火器性坐骨神经损伤后神经元凋亡的特点

目的 通过兔坐骨神经火器性断裂伤与震荡伤模型,观察周围神经损伤后,相应中枢神经元的凋亡规律。方法 113只大耳白兔随机分为火器伤组、切割伤组、正常对照组3组。在伤后6小时、1、3、7、14、28天等6个时相点取材观察计数脊髓前角运动神经元、凋亡细胞,及凝胶电泳检测凋亡细胞的DNA。结果火器伤组伤后1天～1周时脊髓伤侧前角神经元计数与正常组和切割伤组同时相点比较,差异不显著（P＞0．05）;2周时神经元数与正常组相比显著降低（P＜0．01）,与切割伤组相比,差异不显著。火器伤组伤后6小时即可见到脊髓神经元凋亡细胞,凋亡发生的高峰期为伤后第7天,而正常对照组无凋亡阳性细胞出现,切割伤组凋亡细胞数明显减少且时间滞后。结论 与火器性坐骨神经震荡伤相比,火器性坐骨神经断裂伤后脊髓神经元凋亡出现早,数量多,持续时间长,前角神经元数量减少明显。     

兔坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律

目的：探讨坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元及胶质细胞凋亡规律。方法：65只大耳白兔分为正常对照组，高速弹丸震荡伤组（震荡伤组）和功能伤组，震荡伤组致伤靶点为兔右大腿外侧坐骨神经体表投影线中点，切割伤组在同一水平切断右坐骨神经，应用DNA电泳，原位末端标记法（TUNEL）染色和流式细胞仪进行细胞凋亡定性定量检测。结果：震荡伤组伤后2周运动神经元数明显减少，伤后1，2周，可见TUNEL阳性运动神经元及胶质细胞，DNA电泳出现凋亡梯形带，流式细胞仪检测可见亚二倍体峰，震荡伤组伤后1，2周，细胞凋亡百分比分别为10．6％和26．4％，切割伤组仅在4周时有少量阳性运动神经元，结论：与切割伤组比较，震荡伤组细胞凋亡发生早，数量多，凋亡是坐骨神经高速弹丸震荡伤后运动神经元数量减少的主要机制。     

不同损伤条件下CIDE-B的变化与神经元凋亡的关系

目的通过对周围神经火器伤和切割伤CIDE-B基因及蛋白的表达检测，并与神经细胞的凋亡进行对比，探讨CIDE-B的变化与神经元凋亡的关系。方法113只大耳白兔随机分为火器伤组、切割伤组、正常对照组。在伤后不同时相点取材，以RT-PCR法检测CIDE-B mRNA表达水平，原位杂交检测CIDE-B mRNA的形态学分布，Western blot检测CIDE-B的蛋白水平。结果神经损伤后脊髓内CIDE-B mRNA表达增强。火器伤组增加的幅度较大，第1天开始增加，7d达到峰值，持续到2周，4周回落；切割伤组表达增加延迟，幅度也小。蛋白水平的变化与此相一致。正常对照组脊髓组织有少量的CIDE-B mRNA表达，分布于脊髓神经元细胞胞浆内。结论周围神经损伤后脊髓神经元CIDE-B在mRNA、蛋白水平的表达均增强，组织学分布在脊髓灰质内，火器性损伤改变更加明显。     

大鼠坐骨神经损伤后运动神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元胞体的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4 ～L6节段脊髓作H·E染色 ,计算脊髓前角运动神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊髓前角运动神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊髓前角运动神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊髓前角运动神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

胸腰段脊髓火器贯通伤后Bcl-2基因的早期表达

目的 建立家猪胸腰段脊髓火器贯通伤模型和改良Allen打击伤后全瘫模型,观察伤后Bcl-2基因的早期表达。方法 实验动物随机分为3组,其中火器贯通伤组（G组）9只,在全麻状态下制作胸腰段（L1～L2）脊髓火器伤模型;打击伤组（A组）9只,L1节段脊髓行改良Allen打击;对照组（C组）2只,仅予麻醉不致伤。于伤后1、3、6小时和距伤点不同距离处取材,进行Bcl-2蛋白的免疫组化染色。结果 两组脊髓损伤后6小时出现Bcl-2蛋白的表达增加,A组仅在伤点和近伤段处变化,而G组波及中伤段及远段伤。结论 细胞凋亡基因Bcl-2在脊髓损伤中的表达有一定的时空性,在脊髓损伤后6小时,出现Bcl-2基因蛋白表达增加。G组波及范围较A组更为广泛。     

