CUL3对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制

目的 探讨泛素连接酶Cullin3(CUL3)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法基于TCGA数据库分析CUL3在胃癌和癌旁组织中的表达及其与临床预后的关系。采用CUL3 shRNA和空载慢病毒转染HGC-27和BGC-823细胞,构建CUL3敲低胃癌细胞系组(shCUL3组)与空载慢病毒转染组(空载组)。采用CCK-8法、克隆形成实验、EdU染色、划痕实验和Transwell实验检测两组的增殖、迁移和侵袭能力;采用Western blotting检测两组上皮-间质转化(EMT)相关蛋白和PI3K/Akt/GSK3β通路蛋白的表达情况;应用PI3K激动剂740 Y-P后检测shCUL3组细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 TCGA数据库中CUL3在胃癌中呈高表达,且与胃癌患者预后不良明显相关。CCK-8、克隆形成实验和EdU染色结果显示,与空载组比较,shCUL3组胃癌细胞增殖能力受到抑制(P<0.05),且CUL3 shRNA可明显抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。与空载组比较,shCUL3组E-cadherin蛋白表达升高,波形蛋白、β-caten...     

METTL3对肝内胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨m6A甲基转化酶样蛋白3(METTL3)对肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及可能的分子机制.方法 通过嘌呤霉素筛选的方法将携带METTL3基因的重组质粒转染肝内胆管癌细胞系QBC939和RBE,得到稳定过表达METTL3的肝内胆管癌细胞系;采用小干扰RNA(siRNA)瞬时敲低肝内胆管癌细胞系中的METTL3;采用Western印迹检测肝内胆管癌细胞系中METTL3蛋白的表达水平,验证过表达和敲低METTL3的效果;采用细胞增殖实验(CCK-8法)检测METTL3对肝内胆管癌细胞系增殖能力的影响,Transwell法验证METTL3对肝内胆管癌细胞系迁移和侵袭能力;采用Western印迹检测过表达或敲低METTL3后p-ERK蛋白的表达水平,Log-rank检验比较METTL3高表达组和低表达组胆管癌患者的生存期差异.结果 过表达METTL3可显著促进QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而敲低METTL3显著抑制QBC939和RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力.过表达METTL3促进磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的蛋白表达水平,而敲低METTL3则抑制p-ERK的蛋白表达水平.METTL3在肝内胆管癌组织中上调表达,且其高表达与胆管癌患者的不良预后可能相关.结论 METTL3通过促进肝内胆管癌细胞系的增殖、迁移及侵袭能力而发挥癌基因的功能.     

miR-30a-5p和NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

 目的 研究miR-30a-5p和靶基因NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移侵袭的影响。方法 收集2016-09至2019-03在保定市第一医院行手术切除治疗的非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁组织标本64例,QPCR和Western blot分别检测非小细胞肺癌组织样本和细胞中miR-30a-5p和NUAK1的表达;TargetScan网站预测miR-30a-5p与NUAK1间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和Western blot进行验证;MTT和Transwell实验检测miR-30a-5p及联合过表达NUAK1对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 非小细胞肺癌组织中miR-30a-5p的相对表达量(0.33±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.21),差异有统计学意义(t=21.237,P＜0.05);非小细胞肺癌组织中NUAK1 mRNA表达(4.13±1.87)和蛋白表达(3.41±1.62)均高于癌旁组织(1.00±0.17、1.00±0.16),差异有统计学意义(t=13.335、11.844,P＜0.05)。非小细胞肺癌细胞系H460、H1299、A549中miR-30a-5p表达量(0.35±0.03、0.51±0.05、0.28±0.03)低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(1.00±0.11),差异有统计学意义(F=77.100,P＜0.05);H460、H1299、A549细胞中NUAK1 mRNA相对表达量(2.98±0.30、2.39±0.24、3.42±0.36)和蛋白相对表达量(3.06±0.31、2.27±0.23、4.12±0.41)均显著高于BEAS-2B细胞(1.00±0.09、1.00±0.11),差异有统计学意义(F=46.660、63.070,P＜0.05)。结论 miR-30a-5p可通过靶向NUAK1抑制非小细胞肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,提示miR-30a-5p和NUAK1可能成为一种新的临床诊断和治疗非小细胞肺癌的靶点。     

