血管抑素抑制胶质瘤的实验研究

背景与目的:近年来血管抑素在胶质瘤治疗中的意义倍受关注。本研究探讨血管抑素重组表达质粒对裸鼠皮下胶质瘤血管生成、细胞凋亡和肿瘤生长的影响,以寻求治疗胶质瘤的有效方法。方法:取Balb/c裸小鼠22只,建立裸鼠皮下胶质瘤模型,6～9天左右皮下肿瘤平均直径达到4mm,随机分为对照组和As治疗组,每组11只,分别注入100μl纯化pcDNA3和As重组质粒,注射2天后各组随机取5只处死取肿瘤作检测。分别做HE染色,As蛋白免疫组化染色,并行血管内皮细胞标记物CD31检测,观察肿瘤血管化的情况,并行TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。剩余每组6只每隔3天测量肿瘤长、短径,绘制肿瘤生长曲线图。结果:As基因治疗可抑制肿瘤的生长,对照组基因注射后15天肿瘤体积为(1519.88±256.54)mm3,As治疗组肿瘤体积为(1148.03±191.51)mm3,两者差异有显著性(P<0.05)。As治疗组与对照组相比血管密度明显减小。两组凋亡指数差异亦有显著性(P<0.05),凋亡细胞集中在肿瘤坏死区周围,细胞核固缩呈圆形或椭圆形团块,典型者染色质呈新月形或蚕豆状浓染。结论:As具有抑制血管生成的作用,并可诱导肿瘤细胞的凋亡,对裸鼠皮下胶质瘤的生长具有延缓作用。     

腺相关病毒介导重组血管抑素联合雷公藤红素对大鼠颅内C6胶质瘤的抗血管生成作用

目的:腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的重组血管抑素(angiostatin,AS)联合应用雷公藤红素(celastrol)治疗大鼠颅内C6胶质瘤,观察其对肿瘤体积、新生血管密度及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨抗血管生成重组基因联合雷公藤红素对胶质瘤治疗的前景。方法:建立颅内原位荷C6脑胶质瘤大鼠模型,7d后随机分为4组,分别给予0.9%氯化钠溶液(作为对照)、AAV-AS、雷公藤红素及两者联合用药。每隔7d行头部强化MRI检查,计算肿瘤体积。于22d后处死动物,检测AS蛋白表达、血管密度及肿瘤细胞凋亡情况。结果:联合治疗组及AAV-AS治疗组均检测到AS蛋白表达,证实基因转导成功。联合治疗组第22天时肿瘤体积、血管密度和凋亡指数均与对照组、雷公藤红素组及AAV-AS治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗可以抑制肿瘤生长,降低新生血管密度,促进肿瘤细胞凋亡。结论:基因治疗联合雷公藤红素可通过抑制胶质瘤血管生成而抑制肿瘤生长;两者联合应用具有协同作用,可弥补两者单独应用的不足之处。     

反义HIF-1α基因联合血管抑素基因对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究反义缺氧诱导因子-1α（antisense hypoxia inducible factor-1α,aHIF-1α）基因联合血管抑素（angiostatin）基因对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的协同治疗作用。方法：使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立裸鼠皮下移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、PcDNA3-Angiostatin、PcDNA3B-aHIF-1α、PcDNA3-Angiostatin＋PcDNA3B-aHIF-1α。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤组织Angiostatin、血管内皮生长因子（VEGF）、HIF-1α的表达和微血管密度（MVD）,利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果：Angiostatin基因联合aHIF-1α基因治疗组裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制,肿瘤组织中HIF-1α蛋白局部低表达,MVD（13.6±2.3）明显低于Angiostatin基因治疗组（24.5±2.7）,VEGF表达低于各单独治疗组和对照组,细胞凋亡指数（5.32±0.62）高于Angiostatin基因治疗组（2.89±0.45）、aHIF-1α基因治疗组（2.98±0.51）和对照组（1.56±0.41）。结论：Angiostatin基因联合aHIF-1α基因治疗卵巢癌裸鼠皮下移植瘤可以产生协同抑制作用,可在一定程度上解决肿瘤的抗血管生成治疗的耐药性问题。     