合并多发伤的胸腰段脊柱脊髓火器伤的临床特征和救治探讨

目的探讨合并多发伤的胸腰段脊柱脊髓火器伤的临床特点和救治经验,提高其诊治水平。方法回顾性分析了12例合并多发伤的胸腰段脊柱脊髓火器伤的损伤特点和救治情况。本组中椎管贯通伤3例,椎管盲管伤5例,椎管切线伤3例,椎体伤1例。12例均合并胸、腹腔脏器的损伤。治疗包括早期伤道清创术,正确处理多发伤,及时的脊髓减压、内固定等。结果术后椎体前缘高度、矢状面指数和椎管矢状径均明显改善,术后随访与术后相比差异无显著性意义。按美国脊髓损伤协会的ASIA分级标准,术后11例分别提高了1～3级,1例A级无变化。术后无1例发生椎体高度丢失、再移位、内固定失败等并发症。结论认识合并多发伤的胸腰段脊柱脊髓火器伤的临床特征,掌握正确的早期处理原则,摘除椎管内异物,解除脊髓压迫,重建脊柱稳定性,是提高救治水平的关键。     

胶质细胞源性神经营养因子在大鼠生后腰段脊髓中分布的实验研究

为探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠脊髓运动神经元的作用,采用免疫组织化学方法,观察GDNF在大鼠生后1、3、7、10、14和28天腰段脊髓中的分布.结果发现,在生后1、7和28天脊髓灰质前角运动神经元有强阳性染色,生后3天脊髓灰质前角运动神经元呈弱阳性染色,生后1、3、7和28天脊髓灰质后角神经元和少量胶质细胞也呈阳性反应.此外,在各组大鼠腰段脊髓后根内的胶质细胞亦可见GDNF免疫阳性反应.提示GDNF可能对脊髓运动神经元的发育、存活以及功能的正常发挥起重要作用.     

电刺激对大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡调控基因表达的影响

目的 观察直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax基因表达的作用,探讨电刺激防治细胞凋亡的机制。方法 30只SD大鼠坐骨神经切断后,平均分为两组。实验组在相应的脊髓节段立即置入直流电刺激器,对照组置入无输出电流的刺激器,分别于术后1,4,7,14,28d取材,应用免疫组化技术,光镜下观察脊髓动物神经元bcl-2,bax的表达,并对脊髓阳性运动神经元进行计数。结果 坐骨神经切断后4,7,14d,实验组脊髓运动神经元bcl-2阳性数高于对照组;坐骨神经切断后4,7,14,28d实验组脊髓运动神经元bax阳性数低于对照组。结论 直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax的表达具有调节作用。     

大鼠坐骨神经损伤急性期缓激肽在相应脊髓前角的变化规律

应用免疫细胞化学方法,结合图像分析仪,研究了缓激肽在脊髓腰骶段及L_(4～6)背根节的分布,以及坐骨神经切断后,它在相应前角运动神经元的相对含量的变化规律。结果:缓激肽分布于L_(4～6)背根节及腰骶髓灰质的第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ层神经元及脊髓白质的神经胶质细胞和神经纤维。在神经损伤的研究中,相应脊髓前角运动神经元的缓激肽含量,损伤后第15h是减少的,以后逐渐增多,至第72h仍维持在高位水平。     

周围神经损伤对脊髓运动神经元NT—3表达的影响

目的：探讨周围神经损伤对脊髓运动神经元神经营养因子－3（NT－3）水平变化规律及与神经元病理变化的相关性。方法：切断大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,免疫组织化学染色NT－3阳性脊髓运动神经元、图像分析计算其吸光度以反映NT－3的水平。结果：成鼠或乳鼠坐骨神经损伤后运动神经NT－3水平均很快下降,致伤后第2周降至最低水平,随后逐渐恢复,至4周仍未恢复到对照组水平;神经元病理改变过程与此相似,但乳鼠NT－3基础水平高于成鼠。结论：周围神经损伤后脊髓运动神经元NT－3水平将发生变化。运动神经元内源性NT－3水平与其病变程度呈负相关。     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

外周神经损伤对脊髓背角与中枢-外周移行区星形胶质细胞反应的影响

目的 应用免疫组化技术及电镜观察外周神经损伤后脊髓背角中枢--外周移行区星形胶质细胞反应。方法 51只成年wistar大鼠随机分为3组：A组（n=7）正常对照组;B组（n=24）背根压榨伤组;C组（n=20）坐骨神经压榨伤组。损伤组按存活期不同各分为4个亚组,每亚组5例,大鼠分别于伤后3天、2周、1月和2月处死取材。A组、B组3天、2月时相点各取2例用于电镜标本制作。免疫组化染色观察L5脊髓背角及中枢-外周移行区胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,电镜观察中枢-外周移行区星形胶质细胞反应。结果（1）背根和坐骨神经损伤可引起脊髓背角GFAP的显著表达,其中后者的GFAP表达随时间延长而减弱,而前者整个观察期持续高水平表达;（2）坐骨神经损伤不引起中枢-外周移行区GFAP的表达增强,但背根损伤可导致该区域GFAP的显著表达且持续整个观察期;（3）超微结构观察示背根压榨伤后中枢-外周移行区星形胶质细胞突起大量增生,占据了背根传入纤维的径路。结论 外周神经损伤引起的脊髓背角及中枢-外周移行区的反应性胶质化可能是背根再生不能重建脊髓和外周联系的重要原因。     

