骨形态发生蛋白-7(BMP-7)促进小鼠子宫内膜蜕膜化研究

目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法:①采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5～8日小鼠子宫中的表达情况;②原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮(P4)、E2和cAMP诱导蜕膜化的同时分别加入1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlBMP-7重组腺病毒,Westernblotting检测催乳素(PRL)的表达。结果:①BMP-7mRNA在妊娠第5～8日小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织(P<0.01),且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强(P<0.05)。BMP-7蛋白在妊娠第5日、第6日分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带,第7日、第8日时主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。②在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组的催乳素蛋白表达均显著增加(P<0.01),其中10ng/ml组增加最明显(P<0.01)。结论:BMP-7蛋白具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。     

MST1重组腺病毒的制备及对人子宫内膜间质细胞蜕膜化的作用

目的:探讨丝/苏氨酸激酶MST1在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法:制备Ad-FLAG-MST1重组腺病毒,用于感染人子宫内膜间质细胞;采用荧光定量PCR实验结合腺病毒介导的MST1基因过表达,分析人子宫内膜间质细胞蜕膜化进程中MST1的表达及其对蜕膜化特异性基因的调控。结果:获得滴度为2×1011ifu/ml的重组Ad-FLAG-MST1腺病毒,该腺病毒感染人子宫内膜间质细胞后,可高水平表达FLAG-MST1融合蛋白,过表达的MST1显著增加人子宫内膜间质细胞中PRL、IGFBP1、TIMP3和DCN等蜕膜化特异性基因的表达;体外培养的人子宫内膜间质细胞经8-Br-cAMP(0.5mmol/L)和MPA(1μmol/L)刺激后,细胞中MST1总蛋白水平增加3倍以上,同时磷酸化的MST1(Thr183)显著增加。结论:MST1的活化可能参与子宫内膜间质细胞的蜕膜化相关基因的调控。     

增生的宫内膜在体外蜕膜化后分泌催乳素

一般认为受孕后才能使生殖周期中黄体期的增生内膜分化成蜕膜样分泌内膜。蜕膜化的过程发生在黄体期的第二周,在排卵后9天开始围绕着螺旋动脉,逐渐波及内膜的间质,在第十三天达内膜的上1/2。诊断晚分泌期内膜日期的主要标准是有无蜕膜化。据此,在黄体后期取内膜活检可以诊断黄体期缺如。正常月经周期中黄体后期的蜕膜证明可以产生具有免疫反应性的催乳素(PRL)。有人观察在体外培养的黄体后期内膜,如有孕酮(P)则PRL的产生增加:如无P在48～72小时期间PRL的产生减少,蜕膜细胞退化。在体内初期E_2的内膜加P的作用使间质细胞发生蜕膜化。本文研究在体外P是否可使增生的内膜发生蜕膜样变化和E_2在P诱发的蜕膜化过程中所起的作用。蜕膜化间质产生的PRL可用来作为蜕膜化程度及蜕膜成熟的生化指标。     

子宫内膜间质细胞体外蜕膜化的激素调节

目的 探讨甾体激素、黄体生成素释放激素（LHRH）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）、促卵泡激素（FSH）在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的作用。方法 取18例育龄期妇女的增殖期子宫内膜,行体外分离、培养其间质细胞,加入生理剂量的雌二醇（E2）、孕酮(P)、睾酮（T）,以及LHRH、hCG、FSH,在相差显微镜下观察细胞的形态学改变,采用放射免疫法测定培养液中泌乳素（PRL）的含量。结果 E2、P、T对子宫内膜间质细胞的生长及分化均有调节作用,RPL开始上升与多角形细胞出现的时间相一致,P、T对子宫内膜膜间质细胞蜕膜化、分泌PRL起主要作用（P＜0.01）,P与E2、T有协同作用。LHRH hCG、FSH对子宫内膜间质细胞蜕膜化、分泌PRL均有促进作用（P＜0.01）,以hCG的作用最强。结论 P、T、E2在子宫内膜间质细胞生长分化过程中起重要作用,LHRH、hCG、FSH直接作用于子宫内膜本身而参与蜕膜化的调节。     

