菌株数值分类程序设计及其在白念珠菌菌株相似性分析中的…

为了解决我国在菌株数值分类中缺乏专门软件的现状，我们采用ｑｕｉｃｋ ＢＡＳＩＣ语言设计了一套菌株数值分类程序，并对１８株白念珠菌菌株的相似性进行了分析。结果该程序达到了设计要求。表明菌株数值分类程序在白念珠菌流行病学研究中有着广泛的应用前景。     

阴道念珠菌菌株的分型和相似性分析

目的　探讨阴道念珠菌病发病与念珠菌菌株的关系。方法　选择两组白念珠菌 ,A组来源于健康妇女阴道分泌物 ,B组来源于阴道念珠菌病患者。选用自动微生物诊断鉴别系统和氨基黑染色法两种表型识别技术检测受检菌株生化反应及蛋白酶分泌参数 ,进而用数值分类技术行相似性分析。结果　A、B两组间福寿草醇存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,也进一步证实蛋白酶的分泌能力在两组间存在显著性差异 (P <0 0 1)。 5 6株白念珠菌共产生 41型 ,可大致分为 7类 ,c、f和g类以B组分离株为主 ,b和d类以A组分离株为主。结论　福寿草醇和蛋白酶的升高可能与阴道念珠菌病发病相关。数值分类技术在菌株相似性分析时 ,有其优越性 ,有待进一步总结。     

白念珠菌Mdr1基因生物信息学分析

目的:探讨白念珠菌多重耐药基因(Mdr1)DNA、mRNA、蛋白的潜在生物学性质。方法:采用生物信息学方法对白念珠菌Mdr1基因DNA、mRNA、蛋白序列进行分析。结果:Mdr1 DNA中无内含子,Mdr1 mRNA中含有多个调控元件和腺苷酸化位点、AU富集区,对二级结构分析显示,Mdr1 mRNA全长序列可形成棒状结构。蛋白质的理化性质分析显示MDR1蛋白稳定系数为37.14,提示MDR1蛋白较为稳定。Target P 1.1和Signal P 4.1预测结果显示MDR1蛋白不含有线粒体定位序列和分泌信号肽。SWISS-MODEL 3D建模,MDR1蛋白质的3D结构类似于通道管状形态。Motif Scan分析结果显示,MDR1蛋白第116-557个氨基酸构成主要协同转运蛋白超家族,TMHMM预测在此范围内含有12个跨膜区间,为跨膜蛋白。结论:Mdr1基因的表达可能受其它基因的调控,MDR1蛋白为主要协同转运蛋白超家族成员,其功能域或为潜在的药物靶点。     

一氧化氮在人单核巨噬细胞杀伤白念珠菌机制中的地位

在条件致病性真菌感染中,白念珠菌（下称白念）尤其多见。近来发现,鼠巨噬细胞活化后分泌一氧化氮（ＮＯ）是其杀伤包括一些真菌在内的多种病原体的效应机制之一［１］。但人单核巨噬细胞是否具备此种能力,本文对此做一探讨。材料与方法一、标本１．２４例健康人外周静...     

高通量GLGI鉴定及分析白念珠菌LongSAGE标签

目的鉴定并初步分析白念珠菌长片段基因表达序列分析(LongSAGE)标签。方法建立了一种高通量鉴定LongSAGE标签的技术,应用该技术可批量扩增白念珠菌LongSAGE标签,使其由17bp扩增至相应的3'cDNA末端,扩增产物TA克隆后进行测序及序列分析(GLGI)。结果30条多重匹配标签中28条得到稳定有效的扩增,40个无匹配标签中30条得到有效扩增,其中21条证实为新表达序列标签(EST),可能代表新的基因,9条和已知基因有一定同源性,可能是已知基因或其同一家族基因。结论应用高通量GLGI技术成功鉴定了白念珠菌LongSAGE标签,为进一步研究白念珠菌菌相转换机制奠定了基础。     

