关节内注射糖皮质激素对关节软骨影响的实验研究

目的：探讨关节内注射糖皮质激素的剂量与给药次数对关节软骨的影响。方法：选择健康白兔25只并随机5组,分别向关节内注射0.1ml,0.2ml及0.4ml醋酸泼尼松龙2次或4次。对照组膝关节内注射等容量的生理盐水,注射完成2周后对动物关节软骨进行组织学观察及电镜检查,结果：实验组关节软骨表面不规则、缺损、裂隙及结构破坏,软骨细胞数目增多或减少以及软骨异染性的降低。潮线的完整性破坏。软骨细胞超微结构发生改变,包括软骨细胞肿胀。水肿变性及坏死。结论：关节软骨的损伤程度与注射糖皮质激素的剂量及给药次数有关。     

膝关节腔内注射皮质类固醇对关节软骨损害的研究──病理组织学和超微结构观察

３０只健康新西兰白兔，随机分为两组，每组１５只。Ａ组右膝关节腔内注射醋酸强的松龙，每次７．５ｍｇ／ｋｇ，每周１次；Ｂ组右膝关节内注射生理盐水，每次０．３７５ｍｌ／ｋｇ，每周１次。每组分别于第３、５、７、９、１１周的第１天，各取３只动物，在光镜下观察双侧膝关节和股骨头软骨标本有无病理组织学改变，并在第５、９、１１周加作超微结构观察。结果显示，Ａ组用药２次后即见双侧股骨头、膝关节软骨下区髓腔内脂肪细胞增多，造血组织减少。用药６次后可见右侧膝关节软骨组织出现灶性溶解、坏死。电镜下可见软骨细胞核固缩明显，胞浆内脂滴增多、细胞器坏死、溶解，Ｂ组所有标本未见组织学和超微结构改变。结果提示，关节内注射皮质类固醇对关节软骨的损害是肯定的，且随给药次数的增加而加重。故而，临床疼痛治疗工作中，关节内注射皮质类固醇宜免用。     

膝关节腔内注射皮质类固醇对关节软骨损害的研究——病理组织…

３０只健康新西兰白兔，随机分为两组，每组１５只，Ａ组右膝关节腔内注射醋酸强的松龙，每次７．５ｍｇ／ｋｇ，每周１次，Ｂ组右膝关节内注射生理盐水，每次０．３７５ｍｌ／ｋｇ，每周１次，每组分别于第３，５，７，９，１１周的第１天，各取３只动物，在光镜下观察双侧膝关节和股骨头软骨标本有无病理组织学改变，并在第５，９，１１周加作超微结构观察，结果显示Ａ组用药２次后即双侧股骨头，膝关节软骨下区髓内脂肪细胞增多，     

关节内注射富血小板血浆对膝关节软骨退行性变的治疗作用

目的富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)能促进软骨细胞增殖和修复软骨缺损,通过比较膝关节退行性变患者关节内注射PRP及透明质酸钠的疗效,分析PRP治疗关节软骨退行性变的安全性和可行性。方法于2010年1月-6月收治的膝关节软骨退行性变患者中,选择符合标准的30例30膝患者纳入研究。根据注射药物不同,将患者随机分为PRP组(试验组)和透明质酸钠组(对照组),每组各15例。两组患者性别、年龄、体重指数、Kellgren-Lawrence分级等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。试验组患者抽取自体静脉血制备PRP后,于关节腔内均匀注射3.5 mL PRP;对照组注射2 mL透明质酸钠。每3周注射1次,3次为一疗程。记录两组患者注射后不良反应发生情况,并采用国际膝关节文献委员会(IKDC)评分、美国西部Ontario与McMaster大学骨关节炎指数(WOMAC)评分及Lequesne指数评定关节功能。结果两组患者均获随访6个月。两组治疗后IKDC评分、WOMAC评分及Lequesne指数与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组治疗后3、4、6个月间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组治疗后6个月各评价指标较3、4个月差,但差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后3个月及4个月,两组IKDC评分、WOMAC评分及Lequesne指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);6个月时,试验组各指标均优于对照组(P<0.05)。试验组患者12例31次出现不良反应,对照组12例30次;两组不良反应起始时间、终止时间及持续时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论关节内注射PRP治疗关节软骨退行性变安全,可缓解疼痛、肿胀等症状,提高患者生活质量,但需要大样本长期随访观察进一步验证其安全性和远期疗效。     

Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学观察

目的:观察Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学变化.方法:将28只成年雄性新西兰兔制作膝关节缺损模型并随机分成2组,A组在缺损局部植入Ⅱ型胶原海绵,B组不植入以作对照.于术后2、4、6、8、10、12周分别作HE、Safranin O染色及S-100蛋白检测.结果:(1)HE染色显示A组2周后即出现新生软骨细胞,12周后新生软骨组织完全填满缺损区并与周围组织整合,而B组直至术后第12周仍由纤维组织所填充;(2)S-100蛋白免疫组化检测结果显示A组新生软骨细胞具有正常兔软骨细胞的表型;(3)Safranin O染色结果显示A组新生软骨细胞具有分泌软骨基质的功能.结论:Ⅱ型胶原具有较强的诱导软骨细胞生长的能力,其诱导生长的新生软骨具有正常透明软骨的表型和功能.     

Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学观察

目的:观察Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学变化。方法:将28只成年雄性新西兰兔制作膝关节缺损模型并随机分成2组,A组在缺损局部植入Ⅱ型胶原海绵,B组不植入以作对照。手术后2、4、6、8、10、12周分别作HE、Safranin O染色及S-100蛋白检测。结果:(1)HE染色显示A组2周后即出现新生软骨细胞,12周后新生软骨组织完全填满缺损区并与周围组织整合,而B组直至术后第12周仍由纤维组织所填充;(2)S-100蛋白免疫组化检测结果显示A组新生软骨细胞具有正常兔软骨细胞的表型;(3)Safranin O染色结果显示A组新生软骨细胞具有分泌软骨基质的功能。结论:Ⅱ型胶原具有较强的诱导软骨细胞生长的能力,其诱导生长的新生软骨具有正常透明软骨的表型和功能。     

Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学观察

目的：观察Ⅱ型胶原海绵修复兔膝关节软骨缺损的组织学变化。方法：将28只成年雄性新西兰兔制作膝关节缺损模型并随机分成2组，A组在缺损局部植入Ⅱ型胶原海绵，B组不植入以作对照。于术后2、4、6、8、10、12周分别作HE、Safranin O染色及S-100蛋白检测。结果：（1）HE染色显示AXEG 2周后即出现新生软骨细胞，12周后新生软骨组织完全填满缺损区并与周围组织整合，而B组直至术后第12周仍由纤维组织所填充；（2）S-100蛋白免疫组化检测结果显示A组新生软骨细胞具有正常兔软骨细胞的表型；（3）Safranin O染色结果显示A组新生软骨细胞具有分泌软骨基质的功能。结论：Ⅱ型胶原具有较强的诱导软骨细胞生长的能力，其诱导生长的新生软骨具有正常透明软骨的表型和功能。     

透明质酸酶对兔耳软骨的组织学影响

目的探索透明质酸酶(HAase)对兔耳软骨组织糖胺聚糖(GAGs)含量的早期影响。方法使用不同浓度的HAase(75、150、300U/ml)及同体积的生理盐水分别注入兔耳皮下,在注射后第3天及第7天,分别对耳软骨进行阿利蓝染色,并采用1-9-二甲基亚甲基蓝光度法和双抗体夹心ABC-ELISA法测定GAGs含量[包括透明质酸(HA)和硫化糖胺聚糖(sGAG)两部分],分析各组GAGs含量的变化。结果注射后第3天和第7天,HA和sGAG含量分别从低酶浓度组到高酶浓度组大体呈递减趋势。其中,第3天:HA含量在生理盐水组与中、高浓度酶组间比较,以及低浓度组与高浓度酶组间比较,差异均有统计学意义(P0.05);sGAG含量仅在生理盐水组与其他各组相比,差异有统计学意义(P0.05)。第7天:HA含量仅在生理盐水组与其他各组相比,差异有统计学意义;sGAG含量仅在高浓度酶组分别与生理盐水组、低浓度酶组间相比,差异有统计学意义(P0.05)。在相同浓度下,HA和GAGs含量在第7天均高于第3天,其差异有统计学意义(P0.05)。结论早期HAase能够明显降低兔耳软骨中GAGs(包括HA和sGAG)的含量。     

