义

1999年 5月～ 2 0 0 0年 6月对 40例缺氧缺血性脑病(HIE)患儿的脐血与外周血内皮素 1(ET- 1)、降钙素基因相关肽 (c GRP)、C型利钠肽 (CNP)、一氧化氮 (NO)等血管活性因子的变化进行了动态观察 ,并探讨它们对 HIE脑血流动力学的影响。一、对象和方法1.对象 :HIE组 40例 ,其中轻     

缺氧缺血致脑白质损伤的新生大鼠脑中ephrinB2和EphB4表达的研究

目的评估缺氧缺血诱导的脑白质损伤大鼠模型脑组织中的微血管密度和ephrinB2及其受体EphB4表达的水平。方法将新生3日龄Wistar大鼠60只随机分为实验组和假手术组各30只。实验组行右侧颈总动脉永久性结扎后给予氮氧混合气体(94%N_2+6%O_2)4h;假手术组只分离右侧颈总动脉但不结扎并常规给氧。4d后分别测定第7日龄大鼠脑组织中微血管密度以及ephrinB2和EphB4表达的水平。结果实验组大鼠脑组织中的微血管密度、ephrinB2和EphB4的水平高于假手术组;假手术组大鼠脑组织中表达的ephrinB2和EphB4的百分比相近,实验组大鼠脑组织中ephrinB2的表达高于EphB4。结论缺氧缺血诱导的脑白质损伤后有新生血管生成,并且动脉多于静脉。     

围产期窒息幼兔多器官功能损伤的观察

围产儿窒息是造成围产儿死亡的主要原因之一。为探讨围产儿窒息时 ,其心、脑、肝、肾等重要器官的病理学改变 ,以及病变程度与窒息程度的关系 ,我们对新西兰白兔围产期新生幼兔窒息模型进行了研究 ,现报道如下。一、材料与方法1.实验动物 :足月妊娠新西兰白兔 8只 (由中山医科大学动物实验中心提供 ) ,体重 (45 0 0± 5 0 0 )ｇ ,每只孕兔产幼兔6～ 8只 ,只留用 2 4只体重 60～ 80ｇ幼兔作为实验观察对象 ,并分正常组、轻度窒息组、重度窒息组 3组 ,每组各 8只幼兔。新生幼兔窒息模型标准 ,见表 1。2 新生幼兔窒息模型的制作 :轻度窒息模型…     

外源性神经节甘脂对缺氧缺血性脑损伤新生鼠学习记忆的增强作用

目的　探讨外源性神经节甘脂 (gangliosides,GAs)对缺氧缺血性脑损伤 (hypoxic- is-chem ic brain damage,HIBD)新生大鼠学习记忆能力的影响。　方法　选用 7日龄 SD大鼠 ,结扎右侧颈总动脉 ,吸入氧浓度为 8%的氮氧混合气体 ,制作新生大鼠 HIBD模型。制模后的大鼠随机分为三组 :实验组 1,神经节甘脂 5 0 mg/ kg,腹腔注射 ,12 h 1次 ,共 4次 ,以后 30 mg/ (kg· d) ,连续注射 2周 ,(简称 GAs× 2周组 ) ;实验组 2 ,神经节甘脂 5 0 mg/ kg,腹腔注射 ,12 h 1次 ,共 4次 ,以后注射等量生理盐水 2周 ,(简称 GAs NS组 ) ;对照组 ,注射等量的生理盐水。采用三等分迷宫检测大鼠的分辨学习能力和记忆保存能力 ,并观察大鼠的活动状态和交互行为 (此时大鼠日龄为 2 4d)。最后进行脑组织病理检查。　结果　 (1)大鼠达到学会标准所需的训练次数 :对照组 (39± 17)次 ,GAs NS组 (32±14)次 ,GAs× 2周组 (2 0± 13)次 ;记忆保存能力测试结果为 :对照组 (6 2± 10 ) % ,GAs NS组(6 4± 11) % ,GAs× 2周组 (70± 9) %。 GAs× 2周组大鼠的学习记忆能力好于 GAs NS组和对照组(P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。 (2 ) GAs× 2周组在三臂迷宫中的活动较对照组和 GAs NS组少。 (3)实验组和对照组交互行为差异无显著性 ;(4)三组大鼠海马     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤海马CA1区Caspase-3激活的影响