白念珠菌粘附素的分离纯化及其在介导与宿主细胞粘附中的作用

目的　从分子水平探讨白念珠菌 (简称白念 )与宿主细胞的粘附机制。方法和结果　用非离子去垢剂辛基吡喃葡萄糖苷提取白念孢子壁蛋白质 ,然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱 ,运用亲和层析技术从上述提取液中分离纯化纤连蛋白粘附素 ,在非还原状态进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ,得到表观分子量 6 0 0 0 0和 10 5 0 0 0的二条蛋白带。为了弄清此蛋白在白念与宿主细胞粘附中的作用 ,把人颊粘膜上皮细胞与白念孢子共同振荡孵育 2小时 ,显微镜下测定上皮细胞表面粘附白念的数目 ,白念与上皮细胞的粘附百分率为 44 7± 6 2 8,上皮细胞经纤连蛋白粘附素预处理后 ,粘附百分率为 2 8 3± 6 18,P <0 0 1。结论　纤连蛋白粘附素介导了人颊粘膜上皮细胞与白念的粘附。     

外排泵基因在白念珠菌生物膜耐药性产生中的作用

目的观察白念珠菌在生物膜形成不同时期对氟康唑的敏感性,及外排泵基因在生物膜耐药性产生过程中的作用。方法采用96孔微量培养皿进行白念珠菌生物膜的培养,用MTT法检测其对氟康唑的敏感性,并用半定量RT-PCR法测定生物膜形成不同时期CDR1、CDR2及MDR1基因表达的差异性。结果白念珠菌生物膜在较早期(2h)对氟康唑仍然敏感(2～4μg/mL),随着白念珠菌生物膜的不断成熟,其耐药性不断增高;CDR1及CDR2基因在生物膜形成的早中期及成熟期的表达明显上调,尤其早期的高表达更为明显,而MDR1基因的表达只在生物膜形成早期有明显的高表达。结论白念珠菌生物膜的耐药性随着其结构的成熟而不断增高;CDR1,CDR2及MDR1基因在生物膜形成早期有明显的高表达,但与生物膜耐药性的增加并不一致。因此,生物膜的耐药性可能是多种机制作用的结果。     

应用基因芯片筛选白念珠菌耐药基因的研究进展

近年来,临床上白念珠菌耐药现象日趋增多,耐药性形成的主要原因为耐药基因突变或表达异常,可利用基因芯片来绘制相关基因表达图谱,可对临床大量白念珠菌耐药菌株进行大量差异表达基因进行分析,可用来筛查并检测耐药相关基因,更有助于白念珠菌耐药基因的研究进展.     

白念珠菌的毒力及其对氟康唑耐药性的相关性研究

目的:研究白念珠菌的毒力因子分泌性蛋白酶(SAP)活力与其对氟康唑耐药性形成之间的关系。方法:(1)将对氟康唑敏感的白念珠菌,培养在含氟康唑浓度逐渐增加的液体培养基中,体外诱导为氟康唑耐药株;(2)运用牛血清白蛋白培养基方法,分别测定了对氟康唑敏感和对氟康唑耐药的白念珠菌的分泌性蛋白酶活力。结果:(1)40株对氟康唑敏感的白念珠菌均在体外被成功地诱导为对氟康唑的耐药株;(2)耐药株的分泌性蛋白酶活力明显强于敏感株(P<0.001)。结论:白念珠菌的毒力因子分泌性蛋白酶活力增加与其对氟康唑耐药性的增加相一致。     

葡萄糖对白念珠菌芽管产生的影响

为观察体外葡萄糖含量对白念珠菌芽管形成的影响，制定合适的浓度。对经１８ｈ碳、氮饥饿试验的白念珠菌在含不同浓度的葡萄糖培养基中的芽管形成百分率、糖及氧的代谢状况、ｐＨ变化作了详细观察。结果显示最适宜白念珠菌产生芽管的葡萄糖浓度为１ｇ／Ｌ，此时氧及糖的消耗代谢率最大，同时反映白念珠菌的芽管产生严格依赖于葡萄糖含量     

