PI3-K的激活在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞间质转分化过程中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P1I3-K）的激活在转化生长因子岛（TGF-β1）体外诱导人肾小管上皮细胞（HKCs）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法将HKCs细胞株分为正常对照组（C）、不同浓度TGF-β1组、TGF-β1＋P13-K抑制剂Wortmannin组。选取不同时相,采用免疫印迹法（Western blot）测定总Akt（t-Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏素（E-cadherin）蛋白水平的表达变化;Akt磷酸化水平用磷酸化Akt与总Akt水平的比值表示。结果 正常体外培养的HKCs经10ng/ml TGF-β1刺激1h后p-Akt水平显著升高;mSMA蛋白表达水平在10ng／ml TGF-β1诱导48h后表达显著升高,而E-cadherin蛋白表达水平在TGF-β1诱导48h后表达显著下降。同时加用Wortmannin 10nmol／L组,p-Akt、α-SMA表达明显抑制,E-cadherin表达显著升高。结论PI3-K在TGF-β1诱导的EMT过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的EMT过程,特异性阻断PI3-K的激活可有效抑制TGF-β1介导的HK氏的EMT过程。     

TGF-β信号通路在纤维化疾病中的作用研究进展

纤维化疾病是由于机体受到多种刺激因子的作用,肌成纤维细胞活化或发生表型转化,使胶原蛋白表达增加及细胞外基质过度沉积,最终导致器官结构和功能受损的一类疾病。转化生长因子-β(TGF-β)是目前公认的参与纤维化疾病发生过程的调控因子,在调控肺、肝、心肌、肾及胰腺等纤维化疾病的发生、发展过程中具有重要作用。近年来,许多研究探讨了TGF-β信号通路在纤维化疾病发生中的作用,而抑制TGF-β信号通路活化即可起到抗纤维化的作用,但其机制尚未完全明确。该文就TGF-β信号通路在肺、肝、心肌、肾及胰腺等纤维化疾病中的作用进行综述,以期为纤维化疾病治疗靶点的选择提供新策略。     

TGF-β3通过抑制上皮间质转化拮抗放射性肺纤维化

目的检测分析放射性肺纤维化过程中上皮间质转化（EMT）情况,探索转化生长因子β3（TGF-β3）是否通过EMT途径抑制放射性肺纤维化的发生。方法将180只C57BL/6雌性小鼠按体重完全随机分为对照组、单纯照射组（简称照射组）和照射+TGF-β3组（简称TGF-β3组）,照射组和TGF-β3组经20 Gy 60Co γ射线单次胸部照射后,分别腹腔注射0.5 mL 0.9%的生理盐水和TGF-β3（1 μg/kg）,每周1次,于照射后1、3和6个月活杀,用苏木素-伊红（HE）染色、Masson三色染色后观察肺组织病理学改变,用免疫组化法检测肺组织EMT相关的上皮标志物紧密连接蛋白（ZO-1）和间质标志物N-钙粘蛋白（N-cadherin）的表达,用Mann-Whitney U秩和检验和Fisher确切概率法对结果进行统计分析。结果HE和Masson染色结果显示,照射能够引起小鼠肺泡壁增厚、肺泡间隔明显增宽、肺泡结构严重破坏、胶原纤维大量沉积等典型纤维化病理改变;照射后3和6个月,与照射组比较,TGF-β3组小鼠肺纤维化病变明显减轻,差异有统计学意义（Z=-2.562、-2.807,均P<0.05）,胶原沉积显著减少,差异有统计学意义（Z=2.442、2.529,均P<0.05）。免疫组化结果显示,与对照组比较,照射后1、3和6个月,小鼠肺组织ZO-1的表达量明显减少,差异有统计学意义（Z=4.492、5.831、6.064,均P<0.05）,N-cadherin的表达量显著增高,差异有统计学意义（Z=-3.269、-5.520、-6.063,均P<0.05）;与照射组比较,TGF-β3组ZO-1表达量显著增高,差异有统计学意义（Z=-2.881、-4.220、-5.695,均P<0.05）,而N-cadherin表达量显著减少,差异有统计学意义（Z=4.546、3.560、4.919,均P<0.05）。结论TGF-β3可通过抑制EMT拮抗放射性肺纤维化。     

TGF-β/肌肉生长抑制素信号通路对骨骼肌作用的研究进展

转化生长因子β(TGF-β)及其超家族成员肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)在哺乳动物骨骼肌的胚胎期及生长发育过程中发挥着重要的作用.本文综述了TGF-β/myostatin信号通路在骨骼肌中的作用尤其是在骨骼肌生长发育、生理学和病理学中作用的最新研究进展,并展望了该信号通路在骨骼肌发育和疾病等方面的应用前...     