关节内注射透明质酸钠预防兔骨关节炎的实验研究

本实验以成年新西兰兔为实验对象，观察透明质酸钠关节内注射预防骨关节炎的效果。以Ｈｕｌｔｈ法建立膝关节骨关节炎模型，术毕及术后每隔１周关节内注射１％透明质酸钠１ｍｌ，分别于术后４周、８周、１２周处死动物，作大体标本手术显微镜观察并取股骨内髁软骨标本进行光镜及透射电镜观察。结果显示实验组之骨关节炎改变较对照组明显减轻。这一结果提示外源性透明质酸钠能有效地减轻关节软骨的退变，降低关节手术后创伤性骨关节炎的发生率。     

组织工程软骨修复兔关节软骨缺损的初步研究

目的 探讨运用组织工程软骨植入修复兔胫骨平台外侧髁全关节软骨浅层缺损的可行性。方法 取2周龄乳兔软骨细胞体外培养传代至第3代后，与人胎盘I型胶原蛋白海绵复合后植入成年兔的胫骨体平台外侧髁浅层完全软骨缺损区，并设立空白对照组，分别于术后4、12和24周取材，观察修复效果。结果 实验组术后4周缺损表面未见明显的新生软骨形成；12周，缺损表面有少量的新生软骨形成，组织学切片上可见软骨细胞呈边缘不规则的，小蜂窝状结构，软骨细胞周围有软骨陷窝形成；24周，缺损表面的新生软骨较4、12周的新生软骨明显，表面光滑，且与周围组织结合紧密，但仍存在部分缺损尚未修复。组织学切片上可见软骨陷窝形成，并分泌甲苯胺蓝异染的软骨基质。面对照组则均未见明显的修复。结论 制成的组织工程软骨对兔胫骨平台软骨浅层完全缺损有修复作用，但不能完全修复缺损。     

软骨脱细胞基质修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的观察软骨脱细胞基质对兔膝关节软骨缺损的修复作用。方法取兔膝关节软骨片进行脱细胞处理,并通过HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色、扫描电子显微镜评价软骨脱细胞的程度。对兔膝关节软骨面造成直径4 mm、深3 mm骨软骨全层缺损,根据是否在缺损处加入脱细胞软骨分为实验组和对照组,12周后通过HE染色、番红固绿染色来观察膝关节缺损的修复程度。结果 HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色、扫描电子显微镜结果验证了软骨几乎完全脱去细胞和DNA,并基本保留了糖胺聚糖(GAG)和Ⅱ型胶原的含量,为细胞的长入提供了良好的环境。手术12周后实验组缺损部位较对照组修复完整,HE染色、番红固绿染色可见骨与软骨分界明显,连接完整,且新生软骨有较高的GAG含量。结论软骨脱细胞基质对于兔膝关节软骨缺损有一定的修复作用。     

组织工程化软骨修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的 评估同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层软骨缺损的有效性。方法分离收集成年新西兰大白兔软骨细胞进行体外培养。建立双侧兔膝关节软骨缺损模型，用去端肽胶原（atelocollagen）凝胶与所培养的异体兔关节软骨细胞共同植入兔膝关节软骨缺损处，并设对照组。分别于手术后4周、8周观察大体标本以及组织学修复结果，并进行Wakitan的评分，评估此方法的有效性。结果大体观察结果表明，与对照组相比，实验组缺损处由软骨组织修复而对照组缺损处由纤维样组织填充。组织学观察可以见到实验组关节软骨缺损处有密集的软骨细胞而对照组关节缺损处只有纤维细胞无软骨细胞。结论通过短期观察表明以同种异体软骨细胞-去端肽胶原复合物修复全层软骨缺损的方法是有效可行的，为其进一步临床应用提供了参考。     