硫酸右旋糖苷通过影响M2型肿瘤相关巨噬细胞抑制人胃癌细胞侵袭与迁移的作用机制

目的 探讨硫酸右旋糖苷(DS)通过影响M2型肿瘤相关巨噬细胞(M2-TAMs)抑制人胃癌细胞HGC-27侵袭与迁移的作用及可能机制.方法 (1)体外实验:将人胃癌细胞HGC-27分为对照组、DS组、M2组(M2型巨噬细胞与HGC-27细胞共培养)以及M2+DS组(经DS处理的M2型巨噬细胞与HGC-27细胞共培养).采...     

草苁蓉多糖对人肝癌细胞侵袭迁移的影响及机制

目的 探讨草苁蓉多糖(BRPS)对人肝癌细胞侵袭迁移的影响及其可能机制.方法 使用不同浓度的BRPS(12.5、25、50、100、200μg/L)干预肝癌HepG2细胞,筛选合适作用浓度.取对数生长期细胞,随机分为对照组(不作处理)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)组(转染LV-HIF-1α)、HIF-1α-NC组...     

异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化.结果 透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30～100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达.结论 来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用.     

赖氨酸羟化酶2在原发性肝癌组织中表达及其对肝癌细胞迁移、侵袭影响

目的 探讨赖氨酸羟化酶2(PLOD2)在原发性肝癌（HCC）组织中的表达,以及抑制该基因对肝癌细胞HepG2迁移、侵袭的影响。方法 选取自2017年5月至2019年5月于鄂东医疗集团黄石市中心医院行手术治疗的93例HCC患者的癌组织及癌旁组织为研究对象。免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织PLOD2蛋白表达。分析HCC组织PLOD2蛋白表达与临床指标的相关性。培养肝癌细胞HepG2并分为PLOD2干扰组（转染PLOD2干扰序列）、阴性对照组（转染阴性对照序列）和空白组（不作任何处理）。实时荧光定量PCR检测PLOD2 mRNA表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 HCC组织PLOD2蛋白表达阳性率为77.42%(72/93),高于癌旁组织的33.33%(31/93),差异有统计学意义（P<0.05）。PLOD2蛋白阳性表达率与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和微血管侵犯有关（P <0.05）。PLOD2干扰组PLOD2 mRNA相对表达量、24 h时划痕愈合率、侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组,差异有统计学意义（P<0.05）。结...     

甲酰肽受体2促进胃癌细胞侵袭及转移作用研究

目的通过体外胃癌细胞实验和体内裸鼠成瘤实验,探讨甲酰肽受体2(FPR2)对胃癌细胞侵袭、转移的作用。方法采用慢病毒转染技术干扰胃癌细胞SGC7901和XN0422中FPR2的表达,通过实时定量逆转录聚合酶链反应和Western blot方法检测干扰效率。利用划痕实验、Transwell实验、体内裸鼠皮下成瘤及腹腔种植实验,观察XN0422-mock、SGC7901-mock组以及XN0422-sh FPR2、SGC7901-sh FPR2组的侵袭转移、皮下成瘤和腹腔转移能力的改变。结果慢病毒感染XN0422、SGC7901细胞,FPR2表达量下降>80%。XN0422-sh FPR2组、SGC7901-sh FPR2组中侵袭、转移能力,皮下成瘤能力和腹腔转移能力均低于XN0422-mock组和SGC7901-mock组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FPR2可同时促进体外胃癌细胞的侵袭转移能力、体内皮下成瘤和腹腔转移能力。     

DCE-MRI药代动力学参数预估胰腺癌增殖及侵袭转移的可行性初探

目的 探讨DCE-MRI药代动力学参数无创评估胰腺癌Ki67、MMP14表达状况,进而探讨其预估胰腺癌增殖及侵袭转移的可行性.方法 前瞻性连续收集经病理证实的胰腺癌患者21例,术前行胰腺DCE-MRI扫描并测量癌灶的药代动力学参数Ktrans、Kep、Ve和Vp.采用独立样本T检验分别比较Ki67、MMP14高、低表达...     

