miR-135b-5p调控TIMP3的表达对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-135b-5p对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、转移的影响及其可能的机制。方法使用Lipofectamine-2000将miR-135b-5p siRNA转染至SUNE-1细胞,并将NC siRNA转染至SUNE-1细胞中作为对照组。实时定量PCR检测NP69、CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中miR-135b-5p及TIMP3的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-135b-5p及TIMP3的调控关系,免疫蛋白印迹实验检测TIMP3蛋白的表达含量,CCK-8实验检验SUNE-1细胞的增殖能力,Transwell实验检验SUNE-1细胞的迁移及侵袭能力。miR-135b-5p的表达与鼻咽癌(NPC)患者的临床病理学参数之间的关联。结果 miR-135b-5p在CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中表达含量均上升,并且在SUNE-1细胞系中其的表达水平最低;双荧光素酶报告基因结果显示:抑制miR-135b-5p表达可显著增高SUNE-1细胞中TIMP3的荧光素酶活性;抑制miR-135b-5p表达后,TIMP3蛋白的表达相应上调,同时削弱了SUNE-1细胞增殖、迁移、侵袭能力。同时收集整理NPC患者相关临床资料进行对比分析,结果发现miR-135b-5p的表达与NPC的病理分期相关以及淋巴结转移情况呈正相关。结论抑制miR-135b-5p的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并靶向上调TIMP3的表达。     

MicroRNA-451通过靶向RAB14抑制鼻咽癌细胞的生长、侵袭和迁移能力

目的:探讨mi R-451对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:选取正常鼻咽上皮细胞株NP69及4株鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、5-8F、6-10B,荧光定量PCR检测mi R-451的表达量。选取鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2,分别转染mi R-451 mimics和阴性对照后,采用MTT法检测鼻咽癌细胞的增殖能力,划痕实验检测其侵袭能力,transwell迁移实验检测其迁移能力。通过生物信息学方法预测mi R-451的靶基因。结果:与正常鼻咽上皮细胞相比,mi R-451在鼻咽癌细胞株中的表达量明显降低。鼻咽癌细胞过表达mi R-451后,其增殖、侵袭和迁移能力均受到抑制。通过靶基因预测数据库预测RAB14为mi R-451的靶基因,并通过荧光素酶报告基因实验、RT-PCR、Western blot实验验证了这一结果。将RAB14低表达后,也在一定程度上抑制了鼻咽癌的增殖、侵袭和转移能力。结论:mi R-451通过靶向RAB14抑制了鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-130a-3p通过抑制CXCL12抑制鼻咽癌细胞增殖与侵袭

目的探讨miR-130a-3p对人鼻咽癌细胞CNE-1功能的影响及其可能的靶向基因。方法采用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物(实验组)或对照模拟物(对照组)转染CNE-1细胞,分别用CCK-8法和Transwell试验检测细胞增殖侵袭和迁移能力变化,Western Blot检测趋化因子CXCL12蛋白表达。结果相较对照组,实验组CNE-1细胞的增殖,侵袭和迁移能力增强(P0.05),细胞中CXCL12蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论 miR-130a-3p可能通过调节CXCL12蛋白表达抑制人鼻咽癌细胞CNE-1细胞的增殖、侵袭和迁移。     

重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达

目的:构建针对人鼻咽癌CNE-2Z细胞Bcl-2基因pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16.1/15a真核表达质粒,转染至CNE-2Z细胞并检测其表达.方法:采用PCR法从重组质粒PGH-16-1/15a中获得16-1/15a-X2370G全长序列,在T4 DNA Ligase连接酶作用下连接入重组载体pENTR-CMV-EGFP.重组质粒经酶切及测序鉴定.将构建成功的重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2Z,用荧光显微镜观察转染结果.结果:重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a经酶切与测序证实构建成功,转染至鼻咽癌CNE-2Z细胞后,荧光显微镜观察证实该重组质粒能在CNE-2Z中表达.结论:成功构建真核表达质粒DENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a,并在鼻咽癌CNE-2Z细胞中得到表达,可用于进一步检测其抗肿瘤机制.     

