人血清B2—mG BAS—时间分辨免疫荧光分析法的建立

本文报告将BAS引入时间分辨免疫荧光测量法(TRIFMA),成功地在国内首次建立人血清B_2-mG固相夹心BAS—TRIFMA。本法批内平均CV8.0%,批间平均CV11.7%,最小检出值为0.6μg/ml,平均回收率为101.2%,42例血清样品分别用TRIFMA和RLA测量B_2-mG水平,相关性良好,γ=0.9614,P<0.001。研究结果表明:采用戊二醛活化微量滴定条,多次包被抗体,每次中间用戊二醛固定,提高了IgG包被含量,使本方法的检测剂量范围可达1.25～40μg/mL,超过任何一种标记免疫分析法的最大检出值。     

β2mG McAb RIA法研究EPO对CRF患者肾功能的影响

β2微球蛋白(β2mG)已作为检测肾脏功能的灵敏指标应用于临床。重组人红细胞生长素(rHuEPO)是治疗慢性肾功能衰竭(CRF)的药物。本文采用β2mG-McAb宽检测范围(0.31～10μg/ml)的RIA,观察15例CRF患者用rHuEPO治疗后,对贫血和肾功能的影响。结果表明:治疗后,患者Hb明显升高(P<0.01),但血清β2mG与治疗前(25.52±1.76μg/ml)无明显差异。提示rHuEPO对于肾脏功能没有改善和恶化作用,而有改善贫血的效果。     

层粘连蛋白时间分辨免疫分析方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立高灵敏的层粘连蛋白(LN)的快速的全自动检测方法.以羊抗鼠IgG抗体包被板,采用抗人LN单克隆抗体(McAb)、Eu3 标记人LN和以β-二酮体为主的增强液建立竞争LN-TRFIA,数据采用双对数函数处理程序处理.结果表明LN的标记率为11.5 Eu3 /LN,方法的批内和批间CV分别为3.9%和6.7%,平均回收率为91.2%,灵敏度为5μg/L,可测范围为5～1000μg/L,ED20、ED50和ED80分别为723.1μg/L、183.4μg/L和56.95μg/L.临床结果与RIA结果相符.本文建立的LN-TRFIA灵敏、稳定,可全自动操作,有很好的应用前景.     

β_2-m单克隆抗体放射免疫试验的建立

本文首次采用β_2-m单克隆抗体,建立了竞争性、宽范围的放射免疫测定法。本方法最小检出值0.27μg/管,批内变异系数为4.47～7.89%,批间变异系数为9.07～15%,回收率为95—105%。测定43例体检血清标本,同市售商品药盒多克隆抗体放免法相比较,两者之间有极显著正相关(p<0.001)。实验结果表明:β_2-m单克隆抗体完全可以替代多克隆抗体,且本法检测范围较宽(0.31～10μg/ml),缩小了样品稀释倍数,使检测方法更简便。     

抗原捕获ELISA检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒的方法建立

目的 建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的抗原捕获ELISA方法,初步探讨其临床应用的可行性. 方法 以纯化的抗gpK8.1单克隆抗体(McAb)和多克隆抗体(PcAb)配对作为包被抗体和检测抗体,建立和优化抗原捕获ELISA检测方法,评价其敏感性、特异性和重复性,并初步用于3例已知KSHV阳性血清和257例临床血清样品中抗原的检测. 结果 包被的McAb浓度为5μg/ml、检测抗体浓度为1.6 μg/ml时,P/N值最高,检测的敏感度为31.28 ng/ml,且与EB病毒(ESV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)等抗原无交叉反应,特异性高.检测3例KSHV阳性患者血清均为阳性,在257例临床血清样品中,4例捕获到KSHV抗原. 结论 建立了检测KSHV的抗原捕获ELISA方法,为可能的KSHV检测试剂研制提供重要实验依据.     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

