两种造模方式对COPD大鼠肺泡巨噬细胞microRNA表达的影响

目的 通过烟熏加气管内注入内毒素法与单纯烟熏法制备大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,比较两种造模方式的大鼠肺泡巨噬细胞微小RNA(miRNAs)的表达差异.方法 60只雌性Wistar大鼠随机均分为对照组(Ⅰ组、Ⅱ组)、烟熏加气道内内毒素滴注组(模型Ⅰ组)、单纯烟熏组(模型Ⅱ组),采用肺部CT、肺功能检测和肺组织病理学方法进行模型鉴定.分离肺泡巨噬细胞提取总RNA,行微阵列基因芯片分析,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证,比较两种造模方式中大鼠肺泡巨噬细胞miRNAs的表达差异.结果 模型Ⅰ组、Ⅱ组胸部CT、肺功能检测结果和肺组织病理均符合COPD的特征.与对照Ⅰ组相比,模型Ⅰ组肺泡巨噬细胞let-7b-3p、miR-675-5p、miR-376c-3p表达显著下调,未发现有miRNAs显著上调.与对照Ⅱ组比较,模型Ⅱ组let-7b-3p、miR-675-5p表达显著下调,miR-200b-3p、miR-665、miR-344b-1-3p、miR-34c-5p、miR-34b-5p、miR-99b-5p、miR-129-1-3p、miR-3557-5p、miR-331-5p、miR-493-5p、miR-200a-3p共11种miRNAs表达显著上调.结论 两种方法均造模成功,但其肺泡巨噬细胞miRNAs表达差异显著.单纯烟熏后miRNAs表达变化趋势与人类肺泡巨噬细胞miRNAs表达变化趋势相近,进行COPD肺泡巨噬细胞相关炎症机制研究时推荐选择单纯烟熏模型.     

异常高氡温泉周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA的表达

目的 探讨四川省若尔盖县降扎乡异常高氡温泉对周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA表达的影响.方法 获取高氡温泉及对照地区居民外周血样,用实时RT-PCR检测肺癌相关基因( p53、k-ras)及血浆中相关miRNA(let-7a、miR-34a/b)的表达,用Western blot检测靶蛋白p53和k-ras的表达.结果 高氡温泉周围居民p53和k-ras基因mRNA表达分别是对照组的0.97和1.33倍,但差异无统计学意义(t=0.13、-1.12,P＞0.05);靶蛋白p53和k-ras的表达与基因表达变化趋势一致,分别是对照组的0.7倍和1.23倍,(t=0.72、0.46,P＞0.05).高氡组let-7a与对照相比有下降趋势(t=1.63,P＞0.05).值得注意的是,与对照组相比,高氡组miR-34a和miR-34b明显高表达(t=-3.20、-3.32,P＜0.05).结论 通过检测p53和k-ras基因以及miRNA的变化,推测高氡温泉周围居民受到了辐射损伤.     

X射线诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的适应性反应及相关miRNA筛选的研究

目的 研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选适应性反应相关的微RNA（miRNA）。 方法 将NSCLC A549细胞分为6组,包括 50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy）,前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射,培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射,20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA,并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果 50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%,低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%,且差异均有统计学意义（t=10.680、8.006,均P<0.01）。与20 Gy照射组相比,50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR-193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示,差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示,靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示,miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论 X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应,并筛选到一组共同差异表达的miRNA,可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用,有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。     