二烯丙基三硫抑制Hela细胞的迁移和侵袭能力观察

目的研究二烯丙基三硫（diallyl trisulfide,DATS）对Hela细胞迁移能力和侵袭力的影响。方法用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24h（以等量的PBS为对照）,Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Matrigel和Transwell小室检测Hela细胞侵袭力的变化。结果 DATS处理组Hela细胞的迁移能力比对照组明显减弱（P〈0.01）,处理组Hela细胞的侵袭力较对照组也明显降低（P〈0.01）。结论 DATS能够抑制Hela细胞的迁移能力和侵袭力。     

野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖影响

目的探讨野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响及机制。方法采用CCK-8比色法、流式细胞术、Western Blot法检测野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖作用的影响。结果野生猕猴桃根黄酮提取物对胃癌MKN-49P细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间-浓度依赖性;其浓度升高,细胞凋亡增加,G1期细胞增加,S、G2/M期细胞减少,抑制周期蛋白CyclinD1表达降低。结论野生猕猴桃根黄酮提取物可抑制胃癌MKN-49P细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于G1期,其主要机制可能与抑制周期蛋白CyclinD1表达降低有关。     

RORα miRNA真核表达载体构建及对人胃癌细胞增殖的影响

目的构建RORα（Retinoid acid receptor related orphan receptorα,维甲酸相关孤核受体α）miRNA真核表达载体,分析其对人胃癌MGC803细胞RORα蛋白表达及细胞增殖的影响。方法构建针对设计RORαmiRNA表达的3对miRNA干扰序列,克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA真核表达载体,在测序鉴定无误后将含RORαmiRNA转染人胃癌MGC803细胞,用Western blo检测MGC803细胞转染前后RORα蛋白的表达水平变化。MTT法检测对转染MGC803细胞增殖的影响。结果 Western blot结果证实,MGC803细胞转染RORαmiRNA后24h RORα蛋白表达水平明显低于转染阴性组（P〈0.05）。MTT结果显示,转染RORαmiRNA后细胞增殖率（光吸收值）高于转染阴性组（P〈0.05）。结论 miRNA靶向抑制RORα表达后,可促进人胃癌MGC803细胞增殖,提示RORα是一个潜在的胃癌基因及药物治疗的靶点。     

白杨黄素影响两种胃癌细胞系增殖与凋亡的研究

 目的 研究白杨黄素对两种胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45是否具有抑制作用的分子生物学机制.方法 通过MTT法检测白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定经白杨黄素处理后两种细胞的细胞周期,Westen-blot测定凋亡相关因子Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达水平.结果 白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞具有增殖抑制作用,呈时间浓度依赖性;能够将细胞周期阻滞于Sub G1期;能上调Caspase-3,下调Survivin和Bcl-2的基因表达.结论 白杨黄素能够诱导SGC-7901和MKN-45细胞的凋亡并有效地抑制其增殖.其机制可能与干扰细胞周期及激活Caspase-3,抑制Survivin和Bcl-2有关.     

