三磷酸腺苷对人胃癌细胞系MGC—803影响的电镜观察

用透射电镜和扫描电镜方法观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３影响，结果表明，ＡＴＰ能使ＭＧＣ－８０３细胞的核仁由网状向环状改变，微丝的组装得改善，细胞表面微绒毛减少。提示ＭＧＣ－８０３细胞的恶性表型ＡＴＰ作用下可向正常方向逆转。     

Caveolin-1对MGC803细胞增殖、分化的影响及其机制

为了研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响，探讨caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性，用Lipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系MGCS03／Cav-1，并将空载体转染MGC803作为对照(MGC803／pcl-neo)。采用免疫细胞化学及western blot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。     

外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌细胞(MGC-803)增殖和细胞骨架的影响

本文报道人胃低分化腺癌细胞(MGC-803)在外源性三磷酸腺苷(ATP)的连续作用下,细胞增殖受到明显的阻抑,4天以后细胞增殖的抑制率达80％以上,细胞内的骨架系统有较明显的改善。微管由中央区的微管组织中心一直伸展到细胞边缘附近,使细胞充分铺展并变扁平,近似于正常上皮细胞的形态。微丝束变粗壮,纵横交错,布满细胞周边的细胞质内。点状的肌动蛋白荧光明显减少。细胞内外的纤维粘连蛋白的荧光反应更加明显。本文并讨论了细胞增殖和细胞骨架系统之间的关系。     

FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响

目的探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用realtime PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达;用质粒(p CMV6-FTO)实现FTO在胃癌细胞系MGC-803中的过表达;通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验,检测FTO对MGC-803细胞功能的影响。结果 FTO mRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P0.05);在MGC-803细胞系中过表达FTO,可抑制胃癌细胞增殖(P0.05)、抑制细胞迁移(P0.05)和侵袭(P0.05)。结论 FTO在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。     

二烯丙基二硫化物对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点激酶Chk1/2的影响

目的： 观察二烯丙基二硫化物（DADS）对人胃癌MGC803细胞的细胞周期检查点激酶1（Chkl）和细胞周期检查点激酶2(Chk2)的影响。方法：RT-PCR检测MGC803细胞的Chk1和Chk2激酶在mRNA水平的改变;Western blotting 检测Chk1、Chk2的表达和Chk1、Chk2的磷酸化程度,免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与细胞分裂周期蛋白25C（Cdc25C）结合情况。结果：RT-PCR检测显示,Chkl和Chk2 mRNA水平在处理组与未处理组之间无明显差异（P>0.05）。Western blotting 检测显示,MGC803细胞分别受30 mg·L-1 DADS刺激1 h和2 h后,与未处理组相比,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变（P>0.05）;但处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性（P<0.01）,而Chk2在处理组与未处理组间磷酸化程度无明显差异（P>0.05）。免疫共沉淀分析表明,MGC803细胞中DADS能促进Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论：DADS可能是通过激活Chk1引起人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞。     

腺苷三磷酸对人横纹肌肉瘤细胞系P21和c-myc蛋白表达的影响

为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ＡＴＰ作用于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系ＲＤＬ６细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ＡＴＰ作用后的ＲＤＬ６细胞核内Ｐ＾２１蛋白表达增强，ｃ－ｍｙｃ蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束－应力纤维组改善，粘着斑内的主要粘附蛋白－纽蛋白（ｖｉｎｃｕｌｉｎ）表达增强，正常小鼠成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞核内Ｐ＾２１蛋白高表达，ｃ－ｍｙｃ蛋白不表达。结果表明：ＲＤＬ６     

人胃癌细胞系BGC—823不同转移能力的细胞克隆间的细胞微丝结构特征研究

用单细胞培养法，从人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３中分离出１０个克隆。通过裸鼠致瘤和转移检测，进一步筛选出具有较高转移性的Ｃ１、Ｃ６和低转移的Ｃ５、Ｃ８等４个细胞株。它们的生长能力虽无明显差异，但超微结构显示Ｃ５和Ｃ８细胞表面微绒毛少，而且长度不一，微丝长而粗，将列规则，组装程度较好；Ｃ１和Ｃ６细胞微绒毛多而密集，长度均一，微丝短而粗，呈点状或玫瑰状小体，组装程度差，此外本研究显示肿瘤细胞内的微丝骨架组     

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的: 研究槲皮素抑制胃癌 MGC-803 细胞淋巴转移的作用.方法: 实验分为对照组和40 μmol/L槲皮素处理组两组.采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对 VEGF-C及其受体 VEGFR-3表达水平的作用.结果: 槲皮素处理 48 h 后 VEGF-C和 VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01).结论: 槲皮素可下调胃癌 MGC-803细胞 VEGF-C、 VEGFR-3的表达.     

