川芎嗪对脑血管内皮细胞粘附分子ICAM—1表达的影响

川芎嗪对脑血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ－１表达的影响△刘勇许彦钢（西安医科大学神经生物学研究中心，西安７１００６１）粘附分子与脑血管病的发生、发展及防治有关。我们曾报道细胞因子ＴＮＦ－α－和ＩＬ－１β刺激培养脑血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达增加，但有关...     

小鼠孕早期子宫内膜ICAM-1 mRNA的表达及调节

目的：为探讨细胞间粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＩＣＡＭ－１）在孕早期的作用和细胞因子对其表达的影响。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ法测定孕１～８ｄ小鼠子宫内膜ＩＣＡＭ－１的表达；在小鼠孕２～４ｄ分别腹腔注射细胞因子ＬＩＦ、ＩＬ－１β或ＩＬ－１ｒａ，测定并比较各组孕第４天子宫内膜ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达水平。结果：ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ孕第１天表达量较低，第２天开始升高，第４天达高峰（Ｐ〈０．０１）。此后缓慢下降。与对照组相比。ＬＩＦ和ＩＬ－１β组ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达水平升高（Ｐ〈０．０１）。结论：ＩＣＡＭ－１在着床期表达水平较高，可能参与了着床过程中的胚胎粘附。细胞因子ＬＩＦ和ＩＬ－１可能是子宫内膜表达ＩＣＡＭ－１的潜在促调节因子。     

ICAM-1反义寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨ICAM1反义寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞表达ICAM1的影响,为利用ICAM1反义寡核苷酸类药物治疗肾小管间质病变奠定基础。方法:小鼠ICAM1反义寡核苷酸及其对照物参照文献合成并行全硫代磷酸化修饰。部分ICAM1反义寡核苷酸在其5′端作FITC荧光标记。将ICAM1反义寡核苷酸单独或脂质体转染试剂DOTAP混合后转染至培养的肾小管上皮细胞之中,转染成功后加入IL1β诱导细胞产生ICAM1。采用对照寡核苷酸及不含寡核苷酸的细胞转染液作为实验对照及空白对照。利用免疫组化染色的方法检测细胞ICAM1表达变化并提取细胞总RNA行逆转录PCR及Northern杂交观察ICAM1mRNA的表达的变化。结果:两个不同浓度的ICAM1反义寡核苷酸均可明显阻断IL1β诱导的肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达;对照的寡核苷酸不能减少IL1β诱导的肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达。结论:小鼠ICAM1反义寡核苷酸可明显抑制IL1β诱导的小鼠肾小管上皮细胞ICAM1及ICAM1mRNA的表达,提示ICAM1的反义寡核苷酸有可能应用于肾小管间质病变的实验治疗之中。     

MCP—1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM—1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。     

创伤性休克大鼠外周血白细胞表面LFA—1、ICAM—1表达的研究

自 198 1年发现ＣＤ11ａ/ＣＤ18,1986年发现不同于ＬＦＡ 1的细胞间粘附分子 (ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＩＣＡＭ 1,亦名ＣＤ54,是ＬＦＡ 1的一种可诱导的细胞表面配基 )以来。人们对ＬＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的了解日益增多 ,并发现它们在细胞粘附中作用特别活跃。而有关创伤性休克时白细胞表面ＬＦＡ 1、Ｉ ＣＡＭ 1表达情况少见报道 ,故我们设计此实验以探讨创伤性休克时白细胞表面ＩＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的表达变化。1　材料与方法1 1　材料　取雄性ＳＤ大鼠 8只 ,体重 2 10～ 2 50ｇ ,随机分为 2组 :正…     

细胞因子诱导HepG2细胞ICAM—1表达的研究

目的 研究IFN-γ、TNF-a和IL-1对HepG2细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 用IFN-γ、TNF-a和IL-1在体外诱导HepG2细胞表达ICAM-1,并用细胞FLISA检测HepG2细胞ICAM-1表达水平。结果 未经刺激的HepG2细胞ICAM-1表达水平很低。TNF-a、IL-1、IFN-γ刺激后,HepG2细胞ICAM-1表达均明显增强,其表达水平与细胞因子浓度呈一定的剂量依赖关系;随着细胞因子刺激时间的延长,HepG2细胞ICAM-1表达也逐渐增多。结论IFN-γ、TNF-a和IL-1等细胞因子能诱导体外培养HepG2细胞ICAM-1增强表达。     