白细胞介素-7基因抗肿瘤效应的实验观察研究

目的：探讨白细胞介素－７裸ＤＮＡ质粒用于小鼠肿瘤基因治疗的可行性。方法：构建ＩＬ－７基因真核表达质粒（ｐＳＶＫ３ ＩＬ－７）,并将此质粒ＤＮＡ直接肌肉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内,在此之前７天、同时、之后７天背部皮下接种ＳＰ－２肿瘤细胞,观察该质粒基因的体内抗肿瘤生物学活性;并通过ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测注射部位ＩＬ－７ｍＲＮＡ的表达情况。结果：在实验中观察到直接肌肉注射ＩＬ－７基因质粒ＤＮＡ的荷瘤鼠     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

脂质体介导Endostatin IL-12基因联合治疗移植型鼠肝癌的实验研究

目的:探讨脂质体介导Endostatin及IL-12基因联合治疗肝癌的可行性.方法:将已构建的Endostatin和IL-12真核表达载体给荷瘤BALB/c鼠瘤内注射,每周两次测量瘤体积.ELISA法检测肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin含量,MTT法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:联合治疗组肿瘤体积明显小于其它各组(P＜0.05);肿瘤局部IL-12、IL-2、Endostatin的表达明显高于pVAX1空载体和生理盐水对照组(P＜0.05);NK细胞杀伤率和肿瘤细胞凋亡率分别为52.0%和48.2%.结论:联合应用Endostatin和IL-12基因可有效抑制鼠肝癌的生长.     

IL-24对B16细胞生长抑制作用的体内外实验研究

目的:构建白细胞介素24(Interleukin24,IL24)真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL24真核表达质粒pEGFPIL24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察其表达,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的体内生长抑制作用。结果:pEGFPIL24转染B16细胞后,LSM可观察到IL24在细胞中的表达。转染IL24基因的B16细胞体外增殖能力明显受到抑制,细胞被阻滞在G2/M期。与对照组相比,IL24基因治疗组肿瘤在体内的生长受到明显抑制,P<0.05。结论:IL24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。于荷瘤小鼠的瘤内注射pEGFPIL24可抑制肿瘤生长,提示IL24具有明显的体内外抗肿瘤作用。     

双基因（VP3、IL-18）联合致小鼠骨肉瘤S-180细胞凋亡的效应

目的探讨VP3、IL-18双基因抑制骨肉瘤S-180的联合抑瘤作用。方法将VP3、IL-18基因插入pVAX1表达载体的pCMV启动子之下的EcoRI位点，构建成pVVP3及pVVp3-IL18。将该重组质粒与单独表达凋亡素基因的重组质粒分别注射荷S-180肿瘤细胞的BALB／C小鼠，比较抑瘤趋势和抑瘤率。结果联合应用VP3基因和IL-18基因的重组病毒治疗组的抑瘤率（46．16％）高于单独应用VP3基因组的抑瘤率（19．56％），两组比较有统计学差异（P〈0．05）。结论凋亡素基因具有凋亡诱导效应及体内的抑瘤效应。凋亡素基因VP3与IL-18基因有协同抑瘤效应，联合基因治疗骨肉瘤可提高抑瘤效果。     

探讨中药消岩汤联合重组人内皮血管抑制素配合化疗治疗乳腺癌作用机制研究

目的从体内和体外实验,观察中药消岩汤联合重组人内皮血管抑制素配合5-Fu对乳腺癌的治疗效果及作用机制。方法体外实验分为空白组、不同中药浓度及联合重组人内皮血管抑制素配合5-Fu组共10组,作用24h后,以MTT法检测MCF-7乳腺癌细胞的细胞增殖活性及用Hoechst33258法检测细胞的凋亡情况。体内实验分为空白对照组、消岩汤高剂量组、消岩汤低剂量组、5-Fu组、消岩汤高剂量+5-Fu组和消岩汤高剂量+重组人内皮血管抑制素+5-Fu组,分别予以干预措施,干预7天后处死,观察抑瘤率,小鼠体重变化及血清中瘦素水平变化。结果与对照组相比,各用药组均能不同程度地抑制细胞活性和促进凋亡,抑制肿瘤细胞增长,增加荷瘤小鼠体重,降低血清中瘦素水平含量,减少肿瘤周围新生血管生成,消岩汤联合重组人内皮血管抑制素及5-Fu组最优。结论消岩汤对重组人内皮血管抑制素配合化疗治疗乳腺癌有增效减毒作用。     