血清TPS、NSE、CEA、β2MG水平与小细胞肺癌生物学关系的探讨

目的:探讨血清组织多肽特异性抗原(TPS)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)和β2微球蛋白(β2-mG)水平与小细胞肺癌(SCLC)生物学行为的关系及其对肺癌的诊断价值。方法:采用ELISA和免疫放射分析法(IRMA)测定94例小细胞肺癌患者,86例肺良性疾病患者和89例正常对照组4项标志物的水平。结果:小细胞肺癌组血清TPS、NSE水平[(437.8±516.6)U/L、(76.8±91.4)μg/L]不但高于肺良性疾病组[(143.6±78.7)U/L、(13.3±10.8)μg/L]和正常对照组[(98.4±58.9)U/L、(10.1±5.7)μg/L)],P<0.01。CEA和β2-mG水平测定中,SCLC组亦高于良性疾病组和正常对照组(P<0.01),则以TPS、NSE水平为指标诊断SCLC的敏感性、特异性及准确性分别为84.4%、87.8%、83.6%和79.3%、93.7%、88.3%,高于CEA和β2-mG。此外,发生转移的SCLC血清中TPS、NSE水平高于未转移组,转移灶数目越多,则TPS、NSE水平越高。每天吸烟30～40支可达10～24倍,吸烟量与肺癌之间存在着量效关系。结论:血清TPS、NSE、CEA和β2-mG对于小细胞肺癌的早斯诊断有一定的价值,4项联合检测则有明显的互补性,其水平与肺癌转移密切相关。     

RIA诊断妇科恶性肿瘤的临床价值

近几年虽已有应用RIA诊断妇科恶性肿瘤的报告,但应用多种肿瘤标志检测作对比性探讨尚不多,为此我们选用SF、CEA、CA-50、β_2-m等四种肿瘤标志进行检测,探讨RIA对妇科恶性肿瘤诊断的临床价值。病例和方法一、病例:共检测319例,其中恶性274例,良性45例,疾病按组织学分类(表1)。二、方法:所有病例取同一血清标本作SF、CA-50、CEA、β_2-m检测。 (一)CA-50(IRMA):由中国医学科院肿瘤研究所提供,以≥20U/ml为阳性。 (二)SF(RIA双抗法):由上海试剂研究所提供,≥160ng/ml为阳性。 (三)CEA(RIA双抗法):由上海生物制品研究所提供,≥20ng/ml为阳性。 (四)β_2-m(RIA双抗法):由北京北方免疫试剂研究所提供,≥4μg/ml为阳性。 (五)仪器:采用北京261厂生产的FT-613自动计算~(125)I放免测量仪。     

抗利尿激素单克隆抗体的制备及初步应用

作者应用B淋巴细胞杂交瘤技术,成功地建立了分泌抗抗利尿激素(ADH)的McAb细胞株,所获的3株细胞分泌的McAb分别为IgG1,IgG2a,IgG2b。其诱生腹水滴度可达1×10~(-5)～5×10~(-5),灵敏度为2.5ng/ml。抗体亲和力K值在(3～4)×10~(-9)L/M之间,受温度影响明显。McAb与11种神经肽进行竞争抑制试验,均无交叉反应。静脉注射McAb可使新西兰兔尿量明显增加。用免疫组化的方法对大鼠下丘脑神经细胞进     

Iodogen法碘标记McAb技术探讨

我们用Iodogen法标记McAb,体会到要想获得满意的标记效果,应控制好投料、pH、掌握反应时间及贮存时间几个环节。 材料和方法 一、材料: (一)Iodogen:化学名称为1,3,4,6—四氯,3α6α-二苯甘脲,分子量430,美国piere化学公司产品。用二氯甲烷(Sigma公司)溶解,分别配成50μl含3μg,5μg,10μg,25μg,50μg及100μg的浓度,取50μl涂布于2ml玻璃小瓶底部,用氮气轻轻吹干,当即盖上胶盖、封口,-20℃冻存备用。 (二)McAb BAC5:取液氮中冻存的杂交瘤细胞BAC5,复苏后培养至对数生长期,注射3.5×10~5个细胞/0.5ml至6～8周龄的BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天后收集腹水。纯化腹水得纯度为93％的抗低分化鼻咽癌单抗BAC5,属IgG2a亚类,亲和力常数(Ka)值为8×10~9L·M~(-1),分子量149KD。 (二)无载体Na~(125)J,中国北京原子能中、研究院提。     