哮喘大鼠血清刺激下内皮细胞表面粘附分子ICAM—1的表达

近十五年人们才发现炎症是哮喘发病的病理基础,它以白细胞浸润为主要特征,过程由白细胞与内皮细胞表面粘附分子介导,ICAM－1就是其中之一,我们在前期活体动物实验中证实了哮喘动物肺组织中内皮细胞一白细胞粘附现象显著,并且肺组织ICAM－1高表达,这有可能是发病过程中ICAM－1大量表达于内皮细胞表面,导致内皮细胞一白细胞粘附增加的结果。本实验采用肺组织机械分离法体外培养大鼠肺内皮细胞,将哮喘病理血清与内皮细胞共同孵育,用于细胞粘附的体外研究,借助间接免疫荧光标记技术及流式细胞分离法,我们首先研究了受哮喘病理血清刺激后肺微血管内皮细胞表面ICAM－1表达的情况,结果发现,血清孵育的内皮细胞ICAM－1表达比用DMEM培养基培养的内皮细胞表达量高;哮喘血清刺激4h后ICAM－1表达量达到峰值,长于4h则很快降低;正常血清或培养基处理的内皮细胞表达持续在一个低水平。     

流体切应力和Ox—LDL地内皮细胞表面ICAM—1表达的影响

目的研究动脉粥样硬化(AS)的危险因素高脂血症、流体切应力及二者共同作用对血管内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,应用免疫组化ACB方法,观测Ox-LDL、流体切应力及二者共同作用对HUVECs的粘附分子ICAM-1表达的影响。结果与对照组相比,(1)Ox-LDL显著增加HUVECs表面ICAM-1表达;(2)流体切应力使HUVECs表面ICAM-1表达增加,但ICAM-1的表达随时间依赖性增加的趋势不明显;(3)共同作用后,HUVECsICAM-1的表达较基础表达显著增加。结论Ox-LDL、流体切应力的改变及二者共同作用显著增加H-UVECs表面ICAM-1表达。     

单纯疱疹病毒性脑炎小鼠脑组织内ICAM-1 mRNA动态变化及药物影响

目的：了解单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠脑组织内的ICAM-1 mRNA动态变化及药物的影响。方法：采用RT—PCR方法半定量检测小鼠HSE治疗前后ICAM-1 mRNA的表达，并给予阿昔洛韦(ACV)及地塞米松(DEX)治疗，用透射电镜观察药物治疗后脑细胞结构的变化。结果：HSE小鼠在感染后第3天ICAM—1InItNAICAM-1 mRNA的表达开始增加，第4天达高蜂，第5天后逐渐下降；用药物干预的小鼠脑神经细胞改变较轻微，未找到病毒颗粒，毛细血管周围水肿减轻。结论：ICAM-1 mRNA是HSE炎症反应发生过程中的重要环节之一，HSE时早期给予ACV DEX治疗对HSE脑细胞结构有明显保护作用。     

慢性肝病患者STGF—α及ICAM—1水平及其临床意义

研究证实 ,慢性肝炎 (ＣＨ)、肝硬化 (ＨＣ)及原发性肝癌(ＰＨＣ)患者血清转化生长因子 -α(ＳＴＧＦ -α)含量显著高于正常人 ,其水平的变化与ＣＨ、ＨＣ、ＰＨＣ病情的发展呈平行关系。有作者还在研究细胞间粘附分子 - 1(ＩＣＡＭ - 1)与病毒性肝炎及ＰＨＣ的关系时发现 ,正常对照组肝细胞的表面无ＩＣＡＭ- 1表达 ,而所有急性或慢性肝炎标本ＩＣＡＭ - 1在肝窦内皮细胞和肝细胞表面呈强烈表达。其表达强弱与肝细胞坏死程度相关[1,2 ] 。为研究ＳＴＧＦ -α及ＳＩＣＡＭ - 1水平与慢性肝病的关系。本文测定了 32例ＣＨ、38例ＨＣ及 2 9例…     