念珠菌耐药机制的研究进展

随着念珠菌易感人群和抗真菌药物使用的增加,念珠菌耐药形势越来越严峻。现从念珠菌属的菌种变迁、抗真菌药物应用、生物膜形成、药物作用靶酶基因过表达或突变等方面,对念珠菌耐药机制的研究进展加以综述。     

Generation of reactive oxygen species by Candida albicans in relation to morphogenesis

Candida albicans is able to generate significant amounts of reactive oxygen species (ROS). In this study, ROS generation by yeast and hyphal forms of the strain 3153 A was analyzed to determine whether ROS generation could be a major factor in the invasive behavior of germinative cells. Furthermore, the virulent strain CA6 and its avirulent and agerminative mutant VIR3 were compared. ROS were measured by lucigenin-enhanced chemiluminescence and a cytochrome c assay. During the blastoconidial phase of all strains moderate amounts of ROS were found at cell concentrations > 1 x 10(5)/ml. However, ROS generation appeared to be specifically inhibited at cell concentrations > 1 x 10(8)/ml, and this was found in both assays. As shown in comparative experiments, the medium used for measurement markedly affected the total amount of ROS. Hyphae of strain 3153 A generated a significantly higher amount of ROS than yeast cells and cells with germ tubes (P < 0.001). The strain CA6 showed significantly higher ROS generation than the VIR3 strain for both blastoconidiae and after 30 min of induction of hypha formation (P < 0.05). In conclusion, hypha formation, usually acknowledged as a major factor in Candida pathogenicity, was associated with markedly increased ROS formation. ROS generation was not closely linked to the ability to form hyphae, but was highest in germinative cells.     

白念珠菌基因组结构与遗传、致病相关基因

白念珠菌是一种重要的机会致病菌,在人的多个系统或器官与宿主共栖生存,可导致口腔和阴道念珠菌病,在免疫力低下或患严重疾病的患者,可引起系统疾病.由于早期准确诊断系统性念珠菌病存在困难,合适有效的抗真菌药物数量有限,病原体的耐药性增加,导致系统性念珠菌病病死率居高不下.因此,对白念珠菌基因组序列及结构、功能的研究对指导临床的诊断和治疗显得尤为重要.     

申克孢子丝菌酵母相与白念珠菌诱导中性粒细胞活性氧簇的差异性表达

目的 研究人中性粒细胞吞噬申克孢子丝菌酵母相和白念珠菌后胞内活性氧簇（ROS）的实时表达水平及对两者杀菌能力的差异。 方法 应用密度梯度离心法分离人外周血中性粒细胞,并通过ROS探针（DCFH-DA）、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测申克孢子丝菌酵母相临床株和白念珠菌标准株ATCC 90028作用后,中性粒细胞内ROS的实时表达水平及对上述2种真菌孢子的杀菌率。 结果 申克孢子丝菌酵母相临床株和白念珠菌标准株ATCC 90028作用中性粒细胞60 min后,申克孢子丝菌组中性粒细胞内ROS表达水平达到峰值（平均荧光强度159.67 ± 11.34）,并显著高于白念珠菌组（112.22 ± 9.66）,经LSD-t检验,P < 0.01;而作用120 ～ 180 min后,胞内ROS表达水平（120 min为89.01 ± 9.81;180 min为57.63 ± 8.46）迅速下降,显著低于白念珠菌组中ROS的同期表达水平（120 min时为110.25 ± 7.28;180 min时为109.98 ± 9.00,经LSD-t检验,120 min时P < 0.05,180 min时P < 0.01）。激光共聚焦显微镜观察到,ROS主要表达于吞噬上述真菌孢子的中性粒细胞中,并被募集到被吞噬的部分孢子表面。中性粒细胞对申克孢子丝菌180 min杀菌率（19.21% ± 3.68%）亦显著低于其对白念珠菌孢子的杀菌率（26.63% ± 4.97%）,经LSD-t检验,P < 0.01。 结论 中性粒细胞吞噬上述2种真菌孢子后,胞内ROS呈明显的差异性表达。与白念珠菌相比,中性粒细胞内ROS水平的迅速下降在一定程度上抑制了其对申克孢子丝菌的杀伤效能。 【关键词】 孢子丝菌属; 念珠菌,白色; 中性白细胞; 活性氧     

