葡萄糖诱导人血管内皮细胞凋亡及其对bax和bcl-2表达的影响

目的　探讨糖尿病 (DM)状态下葡萄糖 (Glu)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)凋亡的影响及其分子机制。　方法　细胞凋亡用吖啶橙 (AO)荧光染色、原位末端标记 (TUNEL)法、流式细胞仪分析检测。同时行bcl 2和bax免疫细胞化学染色和定量分析。　结果　高浓度Glu( 2 0mmol/L、4 0mmol/L)能够诱导HUVEC凋亡 ,且呈浓度和时间依赖性。高糖 ( 2 0mmol/L)培养HUVEC 72h后bax表达的MOD×area值由 387± 97升至 136 9± 2 2 5 (P <0 .0 1) ,对照组和高糖组bcl 2染色的MOD×area分别为 15 0± 36和 186± 76 ,两者间差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。　结论　DM状态下高血糖能诱导内皮细胞凋亡 ,其机制可能与bax基因表达上调有关。     

三氧化二砷体外对人卵巢上皮癌细胞3AO增殖及凋亡的影响

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )体外对人卵巢上皮癌细胞株 3AO增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法　将人卵巢上皮癌细胞株 3AO与不同浓度的As2 O3 进行体外培养 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定不同浓度As2 O3 对 3AO细胞的生长抑制率 ,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期时相及其Fas、FasL、P53 和bcl 2蛋白的表达。结果　 0 2 5～ 8 0 μmol /L浓度的As2 O3 均显著抑制3AO细胞的增殖 ,且随浓度升高及作用时间的延长 ,抑制率上升 ,As2 O3 与 3AO细胞联合培养 4 8小时的半数致死量 (IC50 )为 (3 90± 0 2 0 ) μmol /L。 0 2 5～ 4 0 μmol /L浓度的As2 O3 均诱导 3AO细胞凋亡 ,随浓度升高 ,凋亡率上升。As2 O3 阻滞 3AO细胞停滞于S期 ,并诱导细胞凋亡。As2 O3 (2 μmol/L )培养3AO细胞 4 8小时 ,Fas蛋白表达率为 (4 6 76± 4 5 0 ) % ,明显高于对照组的 (6 36± 0 82 ) % ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ,FasL、P53 和bcl 2蛋白表达无明显变化 (P >0 0 5 )。结论　As2 O3 以剂量 时间依赖性方式抑制人卵巢上皮癌细胞 3AO增殖并诱导其凋亡 ,其作用机制与上调Fas基因表达有关。     

Fas-Fasl系统及凋亡与再生障碍性贫血关系的研究

目的 :研究Fas Fasl系统及凋亡与再生障碍性贫血 (Aplasticanemia ,AA)发生、发展的关系。方法 :分别用TUNEL方法和免疫组织化学标记方法检测凋亡细胞和Fas、Fasl表达细胞 ,并计算其百分率 ;用ELISA方法检测血清中的sFas含量。结果 :AA患者骨髓单核细胞 (BMMNC)中的凋亡细胞百分率为 2 9.6 3%± 17.71% ,Fas表达细胞百分率为 2 4 .81%± 9.4 5 % ,Fasl表达细胞百分率为 2 1.83%± 7.91% ,血清sFas含量为 5 .72± 0 .34μg/L ,与正常对照组 (分别为 2 .2 7%± 0 .74 %、1.93%± 0 .32 %、4 .18%± 1.0 2 %及 7.5 5± 0 .79μg/L)比较差异均有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;AA患者凋亡细胞百分率与Fas+ 细胞或Fasl+ 细胞百分率之间无直线相关关系 (P >0 .0 5 )。结论 :Fas Fasl系统介导的凋亡以及机体对其调控的失常可能参与了AA患者骨髓造血衰竭的病理生理过程 ,但体内可能还存在另外的机制 ,可造成AA患者BMMNC凋亡增加     