Rack1敲低促进TGF-β诱导的A549细胞的上皮-间充质转化

目的 研究Rack1分子在TGF-β诱导A549细胞发生上皮-间充质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程中的功能.方法 制备携带不同Rack1干涉序列的慢病毒颗粒,并感染A549细胞建立稳定细胞系.选取敲低效率较高的细胞系,利用MTS、细胞划痕、免疫印迹等技术检测Rack1敲低后细胞的增殖、TGF-β诱导的迁移及相关分子表达水平的改变.结果 获得了Rack1稳定敲低的细胞系,Rack1敲低后细胞增殖减慢,TGF-β诱导的迁移加快,钙黏蛋白E(E-cadherin)下调和胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平升高.结论 Rack1分子敲低促进EMT的发生.     

TGF-β3对辐射致肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 探索转化生长因子-β3(TGF-β3)在辐射致肺上皮细胞损伤中的作用及其可能机制,为放射性肺损伤的防治提供实验依据。方法 设计合成并筛选Ⅱ型转化生长因子-β受体(TGFBR2)的小干扰RNA(siRNA),用于细胞TGFBR2干涉;将体外培养的人支气管上皮细胞(Beas-2B细胞)及其TGFBR2干涉细胞随机分为对照组、5 ng/ml TGF-β3处理组(TGF-β3组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射组(6 Gy组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射+5 ng/ml TGF-β3处理组(6 Gy+TGF-β3组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组胶原蛋白和TGFBR2的表达,RT-qPCR和Western印迹检测上皮间质转化(EMT)相关标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期。结果 (1)TGF-β3对辐射诱发的细胞胶原蛋白表达增高有明显抑制作用,并可降低辐射所致细胞EMT相关标志物α-SMA基因和蛋白水平的异常高表达,有效保护辐射所致肺组织细胞纤维化改变;(2)TGF-β3可抑制...     

转化生长因子β/Smad信号通路和骨关节炎研究进展

<正>骨关节炎(osteoarthritis,OA)是以关节组织成份、结构和功能退行性改变为特征的慢性关节疾病,主要涉及关节软骨损伤并累及软骨下骨和周围结构(例如软骨下骨病变、骨赘和滑膜炎症等)。OA的发病部位主要包括膝关节、髋关节、手指关节、颈部、肩关节、肘关节、脊椎关节以及容易被忽视的踝关节和足等,通常伴有疼痛、肿胀和关节僵硬等。根据统计,全球已经有超过3.6     

永生化人支气管上皮细胞中TGF-β1对MAPK家族ERK通路的活化效应

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在永生化人支气管上皮细胞BEP2D信号转导中MAPK家族ERK通路的激活情况及其引起的细胞增殖、凋亡和形态学的改变.方法 用Western blot方法检测TGF-β1对ERK的活化特点;用荧光染料染色分析和流式细胞术检测TGF-β1引起ERK活化时细胞的凋亡变化;用细胞克隆形成率分析TGF-β1引起ERK活化时细胞的增殖情况;观察TGF-β1引起ERK活化时细胞的形态改变.结果 TGF-β1可在短时间内激活ERK1/2,1h达峰值,然后逐渐减弱;TGF-β1诱导BEP2D细胞凋亡,抑制其增殖,使其体积和间距增大;用U0126抑制ERK通路,能促进TGF-β1对细胞在凋亡、增殖方面的作用,但抑制其对细胞形态的影响.结论 TGF-β1诱导的ERK1/2的磷酸化在调节BEP2D细胞的增殖和凋亡间的平衡方面起着重要作用.     