反义寡核苷酸抑制缺氧/再给氧时内皮细胞细胞间粘附分子-1的表达

目的:探讨反义寡核苷酸(AS-ODN)对缺氧/再给氧(H/R)时内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:流式细胞仪测定肾小球血管内皮细胞在缺氧、再给氧及加入AS-ODN后ICAM-1表达的阳性百分率。结果:缺氧10h,肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达与对照组无显著性差异,再给氧6hICAM-1的表达明显高于正常,加入AS-ODN后,ICAM-1阳性细胞的百分率下降40.6%。结论:AS-ODN可以降低H/R时内皮细胞ICAM-1的表达。     

反义RNA对培养的肾小管上皮

目的:探讨骨调素(OPN)反义RNA对培养的肾小管上皮细胞骨调素表达的影响。方法:脂质体介导将表达OPN反义RNA的逆转录病毒重组载体转染大鼠肾小管上皮细胞系NRK52E细胞,建立稳定表达OPN反义RNA的肾小管上皮细胞克隆,以转染了表达OPN顺义RNA和空白逆转录病毒载体的肾小管上皮细胞克隆为对照,以表皮生长因子(EGF)为刺激剂,通过核酸酶保护分析(RPA),WesternBlot,ELISA和OPN生物活性分析检测上述克隆细胞的OPN表达。结果:OPN反义RNA仅被反义克隆细胞表达,反义克隆、顺义克隆和空白克隆细胞均有OPNmRNA的表达,EGF能增加它们OPNmRNA的表达水平,但不增加反义RNA或顺义RNA的表达水平;加或不加EGF的反义克隆细胞和不加EGF的空白克隆细胞无OPN蛋白的表达,加或不加EGF的顺义克隆细胞和加EGF的空白克隆细胞有OPN蛋白的表达。结论:OPN反义RNA能抑制肾小管上皮细胞OPNmRNA的翻译而抑制OPN蛋白的表达,但不抑制OPNmRNA的转录。     

Inhibition of interleukin-1 type I receptor expression in human cell-lines by an antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide

A 20 mer oligodeoxynucleotide designed to hybridize to specific 3′-untranslated sequences in the type 1 receptor IL-1r mRNA was identified which inhibited the expression of both IL-1r mRNA and protein in human A549 lung carcinoma cells and human dermal fibroblasts. The oligodeoxynucleotide exhibited an IC₅₀ value of approximately 100 nM in both cell lines and reduced IL-1r mRNA expression for up to 48 h. Multiple scrambled control oligonucleotides were without effect on IL-lr mRNA expression. Treatment of A549 cells with this oligodeoxynucleotide (but not scrambled controls) inhibited the IL-1 stimulated expression of the cell adhesion molecule ICAM-1 but was without effect on the TNF-α induction of this molecule. This study demonstrates that phosphorothioate oligodeoxynucleotides can selectively inhibit IL-lr expression leading to a reduction in IL-1 dependent gene expression.     

