皮肤鳞状细胞癌组织微 RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白 11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微 RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白 11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取 2017年 1月至 2019年 6月宝鸡市人民医院诊治的 98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测组织中 miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测 CDH11表达水平。 TargetScanHuman网站预测 miR-103a-2-5p与 CDH11的靶向关系; Pearson相关性分析癌组织中 miR-103a-2-5p和 CDH11水平的关系; Kaplan-Meier生存曲线分析 miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用 Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析 miR-103a-2-5p和 CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织［1.03±0.12,(5.06±1.43)μg/L］相比,皮肤鳞状细胞癌组织 miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平［(2.96±0.62)μg/L］明显降低(P<0.05); TargetScanHuman网址预测 miR-103a-2-5p与 CDH11间存在结合位点;经 Pearson相关性分析, miR-103a-2-5p与 CDH11水平呈负相关( P<0.05);两者均与病人病理分级、 TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05); miR-103a-2-5p高表达组和 CDH11低表达组复发率显著高于 miR-103a-2-5p低表达组和 CDH11高表达组(P<0.05); TNM分期、淋巴结转移、 miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05)CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05); miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的 ROC曲线下面积(AUC)0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人 miR-103a-2-5p表达水平升高, 为,     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

微 RNA-106b-5p通过靶向 α-烯醇化酶调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、炎症的研究

目的观察微 RNA-106b-5p、α-烯醇化酶( ENO1)对类风湿关节炎( RA)滑膜成纤维细胞( MH7A)增殖、炎症的影响，并探究二者之间的联系。方法 2018年 1月至 2021年 12月长安医院接诊手术的 8例 RA病人获得了滑膜组织， 4例意外事故引起关节损伤的无 RA、骨关节炎史健康病人作为对照。运用 RT-qPCR实验检测 RA滑膜、正常滑膜及对照组(正常 MH7A)、白细胞介素( IL)-1β组细胞( 10 μg/L IL-1β处理)中 miR-106b-5p、ENO1的表达；脂质体法将 mimic-NC组(转染 mimic)、 miR-106b-5p mimic组(转染 miR-106b-5p mimic)、 inhibitor-NC组(转染 inhibitor)、 miR-106b-5p inhibitor组(转染 miR-106b-5p inhibitor)、 pcDNA组(转染 pcDNA)、 pcDNA-ENO1组(转染 pcDNA-ENO1)、 si-NC组(转染 si-NC)、 si-ENO1组(转染 si-ENO1)、 miR-106b-5p mimic+pcDNA组(共转染 miR-106b-5p mimic+pcDNA)、 miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1组(共转染 miR-106b-5p mimic+pcDNA-ENO1)、 miR-106b-5p inhibitor+si-NC组(共转染 miR-106b-5p inhibitor+si-NC)、 miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1组(共转染 miR-106b-5p inhibitor+si-ENO1)转染至 MH7A，再 IL-1β处理。细胞计数试剂盒( CCK8)检测细胞活性；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞 IL-6、IL-8、基质金属蛋白酶 -3(MMP-3)的含量。双萤光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性；蛋白质印迹法实验检测细胞 ENO1蛋白。结果与对照组( 0.52±0.05、147.32±12.54、0.45±0.03、1.55±0.12)相比， IL-1β组细胞活性(1.13±0.06)、 IL-6(433.21±37.84)、 IL-8(1.38±0.10)、 MMP-3(2.78±0.22)均升高( P<0.05)。与 mimic-NC组( 1.12±0.06、435.15±39.67、1.39±0.12、2.77±0.25)相比， miR-106b-5p mimic组细胞活性( 1.98±0.11)、 IL-6(164.12±15.74)、 IL-8(0.65±0.05)、 MMP-3(1.94±0.17)均降低(P<0.05)且抑制 miR-106b-5p具有相反的作用。双萤光素酶报告实验显示， miR-106b-5p靶向负调控 ENO1，且二者在 RA组织中的表达呈负相关。与 pcDNA组( 1.14±0.06、434.93±37.89、1.37±0.11、2.79±0.22)相比， pcDNA-ENO1组细胞活性(1.96±0.08)、 IL-6(867.83±71.84)、 IL-8(2.83±0.23)、 MMP-3(4.93±0.34)升高( P<0.05)；与 si-NC组相比， si-ENO1组细胞活性、 IL6、IL-8、MMP-3降低( P<0.05)。过表达 ENO1减弱 miR-106b-5p对 IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的促进作用，敲减 ENO1减弱抑制 miR-106b-5p对 IL-1β处理细胞增殖、炎性因子的抑制作用。结论 miR-106b-5p能够抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖和炎症反应，产生这种调控作用的潜在机制与靶向 ENO1有关。     