丹参乙酸镁通过抑制TGF-β途径减轻脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨丹参乙酸镁通过抑制转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/激活素受体激酶5(activin receptor-like kinase 5,ALK5)/SMAD2/3(drosophila mothers against decapentaplegic protein 2/3)/NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)/H2O2途径产生对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 构建大鼠线栓法脑缺血/再灌注模型,使大鼠脑缺血2 h后,再灌注24 h。实验动物随机平分为假手术组（sham组）、脑缺血/再灌注组（I/R组）、脑缺血/再灌注+丹参乙酸镁组（I/R+MLB组）和脑缺血/再灌注+溶媒组（I/R+vehicle组）4组,分别检测sham组、I/R组、I/R+MLB组以及I/R+vehide组动物死亡率、神经学评分、脑梗死体积、脑内TGF-β1含量、ALK5 mRNA及蛋白含量、pSMAD2/3蛋白含量、NOX活性及H2O2水平。结果 与I/R组比较, I/R+MLB组大鼠脑组织梗死体积明显缩小(P<0.01), TGF-β1含量(P<0.05)、pSMAD2/3蛋白含量(P<0.01)、NOX活性(P<0.01)和H2O2水平(P<0.01)均降低。结论 丹参乙酸镁具有抗脑缺血/再灌注损伤的作用,其机制与抑制TGF-β1/ALK5/SMAD2/3/NOX/H2O2通路有关。     

益气活血中药对大鼠TGF-β1、TNF-α的影响

目的 探讨益气活血中药对小剂量重复照射下不同时相大鼠血清、肺组织中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达,探讨其对放射性肺损伤的防治作用及作用机制。方法 66只Wistar雌性大鼠随机表法分为照射加中药组(A组)30只、单纯照射组(B组)30只、健康对照组(C组)6只。6MV直线加速器对前2组大鼠右肺进行分次照射(5 Gy/次,1次/周,累积剂量最高为30 Gy),每组各6只大鼠于照射后第4、6、8、12及26周处死,C组于第4周末处死,取血清标本进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测,取肺组织标本进行免疫组织化学检测,观察各组大鼠不同时相血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α蛋白表达的动态变化。结果 B组大鼠血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α于照射第4周增高,第12周达高峰,第26周略下降;A组各时相大鼠血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α蛋白表达趋势与B组相同,但低于B组。结论 益气活血中药具有抑制TGF-β₁ 、TNF-α合成分泌的作用及减轻放射性肺损伤的作用,其机制与抑制TGF-β₁、TNF-α表达有关。     

间充质干细胞对2型糖尿病小鼠糖尿病肾病进展的影响及其机制

目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)早期注射对2型糖尿病(T2DM)小鼠糖尿病肾病进展的影响及其可能机制。方法 选取20只5周龄雄性db/db小鼠构建T2DM小鼠模型，随机分为干细胞治疗组(MSCs组，n=10)和T2DM组(n=10)；另设置鼠龄匹配的db/m小鼠为正常对照组(NC组，n=10)。MSCs组小鼠行连续6周的人UCMSCs(1×10⁶/0.2 ml生理盐水)尾静脉输注治疗，NC组及T2DM组尾静脉输注等体积生理盐水，每周1次，连续输注6次。每周监测各组小鼠的血糖和体重。第6次治疗结束后，心脏灌流处死各组小鼠并采集血液、留取肾脏组织，行生化和组织病理学检查。采用Western blotting检测各组肾脏沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白以及紧密连接蛋白1(Claudin-1)的表达情况，并采用免疫组化检测SIRT1、Claudin-1、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Col Ⅳ的表达情况。电镜观察各组小鼠肾小球的形态。取对数生长期HK-2细胞，将细胞分为对照组、高糖诱导模型组(HG组)、高糖诱导siRNA组(HG+siRNA组)、MSCs组(...     

TGF-β1信号通路在瓣膜病合并房颤患者心房中的表达变化及意义

目的 观察风湿性心脏瓣膜病合并房颤患者右心房组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad3的表达变化,探讨TGF-β1信号通路在房颤心房结构重构中的意义.方法 2009年10月-2010年5月40例接受单纯二尖瓣置换术的风心病患者,根据病史和术前心电图记录分为慢性房颤组(AF组,n=28)和窦性心律组(SR组,n=...     

