紫杉醇及塞来昔布对胃癌细胞株ＣＯＸ-２及Ｐ-ｇｐ表达的影响

目的：观察紫杉醇及环氧化酶-２（ＣＯＸ-２）选择性抑制剂塞来昔布（Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）对人胃腺癌细胞株ＢＧＣ-８２３ ＣＯＸ-２及Ｐ-糖蛋白（Ｐ-ｇｐ）表达的影响,探讨ＣＯＸ-２在化疗药物诱发多药耐药（ＭＤＲ）产生机制中的作用。方法：采用ＭＴＴ法检测紫杉醇不同剂量、不同时间点及塞来昔布不同剂量对胃腺癌细胞株ＢＧＣ-８２３生长的影响,在此基础上采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测一定剂量范围内某一时间点的紫杉醇对ＢＧＣ-８２３ ＣＯＸ-２、Ｐ-ｇｐ表达的影响及联合塞来昔布后两种蛋白表达的变化。结果：紫杉醇对胃腺癌细胞株ＢＧＣ-８２３的生长为细胞毒作用,呈时间和剂量依赖性。在一定剂量范围内和某一时间点,随着紫杉醇剂量逐渐升高,ＢＧＣ-８２３的ＣＯＸ-２、Ｐ-ｇｐ表达均呈上升趋势;且这两种蛋白在联合塞来昔布应用后表达均呈下降趋势。结论：紫杉醇可诱导胃腺癌细胞株ＢＧＣ-８２３ ＣＯＸ-２及Ｐ-ｇｐ蛋白的表达,这种表达能被塞来昔布所抑制。ＣＯＸ-２表达的诱导在紫杉醇诱导的Ｐ-ｇｐ表达中起着重要作用。     

下调OTX1的表达对胃腺癌SGC－7901细胞系增殖和凋亡的影响

目的：观察沉默胃腺癌细胞系 SGC －7901的 Orthodenticle 人同源盒基因1（orthodenticle homeobox 1, OTX1）对 SGC －7901细胞增殖能力和凋亡情况的影响。方法：构建 shRNA －OTX1重组质粒载体 pGPU6－OTX1,并应用脂质体转染法将其转染入 SGC －7901细胞。qRT －PCR 法检测 OTX1基因的表达;Western blot法检测 OTX1蛋白的含量;CCK －8法检测 pGPU6－OTX1对 SGC －7901细胞增殖能力的影响;Annexin Ⅴ－PE ／7－AAD 双染流式细胞术检测 pGPU6－OTX1对 SGC －7901细胞凋亡的影响。结果：成功将构建的 pGPU6－OTX1转染入 SGC －7901细胞;qRT －PCR 结果显示 pGPU6－OTX1下调 SGC －7901细胞 OTX1基因的表达;Western blot 结果显示 pGPU6－OTX1使 SGC －7901细胞 OTX1蛋白表达降低;CCK －8结果显示 pGPU6－OTX1明显抑制 SGC －7901细胞的增殖能力;流式细胞术结果显示 pGPU6－OTX1能够诱导 SGC －7901细胞凋亡。结论：pGPU6－OTX1能够抑制胃腺癌细胞 SGC －7901的增殖,并诱导凋亡。     

氯喹促进顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及其机制

  目的  研究自噬对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。  方法  DDP和（或）氯喹处理胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,MDC染色后荧光显微镜观察自噬囊泡,West. ern Blot检测自噬和凋亡相关蛋白。  结果  5 mg/L的顺铂作用于胃癌SGC7901细胞24 h,细胞凋亡率为21.07%±2.12%,同时观测到自噬囊泡增多和LC3-Ⅱ蛋白表达升高;氯喹特异性抑制自噬活性后,提高了顺铂诱导的细胞凋亡率（30.16%±3.54%,P < 0.05）;检测到凋亡相关蛋白Caspase-3和P53表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。  结论  自噬在顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的过程中起保护作用,氯喹抑制自噬后,可能通过激活P53蛋白及灭活Bcl-2蛋白的表达来促进细胞凋亡,联合应用顺铂和氯喹有望成为胃癌治疗的新策略。      

甲基莲心碱逆转人胃癌细胞株多药耐药性

目的:研究新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱(VCR)人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法:采用MTT比色法测定药物的细胞毒作用,SP法免疫细胞化学及流式细胞术检测Nef对人胃癌细胞多药耐药性相关蛋白(MRP)表达的影响。结果:①在10μmol/L的浓度下,Nef对SGC7901及SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;②2.5、5、10μmol/LNef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。在浓度为10μmol/L时,逆转活性较VRP为高(P<0.01);③SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达MRP,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞MRP表达明显下降。表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞MRP的表达。结论:甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性。其机制可能与下调MRP的表达有关。     