模拟失重下氧化应激对EA.hy926细胞miRNA表达谱的影响及生物信息学分析

目的探索模拟失重条件下EA.hy926细胞氧化应激后microRNAs(miRNAs)表达谱的变化及生物学意义。方法 EA.hy926细胞分为对照组(Con组)、对照氧化应激组(Con+H2O2)、模拟失重组(MG组)和模拟失重后氧化应激组(MG+H2O2),采用Illumina HiSeq 2500平台开展miRNAs测序并筛选差异表达miRNAs。筛选出的miRNAs以qRT-PCR进行验证,对验证具有显著差异表达的miRNAs进行靶基因预测、靶基因Gene Ontology(GO)功能富集分析、KEGG信号通路分析以及STRING蛋白互作分析。结果模拟失重下氧化应激导致EA.hy926细胞内miRNAs表达谱发生改变。qRT-PCR结果显示,与Con+H2O2组相比,MG+H2O2组细胞内hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-200c-3p表达增加,与miRNA测序结果一致。GO及KEGG通路显著性富集分析结果显示,hsa-miR-29b-3p靶基因显著富集于细胞外基质等生物学过程及局部黏附信号通路,hsa-miR-200c-3p靶基因显著富集于调控细胞代谢过程等生物学过程及miRNA癌症通路等信号通路。蛋白互作分析结果表明,hsa-miR-29b-3p靶基因中COL家族蛋白处于互作关键位置,hsa-miR-200c-3p靶基因中RHOA处于互作关键位置。结论模拟失重下氧化应激可导致EA.hy926细胞miRNAs表达出现显著差异,其中hsa-miR-29b-3p和hsa-miR-200c-3p可通过对靶基因及其信号通路调节对内皮细胞功能发挥调控作用。     

γ射线照射BEP2D细胞诱导表达的外泌体miRNA的鉴定和功能生物信息学分析

目的 识别鉴定γ射线照射细胞外泌体中放射诱导表达的miRNA分子,为揭示放射损伤旁效应机制提供新的线索。方法 ⁶⁰Co γ射线照射人支气管上皮细胞BEP2D,超高速离心法分别从2 Gy照射细胞和对照细胞的培养液上清中收集外泌体,用电子显微镜鉴定外泌体,miRNA芯片杂交检测分析外泌体中miRNA表达谱,qRT-PCR方法验证部分miRNA的表达变化,通过TargetScan、miRanda、GO和KEGG等生物信息学技术分析预测靶基因及其相关功能通路。结果BEP2D细胞2 Gy照射后4 h的外泌体中miRNA表达与对照组相比,共鉴定了16个表达水平显著上调的miRNA分子（P<0.05）,对其中miR-100-5p、miR-1246、miR-29b-3p、miR-7-5p在外泌体中表达上调通过定量RT-PCR得到进一步的验证。同时,还分析了上述4个miRNA在受照细胞内的表达变化,结果显示除miR-7-5p外其余3个miRNA分子在照射后2 h表达上升,4 h时后均显著降低,而此时外泌体中相应miRNA的表达是显著增加的。生物信息学分析结果表明,这些miRNA可能通过调控细胞粘附、蛋白磷酸化修饰、mTOR信号通路、染色质修饰以及DNA损伤的HR和NHEJ修复等信号通路来参与细胞辐射旁效应过程。结论 鉴定了辐射诱导BEP2D细胞外泌体中差异表达miRNAs分子,这些miRNA的靶基因参与细胞重要的生物学过程和功能信号通路,为揭示辐射诱导旁效应的机制提供了新的线索。     

低氧调控大鼠运动性肌损伤的特征MicroRNA表达

目的:筛选低氧调控大鼠运动性肌损伤(EIMD)的特征MicroRNA(miRNA),预测分析特征miRNA调控膜损伤的靶点。方法:56只健康雄性SD大鼠平均分为安静对照组(C),运动后常氧休息24小时组(N24)、48小时组(N48)、72小时组(N72)以及运动后低氧暴露24小时组(H24)、48小时组(H48)、72小时组(H72),采取一次间歇性离心运动复制EIMD模型。采用伊文氏蓝(EBD)染色法鉴定EIMD膜损伤特征,基因芯片进行低氧和常氧之间差异性miRNA筛选,RT-q PCR验证芯片结果后获得特征miRNA表达谱,比对各组的特征miRNA和膜损伤相关特征蛋白以及信号通路核心分子的m RNA表达,预测和分析特征miRNA的可能靶基因及调控途径。结果:筛选并验证得出5条低氧调控大鼠EIMD的特征miRNA:miR-694、miR-1904、miR-881*、miR-211-5p、miR-465-5p。通过特征miRNA、膜损伤相关蛋白和相关通路核心分子进行综合对比以及生物信息学分析得出,miR-694的靶标可能性较大的是dystrophin、JNK和AKT以及mTOR;miR-211-5p的靶标可能性较大的是mTOR。结论:低氧可以影响EIMD大鼠腓肠肌miRNA表达谱发生明显改变。miR-694和miR-211-5p有可能与低氧调控EIMD膜损伤的miRNA调控机制密切相关。     