C反应蛋白增加人内皮细胞糖基化终产物受体表达

目的探讨C反应蛋白(CRP)及其单体(mCRP)对人脐静脉内皮细胞晚期糖基化终产物受体(RAGE)蛋白表达及mRNA的影响。方法将人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5、25、50、100μg/mL)的CRP孵育24h及同一浓度(50μg/mL)CRP不同时间孵育0、6、12、24、48h,采用流式细胞仪及RT-PCR方法检测RAGE蛋白及mRNA的表达水平。分析50μg/mLCRP和mCRP孵育0、6、24h后对RAGE蛋白表达的影响。结果(1)与对照组比较,5μg/mL的CRP培养内皮细胞24h显著增高RAGE蛋白的表达(175.2%±8.1%,P<0.05),50μg/mL时达到顶峰(527.3%±5.8%,P<0.01);50μg/mLCRP孵育不同时间,RAGE蛋白的表达从6h明显增高(179.8%±29.1%,P<0.05)。(2)与对照组比较,5μg/mLCRP即可升高RAGE的mRNA表达(135.4%±11.1%,P<0.05),并在50μg/mL时达到峰值(186.6%±29.0%,P<0.05);6h时可以检测到RAGE mRNA的升高(134.3%±22.8%,P<0.05),在12h为最高(214.2%±33.1%,P<0.05)。(3)mCRP也会升高RAGE蛋白表达,与CRP组没有差别(P>0.05)。结论C反应蛋白以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞RAGE蛋白及mRNA的表达。CRP与其单体(mCRP)作用相似。     

萎缩性胃炎胃黏膜组织细胞增殖与凋亡的实验研究

目的　研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎胃黏膜组织中的凋亡细胞、增殖细胞和bcl 2、Fas表达状态 ,以探讨长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎 (CAG)发生的关系。方法　采用脱氧核糖核酸转移酶介导等缺口末端标记 (TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术。细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术。结果　 (1 )TUNEL检测细胞凋亡显示 :在热盐水所致的大鼠CAG中凋亡细胞数明显增多 ,在黏膜全层均可见到 ,呈弥漫性分布。CAG中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃黏膜 (P <0 0 5) ;(2 )免疫组化法检测凋亡相关基因和增殖细胞核抗原 (PCNA)显示 :bcl 2、Fas及PCNA在热盐水灌胃所致的CAG中的表达率显著高于正常胃黏膜 (P <0 0 5) ;热盐水灌胃不同时间大鼠胃黏膜中bcl 2、Fas蛋白表达率随灌胃时间延长而逐渐增加 ,在 4、8、1 2周 (CAG出现 )时bcl 2蛋白表达率分别为 1 2 5 %、1 6 7%、76 5 % ,Fas蛋白表达率分别为 1 8 7%、2 2 2 %、64 7%。 (3)流式细胞检测显示 :CAG时 ,在G0 /G1 峰前可见一个亚G0 /G1 峰 ,也即凋亡细胞峰出现 ,而在正常胃黏膜时未显示亚G0 /G1 峰。结论　热盐水灌胃可导致大鼠胃黏膜组织细胞增殖和细胞凋亡异常 ,其调控基因在热盐水所致的大鼠CAG发生中起重要作用     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞凋亡及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的变化.方法 制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液培养人脐静脉内皮细胞,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学的变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法分析凋亡调控基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平,通过特异性磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶抗体采用免疫印迹法检测p38丝裂素活化蛋白激酶活性.结果 血管紧张素Ⅱ能诱导内皮细胞凋亡,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(32.76%±2.98%比2.14%±0.36%,P<0.01);流式细胞仪检测AnnexinV-FITC/PI双染色的血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞中,早中期凋亡细胞明显增加,其细胞凋亡率为37.4%±1.6%(对照组为10.2%±1.8%).与对照组相比,6 h、12 h、18 h及24 h Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化水平于18 h达到最高峰(P<0.01).结论 血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡可能与p38丝裂素活化蛋白激酶对Bcl-2 mRNA及蛋白表达影响有关.     