新型卟啉类光敏药物介导的PDT对两种胃癌细胞HGC27和MGC803的杀伤效应

目的 观察本实验室自行合成的新型卟啉类光敏药物对2种人胃癌细胞HGC27和MGC803的光动力学治疗(PDT)作用及作用机制.方法 以人胃癌细胞HGC27和MGC803为实验细胞株.实验分为4组:空白对照组(无药物孵育、无光照),单纯光敏药物组(药物孵育、无光照),单纯光照组(无药物孵育、有光照),光敏药物+光照组(药...     

干扰素对人胃癌细胞IAP－2表达的调节

应用基因重组干扰素－ａ和－γ（ＩＦＮ－ａ和－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ＿（７９０１）、ＭＧＣ＿（８０３）和ＭＫＮ＿（４５），ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照组细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ能增加这三株细胞ＩＡＰ－２表达量；而高浓度（＞１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－ａ和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＭＰ－２表达水平检测作为临床应用ＩＦＮｓ治疗癌症患者的疗效判别指标可能具有一定价值。     

外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌SGC-7901细胞的生物学效应

本文报道外源性三磷酸腺苷(ATP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖的抑制效应。在SGC-7901细胞的培养基质内加入ATP后,细胞生长明显受阻抑,4天以后,抑制率可达80％以上;癌细胞质膜上的3′,5′环腺苷酸磷酸二酯酶(cAMP-PDEase)活性明显下降,而细胞内的cAMP和纤维粘连蛋白的免疫荧光强度却明显增强。癌细胞多呈梭形,微绒毛减少,表面较光滑,呈现癌细胞向正常方向逆转的表型特征。本文还就ATP作用的机理进行了讨论。     

体外长期保存人二倍体成纤维细胞系的初步观察

本文报告HSF 79-2二倍体成纤维细胞系,于体外保持较长时期生长增殖的特性,以及其形成组织样结构的初步结果。 HSF79-2细胞系来自17岁女性卵巢癌患者的腹部正常皮肤。原代采用组织块培养法,培养液系McCoy 5 A补加10～25％小牛血清。细胞系以1:2分种率传代、46～54代终止。此系细胞可停止传代,保持原瓶换液而长期生长(观察16个月),并增殖成厚膜。经组织学检查为结缔组织样结构。非传代瓶中保留细胞分别于3,6,12个月后重新传代,细胞的生长特性与二倍体性未变。其总的生存代数与连续传代细胞大致相等。上述特点,可能为二倍体成纤维细胞所共有,可用于保存某些细胞系,为研究细胞的运动、分化提供模型。     

温热合并吐温80对BGC-823人胃癌细胞超微结构和琥珀酸脱氢酶活性的影响

BGC-823人胃癌细胞系经吐温80合并温热(39℃～43℃)作用20～100分钟后,观察即时至96小时细胞超微结构和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的变化,并用正常人胚肺成纤维细胞作为对照。结果显示温热对细胞的作用,主要表现为粗面内质网扩张,线粒体肿胀、嵴减少,脂滴增多,SDH活性下降。43℃作用后,大量线粒体空泡化或髓样变.多聚核糖体减少,核异染色质增多,核仁呈块状或环形,部分细胞崩解坏死。吐温80单独作用与温热相似,与温热合并有明显协同作用,膜结构损害较早并更为严重,与41℃合并作用100分钟,已达到43℃100分钟温热效果,比单独使用温热可降低作用温度2℃左右。提示吐温80通过降低细胞相变温度,而加强温热对肿瘤细胞的杀伤作用。人胚肺成纤维细胞对合并作用反应较轻且易恢复。     

血卟啉衍生物对人胃癌不同周期时相细胞光敏损伤效应的电镜观察

应用细胞同步化和电镜技术,研究了人胃低分化粘液腺癌细胞(MGc80-3)经血卟啉衍生物加红光照射后,其光敏损伤部位与周期时相的关系。结果表明,细胞的超微结构损伤,呈现出明显的周期特异性,其中G_1期细胞的质膜损伤较显著,胞质也有一定损伤;S期和G_2期细胞,以线粒体和其他胞质细胞器损伤最为严重,M期细胞则以胞核损伤显著。本文对上述光敏损伤的机制进行了讨论。     