miR-702-3p在纳米二氧化硅致大鼠肺纤维化中作用的初步探讨

目的探讨miR-702-3p在纳米二氧化硅(Si O2)致肺纤维化中的生物学作用。方法用Targetscan.org数据库对miR-702-3p调控的靶基因进行预测,通过Gene Ontology和KEGG分析,结合文献检索等方法选择与肺纤维化相关的靶基因为骨形态发生蛋白-7(BMP-7);qRT-PCR与Western blot检测纳米Si O2染尘大鼠60 d组和生理盐水组中大鼠肺组织miR-702-3p、BMP-7 mRNA和BMP-7蛋白的表达水平。结果预测miR-702-3p可能调控的靶基因包括BMP-7共有136个;与生理盐水组比较,染尘组大鼠肺组织中miR-702-3p的表达上调(P0.05)(与前期高通量测序的结果一致),BMP-7 mRNA的表达水平降低(P0.05),BMP-7蛋白的表达水平降低(P0.05)。结论 miR-702-3p与纳米Si O2诱导的肺纤维化相关,其可能通过调控BMP-7等靶基因在肺纤维化中发挥作用。     

过表达miR-26b-5p抑制HMGA1参与卵巢癌细胞上皮间质转化的机制

 目的 探究microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)介导高迁移率族蛋白组A1(high-mobility group A1,HMGA1)基因参与卵巢癌上皮间质转化的机制。方法 对miR-26b-5p靶基因进行预测。qRT-PCR检测组织中miR-26b-5p和HMGA1的表达量。卵巢癌细胞分组转染后,qRT-PCR和Western Blot检测细胞中相关因子的mRNA和蛋白的表达量;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测迁移能力。结果 卵巢癌组织中miR-26b-5p表达降低,HMGA1的表达升高(均P＜0.05)。miR-26b-5p mimic及sh-HMGA1组HMGA1和Vimentin表达降低而E-cadherin表达上调,且细胞侵袭和迁移降低(均P＜0.05);共转染miR-26b-5p inhibitor和sh-HMGA1,sh-HMGA1处理对上皮间质转化及细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P＜0.05)。结论 过表达miR-26b-5p可抑制卵巢癌细胞中HMGA1和Vimentin表达并促进E-cadherin表达,降低细胞侵袭和迁移能力,从而抑制卵巢癌细胞上皮间质转化。     

miRNA参与p53基因调控网络研究进展

在细胞增殖和细胞死亡等过程中均发现一些miRNA可以作为肿瘤抑制基因或癌基因参与调节。研究发现miR-34作为p53转录激活的靶分子,参与了包括细胞周期阻滞和细胞凋亡等过程的调节,miR-34的缺失可使p53介导的细胞效应受阻。miR-29可激活p53的表达并诱导p53介导的细胞凋亡。此外,还有许多miRNA分子受到p53的转录抑制。一种miRNA可调节多种不同的靶蛋白分子,因此大大拓展了p53调控网络的层面。越来越多的证据表明miRNA参与了癌基因和抑癌基因网络的调控,同时为肿瘤治疗提供了新的治疗策略。     

Let-7和miR-24在紫外线B诱导的细胞凋亡中的作用

目的 研究let-7和miR-24在紫外线B(UVB)诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法 NIH3T3细胞受50 J/m²UVB照射后,用Hoechest 33342/PI染色观察其凋亡情况;RT-PCR检测let-7和miR-24的表达水平。利用在线数据库PicTar等预测它们的靶基因,并用GOstat软件对这些靶基因进行功能分类。结果 荧光显微镜下,NIH3T3细胞经UVB照射后可见典型的凋亡和坏死细胞;let-7和miR-24在UVB照射组的表达水平较对照组明显增加。用GOstat进行功能分类后发现,casp3、bcl2l2、map3k1和cdk5等基因同时也是UVB诱导的细胞周期调节的靶基因。结论 let-7和miR-24可能参与UVB诱导的细胞凋亡。     