DDX46基因对结肠癌细胞电离辐射敏感性的影响及机制研究

目的 探讨DDX46基因对结肠癌细胞的电离辐射敏感性的影响及其作用机制。方法 DDX46基因RNA干扰慢病毒转染的SW480细胞为实验组,空载质粒慢病毒转染的SW480细胞为对照组。两组细胞转染72 h后,分别进行0和4 Gy X射线照射,采用CCK-8方法检测两组的细胞活力;实验组联合4 Gy X射线照射24 h后,采用免疫荧光技术和Western blot法检测细胞γ-H2AX foci数量以及DNA损伤修复通路关键蛋白的表达水平,确定DDX46与辐射诱导的DNA损伤修复的关系。结果 4 Gy X射线照射24 h后,实验组的细胞活力比照射前降低（15.02±3.92）%（t=-4.696,P<0.05）,比对照组降低（17.43±1.83）%（t=4.844,P<0.01）;而对照组照射前后比较差异无统计学意义（P>0.05）。同时,实验组γ-H2AX foci数量相比于对照组增加了（43.03±17.6）%（t=-3.108,P<0.05）,ATM的蛋白水平显著升高（t=7.530,P<0.01）,而ATM的活性形式p-ATM以及ATM的下游靶蛋白Rad50的蛋白水平则明显降低（t=4.260、4.260、P<0.05）,同时γ-H2AX的蛋白表达水平也有一定程度的升高（t=-3.090,P<0.05）,DNA-PK在两组细胞内的蛋白水平变化不大。结论 沉默DDX46可以提高结肠癌细胞系SW480的辐射敏感性,其机制可能是DDX46表达沉默抑制结肠癌细胞系SW480中ATM的活化,从而抑制辐射诱导的DNA损伤的修复,提高SW480的辐射敏感性。     

MR imaging of gastric cancer in vitro: accuracy of invasion depth diagnosis

The purpose of this study was to evaluate the accuracy of grading cancerous invasion of the gastric wall in vitro using magnetic resonance (MR) imaging. Twelve specimens of gastric carcinoma were examined at 1.5-T using a small, loop surface coil. They were imaged within 2 days of fixation in formalin. The field of view was 30 mm; the matrix size was 256×256, and the section thickness was 2 mm. T1-weighted, T2-weighted and short inversion time inversion recovery (STIR) images were obtained. Two radiologists evaluated the MR images independently, and in discrepant cases, consensus was obtained through discussion. Findings on MR images were compared with histopathologic findings. All T1-weighted, T2-weighted and STIR images depicted the normal gastric wall as consisting of six layers. STIR images depicted normal six layers most clearly. Histologically, the cancerous invasion was found to extend into the mucosa in 4 of the 12 specimens, the submucosa in 3, the muscularis propria in 2, the subserosa in 2 and the serosa in 1. The grading by MR imaging matched the histopathologic findings for all 12 tumors. The overall accuracy was 100%. Thus, MR imaging in vitro was sufficiently accurate for grading cancerous invasion of the gastric wall.     

经聚乙烯亚胺钝化的荧光碳点负载阿霉素抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移侵袭的治疗研究

目的研究利用经聚乙烯亚胺（PEI）钝化的荧光碳点（CD）装载阿霉素（DOX）进行药物递送,旨在增加DOX对非小细胞肺癌的治疗作用,减少DOX的心肌毒性。 方法通过一步微波加热法将甘油和PEI的混合物制备成CD-PEI,并通过静电效应将DOX装载至CD-PEI。采用CCK8实验检测CD-PEI-DOX对非小细胞肺癌细胞A549的增殖能力的影响;Transwell实验评估CD-PEI-DOX对A549细胞迁移侵袭能力的影响;最后通过体内动物实验评估CD-PEI-DOX的心肌毒性以及对非小细胞肺癌皮下肿瘤生长的抑制效果。 结果体外细胞实验证实,对比单纯的DOX处理组,CD-PEI-DOX对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移侵袭能力的抑制作用更为显著。体内实验证实,CD-PEI-DOX纳米复合物治疗组小鼠心肌细胞结构完整,并且能有效抑制小鼠皮下肺癌肿瘤的生长。 结论经PEI钝化的荧光碳点负载阿霉素能显著提高DOX对非小细胞肺癌的治疗效果,并减少DOX对心脏的毒性作用。运用CD-PEI纳米颗粒改善化疗药物递送的治疗方案取得了初步证实,这可为肺癌化学治疗提供新思路,具有广大的临床应用前景。