白念珠菌芽管特异性抗原快速检测方法的建立和初步评价北大核心CSCD

目的建立白念珠菌芽管特异性抗原快速检测系统,探讨其特异性和敏感性。方法以单克隆抗体McAb03．2C1-C2作为一抗,辣根过氧化物酶标记McAb03．2C1-C2为二抗,建立双抗体夹心ELISA实验方法并检测6只动物模型和5例系统性白念珠菌感染患者的血清标本。结果筛选出McAb03．2C1-C2最佳稀释度和检测包被抗原浓度分别为l：4000和1．25-40μg,／ml;双抗体夹心ELISA检测动物模型的特异性和敏感性分别为95％、92％,其对阳性临床标本的检测结果与常规鉴定方法一致。结论初步建立白念珠菌芽管特异性抗原的双抗体ELISA快速检测系统,动物模型实验证实该系统有较好的特异性和敏感性。     

不同免疫状态下的白念珠菌对小鼠肠粘膜的粘附及影响

以不同剂量白念珠菌（白念）经日攻击健康小鼠，其对肠粘膜的粘附量与菌量成正比；地塞米松、氨甲蝶呤、四环素等均可促进粘附并向内脏播散甚或致死，提示肠道携带白念是免疫低下宿主并系统感染的重要储存灶。几丁质可降低粘附，可考虑作为预防措施之一。     

An assessment of the role of Candida albicans antigen in atopic dermatitis.

An immediate hypersensitivity reaction to Candida albicans (C. albicans) antigen has been observed in patients with atopic dermatitis. Recent data from a comparative study of the immune response to C. albicans antigen in patients with atopic dermatitis and non-atopics suggest a shift form type 1 helper T cells to type 2 helper T cells in the immune response to C. albicans antigen in atopic dermatitis. To delineate the role of C. albicans in the pathogenesis in atopic dermatitis, we evaluated skin reaction of C. albicans antigen, as well as the serum IgE antibody level against C. albicans in patients with atopic dermatitis, patients with nasal allergy, and non-atopics. In addition, the clinical effect of antifungal drugs was evaluated in the patients with atopic dermatitis. As a result, we found that immediate hypersensitivity to C. albicans antigen is strongly correlated with the patients with atopic dermatitis. On the other hand, the delayed-type hypersensitivity to this antigen, which is highly prevalent in atopics without dermatitis as well as non-atopics, was reduced in most of these patients. Antifungal drugs markedly improved the skin manifestations in patients with atopic dermatitis that have IgE antibodies against C. albicans, and the serum IgE levels also decreased. These results suggest that C. albicans antigen is a potent intrinsic factor in inducing skin lesions in atopic dermatitis because of IgE-mediated hypersensitivity of C. albicans antigen.     

树突细胞相关C型凝集素-1受体介导的抗白念珠菌免疫作用及机制

树突细胞相关c型凝集素-1是一种主要的C型凝集素样受体,存在于多种细胞和组织中.它能够特异性识别白念珠菌细胞壁主要成分β-葡聚糖,进而诱导机体产生固有免疫反应和适应性免疫反应.其可单独或与其他模式识别受体相互协同完成上述过程.白念珠菌β-葡聚糖的暴露、树突细胞相关C型凝集素-1表达水平等因素可影响机体免疫效应的强度,对其进行调控将为自念珠菌感染预防和治疗提供一个新的方向.

Abstract：

Dectin-1, a principal C-type lectin pattern-recognition receptor, exists in various types of cells and tissues. It can specifically recognize β-glucans, which are the major cell wall component of Candida albicans, and then trigger the innate and adaptive immune responses in hosts. Dectin-1 can independently, as well as collaboratively with other pattern recognition receptors, induce above mentioned processes. The intensity of immune responses in hosts is modulated by multiple factors such as the exposure of β-glucans on Candida albicans and the expression level of Dectin-1, and this modulation may provide a new direction for the prevention and therapy of Candida albicans infection.