乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR检测及临床应用

目的:了解乙型肝炎病毒基因分型、分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系.方法:采集69例乙肝患者血样,采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒基因分型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和HBV DNA含量.结果:69例乙肝患者中B型26例,C型43例.B型和C型患者的ALT水平分别为(453.54±447.93)U/L和(330.23±306.90)U/L(P＞0.05);HBeAg阳性数分别为11例和23例(P＞0.05);HBV DNA含量分别为(38.74±36.49)×104拷贝/ml和(34.53±34.09)×104拷贝/ml(P＞0.05);不同临床类型乙肝患者中两种基因型的分布没有显著差异(P＞0.05).结论:本地区乙肝患者病毒基因型主要为B型和C型;二种基因型ALT水平、HBeAg表达水平、病毒复制水平以及肝炎病情均无显著性差异.     

乙型肝炎病毒基因分型及临床应用

目的:了解常州金坛地区乙型肝炎病毒基因分布特征,探讨基因型与肝功能损害、病毒复制水平的关系。方法:采用巢式聚合酶链反应(nest PCR),扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较。结果:对该地区122例不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,B型40例(占32.9%),C型82例(占67.1%),未发现B、C以外其他基因型;谷丙转氨酶(ALT)水平分别为(366.8±322.5)U/L和(354.3±315.2)U/L(t=0.339,P>0.05);HBV DNA含量(对数值)分别为(7.69±1.15)和(7.58±1.16)拷贝/m l(t=0.141,P>0.05);HBeAg阳性数分别为28/40和50/82(2χ=0.162,P>0.05);96例慢性乙型肝炎中B型为34例、C型为62例,18例肝硬化和肝癌患者检出B型3例、C型15例,二组比较2χ=7.72,P<0.01。结论:本地区HBV DNA基因型为B型和C型;二种基因型ALT水平、病毒复制水平和HBeAg表达水平均无显著性差异;C基因型与肝硬化和肝癌关系密切。     

乙型肝炎病毒基因分型及临床应用研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨其基因型与肝功能损伤、病毒复制水平及对拉米夫定疗效的关系. 方法采用巢式聚合酶链反应 (nest-PCR), 扩增乙型肝炎病毒S基因区, 用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序, 测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较. 结果对该地区146份不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,B型51份 (34.9%),C型95份(65.1%),未发现B、C以外其他基因型;丙氨酸转氨酶(ALT)水平分别为383.8±335.7IU和364.3±333.7 IU,(t=0.335,P>0.05)、HBV DNA含量分别为107.795±1.22和107.69±1.19拷贝/毫升(t=0.138,P>0.05)、HBeAg 阳性数分别为36/51和64/95,(χ2=0.159,P>0.05);104例慢性乙型肝炎中B型为43例、C型为61例,28例肝硬化和肝癌患者检出B型4例、C型24例,二组比较χ2=7.65,P<0.01;23例B基因型患者和45例C基因型患者接受48周以上拉米夫定治疗,48周后反跳者B型为18例,C型为14例,χ2=13.49,P<0.001.结论本地区HBV DNA基因型为B型和C型;二种基因型丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平和HBeAg表达水平差异均无显著性;C基因型与肝硬化和肝癌关系密切;拉米夫定对C基因型患者的疗效强于B型.     

HBV基因分型与病毒载量及血清标志物关系的探讨

目的探讨HBV基因型与HBV-DNA水平及血清标志物的相关性。方法选择125例乙肝患者血清HBV-DNA复制阳性的标本分别检测HBV病毒基因分型、HBV-DNA、乙肝血清标志物、谷丙转氨酶（ALT）和总胆红素（TBL）。结果 125例HBV-DNA复制阳性标本中HBV基因分型以B型为主占71.2%（89/125）,C型占24.0%（30/125）,BC混合型占2.4%（3/125）,非B非C型占2.4%（3/125）;B基因型患者血清ALT（297.3±193.6）U/L和TBL（105.1±59.7）mol/L水平高于C基因型患者ALT（158.1±107.5）U/L和TBL（53.1±22.7）mol/L,P〈0.01;B基因型患者血清抗-HBe阳性率91.0%（81/89）显著高于C基因型的23.3%（7/30）,P〈0.01;B型HBV-DNA水平（5.87±1.72）log10copies/mL与C型（6.01±1.91）log10copies/mL无差异（P〉0.05）。结论本地区HBV病毒基因型以B型为主,C型次之,B基因型对肝脏损害较C基因型重,并与HBV载量及HBeAg系统具有相关性,B基因型易发生YMDD突变。     