组织工程软骨对兔膝关节胫骨平台浅层全关节软骨缺损的修复作用

目的探讨组织工程软骨对兔膝关节胫骨平台外侧髁浅层全关节软骨缺损的修复作用，并检测其修复组织的软骨类型。方法取2周龄乳兔软骨细胞体外培养传代至第3代后，与人胎盘Ⅰ型胶原蛋白海绵复合后植入成年兔的胫骨平台外侧髁完全软骨缺损区，并设立空白对照组，分别于术后4、12、24周取材。观察修复效果。运用天狼星红染色检测Ⅰ型胶原，Ⅱ型胶原单克隆抗体检测Ⅱ型胶原的表达。结果实验组术后4周缺损表面未见明显的新生软骨形成，组织学切片上少数几个呈上皮样生长的软骨细胞，苏木素-伊红（HE）染色胞浆呈深蓝色，周围软骨基质染色成浅蓝色；12周，缺损表面有少量的新生软骨形成，组织学切片上可见软骨细胞呈边缘不规则的，小蜂窝状结构，软骨细胞周围有软骨陷窝形成；24周，缺损表面的新生软骨较4、12周的新生软骨明显，表面光滑，且与周围组织结合紧密，但仍存在部分缺损尚未修复，组织学切片上可见软骨细胞呈边缘不规则的，多层细胞的蜂窝状结构，软骨细胞周围有软骨陷窝形成，并分泌甲苯胺蓝异染的软骨基质。而对照组则均未见明显的修复；随着术后时间的延长，Ⅰ型胶原的表达呈逐渐减弱的趋势，而Ⅱ型胶原的表达呈逐渐增强的趋势。结论该方法制成的组织工程软骨对兔胫骨平台外侧髁全层软骨缺损有修复作用，运用该方法不能完全修复兔胫骨平台外侧髁软骨完全缺损；形成的新生软骨为透明软骨样组织。     

生长因子促成年兔关节软骨细胞增殖的研究

目的　研究促进成年兔关节软骨细胞迅速增殖的方法。方法　将体外培养 2 4～ 2 8月龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞中加入不同浓度的胰岛素样生长因子 - (IGF- )、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)及 IGF- b FGF联合应用。于 2 4、4 8及 72小时分别进行 MTT检测软骨细胞的成活数 ;检测传 3代后各组软骨细胞的总增殖倍数 ;第 14天后 ,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的增殖倍数 ,观察 IGF- 、b FGF及 IGF- b FGF联合应用对成年兔关节软骨细胞各时间点的促增殖作用。结果　 1施加不同浓度的 IGF- 、b FGF或两者联合应用后各时间点软骨细胞活细胞数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ;2传 3代后 ,三组总增殖倍数也都明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,且两种因子联合应用 ,增殖倍数明 显比应用单个因子时高 ,有统计学意义 (P<0 .0 1) ;3培养 14天后 ,增殖指数明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,两种因子联合应用时 ,增殖指数明显比应用单个因子时高 (P<0 .0 5 ) ;而施加两次因子时 ,增殖指数比施加一次因子时高 (P<0 .0 5 )。结论　 IGF- 、b FGF对成年兔关节软骨细胞有明显的促增殖作用 ,两者之间有协同效应。     

软骨生长因子对兔关节软骨缺损修复作用的实验研究

软骨生长因子(cartilage-derived growth factor，CDGF)是能促进软骨细胞生长，加速骨基质合成的类似于碱性成纤维细胞因子(bFGF)的碱性蛋白^[1]。在体外培养兔软骨细胞中，CDGF能以剂量依赖性的方式促进软骨细胞增殖和胶原的合成^[2]。然而生长因子若没有载体的保护，易被稀释或水解，最终失去生物学活性。我们以新西兰大白兔为实     