多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增生与凋亡的研究

目的 :研究多囊肾病囊肿衬里上皮的增生与凋亡及相关蛋白表达。　 方法 :应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化法 ,对 3例正常肾组织和 12例常染色体显性遗传型多囊肾病 (ADPKD)患者 (2例为终末期肾病患者 ,10例为氮质血症期患者 )肾组织中囊肿衬里上皮细胞的凋亡细胞和增生细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞计数 ,并检测c myc、bcl 2、bax、p5 3、Fas蛋白表达。　 结果 :多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增生与凋亡均增加 ,增生较凋亡增加显著 ,PCNA阳性细胞 /凋亡细胞为 3 46± 1 6 8。多囊肾组织c myc蛋白和bcl 2蛋白表达显著升高。bax、p5 3和Fas的表达并无改变。　 结论 :多囊肾病中囊肿衬里上皮细胞的增生和凋亡失调 ,调节这些过程的基因异常表达介导了多囊肾病囊肿形成。多囊肾组织c myc蛋白高度表达 ,与囊肿衬里上皮过度增生、凋亡相关。多囊肾囊肿衬里上皮细胞的凋亡不依赖于bcl 2、p5 3和Fas。     

动脉粥样硬化斑块中细胞凋亡及其相关基因的表达

目的 :研究动脉粥样硬化 (AS)病灶中细胞凋亡的发生情况及其相关基因的表达情况 ,探讨细胞凋亡与bcl 2、p5 3、C myc基因表达的内在联系。方法 :选择因AS住院手术患者 2 0例作为研究对象〔其中男 17例 ,女 3例 ,平均年龄 (6 6 .8± 9.86 )岁 ,主要取患者的股动脉〕 ,及因意外伤害手术患者的 10例〔其中男 8例 ,女 2例 ,平均年龄 (5 1.6± 11.97)岁〕作为正常对照。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术检测两组动脉标本的细胞凋亡情况 ,采用免疫组化的方法检测bcl 2、p5 3及C myc基因的表达情况 ,应用透射电镜进行两组动脉标本的细胞形态学观察。结果 :AS病灶中 ,细胞凋亡的发生率明显高于正常对照血管 (P <0 .0 1) ,bcl 2蛋白的表达明显降低 ,p5 3蛋白及C myc蛋白的表达明显升高 (P <0 .0 1) ;透射电镜证实AS病灶中有大量的平滑肌细胞发生凋亡。结论 :细胞凋亡是AS病灶中细胞死亡的一种主要形式 ,bcl 2、p5 3及C myc基因的表达可能对细胞凋亡的发生起重要的调控作用。     

吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 :研究非甾体类抗炎药吲哚美辛诱导人胃癌细胞系SGC 790 1的凋亡作用及对COX 2mRNA表达及c myc、bcl 2、cas pase 3凋亡基因蛋白的表达 ,以探索其凋亡机制。方法 :胃癌细胞的凋亡用电子显微镜、AnnexinV FITC染色流式细胞仪技术测定。COX 2基因表达用RT PCR法测定。c myc、bcl 2和caspase 3蛋白表达用免疫细胞化学技术测定。结果 :吲哚美辛在浓度为 50 μmol/L时作用48、72h和浓度为 1 0 0和 2 0 0 μmol/L时作用 2 4、48、72h均可诱导胃癌细胞凋亡 ,凋亡率分别为 6 .48%、8.2 0 % ;9.1 4 %、1 2 .2 7%、1 5 .1 1 %和 9.95 %、1 4 .70 %、1 9.81 % ,呈浓度和时间依赖性。吲哚美辛可降低COX 2mRNA表达和bcl 2蛋白表达 ,增加c myc和caspase 3蛋白表达。 2 0 0 μmol/L吲哚美辛作用 72h ,bcl 2、c myc和caspase 3蛋白表达阳性率分别为 2 2 .8± 6 .5 %、42 .5± 1 3 .1 %和 31 8± 1 2 .7% ;对照组为 44 .6± 1 0 .1 %、2 4 .74± 9.5 %和 1 4 .8± 6 .4%。两者比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。结论 :吲哚美辛可诱导胃癌细胞SGC 790 1凋亡 ,其机制涉及bcl 2表达下调、c myc表达上调及caspase 3激活。说明多基因调控参与其中     