微 RNA-454-3p、FERM结构域蛋白 6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微 RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白 6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院 2016年 12月至 2018年 12月住院手术的 150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用 Kaplan-Meier法分析 miR采454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用 log-rank法进行检验; Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织 miR-454-3p水平( 1.25±0.24)高于癌旁组织( 0.99±0.22),FRMD6水平( 0.79±0.19)低于癌旁组织( 1.01±0.24),差异有统计学意义( P<0.05);癌组织中 miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及 TNM分期有关( P<0.05); miR-454-3p高表达组和 FRMD6低表达组病人 3年累积生存率分别低于 miR-454-3p低表达组和 FRMD6高表达组病人(均 P<0.05); miR-454-3p高表达、 FRMD6低表达、 TNM分期为 Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素( P<0.05)。结论 miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调, FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

N?myc下游调控基因 2蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及对人喉表皮样癌细胞生物学特性的影响

目的检测 N?myc下游调控基因 2(N?myc downstream regulated gene 2,NDRG2)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其人类上皮细胞 2型((Human Epithelial cells of type 2)对人喉表皮样癌细胞(Hep?2细胞)侵袭的影响。方法收集西安交通大学第一附属医院 2014年 1月 1日至 2017年 12月 31日接受喉部分切除术的病人,共计 41例喉鳞状细胞癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学检测喉鳞状细胞癌组织中 NDRG2的表达, χ2检验分析不同临床病理特征分组中 NDRG2阳性率的差异;实时定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测喉鳞状细胞癌 Hep?2细胞中 NDRG2的表达水平; Transwell检测 NDRG2对 Hep?2细胞侵袭及转移的影响。结果 41例喉鳞状细胞癌组织中 NDRG2的阳性率明显低于癌旁组织,(χ2=30.781,P＜0.05)TNM III期和 IV期及淋巴结转移的喉鳞状细胞癌病人中 NDRG2的阳性率低于 TNM I期和 II期及未发生转移的病人(TNM I和 TNM II NDRG2阳性率: 37.500%,TNM III和 IV NDRG2阳性率: 5.882%,χ2=5.394,P＜0.05;无淋巴结转移病人 NDRG2阳性率:55.556%,有淋巴结转移病人 NDRG2阳性率: 15.625,χ2=6.073,P＜0.05)。此外, Hep?2细胞中 NDRG2的表达也明显低于正常鼻咽上皮 NP?69细胞［Hep?2(1.193±0.053),NP?69(0.238±0.072),t=3.536,P＜0.05］。上调 Hep?2细胞中 NDRG2的表达后,转移［Lv?control(141.328±23.424)个, Lv?NDRG2(54.925±16.825)个, t=4.413,P＜0.05］及侵袭［Lv?control(71.782±18.675)个, Lv? NDRG2(25.931±9.729)个, t=3.757,P＜0.05］细胞数目显著降低。结论 NDRG2在喉鳞状细胞癌组织及细胞中低表达,并可作为抑癌基因抑制 Hep?2细胞增殖、侵袭及转移。     

肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白翻译控制 1的反义 RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法收集于 2017年1月至 2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的 46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测组织中 TPT1-AS1和微小 RNA-671-5p(miR-671-5p)表达, Pearson相关性分析肺癌组织中 TPT1-AS1和miR671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至 2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞 A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中 TPT1-AS1和 miR-671-5p调控关系。另将 A549细胞分为对照组、小干扰 RNA阴性序列(si-NC)组、 TPT1-AS1小干扰 RNA(si-TPT1AS1)组、 si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和 si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)基质金属蛋白酶(MMP)-2和 MMP-9蛋白表达。结果肺癌组织中 TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高［(1.88±0.12)(1.01±0.08)、P<0.05］,miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低［(0.45±0.04)(1.01±0.06)P<0.05］。Pearson相关性分析显示,肺癌组比织中TPT1-A,S1和 miR-671-5p呈负相(r= 0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A5比49细胞中负调,控 miR-671-5p表达。 si-TPT1-AS1组 A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(关53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和( 33.78±3.23)个,均低于 si-NC组［分别为( 98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05］。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在 si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)(0.21±0.03)(0.43±0.04),较si-NC组均降低［分别为(0.86±0.04)(0.55±0.05)(0.48±0.07)均P<0.05］。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-、5p组A549细、胞存活率、迁移数和侵袭数及 CyclinD1、MMP-2和M、MP-9蛋白表、达分别为(8,5.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高［分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05］。对照组与 si-NC组、 si-TPT1-AS1组与 si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中 TPT1-AS1表达升高, miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。 TPT1-AS1可能通过靶向下调 miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-150 靶向c-Myb 表达对T 淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150 及c-Myb 表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平［(1.42±0.14)比(1.03±0.09)］、凋亡率［(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%］、Bax蛋白表达水平［(0.65±0.18)比(0.42±0.13)］显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA［(0.66±0.14)比(0.98±0.09)］及蛋白表达水平［(0.37±0.06)比(0.64±0.12)］、OD值［(0.25±0.06)比(0.46±0.09)］、PCNA蛋白表达水平［(0.33±0.07)比(0.56±0.11)］显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。     

长链非编码 RNA变异性浆细胞瘤异位 1通过调控微小 RNA-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X轴影响皮肤黑色素瘤细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)变异性浆细胞瘤异位 1(PVT1)调控微小 RNA(miR)-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X(XIAP)对皮肤黑色素瘤( CMM)细胞的顺铂( DDP)耐药性的影响。方法该研究起止时间为 2020年 3—9月。体外培养人皮肤黑色素瘤 SK-MEL-1/DDP细胞,将细胞分为空白对照组( NG组,不做处理)、阴性转染组( NC组,转染 PVT1-inhibitor阴性对照)、抑制 PVT1表达组( PVT1-inhibitor组,转染 PVT1-inhibitor)、共转染组( PVT1-inhibitor-miR-214-3p-inhibitor组,转染 PVT1inhibitor同时转染 miR-214-3p-inhibitor)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 SK-MEL-1/DDP细胞 PVT1、 miR-214-3p水平; MTT法检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖能力及对 DDP的耐药性;流式细胞仪检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞凋亡率;蛋白质印迹法( Western blotting)检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞 XIAP、细胞增殖相关核抗原 Ki-67、凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)表达水平。应用 TargetScan数据库预测 PVT1与 miR-214-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证。结果与 NG组、 NC组比较, PVT1-inhibitor组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率［( 22.87±3.43)%比( 0.00± 0.00)%、(0.08±0.01)%］、凋亡率［( 40.05±6.06)%比( 15.69±2.35)%、(17.01±2.55)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著升高( P< 0.05)PVT1、药物半数抑制浓度( IC50)值［( 15.13±0.45)μg/L比( 45.03±1.35)μg/L、(47.81±1.33)μg/L］、 Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及,其蛋白表达水平均显著降低( P<0.05);与 PVT1-inhibitor组比较, PVT1-inhibitor+miR-214-3p-inhibitor组 SK-MEL-1/ DDP细胞增殖抑制率［(15.12±2.27)%比( 22.87±3.43)%］、凋亡率［(27.88±4.19)%比( 40.05±6.06)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著降低( P<0.05)IC50［(23.98±0.72)μg/L比(15.13±0.45)μg/L］Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TargetScan,数据值库预测显示 miR-214-3p是 PVT1的潜在靶、基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。     