LINC01296/miR-1255b-5p促进非小细胞肺癌进展的研究

目的 探究下调LINC01296的表达对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）进展的影响,以及LINC01296调控miR-1255b-5p在NSCLC发生发展中的分子机制。方法 培养6种NSCLC细胞系;实时荧光定量聚合酶链反应法检测LINC01296在NSCLC细胞系以及在48例患者样本中表达水平的高低;细胞计数试剂盒-8法检测稳转细胞株的细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞的生长以及增殖状况;划痕实验检测细胞的迁移情况;FITC-Annexin-V法检测细胞凋亡;动物实验,包括裸鼠尾静脉和皮下瘤注射,观察癌细胞的转移以及成瘤情况;双荧光素酶报告基因实验验证LINC01296与miR-1255b-5p之间存在靶向结合关系。 结果 LINC01296在NSCLC中高表达;LINC01296基因敲低抑制NSCLC细胞生长、迁移;LINC01296敲低抑制体内瘤体的生长和转移;LINC01296与miR-1255b-5p的之间存在海绵吸附作用;LINC01296与miR-1255b-5p的表达呈负相关。结论 LINC01296作为NSCLC的促癌分子,通过抑制miR-1255b-5p的表达水平,促进了NSCLC的发展。     

Massively parallel sequencing of microRNA in bloodstains and evaluation of environmental influences on miRNA candidates using realtime polymerase chain reaction

MicroRNAs (miRNA) are small (22–24 nucleotides) non-coding RNAs with potential application in forensic science because of their anti-degradation property and tissue specificity. Recent studies on the use of miRNA in forensic applications have mainly focused on body fluid identification using realtime polymerase chain reaction or microarray analysis. However, the exploration of miRNA in bloodstains, which are the most valuable source of biological evidence during case investigations, is currently lacking, particularly for aged and environmentally compromised forensic samples. Recent developments in massively parallel sequencing (MPS) technology provide the opportunity to establish a whole-genome miRNA profile with high throughput and efficiency. However, MPS analysis of genome-wide miRNA profiles from bloodstains has not been reported to date. In this study, the whole-genome miRNA profiles of bloodstains were examined using MPS, revealing 633 known miRNAs and 266 novel miRNAs. To further explore the stability of miRNAs in bloodstains under various circumstances, the expression levels of six miRNAs (miR-16-5p, miR-20a-5p, miR-486-5p, miR-148a-3p, miR-151a-3p, and miR-451a) that were abundant in blood/bloodstains were examined. The results showed that freezing/thawing and a high concentration of oxidant solution affects the absolute expression of miRNA significantly, while storage for up to 5 months and a temperature of 37 °C did not have any observed effects. This study not only provides a novel method to explore miRNA profiles in bloodstains using MPS, but also points to the circumstantial influences on miRNA expression, which are an important consideration for practical application. Collectively, our work may shed light on MPS-based approaches with miRNA analysis of bloodstains in forensics.     