2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究

目的:研究2-甲氧雌二醇对子宫蜕膜化基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用醋酸甲基孕酮及双丁酰环磷酸腺苷诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化。诱导成功后,分别加入3个浓度的2-甲氧雌二醇,给药48 h后收集细胞上清液,采用ELISA法测定VEGF分泌情况;同时抽提细胞RNA,Real-Time RT-PCR检测VEGF mRNA水平;免疫细胞化学法测定细胞雌激素受体(ER)的表达。结果:ELISA检测表明1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L浓度的2-ME2均可降低蜕膜化基质细胞分泌VEGF的水平;Real-Time RT-PCR同样支持上述结果;免疫细胞化学结果表明,2-ME2对蜕膜化基质细胞ER表达无影响。结论:2-甲氧雌二醇可降低蜕膜化基质细胞VEGF的表达,但与ER表达不相关。     

调控人羊膜上皮细胞AQP8表达的cAMP-PKA信号转导通路研究

目的:研究调控人羊膜上皮细胞AQP8表达的cAMP-PKA信号转导通路。方法:用RNA转录抑制剂ACT-D、蛋白合成抑制剂Cycloheximide(CHX)及蛋白激酶A抑制剂H-89处理被8-Br-cAMP诱导的WISH细胞。采用Western blot技术定量WISH细胞AQP8蛋白表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测WISH细胞AQP8 mRNA的表达。结果:8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平分别为0.083±0.007和0.144±0.008,与对照组的0.026±0.003;0.027±0.004比较,差异有统计学意义(P0.05)。ACT-D处理组WISH细胞AQP8 mRNA的表达水平为0.021±0.004,低于对照组的0.026±0.003,差异有统计学意义(P0.05)。ACT-D+8-Br-cAMP处理组WISH细胞的AQP8 mRNA表达水平为0.031±0.006,明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于ACT-D处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。H-89处理组WISH细胞AQP8 mR-NA和蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。H-89+8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平均明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于H-89处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。CHX处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。CHX+8-Br-cAMP处理组WISH细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平均明显低于8-Br-cAMP处理组,但高于CHX处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:ACT-D、CHX和H-89抑制cAMP诱导的人羊膜上皮细胞AQP8 mRNA和蛋白表达增加的效应,cAMP可能是通过PKA信号转导途径在基因转录、蛋白合成等多个水平调控人羊膜上皮细胞AQP8表达。     

甾体激素对绒毛外滋养细胞表达HLA-G蛋白的影响

目的:探讨甾体激素(E_2、P_4)对绒毛外滋养细胞表达HLA-G的影响。方法:将分离培养的绒毛外滋养细胞(EVT)分成E_2组、孕酮(P_4)组、E_2+P_4组和空白对照组,分别向各组EVT培养液中加入不同浓度的17β-雌二醇、孕酮及17β-雌二醇+孕酮,空白对照组则不加任何激素,48h后,流式细胞仪检测各组HLA-G蛋白的表达。结果:①单独使用E_2或P_4均能上调EVT表达HLA- G蛋白,上调作用与其浓度关系密切,与对照组相比,差异有显著性(P＜0．01);②联合应用E_2+P_4亦上调EVT表达HLA-G蛋白,1000 nmol/L的E_2+P_4组HLA-G蛋白的表达,明显高于低浓度组(1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L),差异有显著性(P＜0．01);③低浓度的E_2+P_4组(1nmol/L)HLA- G蛋白的表达高于同浓度的P_4组(P＜0．05),而低于同浓度的E_2组(P＜0．001);1000nmol/L,E_2+P_4组HLA-G表达显著高于单纯的E_2、P_4组(P＜0．01)。结论:①低浓度的E_2、P_4对HLA-G调节呈拮抗作用,高浓度E_2和P_4则以协同作用调节HLA-G的表达;②HLA-G可能参与了卵巢甾体激素调节胚胎植入进程。     

米非司酮对人子宫内膜核仁管道系统形成的影响

目的 :探讨米非司酮对人子宫内膜核仁管道系统 ( NCS)形成的影响。方法 :5例育龄妇女增殖期子宫内膜组织 ,每例标本均分成两部分 ,分别在含有乙烯雌分酚 ( 2 5 μg/m L) +安宫黄体酮 ( 2 5μg/m L) ( E+ P组 )和乙烯雌酚 ( 2 5 μg/m L) +安宫黄体酮 ( 2 5 μg/m L) +米非司酮 ( 2 5 μg/m L) ( E+ P+ M组 )的 DMEM培养液中培养。 1 0 0 h后取出组织并制成样本供电镜观察。结果 :E+ P组子宫内膜上皮可见典型的 NCS及巨大线粒体和糖原沉积。E+ P+ M组子宫内膜上皮除糖原沉积外 ,并无 NCS及巨大线粒体出现。结论 :米非司酮可抑制人子宫内膜 NCS的形成     