转染bcl-2反义寡核苷酸增强5-FU诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡

目的　探讨转染bcl 2反义寡核苷酸 (ASODN)能否增强 5 氟脲嘧腚 (5 -FU)诱导胃癌细胞株SGC790 1的细胞凋亡。方法　通过脂质体转染bcl 2ASODN和对照序列 ,凋亡率由流式细胞仪检测。酶联免疫法 (ELISA)用于检测细胞内源性bcl 2蛋白的表达 ,以证实反义序列的特异性。结果　和对照ODN相比 ,转染bcl 2ASODN显著增强 5 FU诱导的细胞凋亡率 (P<0 .0 1)。ELISA法显示SGC790 1的内源性bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。结论　bcl 2ASODN能增强 5 FU诱导胃癌细胞的凋亡率 ,这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。     

水通道蛋白在人胃癌细胞株表达的初步研究

目的：研究水通道蛋白家族（Aquaponns，AQPs）在不同分化程度的人胃腺癌细胞株及人正常胃粘膜细胞株中的表达情况并初步探讨其意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测水通道蛋白AQP0～AQP12在人胃腺癌细胞株MKN45、AGS、SGC7901及人正常胃粘膜细胞株GES-1中的表达。结果：AGS、SGC7901与GES-1细胞株表达AQP0、1、3、4、5、7、11mRNA；低分化型细胞株MKN45仅表达AQP3mRNA。结论：不同分化程度的人胃癌细胞株中AQPs表达有差异，在低分化细胞株中仅少数AQPs表达，提示AQPs表达可能与胃癌的病理分级相关，并在胃癌发生、发展过程中发挥作用。     

RhoB对胃癌细胞SGC7901的负性调控作用

目的研究RhoB对胃癌细胞SGC7901增殖调控作用。方法用PCR扩增出RhoB的全长cDNA，构建RhoB可诱导表达载体pGene／V5-His-RhoB；脂质体介导法将调控载体pSwitch及诱导表达载体pGene／V5-His-RhoB先后转入人胃癌细胞SGC7901中，筛选出稳定抗性克隆；Western blot检测米非斯酮诱导后转染细胞中RhoB蛋白的表达。用MTT assay检测RhoB转染细胞株的生长速度、双苯并咪唑染料(Hoechst 33258)活细胞吸收分析法、流式细胞仪(FCM)检测RhoB对胃癌细胞凋亡指数作用。结果成功构建RhoB可诱导真核表达载体pGene／V5-His-RhoB，并经酶切和测序鉴定；转染后经潮霉素B和Zeocin筛选出稳定抗性克隆SGC7901／RhoB；米非斯酮诱导出RhoB蛋白表达，在诱导24小时后蛋白表达最高；细胞增殖试验结果显示，RhoB表达上调后胃癌细胞增殖受到抑制；细胞凋亡检测提示高表达RhoB可明显诱导胃癌细胞凋亡。结论RhoB对胃癌细胞增殖具有负性调控作用，可诱导胃癌细胞出现凋亡。     

甲基化EGCG对SGC 7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达影响与抑癌作用研究

目的：观察甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯（methylated epigallocatechin gallate,甲基化EGCG）对胃癌SGC 7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达的影响,探讨甲基化EGCG抗肿瘤的作用机制。方法：采用MTT法观察甲基化EGCG对胃癌细胞SGC 7901增殖的影响,采用免疫细胞化学方法、Western blot法分别检测Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达。结果：甲基化EGCG呈时间依赖性抑制胃癌SGC 7901细胞增殖（P〈0.05）,下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达。结论：甲基化EGCG可能通过下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达,使胃癌SGC 7901细胞的增殖和凋亡之间达到平衡,从而发挥抗肿瘤作用。     

二甲胂酸诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的研究

目的探讨二甲胂酸（DMAA）诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡作用。方法用不同浓度的二甲胂酸与人的胃癌细胞SGC-7901共育一段时间后观察细胞的存活、形态学改变及生物学变化。结果其中以0．5～5．0mmol／L浓度的DMAA诱导其凋亡的作用最明显。主要形态学表现为细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳结果上则显示明显的梯形凋亡条带。而当DMAA浓度≥10mmol／L时细胞核和细胞质中的荧光减弱，细胞呈坏死趋势；同时，MTT结果显示随着DMAA浓度的升高，细胞的活性明显降低。结论DMAA在低浓度时能有效诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡，而高浓度时主要导致其坏死。     