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。     

人参皂苷Rg1对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡、侵袭和迁移的影响

目的探究人参皂苷Rg1对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡、侵袭和迁移的影响。方法采用不同浓度的人参皂苷Rg1处理鼻咽癌CNE-2细胞,同时选择无显著细胞毒性的Rg1低浓度、中浓度、高浓度(观察组)进行后续实验,对照组不做Rg1处理。采用CCK-8检测细胞增殖倍数,使用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹法检测相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,观察组人参皂苷Rg1浓度越高,CNE-2细胞数量越少,增殖倍数、侵袭能力及Ki-67、血管内皮生长因子的表达水平越低,Q2区凋亡细胞越多,Caspase-3蛋白表达水平越高,差异有统计学意义(P 0. 01)。划线24 h后,观察组的缝隙间距明显大于对照组,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论人参皂苷Rg1可促进鼻咽癌CNE-2细胞凋亡,抑制CNE-2细胞增殖、迁移和侵袭能力,为临床治疗鼻咽癌提供新思路和理论基础。     

miR-490-3p通过抑制TGFβR1基因表达进而抑制结肠癌细胞的转移和侵袭

目的:研究miR-490-3p在结肠癌细胞(colorectal cance rcell,CRC)转移中的表现和生物功能,及其调控作用机制。方法:通过荧光定量PCR测定miR-490-3p在CRC细胞系的表达水平。细胞转染miR-490-3p以及shmiR-490-3p,观察miR-490-3p的过表达或基因沉默对结肠癌细胞的转移能力是否有影响。miR-490-3p的分子靶标由双荧光素酶报告基因分析和免疫印迹技术进行实验认定。通过划痕实验,Transwell小室基质渗透实验对细胞迁移和侵袭能力进行鉴定。结果:miR-490-3p在CRC细胞系中显著低表达(P0.05,P0.01,P0.001,n3)。过表达miR-490-3p显著降低CRC细胞株的细胞迁移和侵袭能力(P0.01,n3)。miR-490-3p的基因沉默显著增加CRC细胞株的细胞迁移和侵袭能力(P0.01,n3)。结肠癌细胞细胞系中过表达miR-490-3p显著降低TGFβR1的基因表达(P0.001,n3),miR-490-3p基因沉默显著上调TGFβR1的基因表达(P0.001,n3)。过表达miR-490-3p抑制TGFβR1的萤光素酶活性(P0.001,n3),miR-490-3p基因沉默促进TGFβR1的萤光素酶活性(P0.001,n3)。TGFβR1基因沉默减弱shmiR-490介导的细胞迁移和侵袭促进效应(P0.01,n3)。结论:miR-490-3p通过抑制TGFβR1的基因表达从而抑制CRC细胞的转移。     

Pim-1蛋白在鼻咽癌诊断和预后价值的研究

目的：分析原癌基因 Pim-1在鼻咽癌（nasopharyneal carcinoma,NPC）细胞增殖和迁移中的作用。方法通过 RT-PCR、Western blotting、免疫荧光法检测 NPC 细胞 CNE1、CNE-GL、CNE-2Z、C666-1中 Pim-1的表达,用不同浓度的 Pim-1特异性抑制剂---六羟黄酮（quercetagetin）处理 CNE1、CNE1-GL、C666-1细胞系,检测细胞的活力、克隆形成率、迁移能力。结果高分化的 CNE1细胞中 Pim-1的表达为阴性,低分化的 CNE-2Z 细胞为弱阳性,而未分化的 C666-1细胞为强阳性。CNE1-GL 细胞和 C666-1细胞在用六羟黄酮处理后显著抑制了细胞的活力、克隆形成率、迁移能力。CNE1-GL 细胞来源于 CNE1细胞,用 EP 病毒潜在膜蛋白-1（LMP-1）过表达质粒转染后,显著促进了Pim-1的表达,过表达而 CNE1细胞未受到抑制。结论这些结果表明,Pim-1的表达是反应 NPC 的增殖和迁移的一种重要标志物,靶向与 Pim-1的药物或许可以用于治疗 Pim-1过表达的 NPC 患者。     

长链非编码RNA TUG1对鼻咽癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的 对长链非编码RNA TUG1进行泛癌分析，并评估其对鼻咽癌生物学行为及放射敏感性的影响。方法 基于TCGA数据库检测TUG1在泛癌中的表达情况和预后价值。用qPCR方法检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中TUG1的表达情况。用TUG1 siRNA或阴性对照siRNA转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞。采用MTS法、transwell实验和划痕实验检测鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果 基于TCGA数据库的分析发现，在12种癌症类型中TUG1的表达上调。TUG1表达增加与多种癌症类型的较差预后相关。体外实验研究发现lncRNA TUG1在鼻咽癌细胞系和组织中也显著上调。TUG1高表达与TNM分期恶化有显著相关性。TUG1的高表达与鼻咽癌患者不良预后有显著相关性。下调TUG1的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭，促进鼻咽癌细胞凋亡，提高鼻咽癌细胞放射敏感性。结论 TUG1在多种癌症类型中发挥重要作用，并与鼻咽癌的不良预后相关。TUG1可能作为鼻咽癌治疗的潜在治疗靶点。     

