去甲斑蝥素增强Bel7402中IκBα表达和抑制细胞增殖的研究

目的　从核转录因子 NF- κB和其抑制分子 IκBα的相互作用揭示去甲斑蝥素的抗肿瘤作用机理 ,为其进一步开发利用提供理论依据。　方法　选用人肝癌细胞株 (Bel740 2 ) ,常规培养 ,分为细胞对照组及去甲斑蝥素不同浓度组 ,进行细胞生长曲线测定、细胞集落形成实验及 MTT实验 ;同时对细胞进行 Giem sa染色、免疫细胞化学染色 (一抗分别为 anti- p6 5、anti- IκBα)。Western blot检测 IκBα的表达。　结果　生长曲线测定 ,细胞集落形成实验及 MTT实验结果表明 ,去甲斑蝥素对人肝癌细胞株的生长有明显的抑制作用 ;免疫细胞化学及 Western blot结果显示 :去甲斑蝥素可增强细胞内 IκBα的表达 ,并抑制 NF- κB的表达与活性。　结论　去甲斑蝥素有良好的抗肿瘤效应 ,其作用机理可能与其能增强核转录因子 NF- κB的抑制分子 IκBα的表达有关。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡的研究

目的 研究新型抗癌药物去甲斑螯素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法 从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑螯素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果 １０ｍｇ／Ｌ去甲斑螯素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小     

血管紧张素Ⅱ对人内皮细胞转录因子NF－kB的激活机制及其对血小板源生长因子B链基因转录的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ对ECV304细胞中转录因子NF－kB的作用和对血小板源生长因子B链（PDGF－B）基因表达的影响。方法：采用电泳迁移率移动分析（EMSA）,免疫组织化学方法,共聚焦显微镜及金颗粒标记免疫电镜技术;荧光素酶报告基因与变异型激酶质粒共转染的方法及Northern印迹法研究血管紧张素Ⅱ激活ECV304细胞NK－kB的信号传递路径和检测了血管紧张素Ⅱ刺激前后ECV304细胞PGF－BmRNA的表达水平。结果：血管紧张素Ⅱ刺激后,在ECV304细胞内有NK－kB的激活及核易位过程,应用免疫荧光聚集显微镜,免疫镜及Northern印迹等方法均可观察到PDGF－B或其基因表达增高。变异型激酶质粒IKKa-KM,IKKβ－KM及NIK－Km可抑制经血管紧张素Ⅱ刺激的转染细胞内与NF－kB启动相连的荧光素酶的表达。结论：血管紧张素Ⅱ可激活胞质内NK－kB并出现核易位,激酶NIK、IKKα和IKKβ参与了此信号传递路径,血管紧张素Ⅱ刺激后PDGF－B链mRNA水平增高。     

银屑病中四种细胞因子表达以及核因子NF—kB的作用

目的：探讨银屑病发病中的核因子调控机制，为疾病治疗提供资料，方法：从银屑病患者外周全血中分离T细胞，与角朊细胞混合培养，利用半定量RT－PCR法分析混合培养体系中的细胞因子mRNA含量，并采用凝胶迁移率电动分析（EMSA）方法分析其中的NF－kB活性。结果：与正常人对照组相比，银屑病患者实验组4种细胞因子的表达显著增加，NF－kB活化也增强；而如先用对甲苯磺酰－L－苯丙氨酸氯甲酮（TPCK）、雷公藤多甙预处理角朊细胞，可抑制细胞因子分泌和NF－kB活化。结论：NF－kB活化增强是导致银屑病炎症反应的重要因素之一，提示抑制NF－kB活性的药物可有助于改善炎症病情。     

核转录因子—kB与前列腺肿瘤

按转录因子NF—kB具有多向性调节作用，可在多种因素作用下被激活，参与调控多种基因的表达；参与免疫反应、胚胎发育、凋亡、肿瘤形成和转移等多种生理及病理过程；并与肿瘤转移过程中起重要作用的粘附分子和细胞外基质蛋白水解酶等分泌调节有关．酣列腺肿瘤的发生、发展及浸润转移，与NF—kB及其抑制因子间正常平衡的破坏及随之而来的系列NF—kB依赖基因表达的改变密切相关．本文综述了NF—kB与恶性肿瘤发生、发展、浸润转移的关系及与NF—kB相关的抗肿瘤策略．     