miR-99b通过下调mTOR的表达抑制胃腺癌细胞系SGC-7901的增殖及迁移

目的:探讨hsa-miR-99b在胃腺癌细胞系的表达及其影响胃腺癌细胞系增殖和迁移的潜在作用机制.方法:Real-time PCR检测miR-99b在人胃上皮细胞系GES-1和人胃腺癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MGC-803中的表达.用人工合成的miR-99b模拟物转染SGC-7901细胞构建过表达miR-996细胞系,转染对照模拟物作为对照组,CCK-8法检测过表达miR-99b的SGC-7901细胞的增殖情况,Transwell法检测SGC-7901细胞系的迁移情况,Western blotting检测SGC-7901细胞系中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达情况.结果:miR-99b在胃腺癌细胞系中的表达水平显著低于胃上皮细胞系,其中以SCG-7901细胞最甚.转染miR-99b模拟物48 h后,实验组SCG-7901细胞增殖能力低于对照组(0.20±0.00 vs 0.27±0.02,P＜0.05);与转染对照模拟物的细胞相比,转染24 h后,实验组SCG-7901穿膜细胞数低于对照组[(226.67 ±25.17) vs (523.33±25.17)个,P＜0.05].miR-99b可下调人胃腺癌细胞系SGC-7901中mTOR蛋白的表达.结论:miR-99b在胃腺癌细胞系中的表达明显下调,miR-99b抑制人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖和迁移的作用可能与下调mTOR表达有关.     

下调CACNA2D1对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:探讨下调CACNA2D1对胃癌耐药性细胞系SGC7901/ADR耐药的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测16对胃癌及癌旁组织以及胃癌细胞系SGC7901和SGC7901/ADR中的CACNA2D1 的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹技术（Western blot）检测CACNA2D1的蛋白表达情况;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染CACNA2D1 siRNA后SGC7901/ADR的IC50值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR结果显示:CACNA2D1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01);CACNA2D1在耐药细胞系SGC7901/ADR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901(P＜0.01)。蛋白免疫印迹技术结果显示相对于转染CACNA2D1 negative control（NC）组,转染CACNA2D1 siRNA组的胃癌细胞CACNA2D1表达降低;MTT结果显示细胞系SGC7901与SGC7901/ADR的阿霉素半数抑制浓度（IC50）分别为（1.3±0.6）μg/ml与（5.5±0.45）μg/ml;SGC7901/ADR转染CACNA2D1 siRNA后对阿霉素的IC50明显下降。流式细胞术检测凋亡结果显示,CACNA2D1的表达下调后,SGC7901/ADR细胞的凋亡比明显增加。 结论:CACNA2D1能够促进胃癌SGC7901/ADR细胞系产生多药耐药。     

三氧化二砷对胃癌细胞系SGC7901的生长及VEGF表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对胃癌细胞株SGC7901的生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：体外培养胃癌细胞株SGC7901,加入不同浓度的As2O3干预,用Western bloting和荧光定量RT-PCR法测定VEGF蛋白和mRNA表达,加入外源性重组人VEGF165,观察VEGF对肿瘤细胞生长的刺激以及As2O3对此作用的抑制.结果：胃癌细胞株SGC7901经As2O3作用后,VEGF的蛋白表达明显减少,但VEGFmRNA拷贝数无差异.在SGC7901细胞培养中加入外源性VEGF165,其细胞活力有所增加,细胞存活率均大于100％;当同时加入VEGF165和As2O3时,其细胞存活率明显减低.结论：As2O3在蛋白水平抑制胃癌细胞株SGC7901的VEGF表达,抑制SGC7901的生长.     

三氧化二砷逆转人胃癌细胞SGC7901/ADR耐药性的作用机制

Objective: To investigate the reversal effect of arsenic trioxide (As2O3) on the multidrug resistance of human gastric tumor SGC7901/ADR cell line to adriamycin (ADM) and its reversal mechanisms. Methods: The non-cytotoxic concentration of As2O3 and the sensitivity of SGC7901/ADR cells to ADM were detected by MTT assay. The drug concentration and P-gp function of SGC7901/ADR cells were measured with flow cytometry (FCM), and the impacts of As2O3 on the GST-π and TopoⅡ expressions of SGC7901/ADR cells were analyzed by immunohistochemical method. Results: As2O3 at 0.4 to 0.8 μmol/Lconcentrations were not significantly cytotoxic to SGC7901/ADR cells. As2O3 at 0.8 μmol/L could improve the sensitivity of SGC7901/ADR cells to ADM via inhibiting P-gp function, down-regulating GST-π expression and increasing the intracellular accumulation of ADM in SGC7901/ADR cells. Conclusion: As2O3 can reverse partly the drug-resistance of SGC7901/ADR cells to ADM, which may be related with inhibiting the P-gp function and down-regulating GST-π expression.     