内皮素-1及其受体拮抗剂对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的　探讨内皮素 - 1(ET- 1)及其特异性内皮素 A受体 (ETA- R)拮抗剂 (BQ12 3)对脐动脉血管平滑肌细胞(HUSMC)凋亡的影响。方法　组织块培养 HU SMC,传代后分为对照组、ET- 1组、BQ12 3+ET- 1组。流式细胞术测定细胞核 DNA降解规律、凋亡细胞数、及细胞周期中各时相细胞的变化。结果　 ET- 1组可见明显 Ap峰 ,凋亡细胞百分比 (13.86 %± 4 .85 % )较对照组 (1.5 8%± 0 .2 3% )显著增加 (P<0 .0 5 )。ET- 1组 HUSMC的 G0 / G1 期细胞百分数 (31.5 6 %± 2 .73% ) ,较对照组 (71.15 %± 1.34% )明显降低 (P <0 .0 1)。 S期细胞百分数 (37.6 5 %±3.0 1% )和 G2 / M期细胞百分数 (30 .78%± 0 .30 % ) ,分别较对照组 (19.10 %± 1.99% )和 (12 .2 1%± 1.86 % )明显升高 (P<0 .0 1)。 BQ12 3+ET- 1组各期细胞百分数与相应对照组比较 ,统计学均无差异 (P>0 .0 5 )。结论　 ET- 1促 HU SMC凋亡和增殖的程度不同 ,产生增殖与凋亡的失平衡。BQ12 3可完全抑制 ET- 1的上述作用 ,具有临床应用前景     

血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的研究血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,同时检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分成对照组、过氧化氢组和过氧化氢 血管内皮生长因子组,12 h后,采用原位末端标记法和流式细胞仪分别观察各组细胞的凋亡数和凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。结果过氧化氢组凋亡细胞数(27.83±2.14)明显高于对照组(2.50±1.05)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(13.00±2.10)(P<0.01)。过氧化氢组细胞凋亡率(14.17%±0.45%)明显高于对照组(1.55%±0.87%)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(5.69%±0.38%)(P<0.01)。与过氧化氢组比较,过氧化氢 血管内皮生长因子组Fas mRNA表达明显减少(40.67%±2.16%比94.50%±3.45%,P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(60.33%±1.75%比23.17%±1.17%,P<0.01)。结论血管内皮生长因子能拮抗过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2 mRNA表达与下调Fas mRNA表达有关。     

The function of apoptosis and protein expression of bcl-2, p53 and C-myc inthe development of gastric cancer

AIM To understand the rule and possible function of apoptosis and protein expression of bcl-2, p53 and C-myc in chronic gastritis, gastric ulcer, non-classic proliferation of gastric mucosa and gastric cancer.METHODS Apoptosis was detected by using in situ terminal labelling (TUNEL). The protein expression ofbcl-2, p53 and C-myc was detected by immunohistochemical method.RESULTS The indexes of apoptosis in chronic active gastritis, gastric ulcer, mild and severe non-classicproliferation of gastric mucosa, early and progressive gastric cancer were 16.8%±12.3%, 24.1%±20.0%,19.3%±16.4%, 15.7%±15.2%, 10.1%±9.1% and 6.3%±6.0%, respectively. The index of progressivegastric cancer was lower than that of early gastric cancer and non-classic proliferation of gastric mucosa(P<0.05). The positive rate of bcl-2 protein was 9.4%, 27.6%, 52.9%, 75.0%, 83.3% and 46.7%,respectively. The positive rate of bcl-2 of early gastric cancer was higher than that of progressive gastriccancer. The positive rates of p53 protein of severe non-classic proliferation, early and progressive gastriccancer were 25.0%, 33.3% and 63.3%, respectively. The positive rate of p53 of progressive gastric cancerwas higher than that of early gastric cancer and non-classic proliferation (P<0.05). In Lauren types, theindex of apoptosis, protein expression rates of bcl-2, p53 and C-myc of intestinal type were 8.3%±7.2%,38.9%, 77.7% and 56.6%, while that of diffuse type were 5.1%±4.9%, 58.3%, 50.0% and 8.3%,respectively. All markers had statistical difference between two types (P<0.05).CONCLUSION Apoptosis was inhibited stepwise in the development of non-classic proliferation of gastricmucosa to early gastric cancer and then to progressive gastric cancer. The high expression of bcl-2, p53 andC-myc was related to the development of gastric cancer, bcl-2 might play an important role in early gastriccancer while p53 and C-myc act mostly in middle and late stage gastric cancer. The Lauren typing of gastriccancer is closely related to the index of apoptosis and expression of bcl-2, p53 and C-myc.     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