BMP-4基因/TGF-β1对兔火器性股骨缺损的治疗作用

目的 观察BMP-4基因联合TGF-β1对火器性股骨缺损的修复作用. 方法 用火器性钢珠造成兔股骨中段缺损,伤后2周于骨缺损上、下端和中部注射经体外鉴定的BMP-4基因和TGF-β1.用RT-PCR和Western blot检测BMP-4 mRNA与蛋白在体内的表达,用碱性磷酸酶(ALP)活性和钙含量检测局部组织的成骨能力,用病理学和X线检查成骨过程和质量. 结果 注射后BMP-4 mRNA和蛋白可在体内表达6周.实验组ALP活性伤后8周时增加到(13.17±0.51)U/100 ml,显著高于对照组的(8.77±0.44)U/100 ml,提示实验组的成骨能力增强,钙含量检测与此相符.病理学和X线检查证明实验组成骨过程加快,成骨质量提高. 结论 BMP-4基因/TGF-β1对火器性骨缺损有明显的促修复作用.     

糖原合成激酶-3β/β-连环蛋白信号通路在贫铀致人肾近曲小管上皮细胞损伤中的作用

目的 探索糖原合成激酶-3β（GSK-3β）/β-连环蛋白信号通路对贫铀（depleted uranium,DU）致人肾近曲小管上皮HK-2细胞损伤的作用。方法 不同浓度DU染毒HK-2细胞3~24 h,采用免疫荧光法检测肾损伤分子-1（KIM-1）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）表达水平以观察DU诱导HK-2细胞的损伤,免疫荧光法检测β-连环蛋白核转位,Western blot法检测p-GSK-3β（S9）、GSK-3β、β-连环蛋白及c-myc蛋白表达变化,观察GSK-3β/β-连环蛋白信号通路的时相变化;采用GSK-3β（KD）质粒瞬时转染和GSK-3β特异性抑制剂TDZD-8处理抑制HK-2细胞的GSK-3β活性,采用β-连环蛋白质粒瞬时转染HK-2细胞使其过表达,观察GSK-3β活性和β-连环蛋白表达变化对DU染毒致HK-2细胞损伤的影响。结果 300和600 μmol/L DU染毒致HK-2细胞KIM-1和NGAL阳性细胞率随染毒时间的延长和染毒剂量的增加而增加,染毒后6、9和24 h明显高于空白对照组（KIM-1阳性细胞率：t=11.06、18.97、30.49,P<0.05;t=6.79、16.02、85.45,P<0.05;NGAL阳性细胞率：t=11.78、11.37、34.29,P<0.05;t=7.34、21.63、36.84,P<0.05）;p-GSK-3β（S9）/GSK-3β比值和核β-连环蛋白阳性细胞率于染毒后3、6、9和24 h明显高于空白对照组;核β-连环蛋白阳性细胞率：t=4.61、6.52、36.64、14.93,P<0.05）,于染毒后9 h达峰值,还激活了β-连环蛋白下游靶基因c-myc的蛋白表达。瞬时转染GSK-3β（KD）质粒明显抑制了HK-2细胞的GSK-3β活性（t=8.07,P<0.05）,降低了DU致染毒HK-2细胞的KIM-1阳性细胞率（t=24.77,P<0.05）。TDZD-8抑制GSK-3β活性的同时提高了β-连环蛋白核转位,亦能显著降低DU染毒诱导HK-2细胞的KIM-1阳性细胞率（t=6.25、6.73,P<0.05）。而且,β-连环蛋白过表达显著减轻了DU诱导的HK-2细胞损伤（t=7.48,P<0.05）。结论 GSK-3β/β-连环蛋白信号通路是调控DU致HK-2细胞毒性的关键通路,抑制GSK-3β活性及β-连环蛋白表达能有效拮抗DU诱导的HK-2细胞损伤。     

阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及HIF-1 a、TGF-β1表达的影响

目的 探讨阿奇霉素对哮喘大鼠气道重塑及缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 将32只雄性Sprauge-Dawley大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、阿奇霉素哮喘组(C组)、地塞米松哮喘组(D组),每组8只,采用卵清蛋白和氢氧化铝混合液腹腔致敏大鼠,2mg·ml-1卵清蛋白滴鼻激发大鼠,各组于末次激发后24小时内麻醉,留取右肺组织行苏木素-伊红染色观察大鼠肺组织病理变化;医学图像分析系统测量气道重塑参数;免疫组织化学检测肺组织HIF-1 a及TGF-β1的表达情况,ELISA检测血清HIF-1a及TGF-β1的表达.结果 与A组相比,B组可见黏膜上皮局部脱落,黏液栓形成,气道壁及肺组织内可见大量炎性细胞浸润,C、D组上述改变明显减轻;B组支气管壁厚度、平滑肌厚度较A组升高(P<0.05),C、D组支气管壁厚度低于B组(P<0.05);C、D组肺组织及血清HIF-1a的表达较A组升高(P<0.05),TGF-β1的表达较B组降低(P<0.05).结论 HIF-1a及TGF-β1可能参与了哮喘气道重塑,阿奇霉素不能有效抑制HIF-1 a的表达来改善哮喘大鼠气道重塑,但它可能通过抑制TGF-β1的表达来改善哮喘大鼠气道重塑.     

表皮生长因子、甲状腺转录因子-1及转化生长因子-β1基因多态性在非小细胞肺癌组织中表达及意义

目的探讨表皮生长因子(EGFR)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因多态性在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。方法选取自2015年4月至2017年6月河北省沧州市中心医院收治的非小细胞肺癌患者50例设为B组。选取同期入院进行手术治疗的肺部良性疾病患者50例设为A组。取两组患者病灶部位组织制备标本,采用免疫组织化学法检测两组患者的EGFR、TTF-1及TGF-β1水平,分析EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。结果 B组EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性阳性率均高于A组(P<0.05),EGFR多表达在细胞膜或细胞浆中,呈阳性表达;TTF-1在细胞浆内出现红色颗粒,呈弱阳性表达;TGF-β1在细胞浆内可见强阳性表达。B组EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性阳性率与年龄、肿瘤直径及病理分型无相关性,与淋巴结转移、肿瘤分期及分化程度呈正相关(P<0.05)。结论 EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性能直接参与非小细胞肺癌的发生、发展,加强EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性检测,能评估患者预后,指导临床治疗。     

糖尿病血管钙化中Wnt/β-catenin信号通路被调控机制的研究新进展

动脉粥样硬化、血管钙化等心血管疾病是2型糖尿病患者发病率和死亡率的重要原因之一。而血管钙化是动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、血管损伤、慢性肾病和衰老等普遍存在的共同病理表现;其严重程度是预测心血管疾病发病率和死亡率的独立危险因素之一。最近的临床和基础研究表明,血管钙化类似于骨发育和软骨形成的过程,是一个主动的、高度可调控的复杂病理生理过程,同时伴有血管平滑肌细胞的表型变化[1]。糖尿病、慢性肾功能衰竭肾透析患者     

GDF11对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞细胞凋亡的影响及其信号机制

 目的 探讨生长分化因子11(GDF11)对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞凋亡的影响及其信号机制。方法 复苏BMSCs并将其分为4组:正常小鼠BMSCs组(Nor),糖尿病小鼠BMSCs组(DB),GDF11干预组(DB+GDF11;GDF11),抑制剂组(DB+GDF11+ LY294002;LY)。各组细胞培养3 d后,台盼蓝染色观察细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和磷酸化(p)-PI3K、p-Akt的表达水平。结果 与正常小鼠BMSCs相比,糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率显著升高[(36.2±3.3)% vs. (3.1±1.1)%,P＜0.05];GDF11可降低糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率[(18.9±1.9)% vs. (36.2±3.3)%,P＜0.05],提高Bcl-2/Bax的蛋白表达比[(1.63±0.10) vs. (0.26±0.09);P＜0.05],同时激活PI3K[p-PI3K/PI3K:(0.98±0.08) vs. (0.42±0.11);P＜0.05]/Akt[p-Akt/Akt:(0.94±0.10) vs. (0.32±0.15);P＜0.05]信号通路。而且,当抑制PI3K/Akt信号通路后,GDF11抑制糖尿病小鼠BMSCs凋亡的作用明显减弱[细胞凋亡率:(41.1±3.9)% vs. (18.9±1.9)%,P＜0.05]。结论 GDF11可通过激活PI3K/Ak信号通路抑制糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡。