基质金属蛋白酶-9与肝细胞癌侵袭转移性的关系

目的：揭示基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）与肝细胞癌（ＨＣＣ）侵袭转移性的关系,并探索ＭＭＰ－９判断肝细胞癌侵袭转移性的作用。方法：通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）对正常肝、ＨＣＣ及其癌旁肝组织、癌栓组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ进行半定量研究,并与ＨＣＣ侵袭转移的病理指标进行统计分析。结果：正常肝、ＨＣＣ及其癌旁组织、癌栓组织中均有ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ表达;癌组织、癌栓组织中,ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平增高与ＨＣＣ侵袭转移性有关;癌组织ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平高于癌旁组织,ＭＭＰ－９是判断ＨＣＣ侵袭转移性的重要指标。结论： ＭＭＰ－９与ＨＣＣ侵袭转移性有关,ＨＣＣ组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平是否高于癌旁组织可作为ＨＣＣ侵袭转移性的指标。     

逆转录聚合酶链反应技术检测人肝癌nm23-H1基因mRNA表达

为探讨人肝癌中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１的ｍＲＮＡ表达状况,设计特异性引物,应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测分析了２０例人肝癌组织及相应癌旁肝组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的ｍＲＮＡ表达。结果 特异性引物能成功扩增ｎｍ２３－Ｈ１基因的几乎整个编码序列：２０例肝癌及癌旁肝组织的ＲＴ－ＰＣＲ结果均为阳性,ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ未发生表达缺失或较大变异现象,由此表明,本实验建立的ＲＴ－Ｐ     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

nm23-H1 cDNA克隆的构建及其mRNA表达与肝癌转移的关系

目的 构建转移抑制基因ｎｍ２３－Ｈ１ｃＤＮＡ克隆，初步分析其ｍＲＮＡ表达与肝内转移，门静脉形成癌栓，ＴＮＭ分期等临床病理特征的关系。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增ｎｍ２３－Ｈｄ１ｃＤＮＡ片段，并亚克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（－）质粒，借助Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，检测１０例肝细胞癌及癌旁肝组织ｎｍ２３－Ｈ１基因ｍＲＮＡ表达水平。结果 ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ低表达，诱发肝细胞癌伴肝内转移     

nm23-H1基因mRNA在人肝细胞癌中的表达

目的　研究人肝细胞癌中肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３Ｈ１ 的ｍＲＮＡ表达状况,并探讨其表达水平与肿瘤各项临床病理指标间的相关性。方法　应用半定量ＲＴＰＣＲ 方法检测分析人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织中ｎｍ２３Ｈ１ 的ｍＲＮＡ表达。结果　１５ 例肝癌及癌旁肝组织ＲＴＰＣＲ结果均为阳性,未见ｎｍ２３Ｈ１ 基因表达缺失或较大变异;肝癌组织中ｎｍ２３Ｈ１ ｍＲＮＡ表达水平明显高于相应癌旁组织（ Ｐ＝ ０－０３５）;ＡＦＰ阳性组ｎｍ２３Ｈ１ ｍＲＮＡ表达水平明显高于ＡＦＰ阴性组（ Ｐ＝０－００５） 。结论　人肝细胞癌中ｎｍ２３Ｈ１ 基因ｍＲＮＡ的异常表达可能与肿瘤的恶性生物学特征密切相关。     

CsA,MPA和RPM对CD28通路共刺激后淋巴细胞IL—4mRNA表达？…

目的 观察环孢素Ａ（ＣｓＡ）霉酚酸（ＭＰＡ）和雷帕霉素（ＲＰＭ）对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。方法 以ＰＣＲ扩增方法获得了ＩＬ－４特异的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆至ＰＧＥＭ－３Ｚ载体中，以此作为探针对ＲＴ－ＰＣＲ产物进行杂交定量，比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结果 以抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共刺激后，发现淋巴细胞稳定地     

转化生长因子-β1及其Ⅱ型受体在肝细胞癌中的基因表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其Ⅱ型受体（ＴＧＦ－βＲⅡ）在肝细胞癌中的基因表达。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化技术,分别检测３０例肝癌组织和癌旁肝组织中ＴＧＦ－β１及ＴＧＦ－βＲⅡ在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。结果 （１）ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ阳性表达,在肝癌组织中为２４／３０,癌旁肝组织中为２６／３０,Ｐ〉０．０５;但ＴＧＦ－β１蛋白水平在肝癌组织阳性表达低于癌旁肝组织（Ｐ〈０．０     

血小板衍化内皮细胞生长因子和血管内皮生长因子在肝细胞癌和门静脉癌栓中的表达

目的 探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）门静脉癌栓的形成机制。方法 采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析法,对手术切除的２８例ＨＣＣ和１８例门静脉癌栓标本中血小板衍化内皮细胞生长因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）ｍＲＮＡ和血管内皮生长因子ｍＲＮＡ的表达水平进行相对定量研究。结果 ＰＤ－ＥＣＧＦｍＲＮＡ在门静脉癌栓、ＨＣＣ和癌周肝组织中的表达率分别为７７．８％、６７．８％６ ３５．７％,ＶＥＧＦｍＲＮＡ则分别为８８．９％、７５．０     

人肝细胞癌中nm 23表达及定位研究

目的研究转移抑制基因ｎｍ２３ｍＲＮＡ和蛋白在人肝细胞癌中的表达,定位及意义。方法分子杂交,免疫组化及ＲＴ－ＰＣＲ方法。结果ｎｍ２３ｍＲＮＡ和蛋白定位于细胞浆,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明：阳性带位于０．８Ｋｂ处;癌组织中有１９例表达,癌周肝组织中有３例表达。ｎｍ２３在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌周组织（Ｐ＜０．０１）。ＲＴ－ＰＣＲ研究表明：３０例癌组织中有２８例阳性,３０例癌旁组织中有２１例阳性,经统计学处理发现癌组织中ｎｍ２３表达明显高于癌分组织。但ｎｍ３ｍＲＮＡ表达与肝癌的分化分级等临床特征无关（Ｐ＞０．０５）。结论ｎｍ２３基因可能在肝癌形成及转移过程中起调节作用。     

低密度脂蛋白及氧化修饰低密度脂蛋白对人系膜细胞增殖及基质合成的影响

目的 观察不同浓度低密度脂蛋白（ＬＤＬ）及氧化修饰低密度脂蛋白（ｏｘ－ＬＤＬ）对人系膜细胞（ＨＭＣ）增殖和细胞毒性作用,及对培养细胞上清Ⅳ型胶原的含量及表达Ⅳ型胶原α１链ｍＲＮＡ的影响。方法 采用体外ＨＭＣ培养,Ｈ＾３－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ掺入研究人系膜细胞增殖,ＬＤＬ释放实验研究细胞毒作用,ＥＬＩＳＡ法测定Ⅳ型胶原含量和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法研究Ⅳ型胶原α１链ｍＲＮＡ表达。结果 Ｌ     

4种肿瘤-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达

目的 观察肿瘤睾丸(CT)抗原MAGE1、SSX-1、CTp11及HCA587基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其对HCC免疫治疗的意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对HCC患者癌组织和对照组织中的目的基因mRNA进行检测。结果在检测的105例HCC组织中,MAGE-1、SSX-1、CTp11、HCA 587基因mRNA阳性率分别是75.2％、72.4％、62.9％和56.2％:至少表达1种CT抗原者达93.3％;对照组仅有3例癌旁组织SSX-1基因mRNA表达为弱阳性。结论MAGE-1、SSX-1、CTp11及HCA 587基因mRNA在HCC中呈高比例、高特异表达,是HCC免疫治疗的理想靶位;多个CT抗原同时在HCC中表达;为HCC多价瘤苗的研制提供了实验依据。     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