国产氨苄西林.舒巴坦复方制剂的抗菌活性及其对β-内酰胺酶的稳定性

通过对药物MIC_(50)的观察,比较国产氨舒钠(ASN)和进口优立新(ULX)制剂(均由氨苄西林(Amp)与舒巴坦(SBT)以2:1比例组成)的体外抗菌活性,并检测舒巴坦对β-内酰胺酶的抑制作用。结果发现:ASN和ULX对6种革兰阳性菌的平均MIC_(50)为87～12.7μg/ml,而单用Amp或SBT的MIC_(50)为8.7～12.7μg/ml,而单用Amp或SBT的MIC_(50)则分别为41.6μg/ml和106.7μg/ml;对9种革兰阴性菌的平均     

儿童原发性单纯性肾病综合征患者白细胞介素4及IgE水平的相关性

本文报道应用抗人 IL-4McAb 及 PcAb 建立了双抗体夹心检测人 IL-4ELISA 法.对20例原发性单纯性肾病综合征患者、16例相应年龄组健康儿童及6例非肾病综合征患儿进行了 IL-2,IL-4 及 IgE水平的测定,并分析了 IL-4及 IgE 的相关性.结果表明,健康儿童 IgE 水平为50-100U/ml,IL-4水平为400-500pg/ml;肾病综合征患儿 IgE 水平为300->1000U/ml,IL-4水平为1080-4000Pg/ml.患儿 IgE 水平的升高与 IL-4水平的升高呈正相关,R 值为0.691.     

巨噬细胞泡沫化对炎症反应的影响

目的:观察巨噬细胞泡沫化对促炎因子水平的影响。方法:取6-8周龄C57BL/6J雄性小鼠骨髓细胞,采用L929培养分化成巨噬细胞。在巨噬细胞悬液中加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),分为空白对照组(0μg/ml)、10μg/ml组和25μg/ml组,再培养24h后观察各组细胞泡沫化程度,检测分析各组泡沫细胞中促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达水平。结果:所取骨髓细胞被成功分化为巨噬细胞。不同浓度ox-LDL均能诱导巨噬细胞的泡沫化,25μg/ml组巨噬细胞泡沫化程度高于10μg/ml组(P0.01)。与空白对照组相比,25μg/ml组的IL-1β和TNF-αmRNA表达水平均显著降低(P0.05)。结论:巨噬细胞泡沫化可以抑制炎症反应。     

胞外高迁移率组蛋白1对HTLV-1感染的T细胞中病毒复制的影响

目的 探讨胞外的高迁移率组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)对人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T-cell leuk HTLV-1)感染的T细胞中病毒复制的影响.方法 ELISA检测HTLV-1病毒阴性T细胞系Jurkat、MOLT4细胞及HTLV-1病毒阳性的T细胞系MT2、MT4细胞培养上清中的HMGB1水平;将HTLV-1的长末端重复序列荧光素酶报告基因pHTLV-1-LTR-luc转染病毒阳性细胞MT2,随后加入终浓度为0.25、0.50、0.75 μg/ml的HMGB1多克隆抗体(PcAb)及其同型对照抗体,30、100、300 ng/ml的重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及其对照PBS,48 h后检测荧光素酶活性;在病毒阳性细胞MT2中加入终浓度为0.25μg/ml的HMGB1 PcAb及同型对照抗体,300ng/ml的rhHMGB1及对照PBS,real-time PCR检测病毒编码基因tax、pol1、pol2、p19、gag、env.结果 HTLV-1病毒阴性T细胞系和HTLV-1病毒阳性细胞系培养上清中的HMGB1水平无明显差异;0.25μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制HTLV-1-LTR的转录活性,而300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进HTLV-1-LTR的转录活性;real-time PCR检测显示0.25 μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制病毒编码基因pol1、pol2、gag、env的表达,300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进pol1、pol2、gag、env的表达.结论 胞外的HMGB1可促进HTLV-1病毒感染T细胞的病毒复制.     