Overexpression of bcl-2 in transient abnormal myelopoiesis associated with Down syndrome

Transient abnormal myelopoiesis (TAM) is a haematological complication found in Down syndrome. To determine the mechanisms of sustained proliferation of TAM cells, we studied the expression of apoptosis-related proteins, such as bcl-2, Fas (APO-1/CD95) and p-53, in peripheral blood cells from a new-born infant with Down syndrome and TAM. Using flow cytometry, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), consisting mostly of blast cells, showed marked expression of bcl-2 protein but not of Fas or p-53 products. DNA gel electrophoresis of PBMCs, cultured in the absence of serum factors, revealed no marked fragmentation. Our findings suggest that bcl-2 overexpression may be associated with prolonged cell survival of TAM cells. Received: 8 March 1999 / Accepted: 9 November 1999     

神经酰胺诱导内皮细胞凋亡机制的研究

目的 探讨p53、Fas在外源性神经酰胺（C2-ceramide）诱导内皮细胞凋亡中的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以不同浓度的C2-ceramide处理后,用TUNEL染色法检测细胞的凋亡。用p53 的抑制剂PFT-α和Fas的抑制剂Fas相关磷酸酶-1（FAP-1）预处理细胞后,加入C2-ceramide,与对照组比较观察Fas的表达和细胞凋亡指数的变化。结果 C2-ceramide可剂量依赖性地诱导内皮细胞凋亡。FAP-1可抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的内皮细胞凋亡。结论 神经酰胺能够诱导内皮细胞凋亡,其作用机制可能是通过Fas途径而非通过p53途径。     

Apoptotic pathway induced by diallyl trisulfide in pancreatic cancer cells

AIM:To investigate the effects of diallyl trisulfide(DATS),a garlic-derived organosulfur compound,in pancreatic cancer cells.METHODS:Human pancreatic cancer cells with wildtype p53 gene(Capan-2)and normal pancreatic epithelial cells(H6C7)were cultured in RPMI1640.DATS was prepared at a concentration of 100μmol/L.Cell viability was determined via the methyl thiazolyl tetrazolium assay.Apoptotic cells were detected by TUNEL assay.Cell cycle analysis was performed using flow cytometry.Protein expression was determined by Western blot.Bax and Bcl-2 expression was detected by immunofluorescence.Apoptosis genes and cell cycle were assessed by quantitative real-time polymerase chain reaction.RESULTS:DATS suppressed the viability of cultured human pancreatic cancer cells(Capan-2)by increasing the proportion of cells in the G2/M phase and induced apoptotic cell death.Western blot analysis indicated that DATS enhanced the expression of Fas,p21,p53and cyclin B1,but downregulated the expression of Akt,cyclin D1,MDM2 and Bcl-2.DATS induced cell cycle inhibition which was correlated with elevated levels of cyclin B1 and p21,and reduced levels of cyclin D1 in Capan-2 cells and H6C7 cells.DATS-induced apoptosis was markedly elevated in Capan-2 cells compared with H6C7 cells,and this was correlated with elevated levels of cyclin B1 and p53,and reduced levels of Bcl-2.DATS-induced apoptosis was correlated with downregulation of Bcl-2,Akt and cyclin D1 protein levels,and up-regulation of Bax,Fas,p53 and cyclin B protein levels in Capan-2 cells.CONCLUSION:DATS induces apoptosis of pancreatic cancer cells(Capan-2)and non-tumorigenic pancreatic ductal epithelial cells(H6C7).     