长链非编码 RNA LINC00662靶向微小 RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码 RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于 2018年 10月至 2020年 2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞 A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为 si-NC、si-LINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和 si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染 A375细胞。采用 RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中 LINC00662和 miR-103a-3p的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法( western blot. ting)检测细胞周期蛋白 1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原( PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中 LINC00662表达［ 1.24±0.50比 4.17±1.27］上调, miR-103a-3p表达［ 1.17±0.32比 0.64±0.21］显著下调。 LINC00662与 miR-103a-3p靶向结合。与 si-NC组相比, si-LINC00662组 LINC00662表达［ 1.00±0.06比 0.48±0.06］、 OD值和 S期细胞比例［( 34.7±3.5)%比( 20.5±3.0)%］降低, G0/G1期细胞比例［( 57.4±5.2)%比( 74.7±4.8)%］增高, Cyclin D1［1.00±0.01比     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

长链基因间非编码 RNA 00963通过靶向微小 RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制.方法 本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系.将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭.结果 与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05).LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达.干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05).过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05).抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用.结论 干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

LncRNA KCNQ1OT1通过调控 miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制.方法 于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达.以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系.结果 喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)].喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)].与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)％比(3.79±2.37)％].KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达.敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论 KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为.     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

微小RNA-454、微小RNA-132、液泡膜-ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的 探讨组织微小RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜-ATP酶（V-ATPase）表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法 选取2011年9月至2014年11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的96例结肠癌组织标本、96例癌旁正常结肠组织标本、82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定标本中miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达,分析miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访5年,统计miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人3年、5年生存率。结果 结肠癌组织标本中miR-454表达69.86±7.29与V-ATPase mRNA表达5.42±0.41高于良性结肠病变组织10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本1.28±0.74、1.96±0.32,miR-132水平表达1.46±0.25低于良性结肠病变组织3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本4.59±1.24(P<0.05);中低...     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

长链非编码 RNA母系表达基因 8靶向微小 RNA-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因8(MEG8)靶向微小RNA(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平.血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系.结果 与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)％比(103.50±11.04)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(26.57±2.73)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)％比(104.11±10.64)％]、cy?clin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(21.26±2.45)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).MEG8和miR-497-5p直接特异性结合.与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)％比(40.23±4.35)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率[(15.32±1.67)％比(26.81±2.94)％]、P21和Bax蛋白表达降低(P<0.05).结论 抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展.     

WWOX、p53及Bcl-xl基因在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨WWOX、p53及Bcl-xl基因在食管鳞癌组织中的表达及其与临床病理学特征的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测10例高分化鳞癌、28例中分化鳞癌、14例低分化鳞癌及52例癌旁正常组织中WWOX、p53及Bcl-xl基因的表达并分析其与临床病理指标的相关性。结果 WW0X在食管鳞癌组织中的表达明显降低,与癌旁正常组织相比较其差异有统计学意义（P〈0.01）,且WWOX的表达与癌组织的分化程度、肿瘤的浸润深度及淋巴结转移情况密切相关（P〈0.05）,在低分化鳞癌中的表达低于高、中分化鳞癌。p53（突变型）基因在食管癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,二者比较其差异具有统计学意义（P〈0.05）,其表达与癌组织的分化程度、肿瘤的浸润深度及淋巴结转移情况密切相关（P〈0.05）,以上两种基因的表达与患者的年龄和性别无关（P〉0.05）。Bcl-xl基因在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁正常组织（P〈0.05）,其表达与癌组织的分化程度有关（P〈0.05）,与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移情况及患者的年龄性别无关（P〉0.05）。WWOX基因与p53基因及Bcl-xl基因的表达均呈负相关。结论 WWOX在食管鳞癌组织呈低表达,p53（突变型）及Bcl-xl基因在食管鳞癌组织呈高表达。三基因在食管癌的发生、发展及转移过程中有明显的协同作用。     

舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.