乙型肝炎病毒基因型不同的患者肝功能相关指标及免疫功能变化分析

目的 探讨基因型不同的乙肝患者肝功能、病毒载量和免疫功能的差异及临床意义.方法 145例乙肝患者划分两个年龄段:小于35岁和大于35岁,全部应用实时荧光PCR法进行乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测;同时采用实时荧光PCR法检测血清HBV-DNA载量;用全自动生化分析仪和流式细胞仪检测各组肝功能相关指标及淋巴细胞亚群含量.结果 145例HBV患者仅为两种基因型,B基因型62例(42.76％),C基因型83例(57.24％).B型患者谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和HBV-DNA均稍高于C型,分别是[(263.6±36.13) U/L比(243.1±37.69) U/L]、[(128.1±15.84) U/L比(123.6±19.1)U/L]和[(6.131±0.2133)比(5.875±0.1725)],进行统计学分析后差异均无统计学意义(P＞0.05),但划分年龄段后,大于35岁的患者,B型ALT、AST和HBV-DNA均显著高于C型(P＜0.05),分别是[(227.6±34.52) U/L比(144.8±19.92) U/L]、[(124.5±19.4) U/L比(79.79±12)U/L]和[(6.166±0.2582)比(5.228±0.2644)].淋巴细胞亚群分析可见,所有年龄段或大于35岁患者均是B型的CD4+T细胞比例显著低于C型[(32.97±0.95)％比(35.81±0.85)％](P＜0.05),CD8+T细胞显著高于C型[(30.19 ±0.97)％比(27.44±0.92)％](P＜0.05),而CD3+T细胞、B细胞、NK细胞在B型和C型患者中则差异无统计学意义(P＞0.05).结论 145例HBV患者B、C型的分布未见显著差异;肝功能、病毒载量及T细胞亚群在年龄较大的B、C两组患者中存在显著差异.     

乙型肝炎肝硬化患者病毒基因型与特异性、非特异性CTL的关系和意义

目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者不同HBV基因型与外周血HBV特异性、非特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的关系和意义.方法 91例乙型肝炎肝硬化患者作HBV基因型检测,比较B、C基因型感染者之间HBV特异性、非特异性CTL的差别,并探讨其临床意义.结果 91例乙型肝炎肝硬化患者中,C基因型55例（60.44%）,B基因型35例（38.46%）,B、C混合型1例（1.1%）,C基因型人白细胞抗原（HLA）-A2阳性27例（49.09%）,HBV特异性CTL（0.18%±0.03%）,B基因型HLA-A2阳性18例（51.43%）,HBV特异性CTL（0.38%±0.04%）,高于C基因型,t=5.01,P＜0.01,非特异性CTL：C基因型（11.87%±1.50%）,B基因型（11.90%±1.51%）,t=0.14,P＞0.05.HBV DNA水平：C基因型[（6.01 ±0.81）log10拷贝/ml],高于B基因型[（5.01 ±0.54）log10拷贝/ml],t=5.01,P＜0.01,丙氨酸转氨酶（ALT）：C基因型（251.13 ±131.11）U/L,高于B基因型（121.25±63.21）U/L,t=3.61,P＜0.01,血清总胆红素（TBil 45.61 ±15.11）μmoL/L,高于B基因型（28.11 ±6.25）μmol/L,t=3.05,P＜0.01.结论 与乙型肝炎肝硬化B基因型感染者相比,C基因型感染者的HBV特异性CTL较低,导致HBV DNA水平较高,肝功能损害较重.     