NF-κB在人肝细胞肝癌中的表达及与HBV X蛋白的关系

目的：研究核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒（HBV ）X蛋白的关系。方法；用免疫组织化学S－P法，检测52例人肝细胞肝癌组织中核转录因子NF－-κB及HBV X蛋白的表达；用脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染入人肝癌细胞系HCC－9204，检测肝癌细胞内核转录因子NF－-κB的表达。结果：52例人肝细胞肝癌组织均有核转录因子NF－-κB的广泛表达，并且在11例HBV X蛋白阳性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于细胞胞质和胞核，而在41例HBV X蛋白阴性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于肝癌细胞的胞质。将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染 入人肝癌细胞系HCC－9204，并在稳定表达X蛋白 的肝癌细胞，核转录因子NF－-κB定位于其胞质和胞核，而未进行基因转染的亲体细胞，核转录因子NF－-κB仅定位于细胞质，细胞核无核转录因子NF－-κB的表达。结论：核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中广泛表达，人肝细胞肝癌中存在着核转录因子NF－-κB的异常激活，并且核转录因子NF－-κB的异常激活与HBV X蛋白有关，X蛋白激活核转录因子NF－-κB， 使其从细胞转位于细胞核，这可能在HBV相关的人原发性肝癌肝癌的发生中起一定作用。     

重组腺病毒△N IkBα的构建及其对A549细胞中NF-kB活性的抑制

目的：探讨△N IkBα基因对NF—kB活性的调节作用。方法：构建去除Ser^32和Ser^36磷酸化位点的IkBα重组腺病毒——Ad—△N IkBα。A549细胞分为3组：即LPS组、Ad—LacZ LPS组和Ad—△N IkBα LPS组．LPS组单纯用内毒素(LPS)激活NF—kB；Ad—LacZ LPS组及Ad—△N IkBα LPS组在用LPS前2d，分别感染Ad—LacZ和Ad—△N IkBα。用western blot、电泳迁移率变动分析(EMSA)和ELISA法分别检测LPS刺激后5h，细胞总蛋白中NF—kB的活性和培养上清中TNF—α及IL-6的含量。结果：Ad—△N IkBα LPS组NF—kB的活性，TNF—α和IL-6的含量，均显著低于LPS组及Ad—LacZ LPS组。结论：突变后的IkBα可明显抑制NF—kB活化，减少TNF—α和IL-6的释放，有望成为一种强有力的抗炎治疗制剂。     

NF—kB、Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的探讨核转录因子-kB（NF—kB）、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义。方法线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型。TTC染色法测量脑梗死体积，免疫组织化学方法检测前脑皮质、基底核NF—kB、Bcl-2和B＆x蛋白的表达。结果与缺血组相比，预处理缺血组脑梗死体积明显减小（p〈0．01），NF—KB蛋白和Bax蛋白表达的细胞数减少（p〈0．001），Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加（p〈0．001）。结论缺血预处理可有效抑制NF—kB的激活并减少神经元的凋亡，Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理产生耐受的原因之一。     

显性负性ⅠκBα对乳腺癌细胞株核因子κB通路和运动迁移的影响

目的： 探讨在高转移人乳腺癌细胞中，核因子κB活性对肿瘤生长及运动迁移能力的影响。方法: 转染显性负性突变的ⅠκBα重组质粒入高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435，筛选并鉴定稳定转染的细胞株；凝胶迁移实验观察核因子κB活性，细胞生长曲线、平板集落形成试验及Millicell-PCF培养小室观察质粒转染对细胞生长和趋化运动的影响。结果: 乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞中存在高NF-κB组成型激活，稳定转染显性负性的ⅠκBα质粒后，细胞NF-κB活性下调，在不明显影响细胞生长、克隆形成的情况下，抑制高转移乳腺癌细胞株的运动能力。结论: 在体外，抑制NF-κB通路，可明显抑制高转移乳腺癌细胞株的运动迁移能力。     

NF-kB在Graves病免疫病理机制中的意义

目的：探讨Graves病（GD）患者外周血单个核细胞（PBMCs）NF—kB活性变化及其在GD免疫病理机制中的意义。方法：分别采集22例未经治疗的GD患者（未经治疗组）、20例经他巴唑治疗〉1年的GD患者（治疗组）及25例健康志愿者（对照组）静脉血,采用凝胶电泳可动性移位分析（EMSA）检测PBMCs中NF—kB活性;采用放免法检测血清IL-1β、IL-6及TNF—α含量。结果：未经治疗GD组患者PBMCsNF—kB活性显著高于治疗组及正常对照组（P〈0．05）;未经治疗GD组患者血清IL-1B、IL-6、TNF—α水平明显高于治疗组和正常对照组（P〈0．05）;未经治疗GD组和治疗组NF—kB活性与IL-6水平均呈正相关。结论：GD患者NF—kB活性明显升高,NF—kB活性增高可能在GD免疫病理机制中起重要作用。     

EGCG抑制肝癌细胞株HepG2增殖及HIF-1α/VEGF的表达

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制肝癌生长的分子机制。方法:采用MTT方法观察EGCG对HepG2细胞株增殖的影响;利用体外厌氧培养技术,通过不同剂量的EGCG进行干预,检测肝癌细胞HIF-1α/VEGF的基因转录和蛋白表达;将肝癌细胞种植于裸鼠体内,观察EGCG对肿瘤生长的抑制作用,并且测定HIF-1α/VEGF的表达。结果:体外试验显示EGCG对肝癌细胞株HepG2的增殖有明显抑制作用;明显下调HIF-1α/VEGF蛋白的表达,而对HIF-1α基因转录影响不大;裸鼠体内试验中观察到EGCG对肿瘤生长有明显抑制作用,抑制率达39.8%±5.1%。结论:EGCG可明显抑制肝癌细胞的增殖,干预HIF-1α/VEGF信号转导通路可能是其抑制肿瘤生长的主要机制之一。     

乙型肝炎病毒核壳蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

目的初步探讨乙型肝炎病毒野生型核壳蛋白和L60V、197L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将构建的野生型核壳蛋白融合表达载体（pEGFP—WT）,L60V变异核壳蛋白（pEGFP—V60）和197L变异核壳蛋白（pEGFP—L97）表达载体HepG2阳性细胞株复苏培养;Western blot检测各核壳蛋白表达;TNF—α、Act—D诱导各种HepG2细胞株凋亡,48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测NF—kB信号传导通路中IKK—α、IKB—α、NF—kB P65蛋白表达与caspase-8、caspase-3蛋白表达情况。结果Western blot检测pEGFP—WT组、pEGFP—V60组和pEGFP—L97组核壳蛋白表达基本相同;流式细胞术检测显示,与pEGFP—C1细胞株相比。48h时pEGFP—WT、pEGFP—V60和pEGFP．L97表达细胞株的细胞凋亡率均明显偏低（P〈0．01）;4组细胞株IKK—α、IkB-α、NF—kB P65蛋白表达水平无明显差异,而pEGFP—WT组caspase-8、caspase-3蛋白表达水平明显低于pEGFP—V60和pEGFP—L97组,且三组表达均明显低于pEGFP—C1组。结论乙型肝炎病毒野生型和L60V、197L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡可能与核壳蛋白影响细胞内caspase-3,8表达有关。     

腺病毒介导HLA-B7可诱导启动子调控双细胞因子基因在人肝癌细胞中表达

目的：使外源性TNF、IFN基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类(MHCⅠ)分子基因表达呈“正反馈”式放大效应。方法：以腺病毒为载体，以IRES连接TNF和IFN基因，选择HLA-B7可诱导启动子调控其表达。分别用RT-PCR、抗体中和实验和MTT法检测转导基因的转录及蛋白表达，流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达。结果：TNFα和IFNβ基因在人肝癌细胞中可有效转录，转染细胞(SMAdBTI、SMAdCTⅠ)的MHCⅠ类分子表达高于SMAd对照组，且SMAdBTI组明显高于SMAdC-TI组。TWF最高活性：SMAdBT1和SMAd分别为1．059ng/ml、415pg／ml；IFN最高活性分别为298．57U／24h/10^6个细胞和262．26U／24h/10^6个细胞。抗TNFα多抗、抗IFNβ多抗对SMAdBTI、SMAdCTI上清均具有中和活性。结论：腺病毒介导的HLA-B7可诱导启动子调控的人TNFα和IFNβ基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721，可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达。     

外源表达EGR-1对肝癌及食管癌细胞生长的影响

目的：探讨早期生长反应基因－１（ＥＧＲ－１）对肝癌和食管癌细胞的生长是否有抑制作用。方法：用脂质体技术将ＥＧＲ－１真核表达载体转染于无ＥＧＲ－１转录，表达的肝癌及食管癌细胞株中，观察外源高表达的ＥＧＲ－１对二癌细胞生长，细胞周期、克隆形成及致瘤性的影响，以空白载体为对照。结果：转染ＥＧＲ－１的ＨＨＣＣ细胞株（肝癌）和ＥＣａ１０９细胞株（食管癌）的生长速率较对照组明显减慢，Ｓ期细胞比例分别减少４５．     