正常早孕与流产患者蜕膜局部PRL、P、E_2水平及其受体mRNA表达水平的比较

目的:比较正常组与流产组蜕膜PRL、P、E_2及其受体mRNA水平的差异,探讨其在早孕维持中的作用。方法:收集18例正常早孕人流与12例保胎失败刮宫患者的蜕膜组织,应用放免法测定蜕膜匀浆PRL、P、E_2水平,并行RT-PCR方法检测了相应激素受体(PRLR、PR、ER)mRNA表达的差异。结果:正常早孕组蜕膜匀浆PRL、P水平显著高于流产组(P<0.05),PRLR、PRmRNA表达正常早孕组亦显著高于流产组(P<0.05和0.01)。结论:蜕膜局部正常水平的PRL、P及其受体mRNA的正常表达对妊娠的维持起着重要的作用。     

子宫内膜蜕膜化过程的调节机制

子宫内膜蜕膜化是胚泡植入、胎盘形成以及妊娠维持的必备条件之一。蜕膜化时,子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)在形态和功能上都发生明显改变。生理情况下,ESCs主要受卵巢雌、孕激素的影响向蜕膜间质细胞转化;在体外实验中,多种细胞因子、激素、免疫细胞、转录因子等都参与调节ESCs模拟蜕膜化过程,有利于人们对蜕膜化机制的理解。     

Lack of an association of a single nucleotide polymorphism in the promoter of the matrix metalloproteinase-1 gene in Czech women with pregnancy-induced hypertension

Decidualized human endometrial stromal cells and human decidual CD56+ cells are reported to produce macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), although its physiological roles remain unclear. In this study, the effects of M-CSF on cell viability and 8-Br-cAMP-stimulated decidualization of normal human endometrial stromal cells are examined by using an in vitro decidualization activity assay system. M-CSF alone affected neither the viable cell numbers nor PRL release of nonstimulated stromal cells, while high concentrations of M-CSF strongly suppressed the viable cell numbers and PRL secretion of stromal cells costimulated with 8-Br-cAMP and M-CSF. However, M-CSF did not suppress the viable cell numbers and PRL secretion of 8-Br-cAMP-induced decidualized cells. These results indicate that high concentrations of M-CSF can suppress the cell viability of stromal cells in the decidualization process, and inhibit decidualization of endometrial stromal cells. Thus, nonpregnant decidual M-CSF may autoregulate decidualization and the viable cell numbers of endometrial stromal cells in a paracrine manner.     

两种激活方案对辅助生殖技术中未受精卵母细胞的激活效果比较

目的:观察2种不同激活方案对辅助生殖技术中未受精的成熟卵母细胞的激活效果及其胚胎发育情况。方法:收集常规IVF及ICSI后48h移植当日仍未受精的成熟卵母细胞,分别采用"Ca2+载体A23187联合6-甲基嘌呤(6-DMAP)"(Ca+6D)和"氯化锶联合6-DMAP"(Sr+6D)2种方案进行激活处理,观察原核形成情况;将激活后的卵母细胞继续体外培养3～5d,观察胚胎发育情况。结果:Ca+6D组的激活率为80.5%(29/36),显著高于Sr+6D组的47.8%(22/46)(P<0.05)。Ca+6D组激活的29个卵母细胞中有15个表现为2PN,占51.7%;Sr+6D组被激活的22个卵母细胞中有10个表现为2PN,占45.4%,组间无统计学差异(P>0.05)。激活的胚胎继续培养,Ca+6D组的卵裂率为48.3%(14/29),2个发育到2～4-细胞,6个发育到5～8-细胞,6个发育到>8-细胞阶段,最终获得4个桑椹胚,1个囊胚;Sr+6D组的卵裂率为31.8%(7/22),2个发育到2～4-细胞,4个发育到5～8-细胞,1个发育到>8-细胞阶段。结论:2种激活方案均能激活辅助生殖技术中未受精卵母细胞,并继续发育形成胚胎。激活方案"Ca2+载体A23187联合6-DMAP"与"SrCl2联合6-DMAP"相比,激活率及激活胚胎的发育结局,前者优于后者,可能是更适合辅助生殖技术中未受精卵母细胞的激活方案。     