长链非编码RNA ZFAS1在食管癌中的表达及作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1（zinc finger antisense 1,ZFAS1）在食管癌中的表达及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR法分别检测癌旁组织和食管癌组织、正常食管上皮细胞和食管癌细胞的ZFAS1表达水平,通过细胞增殖活性检测、细胞划痕实验及流式细胞仪检测细胞凋亡技术,评价干扰食管癌细胞表达ZFAS1对细胞增殖、迁移及凋亡的影响,采用荧光素酶报告基因验证微小RNA（microRNA,miRNA）miR-302b-3p是ZFAS1的作用靶点,Western蛋白印迹法检测ZFAS1及miR-302b-3p作用下c-Jun氨基末端激酶2（c-Jun N-terminal kinase 2,JNK2）、胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R）、白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4）和上皮细胞激酶（epithelial cell kinase 2,EphA2）蛋白的表达变化。结果与癌旁组织相比,食管癌组织表达ZFAS1水平升高（t=19.40,P<0.001）,与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞表达ZFAS1水平增加（t=13.80,P<0.001）,通过抑制细胞表达ZFAS1发现,与NC干扰组相比,显著降低ZFAS1干扰组细胞增殖活性（t值分别=2.933,8.568,10.04,均P<0.05,）及迁移能力（t=13.96,P<0.001）,且细胞凋亡率升高（t=10.68,P<0.001）。ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p调节JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2蛋白的表达。结论ZFAS1在食管癌组织中表达显著增加,具有促进食管癌细胞增殖、迁移,抑制凋亡的能力,且ZFAS1可通过靶向miR-302b-3p激活JNK2、IGF-1R、IRAK4和EphA2,有望成为治疗食管癌的潜在靶点。     

miR-19a-3p靶向调控CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制

 目的 探究miR-19a-3p靶向CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 癌细胞分组转染(空白组、阴性对照组、miR-19a-3p mimic组、siRNA-CCND1组、miR-19a-3p mimic + siRNA-CCND1组)。分别应用qRT-PCR、Western blot、MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验检测相关基因mRNA和蛋白表达及细胞生物学行为变化趋势。结果 人乳腺癌组织和细胞中CCND1和Fra-1的表达明显上升,而miR-19a-3p明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组的miR-19a-3p、CCND1、FrA-1表达水平均上调(P<0.05),miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中上调更为明显(P<0.05)。各组细胞在24 h时无明显差异。48 h和96 h各组细胞增殖能力均提高。空白组与阴性对照组细胞增殖能力相比无明显差异。另外3组的细胞增殖能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),但miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中细胞增殖变化趋势较弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组细胞迁移、侵袭能力均减弱,差异有统计学意义(P<0.05),且miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组迁移、侵袭能力最弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-19a-3p在乳腺癌中呈下降趋势,上调miR-19a-3p可有效抑制CCND1基因表达和FrA-1/IL-6/Stat3通路激活,从而降低乳腺癌细胞侵袭转移。     

lncRNA CCAT1靶向miR-130b-3p对人胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA CCAT1和miR-130b-3p对体外培养的胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响。方法 采用Real-time PCR检测胰腺癌组织及其细胞系和2 Gy X射线照射后PANC-1细胞中CCAT1和miR-130b-3p的相对表达水平。沉默CCAT1表达、抑制miR-130b-3p表达后,应用流式细胞仪、Caspase 3活性检测试剂盒及克隆形成实验检测细胞凋亡率、Caspase 3活性和细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线;利用starBase v2.0在线预测、荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀实验（RIP）及Real-time PCR实验,验证CCAT1和miR-130b-3p的靶向关系。结果 在放射抵抗的胰腺癌组织、胰腺癌细胞系和2 Gy照射的PANC-1细胞中,CCAT1表达均上调（t=6.322~8.555,P<0.05）,miR-130b-3p表达下调（t=3.950~18.795,P<0.05）。2 Gy照射并沉默CCAT1,PANC-1细胞存活分数降低（t=2.929、5.047、5.234、5.125,P<0.05）,细胞凋亡率增加（t=6.953,P<0.05）,Caspase 3活性升高（t=6.836,P<0.05）。发现CCAT1能靶向调控miR-130b-3p表达,抑制miR-130b-3p表达,PANC-1细胞存活分数增大（t=4.564、6.736、8.656,P<0.05）,细胞凋亡减少（t=5.234,P<0.05）,Caspase 3活性降低（t=10.440,P<0.05）。结论 沉默CCAT1表达能够促进miR-130b-3p表达,从而增加PANC-1细胞放射敏感性。     