坐骨神经损伤修复过程中髓鞘变化的形态学研究

目的：探讨坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，并对髓鞘显示方法的应用价值进行评估。方法：制备大鼠坐骨神经损伤实验模型，采用锇酸染色，改良苏木精染色和镀银染色等三种髓鞘显示方法对伤后30天，90天髓鞘的形态学变化进行比较研究。结果：应用三种方法均观察到伤后两组伤侧坐骨神经髓鞘形态结构同对照侧有明显差别，伤后30天神经髓鞘溃变程度很高；伤后90天，神经髓鞘形态结构接近正常。结论：三种髓鞘显示方法均能反映坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，改良苏木精染色方法是显示髓鞘的形态结构及其与轴突关系的简捷有效的方法，锇酸染色方法不仅适用于显示髓鞘的形态结构，还可进行形态计量分析。     

大鼠坐骨神经损伤后嗅球成鞘细胞对脊髓神经元的保护作用

目的：探讨嗅球成鞘细胞（OECs)对大鼠坐骨神经损伤引起的脊髓前角运动神经元死亡的保护作用，方法：30只SD大鼠随机分成对照（SAL）组和实验（OFCs)组，采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经，硅胶管内给予等渗盐水或培养成活的新生大鼠OECs，分别于伤后7，14，30d应用尼氏染色，酶组织化学染色方法，检测神经损伤侧的脊髓前角运动神经元死亡数目和胆碱酯酶（ChE)及酸性磷酸酶（ACP）的变化。结果：与SAL组比较，伤后7，14和30d,OECs组脊髓前角运动神经元死亡率分别降低了7．04％，6．44％，和9．72％（P＜0．01），脊髓前角运动神经元中ChE活性变化幅度分别降低了4．03％，4．25％和5．72％（P＜0．01），ACP的变化幅度分别下降了51％、64％和92％（P＜0．01），结论：OECs对周围神经损伤后引起的神经元死亡有较好的保护作用。     

低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的效果比较

目的 比较低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的疗效。方法 取45只成年雄性SD大白鼠，随机分为A、B、C、D4组。A、B、C组为实验组，每组10只；D组为供体组，15只，切取双侧坐骨神经15mm作为供神经。A组的供体神经在－196℃下保存3周，37℃生理盐水复温后桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；B组用70％酒精浸泡8小时后，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；C组的供体神经不经任何预处理，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段。术后17周进行电生理测定，光镜观察及移植异体神经中段的轴突计数。结果 A、B实验组的电生理测定及移植神经中段的轴突计数结果无显著性差异，光镜下的形态学变化相似。A、B组与C组、电生理测定与移植体中段轴突计数均有显著性差异。结论 两种预处理方法降低异体神经的抗原性具有相似的近期效果。     

大鼠坐骨神经损伤后神经再生的形态学观察

目的 研究周围神经损伤后的再生情况。方法 切断并原位吻合右侧SD大鼠坐骨神经。左侧不作任何处理、作为对照。手术后不同时间取跨越吻合口两侧的神经段作纵向冰冻切片,行乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学染色,观察神经纤维的变化。同时取左侧一段神经作对照染色。结果 右侧坐骨神经损伤后。术后第1天至第7天无神经纤维通过吻合口。且神经纤维排列杂乱;第14天只有小部分神经纤维通过吻合口;第21天有部分神经纤维通过吻口;第30天有较多神经纤维通过吻合口;第45天有大量神经纤维通过吻合口。但排列不整齐;第60天吻合口神经纤维排列整齐。而左侧的神经纤维排列整齐、均匀。结论 大鼠坐骨神经切断损伤后,神经纤维先发生溃变,1个月后有大量神经能够再生,至2个月,再生神经纤维的排列近似正常。     

Foxo3a在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨大鼠坐骨神经夹伤后Foxo3a在腰段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)中的表达变化及其意义.方法 将42只成年SD大鼠完全随机分为正常对照组和实验组.对实验组行坐骨神经夹伤术.运用Western blot及免疫荧光染色,观察大鼠坐骨神经夹伤对腰段DRG中Foxo3a表达的影响及其与生长相关蛋白的表达变化.结果 Western blot结果表明,坐骨神经夹伤后1 d,腰段DRG中Foxo3a蛋白表达开始明显下降,第2天达到最低值,随之逐渐升高,于4周后接近正常水平.坐骨神经夹伤后2 d细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和神经元生长相关蛋白(GAP-43)在DRG中的表达均开始上调,在7 d达到最高点,GAP-43则保持较高水平.免疫荧光染色结果表明,Foxo3a表达下降主要存在于神经元和神经胶质细胞内,并且PCNA与神经元细胞几乎无共定位,与神经胶质细胞共定位明显.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a在腰段DRG中的表达减少可能与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.