温肾活血汤联合克罗米芬改善促排卵子宫内膜容受性疗效研究

目的:探讨温肾活血汤联合克罗米芬(clomiphene citrate,CC)促排卵治疗后对子宫内膜容受性的影响。方法:45例排卵障碍型不孕患者随机分成A组(CC)、B组(CC+阿司匹林)、C组(CC+温肾活血中药),每组15例。治疗1～3个疗程,观察排卵率、妊娠率及hCG注射日子宫内膜类型及厚度。结果:C组A+B型内膜率(91.18%)显著高于A组(76.92%,P<0.01)及B组(66.67%,P<0.05);C组内膜平均厚度(9.4±2.2mm)显著高于A组(7.8±1.4mm),P<0.05。周期排卵率C组(82.35%)>B组(76.92%)>A组(69.23%),但各组间无统计学差异(P>0.05);未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS)发生率C组(5.88%)显著低于A组(23.08%)(P<0.05)。周期妊娠率C组(23.5%)>B组(15.4%)>A组(10.3%)(P<0.05)。结论:温肾活血汤能提高克罗米芬促排卵治疗后的妊娠率,其机制可能与促进排卵、降低LUFS发生及改善子宫内膜容受性有关,其改善内膜容受性的效果好于阿司匹林联合CC。     

多囊卵巢综合征患病相关因素初步研究

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患病相关风险因素。方法:对PCOS患者47例以及同期作为对照的月经规律的患者42例进行临床体征评分、内分泌指标测定,采用调查问卷法搜集其家族史等发病相关因素,采用病例对照研究进行分析。结果:①PCOS组患者家族中糖尿病(DM)及女性月经失调(闭经或月经稀发)的患病率大于对照组(P=0.000),二组家族中男性秃顶的患病率差异无统计学意义(P>0.05);②PCOS患者出生体重(birth weight,BW)低于对照组(P=0.000);③PCOS患者24h摄入食物能量大于对照组(P<0.05);④两组之间初潮时间、运动情况等的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肥胖、低出生体重及月经紊乱的家族史均为PCOS发病的独立危险因素,糖尿病家族史可能与PCOS发病有关,提示了家族遗传、BW及出生后的饮食状况都可能是PCOS发病的主要影响因素。     

19例下丘脑性闭经的诊断及助孕治疗分析

目的:探讨下丘脑性闭经(hypothalamic amenorrhea,HA)的临床特征和助孕治疗方法。方法:对19例HA患者进行病例回顾分析,总结临床特征,并与19例月经规律的正常妇女进行对照,比较血FSH、LH、E2、PRL、T水平及子宫体积、卵巢体积和基础窦卵泡数。对HA患者进行人工周期和hMG促排卵治疗,总结治疗方法和效果。结果:HA患者无或部分或不全性征发育,无潮热症状,染色体核型正常;血FSH、LH和PRL水平明显低于正常妇女(P<0.01),血FSH和LH呈低～正常水平,血E2和T水平与对照组比无明显差异。HA患者子宫和平均卵巢体积明显小于对照组,基础窦卵泡数明显少于对照组(P<0.01)。HA组行人工周期治疗,其中11例行hMG促排卵治疗后有排卵,7例临床妊娠。结论:人工周期和hMG促排卵治疗是对有生育要求的HA患者的经济有效的治疗,但需从低剂量起始,按逐渐加量和减量的原则进行,预防卵巢过度刺激综合征和多胎。出现多卵泡发育时穿刺多余卵泡或中转IVF,都是较好的补救措施。     