在慢性乙肝儿童中HBV基因型分布特性及与临床特征关系的研究

目的 探讨在慢性乙肝儿童中HBV基因型分布特性及与临床特征的关系.方法 采用HBV引物特异性基因分型原理,建立巢式PCR方法 对404例儿童慢性乙型肝炎患儿的血清HBVDNA基因进行分型.结果 在儿童慢性乙肝中HBVDNA基因型主要为8型(24.5%)和c型(70.5%),其中南方儿童的8型感染率(38.7%)明显高于北方(21.3%,P=0.002)儿童,北方儿童以C型(73.3%)感染为主.B/C型的感染无性别、年龄和母婴传播途径差异.儿童慢性HBV感染者B、c不同的基因型,肝功受损程度(P=0.4796)、血清HBeA9阳性率、HBV DNA病毒载量及肝脏炎症(P=0.209)、纤维化程度(P=0.177)差异均无统计学意义.结论 HBVDNA基因型分布在儿童虽然存在南北方地域的差异,但无母婴传播、病毒复制和肝脏损伤等方面的差异.     

类风湿关节炎患者血清中IL-17 表达及IL-17F 基因位点rs763780 多态性分析

目的:了解类风湿关节炎(RA)患者血清中IL-17、类风湿因子(RF)及C反应蛋白(CRP)的表达,并探讨IL-17F基因位点rs763780多态性与RA发病易感相关性。方法:收集2016年1月～2018年10月来深圳市福田区风湿病专科医院就诊的RA患者176例为研究组,并选取同期来院体检的健康人群110名为对照组,分别检测血清中IL-17、RF及CRP含量,并采用聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对IL-17F基因位点rs763780多态性进行分析。结果:RA组血清中IL-17、RF及CRP含量分别为(36.73±11.06)pg/ml,(58.05±14.92)U/ml和(32.15±13.96)mg/L,明显高于对照组的(14.52±6.35)pg/ml,(10.24±5.32)U/ml和(6.81±3.25)mg/L,差异均有统计学意义(t=3.035 7～5.320 6,P0.05);RA组CC基因型和C等位基因检出率分别为19.32%和41.48%,明显高于对照组的6.36%和26.82%,差异有统计学意义(χ~2=3.916 5～5.054 7,P0.05);RA组IL-17F基因位点rs763780 CC基因型中的IL-17水平为(42.96±13.64)pg/ml,明显高于其他基因型,差异有统计学意义(P0.05),而三种基因型血清中RF和CRP水平之间差异均无统计学意义(P0.05)。结论:RA患者血清中IL-17,RF及CRP水平明显高于健康人群,同时RA患者IL-17F基因位点rs763780 CC基因型及C等位基因检测率明显高于健康人群,可能是导致本地区RA发病的危险遗传易感基因之一。     

乙型肝炎病毒基因型与国产阿德福韦酯片疗效相关性的研究

目的 探讨我国患者HBV基因B和C型与国产阿德福韦酯片(ADV)疗效间的关系.方法 采用随机、有限双盲、安慰剂(PLB)对照、多中心临床研究方法.筛选合格的HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者按照2:1的比例,随机分为试验组(ADV+ADV组:ADV 10 mg/d,治疗48周,疗程48周,共145例)、对照组(PLB+ADV组:PLB 10 mg/d,24周后改用ADV 10 mg/d,治疗24周,共71例).用PCR-RFLP(PCR-限制性片段长度多态性)的方法检测患者血清中乙肝病毒基因型.结果 HBV基因型主要为C型,占66.7%,B型占25.2%.B型多见于广州患者,较C型患者明显年轻(26.98岁 vs 31.71岁,P=0.001),既往接受抗病毒治疗的明显较少.感染B基因型患者48周血清中HBV DNA与基线相比平均下降(-3.86±1.44)log10拷贝/ml(ADV+ADV组)和(-3.63±2.10)log10拷贝/ml(PLB+ADV组),与C基因型患者的(-3.87±1.24)log10拷贝/ml(ADV+ADV组)和(-3.41±1.82)log10拷贝/ml(PLB+ADV组)相比,无明显差别,P＞0.05.B和C基因型患者的血清学应答(HBeAg阴转率和HBeAg/HBeAb血清转换率)间也无统计学意义.结论 感染乙肝病毒B基因型和C基因型的HBeAg阳性慢性乙肝患者,应用国产阿德福韦酯片10 mg/d治疗均可取得显著的抗乙肝病毒复制作用,疗效在不同基因型间差异无统计学意义.     