中间纤维对兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响

目的 观察细胞骨架中间纤维破坏对培养的兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响.方法 1个月龄新西兰白兔,无菌条件下切取双膝关节软骨,酶解法分离软骨细胞,接种于6孔板培养待细胞贴壁后弃去培养液并随机分为2组.对照组用DMEM/F12正常培养,中间纤维破坏组(简称IF破坏组)利用含5 mmoL/L丙烯酰胺的DMEM/F12培养,使细胞骨架中间纤维破坏.分别在换液后第4天和第7天以阿尔新蓝法检测2组细胞上清液中糖胺多糖(GAG)含量,同时检测上清液中羟脯氨酸含量以评估2组细胞胶原的合成量.结果 两组软骨细胞在换液后第4天和第7天时上清液中GAG含量差异无统计学意义(P>0.05);但2组上清液中GAG含量均随培养时间的延长而升高(P<0.05).IF破坏组上清液中羟脯氨酸含量在换液后第4天时与对照组差异无统计学意义(P>0.05),而第7天时明显低于对照组(P<0.05);对照组第7天上清液中羟脯氨酸含量较第4天有增高趋势,但统计学检验差异无统计学意义(P>0.05),而IF破坏组第7天上清液中羟脯氨酸含量与第4天相同.结论 软骨细胞GAG的合成具有时间累积效应,破坏中间纤维对软骨细胞GAG的合成没有影响,而破坏中间纤维可降低离体培养的关节软骨细胞羟脯氨酸的合成,表明中间纤维在软骨细胞胶原的合成中有着重要作用.     

关节内骨折软骨修复的实验研究

在27只成年狗的股骨内髁造成关节内骨折,分组给予加压或不加压、加外固定或不加外固定治疗。术后定期取材,用光镜、透射及扫描电镜等观察关节内骨折软骨断端的修复过程、修复组织性质及近骨折线处软骨对损伤的反应。结果表明:软骨缺乏自身修复能力;加压固定只能使软骨断端产生被动粘合;关节内骨折后既软骨有细胞的退变与坏死又有细胞的代谢增加及细胞的增殖;来自髓腔的修复组织既使在光镜下类似透明软骨,在电镜下也为纤维软骨;关节制动,短期细胞出现代谢抑制,久之出现退变。     

利用脂肪干细胞构建软骨修复兔膝关节软骨缺损的初步研究

目的 利用兔同种异体软骨脱细胞基质支架和脂肪干细胞体外构建组织工程软骨,探讨其修复关节软骨损伤的可行性.方法 将新西兰大白兔的脂肪干细胞与软骨脱细胞基质支架复合,于软骨细胞方向诱导培养基中培养两周,构建组织工程软骨.兔24只随机分为A、B、C 3组, A组关节软骨缺损处置入经诱导的脂肪源干细胞复合软骨基质支架, B组缺损处只置入软骨基质支架, C组软骨缺损处不做任何处理.分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化染色和透射电镜检测.结果 A组软骨缺损处被类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色阳性;电镜下可见软骨陷窝内有细胞结构存在,且有大量均匀颗粒状细胞分泌基质成分存在,细胞周围大量胶原纤维.B组软骨缺损处为纤维组织状物填充,C组软骨缺损处无修复组织填充.结论 脂肪干细胞与软骨脱细胞基质复合并向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力.     

骨髓基质细胞修复兔关节软骨的实验研究

目的　研究骨髓基质细胞修复兔关节软骨的可行性。方法　取自体骨髓基质细胞体外培养扩增 ,聚乳酸吸附骨髓基质细胞植入兔膝关节软骨负重 (内髁 )和非负重区 (外髁 )缺损内 ,观察 4、 8、 12周后软骨缺损的修复情况 ,并对组织切片评分。结果　 8、 12周后 ,骨髓基质细胞在负重区缺损内可以形成透明软骨 ,组织评分接近正常软骨优于对照 ,非负重区内没有形成透明软骨。结论　骨髓基质细胞可以修复关节软骨缺损 ,摩擦和压应力是成软骨的重要条件。