血清及胆汁SIgA夹心EIA测定法

本SIgA夹心酶免疫(EIA)定量分析法是以抗人分泌成分(SC)抗体包被固相载体、辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgA抗体的Fab′片断作为酶标抗体。本方法灵敏度达O.625ng/孔,特异性强,批内变异系数和批间变异系数分别为5.8～9.3％和6.2～9.2％,回收率为99.6～108.7％,与相应的RIA法高度相关(r=0.961),标本用量甚微,2～4μl血清就可测定。用本方法测定117例正常成人血清,SIgA正常值为2.98～18.15μg/ml(8.04±3.60μg/mld);16份“T”管胆汁标本测定结果为40.8±25.0μg/ml。     

铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

用夹心法建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),测定血清FER的含量。以FER单克隆抗体(McAb)806#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记FERMcAb 803#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用双对数函数数据处理程序,方法的批内和批间CV分别为2．2％和3．7％,平均回收率为118％,灵敏度为0．5μg／L,可测范围为0．5-1000μg／L。ED20、ED50和ED80分别为27．8μg／L、88．5μg／L和247μg／L。Eu^3 FER McAb于-30℃保存至少4个月,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续分析4个月结果稳定。本法与PE公司的FER-TRFIA试剂盒所得样品的测定值的相关系数为0．98。本文建立的FER-TRFIA法,是一种适用于人群贫血普查和各种肝脏疾病及肿瘤的联合诊断的良好方法,分析范围、灵敏度和稳定性均较理想,值得推广应用。     

信号分子IRAK1/4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨IRAK1和IRAK4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性;Western blot检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达IRAK1、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)、IRAK4情况;观察IRAK1/4抑制物是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1表达TF。结果:Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF显著增加(P<0.05 vs control);Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达IRAK1、p-IRAK1、IRAK4(蛋白)显著升高(P<0.05 vscontrol);IRAK1/4抑制物(50μmol/L)能够阻断antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1表达TF及IRAK1磷酸化的效应。结论:antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,信号分子IRAK1/4被激活进而发挥重要作用。     

免疫酶斑点试验检测AFP的初步报告

本文以硝酸纤维素膜(Nitrocellulose paper,NCP)作载体首次建立了检测AFP的免疫酶斑点试验(Immnue Enzyme Dot Assay,IEDA),其原理与ELISA夹心法基本相同。我们首先以AFP标准品作试验,进行方法学探索,选出最佳包被抗体浓度为100μg/ml,酶抗体稀释度为1:2000,同时发现包被过程中的封闭处理能减少非特异性反应,叠氮钠终止反应能确保显色结果稳定。试验证明,此方法特异性强,重复性好,灵敏度达1.25μg/ml。本法检测17例患者血清,其AFP含量与RIA结果相吻合。     

高血压病肾功能受损患者血,尿β2—mRIA的临床评价

本文对150例原发性高血压患者行血、尿β_2-m测定,并与临床检验尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)作对比分析。 资料和方法 将我院临床确诊的原发性高血压患者150例(男72,女78),(Ⅰ期21例,Ⅱ期93例,Ⅲ期36例),年龄28～67岁,平均44岁。 β_2-m RIA kit:由3V公司提供。 β_2-m测定的血清,尿样本按试剂盒要求稀释准备,尿样用0.1NNaOH调pH至6.0～7.50 40例正常对照组血清β_2-m值为2490±801(ng/ml),尿值88±75(ng/ml)。血BUN 6.40±1.92(mmol/L),Cr80.36±26.52(μmol/L)。 结果 结果见表1。 讨论 本文对150例原发性高血压患者血、尿β_2-m RIA与临床常规检验BUN、Cr对比分析,BUN、Cf阳性检出率低,在反映早期肾功能受损上并不敏感,而血,尿β_2-m能早期反映及区别了解肾小球滤过     

塑料试管固相放射免疫法测定甲胎蛋白

本文将甲胎蛋白(AFP)特异的抗体IgG包被在塑料管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析(RIA)法测定AFP。标准曲线范围为10～800ng/ml,最小检出值和正常值均<10ng/ml。批内CV％为7.1％,批间CV％为10.3％。本文与液相RIA法平行测定61扮样品的AFP浓度(10.1～3030ng/ml)。经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关,表明本文建立的方法可以替代液相RIA法测定AFP,并适用于大批样品和自动化检测。