内皮抑制素基因治疗小鼠肝癌及其机制研究

 目的探讨内皮抑制素质粒重复注射治疗小鼠肝癌的效果及其作用机制。方法内皮抑制素质粒转染BHK21,ELISA检测培养上清中内皮抑制素的含量,并用此上清作用于ECV304内皮细胞,MTT法检测内皮细胞的增殖。小鼠股部肌内接种H22细胞,反复注射内皮抑制素质粒/PVP,观察肿瘤的形成。ELISA检测血清中内皮抑制素的含量,免疫组化观察肿瘤血管密度,TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡。结果转染上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,并可抑制内皮细胞的增殖,抑制率约29.2%。治疗组血清内皮抑制素水平升高,瘤内血管减少,肿瘤细胞凋亡增加,肝癌生长受抑,抑制率为56.4%。结论PVP介导的内皮抑制素基因治疗可以抑制小鼠肝癌血管形成,从而较好地抑制了肝癌的生长     

子宫内膜增生过长与内膜腺癌腺上皮细胞DNA定量分析

本文采用显微分光光度计技术对26例正常子宫内膜、子宫内膜增生过长和子宫内膜腺癌的腺上皮细胞DNA进行定量测定,结果表明:7例囊腺型增生过长细胞核DNA含量与正常增殖期内膜相近;7例腺瘤型增生DNA平均含量介于囊腺型增生与内膜癌之间,其中2例DNA含量及细胞倍体分布与内膜癌相似;8例内膜癌DNA含量显著高于增殖期内膜细胞,非整倍体细胞明显增多。DNA含量的测定能更客观精确地反映内膜细胞的增生、分化程度,并作为探索内膜癌早期诊断的一项指标。     

食管贲门癌术后胸胃排空障碍的成因和预防

目的探讨食管贲门癌术后胸胃排空障碍的成因和预防措施。方法食管贲门癌手术１５４７例，发生胸胃排空障碍１５例，均为上腹、右胸、左颈吻合。手术方式由术中将食膈孔扩张至４指使胃通过时充分舒张，改为行食膈孔处切断部分膈肌。结果行食膈孔处切断部分膈肌，术后未发生胸胃排空障碍。结论胸胃排空障碍与迷走神经切断致胃解剖位置变化而影响胃十二指肠压力梯度和胃窦部功能及胃泌素分泌的功能有关，也与常规扩张食膈孔后膈肌自行回缩、膈肌重建过紧、胸胃远端呈“Ｓ”型扭曲、幽门位于膈肌以上使十二指肠呈关闭状、胃扭曲和术后粘连等机械性因素有关。     

颅咽管瘤的预后分析

198 2年 1月至 1 993年 2月术后放疗颅咽管瘤 4 4例。 5年生存率为 78 9%。其中 ,成人 1 5例 ,儿童 2 9例。儿童颅咽管瘤与成人的比较 :5年生存率高 ,疗后生存质量差 ,但无统计学差异。儿童颅咽管瘤术后放疗剂量 5 6 1～ 6 0Gy组与 4 5～ 5 6Gy组比较 :5年生存率无差别 ,但疗后闭经 -性功能障碍发生率增加 (P <0 0 5 ) ;疗后生存质量Ⅱ～Ⅲ级的比例明显增加 (P <0 0 1 )。我们建议对儿童颅咽管瘤部分切除术后应给予放疗 ,术后放疗剂量以 4 5～ 5 6Gy/ 5～ 6周为宜。     

17例早期贲门癌临床分析

自1978—1984年12月共收集17例贲门癌,占同期贲门癌切除病例(320例)的5％,早期贲门癌在临床上比较少见,如能早期发现、早期诊断、早期治疗,手术切除和五年生存率比进展期高。贲门癌的研究处于初期阶段,文章着重讨论国内外专家对贲门癌范围的认识,笔者使用内窥镜诊断以及外科治疗点滴体会。     