微管-微丝系统的改变对培养的MGc80-3人胃癌细胞粘液分泌的影响

本工作用PAS反应显示粘液蛋白的方法对细胞内微管微丝变化时人胃腺癌MGc 80-3细胞粘液分泌活动进行了研究。秋水仙酰胺、低温(2～4℃)及细胞松弛素B(CB)处理后,细胞内微管微丝解聚,粘液分泌活动受到抑制,当细胞从低温回置37℃温育,微管重新组装后,粘液分泌又得到恢复。Taxol短时间处理对MGc 80-3细胞粘液分泌有促进作用、但长时间处理后,由于细胞内微管的高度浓集化,从而破坏了细胞内微管网络结构(CMTC),使粘液分泌活动停止,说明人胃腺癌MGc80-3细胞的粘液分泌活动依赖于细胞内CMTC和微丝的存在。毛果芸香碱能直接刺激培养的MGc 80-3细胞的粘液分泌,提示人胃腺癌MGc 80-3细胞膜也可能存在类胆碱能受体。硫杂脯氨酸对人胃腺癌MGc 80-3细胞的增殖具有抑制作用,但对其粘液分泌具有强烈的刺激作用,这种刺激作用可通过加速粘液的排放而实现。毛果芸香碱和硫杂脯氨酸对MGc 80-3细胞粘液分泌的刺激作用也依赖于细胞内微管微丝的存在,一旦微管微丝解聚,其刺激粘液分泌的作用便消失。db-cAMP对MGc 80-3细胞的粘液分泌也有促进作用。CB单独处理或CB与秋水仙酰胺同时处理,都能抑制MGc 80-3细胞的粘液分泌,但CB单独处理后,分泌颗粒多聚集于细胞边缘,而CB与秋水仙酰胺同时处理后,分泌颗粒则散在分布于胞质中,提示在MGc 80-3细胞内微丝对粘液的排放,而微管对分泌颗粒的输送起主要作用。     

蛋白激酶C活性的阻抑对人胃癌细胞BGC－823恶性表型的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型，在佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＰＭＡ）导致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）负效应条件下，探讨了ＰＫＣ活性的阻抑与细胞恶性表型变化的相关性及其可能作用机理。ＰＭＡ（１００μｇ／Ｌ）处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ，细胞质、膜和核中ＰＫＣ活性分别下降３５．６％和７２．３％。经电泳分析，观察到细胞核蛋白质磷酸化水平也明显下降。在ＰＫＣ活性被阻抑的同时，人胃癌细胞形态发生变化，细胞呈单层生长，出现接触抑制，在软琼脂中不能形成集落。表现出部分恶性表型丢失，并且与人胃癌细胞恶化密切相关的癌基因Ｈａ－ｒａｓ基因表达也明显被阻抑。这可能是ＰＫＣ活性被阻抑引起人胃癌细胞部分恶性表型丢失的分子机理之一。     

外源性3′,5′,环腺苷酸对人胃腺癌细胞系的影响

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸(cAMP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制的同时,膜表面环腺苷酸-磷酸二酶(cAMP-PDEase)的活性及Mg~(++)-ATPase活性均明显下降,而细胞内cAMP免疫荧光强度则明显增强,进一步证实了细胞内cAMP水平与细胞的生长、分化,及膜表面ATPase、cAMP-PDEase的活性有密切的关系。     

人类风湿性关节炎滑膜细胞系(RASB)的建立和生物学特性的观察

目的　建立人类风湿性关节炎滑膜细胞永生细胞系。　方法　用重组有HPV16病毒E6 E7基因阅读框架的逆转录病毒载体转染原代培养的人类风湿性关节炎滑膜细胞 ,经G418筛选 ,获取细胞克隆RASB ,并从形态学、生长特性、核型组成、致瘤性和分泌功能等多方面对建系细胞RASB进行生物学观察。　结果　实验和观察证实 ,转化滑膜细胞染色体整合HPV病毒DNA ,表达HPVE6蛋白 ,基本保留了B型滑膜细胞特征形态、细胞骨架和分泌功能 ,倍增时间缩短一半 ,对裸鼠无致瘤性 ,软琼脂培养形成细小集落。已稳定传代大于 10 0代。　结论　建立了能长期体外稳定传代的人类风湿性关节炎滑膜细胞系。此细胞系的建立将为类风湿关节炎致病机理的研究和治疗提供极有意义的体外细胞模型。