全反式维甲酸对结肠癌不同增殖潜能细胞株VEGF表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸对结肠癌不同增殖潜能细胞株VEGF表达的作用；研究VEGF在结肠癌侵袭和转移中的作用。 方法:采用细胞培养观察、ATRA干预、MTT和FACS方法确定结肠癌细胞株CW-2和LS174T的生长增殖状况，用Northern blotting方法检测结肠癌中VEGF mRNA的表达量，用免疫细胞化学观察细胞VEGF蛋白的表达。 结果:MTT生长曲线显示结肠癌细胞株LS174T的生长增殖比CW-2快;FACS结果显示LS174T细胞的S期细胞较CW-2细胞数多；Northern blotting和免疫细胞化学检测在CW-2中有明显的VEGF表达，但在高增殖细胞株LS174T中VEGF的表达更明显。 结论:VEGF在结肠癌细胞株中有较高的表达。在高增殖结肠癌细胞株VEGF表达更明显。ATRA可能通过抑制VEGF表达，而抑制结肠癌细胞的增生。     

桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721抑制作用的初步研究

目的：探讨桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法：采用四唑盐（MTT）比色法观察不同浓度桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察桔皮素对其增殖的影响。结果：MTT结果显示不同浓度的桔皮素对SMMC-7721的生长均有一定的抑制作用,同一时间,各浓度组与对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）;桔皮素浓度为0．24—30μg·mL。时,对SMMC-7721细胞在药物处理72小时后抑制率为3．85％～93．59％,且72小时的IG50为14．69—21．11μg·mL^-1。生长曲线结果提示,桔皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论：桔皮素能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖。     

维生素D3受体mRNA在肝细胞增殖和肝癌发展中的作用

目的：探讨维生素D3受体mRNA在肝细胞增生和肝癌发展中的作用。方法：体外培养肝癌细胞株SMMC－7721和HCC－T细胞，培养时添加1000nmol/L、100nmol/L、10nmol/L 1，25-(OH)2D3作用1、3、6天后，用四唑盐比色试验（MTT）检测细胞的存活和生长；用反转录PCR（RT－PCR）检测维生素D3受体mRNA的表达。结果：1.25-(OH)2D3可以抑制维生素D3受体mRNA表达阳性的SMMC－7721细胞增生并且有剂量效应关系；对维生素D3受体mRNA表达阴性的HCC－T细胞没有抑制作用。9例肝癌组织标本维生素D3受体mRNA表达均为阳性。结论：1，25－（OH）2D3对于人肝癌细胞株SMMC－7721的增殖具有显著的抑制作用，其机械可能是通过维生素D3受体来实现的。     

锌指蛋白281对肝癌细胞增殖的影响

目的:研究锌指蛋白281(zinc finger protein 281,ZNF281)对肝癌细胞增殖的作用。方法:用realtime PCR检测80例健康人群及206例肝癌患者外周血单个核细胞中ZNF281的mRNA表达水平,并分析肝癌患者单个核细胞中ZNF281的表达水平与多个临床病理参数的相关性。采用real-time PCR及Western blot实验分别检测ZNF281在肝癌细胞和永生化肝细胞中的mRNA及蛋白表达水平。利用小干扰RNA靶向沉默Huh-7细胞和SKHep-1细胞中ZNF281的表达,然后用MTS法检测肝癌细胞活力的变化;EdU标记实验检测肝癌细胞增殖能力的变化;平板集落形成实验检测肝癌细胞集落形成能力的变化;软琼脂集落形成实验检测肝癌细胞锚定非依赖生长能力的变化。结果:与正常健康人群相比,肝癌患者的外周血单个核细胞中ZNF281的mRNA表达水平明显增高,且其增高水平与肿瘤的大小、分期以及血管侵袭性存在正相关。肝癌细胞中ZNF281表达水平高于永生化肝细胞(P0.05)。沉默ZNF281可以抑制肝癌细胞的活力,抑制肝癌细胞增殖,DNA合成降低,集落数量减少,锚定非依赖性生长能力减弱(P0.05)。结论:ZNF281可促进肝癌细胞的增殖。     

核转录因子NF—κB——肿瘤基因治疗的新焦点

NF－κB是一种重要的核转录因子，由一个复杂的体系组成，它存在于多种细胞，参与多种生理、病理过程的基因调控，并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用，NF－κB系统由NF－κB家族及其抑制物IκB家族共同组成。NF－κB的激活是肿瘤细胞抵抗 TNF等抗肿瘤药物作用的重要机制。通过抑制IκB的降解来抑制NF－κB的激活可以导致肿瘤细胞的大量凋亡。因此，通过基因治疗来抑制NF－κB的活性，再辅以常规的3化疗将有望成为一个有效的肿瘤治疗方法。