二甲双胍降低人子宫内膜癌裸鼠移植瘤孕激素耐药及其机制的初步研究

目的:研究二甲双胍对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药性的逆转作用,并初步探讨其可能机制。方法:将40只裸鼠随机分为2组,分别建立人子宫内膜癌ishikawa及孕激素不敏感ishikawa/GLOI细胞裸鼠皮下移植瘤模型,每组各随机分成4个亚组,每亚组各5只小鼠:对照组(生理盐水)、二甲双胍组(二甲双胍200mg/kg灌胃给药,0.1ml/只)、孕激素(MPA)组[甲羟孕酮(MPA)100mg/kg腹腔注射,0.1ml/只]、二甲双胍+MPA组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和MPA腹腔注射)。治疗期间定期测量肿瘤大小及裸鼠质量。实验结束时取出移植瘤,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算药物对肿瘤生长的抑制率。应用免疫组化检测肿瘤GLOI、CyclinD1、mTOR、pmTOR蛋白的表达。结果:接种ishikawa细胞株的裸鼠中,二甲双胍组、MPA组、二甲双胍+MPA组的抑瘤率分别为36.63%、55.92%和75.38%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。接种ishikawa/GLOI细胞株的裸鼠中,二甲双胍+MPA组的抑瘤率为41.77%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);而二甲双胍组、MPA组的抑瘤率分别为12.58%和2.79%,与对照组的差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,接种ishikawa/GLOI细胞的MPA组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的表达与对照组无明显差异(P0.05),余各实验组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的阳性表达率均低于对照组(P0.05)。结论:二甲双胍能逆转人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的孕激素耐药性,其逆转机制可能与下调GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1表达有关。     

Enhancement of human endometrial stromal decidualization by bestatin, an aminopeptidase-N inhibitor.

We have re-evaluated the effects of bestatin, an aminopeptidase-N (CD13) inhibitor, on in vitro decidualization of normal human endometrial stromal cells by using an in vitro decidualization activity assay. Bestatin did not show any effects on the viability of both the decidualizing stromal cells co-stimulated with 8-Br-cAMP and bestatin and the 8-Br-cAMP-induced decidualized stromal cells, or on prolactin release from the decidualized stromal cells. However, bestatin dose-dependently enhanced prolactin release from the decidualizing stromal cells co-stimulated with 8-Br-cAMP and bestatin. These results indicate that bestatin enhances cAMP-mediated decidualization of human endometrial stromal cells and suggests that membrane aminopeptidase-N in the human endometrium is involved in the regulation of endometrial differentiation by inhibiting cAMP-mediated decidualization signals in endometrial stromal cells.     

来曲唑联合促性腺激素用于行宫腔内人工授精的排卵障碍者的促排卵研究

目的:探讨来曲唑在促排卵过程中的功效。方法:100例不孕症常规检查确诊为女性排卵障碍并接受超促排卵及IUI的不孕患者,随机分为A组(50例):口服来曲唑(LE)+hMG,B组(50例):口服氯米芬(CC)+hMG,分别监测hCG注射日子宫内膜的厚度、形态、血E2、P水平,分别统计排卵率及妊娠率。结果:A组血清中雌激素水平明显较低,hCG注射日子宫内膜较厚。直径>17mm卵泡数组间无明显差异,临床妊娠率也无明显差异。结论:对因女性排卵障碍引起的不孕,用LE或CC促排卵,其获卵数和临床妊娠率无差异,但用LE促排卵,可以减少CC抗雌激素样作用对子宫内膜的不良影响,使子宫内膜有较好的容受性,有利于妊娠。     

甲状腺自身抗体阳性对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的：探讨抗甲状腺自身抗体（antithyroid autoantibodies,ATA）阳性对体外受精．胚胎移植泐vitro fertilization and embryo transfer,ⅣF—ET）结局的影响。方法：回顾性分析行IVF／ICSI治疗不孕的患者资料。选取甲状腺抗体阳性但甲状腺功能正常者65例（共71个周期）作为研究组（ATA＋组）,492例甲状腺抗体阴性患者（共512个周期）作为对照组（ATA组）。结果：ATA＋组与ATA-患者的一般情况、促排卵天数、促性腺激素使用总量（Gn总量）、hCG注射日E2水平、获卵数、ICSI受精率、可移植胚胎数和妊娠率,组间比较均无统计学差异（P〉0．05）。ATA＋组IVF受精率（59．73％）、优质胚胎率（26．94％）明显低于ATA-组（70．86％和36．31％）;ATA＋组的流产率（37．50％）明显高于ATA组（17．79％）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：ATA＋对IvF—ET妊娠结局有不利的影响,因此,对于ATⅣ患者在接受IVF—ET治疗前调节甲状腺自身免疫功能可对妊娠结局有利。