2型糖尿病视网膜病变患者血清中VitD水平及VDR基因rs2228570F/f位点多态性分析

目的了解深圳地区2型糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中25羟基维生素D3[25-(OH)VD3]水平表达情况,并探讨VitD受体(VDR)基因rs2228570F/f位点多态性与DR发病的易感性。方法选择2016年3月～2018年11月来深圳市眼科医院就诊并确诊为2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)患者216例,其中单纯2型糖尿病83例为T2DM组、非增殖性视网膜病变71例为NPDR组及增殖性视网膜病变62例为PDR组,同时选取健康人群120例为对照组,采用化学发光法检测血清中25-(OH)VD3水平,同时采用PCR-RFLP法对VDR基因rs2228570F/f位点多态性进行分析,并对结果进行统计分析。结果 NPDR组和PDR组患者血清中25-(OH)VD3水平分别为25.28±7.31nmol/L和的22.95±6.22nmol/L,差异无统计学意义(t=1.0652,P0.05),但明显低于T2DM组患者的37.15±10.87nmol/L和对照组的54.09±13.72nmol/L,差异均有统计学意义(t=3.7185～7.3724,P0.05);PDR组患者ff基因型及f等位基因频率分别为72.58%和83.06%,略高于NPDR组的70.42%和81.69%,差异无统计学意义(χ~2=0.7165～1.1044,P0.05),但明显高于T2DM组的49.40%和67.47%,差异有统计学意义(χ~2=9.8063～10.7251,P0.05),而T2DM组与对照组之间差异无统计学意义(χ~2=1.2029～1.4245,P0.05);VDR基因rs2228570位点ff基因型DR患者血清中25-(OH)VD3水平为17.25±5.06nmol/L,明显低于Ff和FF基因型的23.98±5.82nmol/L和27.66±7.87nmol/L,差异有统计学意义(t=2.5032～3.0217,P0.05);FF,Ff及ff基因型的DR发病率分别为42.86%,49.15%及69.86%,ff基因型的DR发病率明显高于FF和Ff基因型,差异有统计学意义(χ~2=7.6256～9.8542,P0.05),而FF和Ff基因型的DR发病率之间差异无统计学意义(χ~2=1.1084～1.3927,P0.05)。结论深圳地区DR患者血清中25-(OH)VD3水平缺乏严重,而VDR基因rs2228570位点ff基因型及f等位基因频率明显升高,且ff基因型的DR患者血清中25-(OH)VD3水平缺乏更为严重,DR发病率更高。因此,VDR基因rs2228570位点多态性突变可能与深圳地区DR发病有一定的相关性。     

High prevalence of dual or triple infection of hepatitis B, C, and delta viruses among patients with chronic liver disease in Mongolia

Mongolia is known for its high endemicity for hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus (HCV), and hepatitis delta virus (HDV) infections among apparently healthy individuals. However, there are little or no data on the prevalence and genotype distribution of HBV, HCV, and HDV among patients with chronic liver disease in Mongolia. Therefore, serum samples obtained in 2004 from 207 patients (age, mean+/-standard deviation, 51.0+/-11.9 years) including those with chronic hepatitis (n=90), liver cirrhosis (n=41), and hepatocellular carcinoma (n=76) were tested for serological and molecular markers of HBV, HCV, and HDV infections. Of the 207 patients, 144 (69.6%), 106 (51.2%), and 117 (56.5%) tested positive for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and/or HBV DNA, HCV RNA, and HDV RNA, respectively. Collectively, 172 patients (83.1%) were viremic for one or more of these viruses, including dual viremia of HBV/HDV (26.6%) or HBV/HCV (7.7%) and triple HBV/HCV/HDV viremia (30.0%). Of note, triple ongoing infection was significantly more frequent among patients with hepatocellular carcinoma than among those with chronic hepatitis (63.2% vs. 14.4%, P<0.0001). One hundred sixty patients (77.3%) had a history of blood transfusion and/or surgery. The distribution of HBV genotypes among the 116 HBV-viremic patients was: A (0.9%), B (0.9%), C (6.0%), D (88.8%), and C plus D (3.4%). All 117 HDV isolates were classified into genotype I. The 106 HCV RNA-positive samples were typed as genotype 1b (92.5%), 2a (0.9%), or 1b plus 2a (6.6%); mixed infection of two distinct HCV genotypes was found exclusively in the patients with hepatocellular carcinoma.     

双环醇片对乙型肝炎病毒B、C基因型感染的疗效比较

目的比较双环醇片对乙型肝炎病毒B、C基因型感染的疗效。方法选择乙型肝炎病毒B基因型感染者26例、C基因型感染者44例，同时给予双环醇片口服，50mg／次，每日3次，疗程24周。观察受试者的临床症状、体征变化，并于治疗前、治疗期间（第12周）及治疗结束时（第24周），分别检测血常规、肝功能、乙肝三系和血清HBVDNA水平。结果双环醇片能明显改善B、C基因型乙型肝炎病毒感染者的临床症状和肝功能，并有一定的抑制病毒作用，两组患者治疗24周时的血清HBVDNA阴转率分别为19．2％和15．9％，差异无统计学意义。结论双环醇片不仅能保护慢性乙型肝炎患者的肝功能，同时能抑制乙型肝炎病毒复制，对B、C基因型乙型肝炎病毒感染者的疗效相近。     

乙型肝炎肝硬化患者病毒基因型与滤泡辅助性T淋巴细胞及白细胞介素-21的关系和意义

目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者不同HBV基因型与外周血滤泡辅助性T淋巴细胞（Tfh）及白细胞介素-21 （IL-21）的关系和意义.方法 59例人白细胞抗原（HLA）-A2阳性的乙型肝炎肝硬化患者作HBV基因型检测,比较B、C基因型感染者之间Tfh、IL-21的差别,并探讨其意义.结果 59例乙型肝炎肝硬化患者中,C基因型36例（61.02％）,B基因型22例（37.29％）,B、C混合型1例（1.69％）,C基因型外周血Tfh水平（2.89％±1.44％）,低于B基因型（4.65％±1.37％）,t=3.01,P＜0.01,IL-21水平（14.62±2.12 ng/L）,低于B基因型（32.27±11.25 ng/L）,=4.12,P＜0.01,HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）水平（0.17％±0.02％）,低于B基因型（0.37％±0.03％）,t=3.12,P＜0.01,HBV DNA水平（6.95±0.75log10拷贝/ml）,高于B基因型（5.02 ±0.36log10拷贝/ml）,=3.03,P＜0.01.结论 与乙型肝炎肝硬化B基因型感染者相比,C基因型感染者的外周血Tfh水平较低,引起IL-21和HBV特异性CTL水平降低,导致HBV DNA水平较高.     

Serologically silent hepatitis B virus coinfection in patients with hepatitis C virus-associated chronic liver disease: clinical and virological significance.

Frequent coinfection of surface antigen-negative hepatitis B virus (silent HBV) in hepatitis C virus (HCV)-associated chronic liver disease (CLD) has been reported. The clinical and virological significance of silent HBV infection was investigated in 65 patients with HCV-associated CLD who subsequently received interferon (IFN) therapy. HBV DNA was detected in 34 (52.3%) patients by a nested polymerase chain reaction (PCR). Virologically, all of the 34 patients were found to have HBV with an eight-nucleotide deletion in the core promoter. Coinfection of silent HBV was more frequent with HCV genotype 1b than in 2a (64.3% vs. 28.6%, P<.01). With HCV genotype 1b, the serum RNA level was significantly higher (> or =10(6) copies per milliliter vs. < or =10(5) copies per milliliter) in patients with silent HBV than those without coinfection (P<.01). Clinically, silent HBV was associated with a higher level of serum alanine aminotransferase (158.5+/-104.8 vs. 121.8+/-78.6 IU/I; mean +/- SD) and a greater histological activity of hepatitis as evaluated by histological activity index score (9.4+/-3.8 vs. 8.6+/-4.5; mean +/- SD), although it was not statistically significant. Silent HBV was also associated with poor efficacy of IFN therapy (P<.01). The results suggest that silent HBV has some promoting effect for HCV replication, at least for HCV genotype 1b, and may affect the histological activity of hepatitis and IFN response in HCV-associated CLD.