白细胞介素2对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶在肾小管上皮细胞中表达的影响

目的：探讨IL-2对肾小管上皮细胞中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lck） mRNA及蛋白表达的影响以及Lck在狼疮肾炎中的致病作用.方法：采用BALB/c小鼠及BXSB狼疮小鼠肾小管上皮细胞为实验对象,分别给予 IL-2（100 U/ml）刺激.应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肾小管上皮细胞Lck mRNA的表达,免疫印迹法检测Lck蛋白的表达,比较IL-2刺激前后Lck mRNA及蛋白表达水平的变化.结果：正常BALB/c小鼠及BXSB狼疮小鼠肾小管上皮细胞中仅有微量Lck mRNA及蛋白表达,经IL-2刺激后二者的Lck mRNA及蛋白表达水平均有增加,以狼疮小鼠肾小管上皮细胞增加更为显著.结论：（1）肾小管上皮细胞中有Lck基因的表达.（2）肾小管上皮细胞经IL-2刺激后Lck mRNA及蛋白表达水平增加,提示IL-2可活化肾小管上皮细胞诱导Lck表达,进而可能通过一系列信号传导作用,发挥生物学作用.相对于BALB/c小鼠,狼疮小鼠肾小管上皮细胞在IL-2刺激后Lck表达更明显,提示狼疮小鼠肾小管上皮细胞可能更易激活.（3）由于Lck在狼疮肾炎小鼠肾小管上皮细胞中异常表达,推测Lck可能作为细胞因子或炎症因子的重要信号分子,促进狼疮肾炎的发生.     

修饰的反义寡脱氧核苷酸对胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑…

观察修饰过的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制卵巢癌细胞株SKOV3／mdr1中MDR1基因的表达

多药耐药基因（MDR1）编码的P－糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要因素之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－AS）通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3／mdr1 细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－S)同样导入细胞为对照。经以脂质体介导的1．6μmol/L MDR1-AS转染后,Pgp阳性的细胞百分数从100％降至48．7％,经过16和10μmol／L两个浓度的单纯MDR1－AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100％分别降至52．6％和86．7％。同时,利用RT－PCR检测了MDR1mRNA水平的变化,以β-actin作为内对照,发现MDR1mRNA水平在MDR1－AS转染后降至内对照的60％左右,而用MDR1－S转染的细胞与SKOV3／mdr1细胞比无明显变化。所以导入MDR1基因硫代反义寡聚脱氧核苷酸可以部分抑制SKOV3／mdr1细胞中MDR1基因的表达。     

特异性小干扰RNA沉默CHOP对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:研究C/EBP同源蛋白(CHOP)对肾小管上皮HK2细胞凋亡的影响。方法:采用qPCR法检测急性肾损伤患者及健康对照者血清中CHOP的mRNA水平。体外培养肾小管上皮HK2细胞,随机分为对照组、阴性组和si-CHOP组,si-CHOP组和阴性组分别转染CHOP小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导细胞损伤。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率, Western blot检测细胞中细胞核抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与健康对照者相比,急性肾损伤患者血清中CHOP的表达量显著增加(P0.05);转染CHOP siRNA显著降低肾小管上皮细胞HK2中CHOP的水平,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。敲减CHOP的表达显著增加肾小管上皮HK2细胞的活力(P0.05),降低其凋亡率(P0.05),增加Ki-67和PCNA的表达量(P0.05),下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。结论:在急性肾损伤患者血清中CHOP的水平增加。敲减CHOP表达通过调节增殖和凋亡相关蛋白的表达抑制肾小管上皮HK2细胞的凋亡。     

Embolic tubular epithelial cells in percutaneous renal biopsies

Four percutaneous renal biopsies with intravascular embolic tubular epithelial cells are presented. This unusual finding is presumably the result of the needle biopsy procedure and can be a puzzling and misleading artifact. It is postulated that dislodged tubular epithelial cells are pushed forward into or pulled back into punctured intrarenal arteries and subsequently transported to distant glomeruli.     

脂质体介导的cripto反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞端粒酶活性

目的：探讨cripto反义寡核苷酸（ASODN）对结肠癌细胞端粒酶活性的影响。 方法: 应用脂质体瞬时转染法介导cripto 反义寡核苷酸，处理人结肠癌细胞系后，分别采用实时定量PCR检测cripto mRNA表达，用TRAP检测端粒酶活性，采用软琼脂集落培养试验检测结肠癌细胞的生长。 结果: Cripto ASODN可有效抑制结肠癌细胞集落生长，且与浓度相关。结肠癌细胞经Cripto ASODN转染后，端粒酶活性明显受到抑制，呈作用浓度和时间依赖性。并与ASODN的浓度和处理时间有关。 结论: cripto基因可能参与对结肠癌细胞端粒酶活性的调控。