目的　探讨重组人促红细胞生成素 (rhEPO )对新生鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的保护作用及对海马CA1区Caspase 3激活的影响。　方法　将 7日龄SD大鼠分为缺氧缺血模型组 (n= 11)、rhEPO治疗组 (n =11)和假手术对照组 (n =10 ) ,模型组和治疗组建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型。观察模型组和治疗组缺氧后 0、6、12、2 4h不同时间点自发左旋、夹尾左旋、夹尾尖叫现象。用免疫组织化学方法检测活化的Caspase 3的表达 ,观察Caspase 3阳性细胞在脑组织内分布情况 ,计算各组海马CA1区单位面积内阳性细胞数 (个 / 1mm)。　结果　模型组 2只、治疗组 1只在缺氧过程中因持续抽搐死亡。缺氧后 0h两组动物均出现自发左旋 (治疗组 10 / 10 ,模型组 9/ 9) ,2 4h治疗组自发左旋发生率明显减少 (治疗组 1/ 10 ,模型组 6/ 9,P =0 .0 198)。免疫组化显示Caspase 3阳性细胞在对照组脑组织内散在分布 ,模型组和治疗组在海马、大脑皮层较为密集。模型组CA1区阳性细胞数显著高于对照组 (41.3 8± 2 .0 9vs 10 .52± 2 .70 ,P <0 .0 1)。治疗组阳性细胞数显著低于模型组(41.3 8± 2 .0 9vs 2 2 .63± 3 .17,P <0 .0 1)。　结论　Caspase 3在新生鼠HIBD中活性显著增高 ,应用rhEPO能有效抑制Caspase 3激活 ,提示rhEPO通过抑制Casp     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织细胞红蛋白的表达

目的 探讨细胞红蛋白(eytoglobin,CYGB)在7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-isehemie brain damage,HIBD)脑内的表达变化.方法 健康7日龄SD大鼠70只,按简单随机抽样法随机取50只制备HIBD模型作为HIBD组,再随机分为HIBD后0、4、12、24和48 h组,每组10只;假手术组10只,只分离左颈总动脉,不结扎,也不放入缺氧箱;另10只不做任何处理作为对照组.假手术组术后即断头取脑,对照组同时取脑,HIBD组在相应时间点取脑.采用免疫组织化学法和Western印迹法从蛋白水平分析CYGB在脑组织中的分布及表达特点. 结果 (1)免疫组织化学染色显示CYGB主要表达于大脑皮质、丘脑和海马神经元的胞浆,HIBD组CYGB表达数量及染色强度均高于对照组,其中缺氧24、48 h组表达最强.(2)Western印迹结果显示,HIBD后0、4、12、24和48 h CYGB平均吸光度分别为261.5土5.0,263.0土5.4,464.3±6.8,522.8±11.2,512.9±7.9,明显高于假手术组(117.6±7.0)及对照组(116.6±9.0),P<0.01.其中缺氧0和4 h组明显高于对照组(P<0.01);缺氧12 h组的表达明显高于缺氧0、4 h组(P<0.01);缺氧24、48 h组明显高于缺氧12 h组(P<0.01);缺氧0、4 h组间,缺氧24、48 h组间差异无统计学意义(P>0.05). 结论 7日龄新生大鼠HIBD后脑内CYGB表达明显增强,并且随着缺氧缺血发展呈现时相性变化,提示其可能在脑缺氧缺血的适应性调节过程中起重要作用.