miR-27b-3p通过靶向PLK2促进乳腺癌细胞的辐射抵抗

目的 研究miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗的影响。方法 通过检索基因表达（GEO）数据库，筛选分析miR-27b-3p在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同乳腺癌细胞系中的表达水平。通过细胞克隆形成、免疫荧光和5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）检测技术评价miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗作用。采用荧光素酶报告基因技术确定miR-27b-3p的靶基因PLK2，并在乳腺癌细胞中进一步验证miR-27b-3p的辐射抵抗作用。结果 与正常乳腺组织和细胞相比，miR-27b-3p在乳腺癌组织（t=2.99，P<0.01）和乳腺癌细胞中表达水平显著上调（t=21.21、32.88，P<0.05）。尤其在抗辐射细胞MCF-7R中升高更加明显（t=25.63，P<0.05）。过表达miR-27b-3p增强了MCF-7细胞的克隆形成能力（t=10.32，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，miR-27b-3p对MCF-7增殖能力的保护效应逐渐凸显（t=8.77、8.26、8.03，P<0.05）；干扰miR-27b-3p则抑制MCF-7R细胞克隆形成数（t=40.00，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，进一步削弱了MCF-7R细胞的增殖能力（t=8.54、8.32、8.23，P<0.05）。报告基因实验结果表明，PLK2是miR-27b-3p的直接靶标。过表达PLK2抑制了miR-27b-3p介导的乳腺癌细胞辐射抵抗（MCF-7：t=9.66，P<0.05；MCF-7R：t=6.42，P<0.05）。结论 miR-27b-3p可通过靶向PLK2提高乳腺癌细胞的辐射抗性。     

60Co γ射线照射致小鼠肝脏的miRNAs表达改变

目的 应用miRNA芯片筛选4 Gy60Co γ射线照射后小鼠肝脏中差异表达的miRNAs,生物信息学方法探索差异表达miRNAs调控的主要功能.方法 SPF级C57BL/6J小鼠接受4 Gy60Co γ射线单次全身照射后,进行外周血白细胞计数和骨髓嗜多染红细胞微核计数.应用miRNA芯片筛选照射后小鼠肝脏中差异表达的miRNAs,用miRNA特异引物对部分差异表达miRNA进行实时定量PCR(real time PCR)验证.运用生物信息学方法,对差异miRNAs靶基因及调控功能进行预测.结果 4 Gyγ射线照射后,外周血白细胞总数与对照组相比显著减少(t=2.87,P＜0.05),而骨髓嗜多染红细胞微核率与对照组相比显著增加(t=-2.91,P＜0.05).miRNA芯片结果显示,照射组与对照组差异表达的miRNAs共17个,其中9个表达上调,8个表达下调.miR-124和miR-34a的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片结果一致.GO分析发现,与黏附、细胞周期相关的通路被抑制,一些免疫相关通路被激活.结论 miR-34a和miR-194参与了急性辐射损伤的调控,起主要调控作用的miRNAs还有miR-124、miR-382和miR-92a*.

Abstract：

Objective To investigate the differential expression profiles of microRNAs in the liver of 60Co γ-ray irradiated mice using microRNA microarray and to explore their main functions by bioinformatic analysis.Methods After SPF C57BL/6J mice expose to 4 Gy-single whole body radiation,total number of peripheral WBC and the fMNPCE were measured at 3 d.The differentially expressed miRNAs in mouse liver were detected with miRNA microarray,miRNA-124 and miR-34a were confirmed by real time RT-PCR assay.Bioinformatic analysis was applied to explore target genes and the main functions of the differential expressed miRNAs.Results Compared with control group,the total number of peripheral WBC decreased( t = 2.87,P ＜ 0.05 ) ,while the fMNPCE in bone marrow increased ( t =-2.91,P ＜0.05) after 4 Gy γ-ray irradiation.miRNA microarray revealed that 17 miRNAs were differentially expressed,in which 9 up-regulated,8 down-regulated.The expression levels of miR-124 and miR-34a were coincident with the result of real time RT-PCR.GO analysis showed that some pathways including adherens junction and cell cycle were suppressed,while some immune-related pathways were activated.Conclusions miR-34a and miR-194 were involved in the regulation of acute radiation damage,some other miRNAs including miR-124、miR-382 and miR-92a* also played important roles in radiation process.