脂多糖对胃癌细胞mir-146a-5p、mir-335-5p及TLR_(1～10)受体表达的影响

目的研究胃癌细胞在受到脂多糖干预后,TLR_(1~10)受体及上游调控分子mir-335-5p和mir-146a-5p的表达规律。方法 PCR Array筛选结合实时荧光定量PCR检测验证TLR_(1~10)mRNA在不同分化程度胃癌细胞中的表达;实时荧光定量PCR检测不同浓度的脂多糖(终浓度分别为0.1、1.0、10.0、100.0μg/mL)干预胃癌SGC-7901、BGC-823细胞和GES-1细胞12、24、48h后,mir-335-5p、mir-146a-5p及TLR_(1~10)的表达。结果实时荧光定量PCR检测验证表明,除TLR_1、TLR_3、TLR_5外,其余的Toll样受体mRNA在不同分化程度胃癌细胞中的表达相对于正常胃黏膜上皮GES-1细胞出现明显上调;不同浓度的脂多糖干预胃癌SGC-7901、BGC-823细胞和GES-1细胞12、24、48h后,相对于未干预胃癌细胞,mi-335-5p和mir-146a-5p的表达明显下调;在SGC-7901细胞中,除TLR_3、TLR_4外,其他TLR受体在不同浓度脂多糖干预后,均有不同程度的上调表达;在BGC-823细胞中,TLR_1、TLR_4、TLR_6受体仅在高浓度脂多糖干预时,上调表达,其他TLR受体在不同浓度脂多糖干预后,均有不同程度的上调表达;在GES-1细胞,所有TLR_(1~10)在不同浓度脂多糖干预后均有明显上调表达。结论脂多糖干预胃癌细胞,可诱导mir-335-5p、mir-146a-5p下调表达和Toll样受体mRNA上调表达,Toll样受体mRNA上调表达可能与mir-335-5p、mir-146a-5p下调有关。     

PDGF-D稳定沉默后对乳腺癌细胞SK-BR-3生物学功能的影响

目的通过慢病毒载体沉默乳腺癌细胞系SK-BR-3中血小板衍生生长因子D(PDGF-D)基因的表达,探讨PDGF-D基因沉默后对乳腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测5种乳腺癌细胞系中PDGF-D的表达状况;设计人PDGF-D基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染PDGF-D高表达的乳腺癌细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对PDGF-D基因的沉默效果;PDGF-D基因沉默后通过细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 PDGF-D在5种细胞系中存在差异性表达,其中具有低转移潜能的HT-29和SK-BR-3细胞与具有高转移潜能的LOVO、RKO和SW620细胞相比,具有更高的PDGFD表达水平(t=3.880,P0.05)。选取低转移细胞株中PDGF-D表达相对较高的SK-BR-3作为研究对象,构建PDGF-D shRNA慢病毒载体沉默SK-BR-3细胞中PDGF-D的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,PDGF-D稳定沉默的SK-BR-3细胞系构建成功;在稳定沉默PDGF-D基因后,MTT细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验表明SK-BR-3细胞增殖能力增强(F=75.23,P0.001);流式细胞技术检测显示PDGF-D基因沉默后可抑制SK-BR-3细胞凋亡(F=84.44,P0.001);细胞小室实验结果显示,PDGF-D沉默后SK-BR-3迁移能力增强(F=155.9,P0.001)。结论 PDGF-D基因可能与乳腺癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了乳腺癌的发生、发展。     

复方小柴胡汤调控microRNA抑制鼻咽癌细胞增殖

目的观察复方小柴胡汤（FFXCHT）对高分化鼻咽癌细胞CNE-1和低分化鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用,探讨其调控CNE-2细胞microRNA的差异表达。方法通过磺基罗丹明B（SRB）法检测FFXCHT对CNE-1和CNE-2细胞增殖的影响;采用μParaflo^TM MicroRNA芯片检测,激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后比较数据,分析FFXCHT处理前后CNE-2细胞microRNA表达的差异。结果FFXCHT可抑制CNE-1和CNE-2细胞增殖,且呈剂量依赖性;FFXCHT处理CNE-1细胞24h、48h、72h,其IC50分别为12．23mg／mL,4．63mg／mL和4．97mg／mL;其对CNE-2细胞IC50分别为9．67mg／mL,4．33mg／mL,3．09mg／mL。microRNA芯片检测结果显示FFXCHT处理CNE-2细胞后,在检测的326个microRNA中,有10个microRNA上调,1个microRNA下调,其中检测量绝对值在1000以上且两者相差log2（Sample B signal／Sample A signal）〉1的microRNA有hsamiR-513、hsa-miR-498、hsa-miR-210和hsa—miR-602。结论该FFXCHT可抑制高低分化鼻咽癌细胞的增殖,其抑瘤作用可能与microRNA的差异表达有关。     