花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨花刺参粘多糖抗动脉粥样硬化、预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的可能机制。方法组织块贴片法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑盐、流式细胞细胞周期分析;流式细胞术、TUNEL法观察细胞凋亡。结果血小板源生长因子BB刺激后可促进血管平滑肌细胞增殖,抑制其凋亡;花刺参粘多糖则呈浓度依赖性地逆转此作用,光密度值由0.406±0.003减少到0.187±0.017(P<0.01),G0/G1期细胞比例由77.4%±5.7%增加到88.1%±5.3%(P<0.05),细胞凋亡率由8.6%±2.3%增加到22.6%±2.3%(P<0.05),凋亡细胞比例由2.7%±0.4%增加到10.1%±0.9%(P<0.01)。结论花刺参粘多糖可抑制血小板源生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,这可能对延缓动脉粥样硬化的发生发展、防止经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的发生起到一定作用。     

芪丹通脉片保护缺氧内皮细胞的实验研究

目的 观察芪丹通脉片（QDTMT）对缺氧内皮细胞的保护机制。方法 原代培养、鉴定人脐静脉内皮细胞（HuVECs)。制备含QDTMT的血清并干预传代的HuVECs。将HuVECs根据不同处理因素随机分为 3 组:空白对照组、生理盐水组和QDTMT组,用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。用免疫荧光染色法检测生理盐水组和QDTMT组细胞上血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达。结果 培养的HuVECs中具有特征性的短棒状细胞器Weible-Palade小体。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,缺氧培养的HuVECs的凋亡率增加,但QDTMT组内皮细胞的凋亡率明显低于生理盐水组(P<0.05)。免疫荧光染色检测可见QDTMT组内皮细胞VEGFR2的表达强于生理盐水组。结论 QDTMT抗缺氧的HuVECs凋亡的作用可能与其促进VEGFR2的表达有关。     

Quantitative analysis of Fas and bcl-2 expression in hematopoietic precursors

BACKGROUND AND OBJECTIVES: We investigated the expression of bcl-2 and CD95 (Apo1-/Fas) on CD34+ cells obtained from bone marrow (BM), mobilized peripheral blood (MPB), and umbilical cord blood (UCB) samples. The expression of bcl-2 and Fas was then compared with that of other markers usually associated with immaturity; functional tests using the agonistic antibody anti- Fas CH11 were also carried out. DESIGN AND METHODS: The analysis was performed by flow cytometry on purified CD34+ cells in a three (CD95 PE, CD34 APC and CD71 FITC) and in a four (CD38 PE, HLA-DR PerCP, CD34 APC and bcl-2 FITC) fluorescence assay. RESULTS. The results were expressed as mean fluorescence index (MFI); bcl-2 expression was significantly higher (p < 0.001) in BM (3.73 +/- 0.63) than in MPB (2.47 +/- 0.39) and UCB (2.38 +/- 0.58); Fas was significantly less expressed (p < 0.001) in UCB (1.27 +/- 0.78) than in MBP (3.63 +/- 2.19) and BM (4.56 +/- 1.69). CD34 expression was significantly (p < 0.001) brighter in UCB compared to in MBP and BM, while CD38 and CD71 were significantly (p = 0.005 and p < 0.001, respectively) more expressed in BM than in MPB and UCB. Fas values were directly correlated to CD38; both Fas and bcl-2 were directly related to CD71 and inversely to CD34. Culture assays showed that hematopoietic precursor cells from BM, MPB and UCB had a low susceptibility to undergo Fas-mediated apoptosis. INTERPRETATION AND CONCLUSIONS: In conclusion, bcl-2 and Fas are less expressed in UCB than in MPB and BM; early hematopoietic precursor cells are relatively resistant to CD95-triggered apoptosis; the observed correlation between Fas/bcl-2 and markers of immaturity suggests that they may be determinants of commitment in early hematopoietic precursors.