人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的:探讨NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞恶性表型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法:将构建好的人NHE1反义基因真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,观察NHE1反义基因转染后SGC-7901胃癌细胞的细胞形态学、NHE1蛋白表达、体外生长增殖特性、双层软琼脂集落形成能力的变化。结果:NHE1反义基因转染的SGC-7901胃癌细胞形态恶性程度降低,NHE1蛋白表达明显减少,双层软琼脂集落形成能力、体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复,细胞凋亡率增加。结论:NHE1反义基因转染能使SGC-7901胃癌细胞的NHE1蛋白表达明显下调并逆转其恶性表型,提示NHE1基因可成为肿瘤治疗的新靶点,具有一定的临床应用前景。     

Integrin?l asODN - inhibition of cell attachment and invasion of the human gastric cancer cell line SGC7901

Objective To study the inhibition of adhesion and invasion of SGC7901 cells into the ECM by integrin?l antisense oligodeoxynucleotide asODN. Methods asODN and control ODN were transfected into SGC7901 cells using liposomes as vectors. The distribution of the ODN was followed by immunochemistry and changes in the expression of integrin?l mRNA and protein were determined by RT-PCR and FCM, respectively. The adhesion and invasion into the ECM were measured by the MTT and Boyden chamber methods, respectively. Results Integrin?l asODN which was transfected into SGC7901 cells distributed evenly in the cytoplasm and nucleus. PCR and FCM revealed a weakened band at 489bp and a left-shift curve, respectively. Adhesion and invasion assays showed decreased activity with an inhibition rate of 54% and 76%. The extent of decrease induced by integrin?l asODN was larger than that caused by random control ODN (P<0.001 ). Conclusion Transfection of integrin?l asODN into SGC7901 cells induced a decrease in the expression of integrin?l mRNA and protein, resulting in a decrease in adhesion and invasion into the ECM, with a greater effect than random control ODN. This work was supported by the 973 State Project of Important Basic Research and the Key Project of the Department of Education, Liaoning Province.     

胃癌组织中环氧合酶-2表达及其与P-gp表达相关性的研究

目的 :探讨环氧合酶 2 (COX 2 )蛋白在胃癌组织中的表达 ,并探讨COX 2对P糖蛋白 (P gp)表达的影响。方法 :应用免疫组织化学方法检测 4 8例胃癌及 10例正常胃组织中COX 2蛋白与P gp蛋白的表达。结果 :正常胃组织中未见COX 2表达 ,胃癌组织中COX 2阳性率为 6 0 .4 % (2 9/ 4 8) ,其阳性表达与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移相关 (P <0 .0 5 )。COX 2阳性组中P gp表达阳性率为 82 .8% (2 4 / 2 9) ,而COX 2阴性组P gp同时阴性率 6 3.2 %(12 / 19) ,两者有高度正相关性 ,相关系数r=0 .4 70 (P <0 .0 1)。结论 :COX 2蛋白的表达参与胃癌的发生及恶性进展 ,并可能干预P gp表达 ,参与对肿瘤的多药耐药 (MDR)的调节作用     

LINC00997在胃贲门腺癌中表达的临床意义及其对SGC7901细胞迁移、侵袭和EMT的影响

目的：检测LINC00997在胃贲门腺癌（GCA）组织及胃癌细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系,探讨敲减LINC00997对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法：基于TCGA和GTEx数据库分析LINC00997在胃癌组织中的表达及其与患者预后的关系。应用qPCR法检测68例GCA组织和相应癌旁组织以及胃癌细胞中LINC00997的表达水平,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。通过划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测敲减LINC00997对SGC7901细胞迁移和侵袭的影响,qPCR法和WB法检测敲减LINC00997对EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin及vimentin表达的影响。结果：LINC00997在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,且LINC00997高表达组患者的OS及DFS显著低于LINC00997低表达组患者（P<0.01或P<0.05）。在68例在GCA组织中,LINC00997的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,其表达与患者淋...     

熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901增殖和诱导细胞凋亡的机制

背景与目的:研究表明熊果酸(ursolicacid,UA)可抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,但目前有关UA作用于胃癌细胞的报道较为少见。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种癌前病变及癌组织中高表达。本研究旨在探讨熊果酸抑制人胃癌细胞SGC7901增殖和诱导凋亡的机制。方法:MTT法检测0、10、20、30、40!mol/LUA作用不同时间对SGC7901细胞增殖的影响;荧光染料Hoechst33258染色观察不同浓度UA作用24h细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡率;Westernblot法检测COX-2蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)。结果:20～40!mol/LUA可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用12、24、36、48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(57.50±1.18)!mol/L、(34.28±2.05)!mol/L、(27.54±1.11)!mol/L、(24.83±1.02)!mol/L;20～40!mol/LUA作用24h后,SGC7901细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(9.10±2.39)%、(26.30±1.25)%、(35.20±2.26)%;同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化。结论:熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制及诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达进而减少PGE2生成以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达有关。