肝癌组织、外周血细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 mRNA表达的意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)mRNA表达对肝细胞肝癌(HCC)及其血液微转移的诊断价值。方法参照甲胎蛋白(AFP)mRNA,半定量与巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测41例HCC、41例癌旁组织、52例非瘤肝组织(41例远离癌灶组织与11例正常肝组织)及67例外周血的GPC3表达。结果半定量PCR显示组织与外周血细胞全部存在GPC3 mRNA表达,HCC、癌旁、非瘤肝组织的表达量分别为78.9±35.5、30.6±21.6、23.8±15.5;而AFP mRNA的表达量依次为61.2±32.6、31.5±23.6、21.2±15.9。各基因在HCC与其他组织中的表达量差异具有统计学意义(P<0.01),以各基因在非瘤肝的相对表达量上限(x-+1.96s)为界,HCC中GPC3 mRNA和AFP mRNA的高表达分别占80.5%与63.4%;至少一个基因高表达HCC达总数的92.7%,与AFPmRNA单独检测差异有统计学意义(P<0.01)。临床病理特征分析发现AFP mRNA与HCC分级及血清AFP浓度有关,GPC3 mRNA表达与HCC分级及侵袭性有关。67例外周血GPC3 mRNA的表达量为15.9±9.0,各类组织中GPC3 mRNA表达均强于相应的外周血表达(P<0.01)。外周血GPC3mRNA表达量在HCC组、非HCC组分别为16.1±8.3、15.6±10.2,组间差异无统计学意义;在HCC转移组、HCC无转移组的表达量各为16.0±9.0、16.3±7.7,组间差异无统计学意义。巢式PCR显示,AFP mRNA表达比率在HCC组与非HCC组各为56.1%、23.1%,组间差异有统计学意义(P=0.011);HCC转移组与无明显转移组各为80.9%、30.0%,组间差异有统计学意义(P=0.002)。结论GPC3 mRNA是潜在的HCC组织诊断指标,与AFP mRNA有明显的互补作用,两者联合检测可提高HCC的阳性检出率;外周血存在GPC3 mRNA的广泛表达,但其与HCC的转移复发无关,不能用于HCC微转移的检测。     

MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。     

联合检测肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白和黑色素瘤抗原-1 mRNA的临床意义

目的　探讨甲胎蛋白 (α FP)mRNA和黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)mRNA联合检测肝细胞癌患者外周血微转移的可行性。方法　采用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 6 5例原发性肝细胞癌、2 2例肝炎和肝硬化、12例继发性肝癌、12例肝血管瘤患者、2 0例健康献血员外周血α FPmRNA和MAGE 1mRNA水平。结果　肝细胞癌患者外周血中 ,α FPmRNA和MAGE 1mRNA的检出率为分别是 5 4 % (35 /6 5 )和 4 2 % (2 7/6 5 ) ,6 5 % (42 /6 5 )的患者至少一种标志物阳性。α FPmRNA和MAGE 1mRNA的检出率和肝癌结节数目、门静脉癌栓、肿瘤直径、TNM分期等临床参数密切相关 (χ2 值分别为 8 0 2 3与 8 4 4 0 ,9 6 73与 5 132 ,6 777与 7 0 99,11 0 37与 8 5 4 7,P <0 0 5 )。α FPmRNA在肝炎肝硬化患者外周血中的检出率为 14 % (3/2 2 ) ,继发性肝癌、肝血管瘤患者及健康献血员中均未检出。MAGE 1mRNA在继发性肝癌患者外周血中的检出率为 33% (4/12 ) ,肝炎肝硬化、肝血管瘤患者及健康献血员中均未检出。结论　以α FPmRNA和MAGE 1mRNA为指标 ,采用巢式RT PCR技术检测肝细胞癌患者外周血微转移可行 ,两者联合检测可能有助于提高肝细胞癌外周血微转移检测的敏感性和特异性     