microRNA-19对肝癌细胞系迁移与侵袭能力的影响

目的 比较不同转移潜能肝癌细胞系中microRNA-19（mir-19）表达变化,探讨mir-19对不同转移潜能肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 应用TaqMan MGB探针法定量分析mir-19在高转移潜能肝癌细胞系（MHCC97H、LM3）和低转移潜能肝癌细胞系（HepG2、7402）的表达差异.利用转染试剂将人工合成的mir-19的前体转染高转移潜能细胞系,人工合成的mir-19抑制剂转染低转移潜能细胞系.采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测mir-19对细胞增殖的影响,Transwell小室检测mir-19对细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 在不同转移潜能的细胞系中,mir-19表达水平在高转移潜能细胞系较低转移潜能细胞系表达下调（P〈0.05）.功能实验显示mir-19可抑制肝癌细胞的侵袭和增殖（P〈0.05）,利用生物信息学预测mir-19的靶基因发现,许多癌基因3＇UTR包含与mir-19的互补序列.结论 mir-19可能部分通过调节CREB3L4、PDE4A、JAM2、RUNX2等的表达来抑制肝癌细胞的增殖和侵袭转移.     

IKKɑ调控表皮角朊细胞的增殖和分化及与p63的关系

目的探讨IKKɑ调控表皮角朊细胞的增殖和分化及与p63的关系。方法原代分离培养野生型(wildtype,WT)和Ikkɑ基因敲除小鼠(Ikkα-/-)的表皮角朊细胞(WT-KTC及Ikkα-/-KTC),Western blot检测Ikkα-/-中p63的表达。含0.5mM Ca2+培养基刺激分化后,免疫荧光染色观察分化标记物Zonula occludens-1(ZO-1)及增殖标记物BrdU的表达。制备沉默p63表达的慢病毒并感染Ikkα-/-KTC,观察其增殖及分化能力的变化。结果在正常培养条件下,Ikkα-/-KTC中BrdU阳性细胞率显著高于WT-KTC(P0.05)。Ikkα-/-KTC中p63高表达。高钙条件刺激分化后,WT-KTC中BrdU表达显著降低,表达ZO-1;而Ikkα-/-KTC的BrdU表达无明显变化;且无ZO-1的表达。将表达shRNA p63的慢病毒感染Ikkα-/-KTC沉默p63后,含0.5mM Ca2+培养基刺激细胞,Ikkα-/-KTC中BrdU的表达显著降低,不表达分化标记物ZO-1。结论 IKKɑ调控表皮角朊细胞的增殖和分化,且其对增殖的调控通过p63信号通路。     

枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

μ阿片受体通过调控Smad2抑制乳腺癌细胞迁移侵袭

目的:研究μ阿片受体(MOR)对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响及其机制。方法:Western blot(WB)及RT-q PCR检测乳腺癌细胞系MCF-7、BT-549、SKBR3、MDA-MB-231、BT-474、T47D中MOR的表达水平。在MDA-MB-231细胞中,慢病毒转染过表达MOR。用划痕实验、transwell实验以及WB实验来研究MOR表达量改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移的影响及可能的机制。结果:WB及RT-q PCR结果示,MOR在MDA-MB-231中的表达量明显低于MCF-7、BT-549、SKBR3、BT-474、T47D。划痕实验及transwell实验示,过表达MOR后MDA-MB-231细胞愈合、迁移及侵袭能力明显减弱。WB结果示,与对照组相比,过表达组的Smad2、p Smad2、MMP9、MMP2、N-cadherin表达量下调。结论:与MCF-7等低转移潜能细胞相比,MOR在高转移潜能乳腺癌细胞系MDA-MB-231中表达量低。过表达MOR后,MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力减弱。WB结果提示MOR对MDA-MB-231细胞迁移侵袭的影响可能与Smad2及其下游蛋白的表达下调有关。     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果 与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,...     

微小RNA-150-5p抑制鼻咽癌细胞恶性增殖及增强放疗敏感性的作用研究

目的 探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在鼻咽癌组织中的表达水平及其对癌细胞增殖和放疗敏感性的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-150-5p的表达水平。常规培养鼻咽癌细胞CNE2进行miR-150-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-150-5p过表达组(miR-150-5p mimic组)。采用MTT实验检测各组CNE2细胞的增殖能力;采用流式细胞仪检测各组CNE2细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)的表达。结果 miR-150-5p在鼻咽癌组织中的表达水平为(0.74±0.39),低于癌旁组织中的(1.44±0.54),差异有统计学意义(t=8.140,P<0.001)。转染48 h后,miR-150-5p mimic组CNE2细胞中miR-150-5p的表达水平为(6.31±1.20),高于NC组中的(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=7....     

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。