影响贲门癌手术患者预后的相关因素分析

目的：探讨影响贲门癌患者生存时间的影响因素。方法：收集236例贲门癌患者临床资料和随访资料，使用单因素Log-rank检验、Cox比例危险模型对影响预后的因素进行单因素、多因素回归分析。结果：肿瘤长度、淋巴结转移、组织病理学类型和TNM分期对患者的预后有影响。结论：早发现、早治疗是提高患者生存率的关键。     

某电厂周围大气颗粒物提取物的致畸效应

本文以惧某电厂下风顺居民区内的大气颗粒物，经二氯甲烷提取，减压浓缩制成受试物。以１，１０，２０和４０ｍｇ／ｋｇ剂量腹腔注射于妊娠６－１５ｄ的孕鼠，然后按传统致畸试验方法处理。结果发现：所试剂量对孕鼠无毒性，对胚胎产生毒效应，２０和４０ｍｇ／ｋｇ组与对照组有明显差异，并抑制胎仔的正常生长发育，其作用与剂量有关，并在２０和４０ｍｇ／ｋｇ时产生一定的致畸效庆，表现为外观畸形和骨骼发育。     

南澳县食管癌减寿年数指标的分析

广东南澳县是中国食管癌高发区之一。本文作者应用减寿数指标分析了南澳县十年来食管癌死因资料，描述该肿瘤减寿的时间和人群间的分布。     

亲和组化法检测乳腺癌雌,孕激素受体状态的研究

用亲和组化法（半定量分析法）同时检测６７例乳腺癌和良性病变组织印片和石腊切片的ＥＲ／ＰｇＲ状态，二种玻片的ＥＲ阳性、阴性和总符合率分别为８９．５％、９６．６％和９２．５％；双顶阳性（ＥＲ＋／ＰｇＲ＋）、双项阴性（ＥＲ－／ＰｇＲ－）和双项总符合率分别为７５．９％、９２．６％和８２．１％；同种方法检测１５７例随机乳腺癌石腊切片，发现ＥＲ阳性率为５８．６％（９２例）；ＰｇＲ阳性率４８．４％（７６例）．１５７例随访资料提示，受体双项阳性者，其健康良好。乳腺癌分期同ＥＲ／ＰｇＲ状态的比较，ＥＲ＋／ＰｓＲ＋者的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期病例分别为３７．５％、４５．３％和１７．２％，无Ⅳ期病例：而ＥＲ－／ＰｇＲ－者则为１３．８％、２２．４％和４３．１％．提示，用亲和组化法测定乳腺癌石腊切片ＥＲ／ＰｇＲ状态有较好的可信性。但对乳腺粘液腺癌和派杰氏病宜用切片或针吸涂片。     

贲门癌手术径路的合理选择

目的 研究贲门癌选择各种手术径路的临床价值。方法 对本组贲门癌患者,术前进行充分的讨论,依据病灶范围、全身情况,选择适合的手术径路施术,对手术彻底性、切除率、切缘阳性率、术后总并发症、吻合口瘘、心肺功能影响等进行分析。结果 本组手术彻底性高,手术切除率为９５％,全胃切除率１２％,淋巴结转移率８４．６％,总并发症８．７％,吻合口瘘０．４％,心血管并发症３％,呼吸系统并发症４．４％,住院死亡率０．４％     

120例大肠癌的外科治疗

目的 讨论大肠癌的诊断和手术治疗.方法 大肠癌诊断遵循肛门指检、钡剂灌肠、纤维结肠镜检查步骤,对急性梗阻性结肠癌患者,除腹部X线片,条件允许可作钡灌肠,明确梗阻部位.采用梗阻近端肠腔充分减压,大量抗菌素溶液冲洗,尽量使吻合口“上空、中松、下通”引流管放过安全期的方法.结果 肛指检查对诊断直肠癌是可靠的,本组15例急性梗阻左半结肠癌作Ⅰ期切除吻合术,无吻合口瘘发生.结论 对便血、大便习惯改变的患者,必须按上述顺序作肛指和其他检查来提高早期诊断和术后五年生存率,按上述方法,急性梗阻性左半结肠癌Ⅰ期切除吻合是安全的.