荧光定量PCR法扩增MAGE-1、MAGE-3及AFP基因联合检测肝癌病人外周血微小转移

目的探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA联合检测肝癌病人外周血中微小转移的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测86例原发性肝癌病人肝癌组织和外周血中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果86例原发性肝癌病人肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34．9％（30／86）、60．5％（52／86）和69．8％（60／86）；所有病人肝癌组织至少表达其中一种mRNA。外周血中阳性率分别为14．0％（12／86）、20．1％（18／86）和33．7％（29／86）。52．3％（45／86）的病人外周血至少检测到一种mRNA，较单一AFP mRNA检测阳性率明显提高（P〈0．05）。25例肝炎肝硬化病人及28例健康志愿者中未见阳性。阳性率与肿瘤TNM分期、门脉瘤栓、远处转移有关（P〈0．05）。与肿瘤大小、数目、分化程度、血清AFP水平无关（P〉0．05）。结论MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA联合检测肝癌血行微小转移较单一AFP mRNA检测灵敏度高。     

RASSF1A mRNA在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析RASSF1 A在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 提取65例外科手术切除的肝细胞癌组织(其中右肝癌41例,左肝癌的24例)及其相对应的癌旁正常组织和6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株的总RNA,逆转录成cDNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测RASSF1 A mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA表达量为癌组织的3.32倍,两者差异有统计学意义(癌旁正常组织△CT=4.64±2-44,癌组织中△CT=6.30±1.92,P<0.01),其中38例(58.5%)肝癌组织中的RASSF1A mRNA表达水平比癌旁正常组织显著下调:下调8倍以上的有17例,下调4倍以上的有8例,下调2倍以上的有13例,另外有5例(7.7%)在肝癌组织中的RASSF1A表达水平比癌旁正常组织较高,其余22例(33.8%)则差异无统计学意义(P>0.05);3株(QGY-7701、PLC、Hep3B,50.0%)肝癌细胞株中的RASSF1A mRNA表达水平比正常肝脏细胞株(HL-7702)显著下调;在肝癌组织中RASSF1A的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小等无明显相关(P>0,05),但和门脉癌栓与否(P<0.05)、临床分期(P<0.05)及血清HbsAg明显相关(P<0.01).结论 RASSF1A基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

肝细胞癌Period1 表达与预后的关系

目的：探讨Period1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及意义。 方法：用RT-PCR与Western blot法检测30例HCC组织与其癌旁肝组织及5例正常肝组织中Period1 mRNA与蛋白表达;甲基化特异性PCR检测HCC组织与癌旁肝组织中Period1启动子甲基化水平;免疫组化检测67例HCC组织及其癌旁肝组织石蜡切片中Period1蛋白的表达;分析Period1的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。 结果：HCC组织Period1 mRNA和蛋白的表达水平均较癌旁肝组织与正常肝组织明显降低（均P<0.05）,而两者在癌旁肝组织与正常肝组织间差异无统计学意义（均P>0.05）;HCC组织Period1启动子甲基化水平较其癌旁肝组织明显增高（均P<0.05）。HCC组织石蜡切片中Period1阳性表达率为47.8%,而癌旁肝组织阳性表达率为83.6%,差异有统计学意义（P<0.05）;Period1表达与HCC分化程度、结节数目、有无静脉浸润有关（均P<0.05）;Period1阳性表达HCC患者中位复时间与中位生存时间均明显短于阳性者（均P<0.05）。 结论：Period1在肝癌中表达下调可能与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关;启动子甲基化可能是Period1表达下调的重要机制。     

Smac和Survivin基因在肝癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨Smac和Survivin在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及两者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系。方法免疫组织化学法检测50例肝癌组织、20例癌旁组织和15例正常肝组织中Smac和Survivin蛋白表达情况。逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测Smac和SurvivinmRNA表达情况。结果50例HCC标本中表达Smac有21例(42.0%),而除2例癌旁组织外,其他癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Survivin在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有46例、2例和0例表达;50例肝癌组织中Smac阳性率为40.0%(20/50),肝癌组织和非肝癌组织中Smac的表达差异具有统计学意义,Survivin在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中阳性率分别为90.0%(45/50)、10.0%(2/20)和0%(0/15),肝癌组织和非肝癌组织中Survivin的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。