藤梨根抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响

本文报告藤梨根水溶成分的抗小鼠移植性实体瘤U_(14)的作用,体外促进C_3H小鼠淋巴细胞转化、体内提高C_3H小鼠NK细胞对~(126)I—dUrd标记的U(14)靶细胞的细胞毒作用,以及体内抑制C(57)小鼠溶血素生成的作用。实验结果提示本药有抗小鼠U(14)实体瘤的作用、增强细胞免疫和抑制体液免疫的功能。其抗肿瘤作用似乎部分地与其促进淋巴细胞转化和增强NK细胞活性有关。     

活性氧在大黄素联合顺铂诱导食管癌EC-9706细胞凋亡中的作用

目的探讨大黄素联合顺铂诱导人食管癌EC-9706细胞凋亡过程中的作用及可能机制。方法不同浓度大黄素、顺铂与二药联合分别作用于EC-9706细胞,应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法测细胞凋亡(形态学变化);MTT法检测细胞抑制率;用Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法及流式细胞术检测细胞凋亡情况(计算凋亡细胞百分率);流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果大黄素、顺铂均可明显抑制EC-9706细胞增殖,并且呈一定的时间依赖性;大黄素、顺铂分别及联合作用24 h,细胞早期凋亡率分别为(15.39±3.40)%、(12.80±2.41)%和(23.09±3.97)%,较对照组〔(1.42±0.14)%〕明显增加(P均<0.05);两药分别及联合作用2 h,细胞内活性氧的含量分别为(35.57±3.16)%、(29.44±2.43)%和(43.23±3.68)%,较对照组〔(4.73±2.12)%〕明显升高(P<0.05)。结论大黄素能抑制EC-9706细胞增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生促进凋亡,与顺铂联用存在协同作用,其机制可能与通过诱导细胞内活性氧的产生促进细胞凋亡有关。     

藤梨根拮抗四氯化碳致急性肝损伤作用活性部位的初步筛选

目的:通过建立四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠模型,测定其血清中谷丙转氨酶(ALT)的含量,对藤梨根不同提取部位抑制ALT升高的作用比较,筛选出具有拮抗肝损伤作用的提取部位。方法:取藤梨根原药材,经过乙醇提取、乙酸乙酯萃取,得乙酸乙酯提取部位;过聚酰胺柱洗脱,得不同提取部位,分为X部位、Y部位、Z部位;小鼠预防性给药2 d,以CCl4橄榄油混合物(1%)2 mL/kg腹腔注射造就小鼠化学性肝损伤模型,第3天给药后摘眼球取血,测血清中ALT活力。结果:乙酸乙酯部位、X部位、Y部位均具有拮抗CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT升高的作用,其中X部位在一定剂量范围内具有量效关系。结论:含有黄酮类化合物的藤梨根提取X部位,具有拮抗CCl4致急性肝损伤的作用,且在一定剂量范围内具有量效关系。     

藤梨根拮抗四氯化碳致急性肝损伤作用活性部位的初步筛选

目的：通过建立四氯化碳（CCh）致息性肝顿伤小鼠模型。测定其血清中谷丙转氨酶（ALT）的含量,对藤梨根不同提取部位抑制ALT升高的作用比较,筛选出具有拮抗肝损伤作用的提取部位。方法：取藤梨根原药材。经过乙醇提取、乙酸乙酯萃取。得乙酸乙酯提取部位;过聚酰胺柱洗脱,得不同提取部位,分为X部位、Y部位、Z部位：小鼠预防性给药2d．以CC14橄榄油混合物（1％）2mL/kg腹腔注射造就小鼠化学性肝损伤模型,第3天给药后摘眼球取血,测血清中ALT活力。结果：乙酸乙酯部位、X部位、Y部位均具有拮抗CC14致惠性肝损伤小鼠血清ALT升高的作用,其中X部位在一定剂量范围内具有量效关系。结论：含有黄酮类化舍物的藤梨根提取X部位,具有拮抗CC14致急性肝损伤的作用．且在一定剂量范围内具有量效关系。     

藤黄酸诱导SPC-A-1肺腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的研究藤黄酸(GA)对SPC-A-1肺腺癌细胞的生长抑制作用及诱导肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法应用改良的MTT法及流式细胞术分别检测GA对SPC-A-1的生长抑制作用及诱导肺癌细胞凋亡的作用,并通过Western-blotting检测不同浓度的GA作用SPC-A-1细胞后Caspase9、Caspase10及p53蛋白表达的变化。结果GA对SPC-A-1细胞有明显的生长抑制作用,GA对其有显著的促凋亡作用。Caspase9、Caspase10及p53都参与了GA诱导的肺腺癌细胞凋亡,且随着GA浓度的增大,Caspase9、Caspase10及p53蛋白的表达均上调。结论GA对SPC-A-1有明显的生长抑制作用,具有显著的促SPC-A-1肺腺癌细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调凋亡起始酶Caspase9、Caspase10及促凋亡蛋白p53的表达有关。     

用血清药理学方法观察中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用血清药理学方法，流式细胞仪、琼脂糖胶电泳和透射电镜分析技术对中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡情况进行检测和观察。结果可见中药复方Ⅰ号诱发肿瘤细胞，ＤＮＡ裂解成典型的梯状电泳图谱，胞核固缩，核染色质着力并裂解为碎块；Ｇ０／Ｇ１期细胞减少，产生典型凋亡峰，提示复方１号对胃癌是一种有潜力的治疗药物。     

用血清药理学方法观察中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用血清药理学方法，流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳和透射电镜分析技术对中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡情况进行检测和观察。结果可见；中药复方1号诱发肿瘤细胞，DNA裂解成典型的梯状电泳图谱，胞核团结，核染色质看边并裂解为碎块；G0／G1期细胞减少，产生典型凋亡峰。提示复方1号对胃癌是一种有潜力的治疗药物。     

Bcl-Xl基因反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的探讨BclXl基因反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞株EC9706增殖和凋亡的影响。方法用阳离子脂质体介导bclxL基因ASODN转染EC9706细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测EC9706细胞的增殖抑制率;逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹杂交检测BclXlmRNA和蛋白表达水平;吖啶橙荧光染色和流式细胞术定量检测EC9706细胞的凋亡率。结果MTT检测显示,BclXlASODN可显著抑制EC9706细胞的增殖(P<0.01),而且其对细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖性;BclXlASODN对BclXlmRNA表达抑制率为57.29%。用吖啶橙荧光染色法和流式细胞检测ASODN组凋亡率(分别为31.13%±5.75%和30.5%,与细胞对照组、空白对照组及无关序列寡核苷酸组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BclXl基因ASODN可有效抑制EC9706细胞的增殖,通过ASODN作用可下调BclXl基因表达,并显著促进EC9706细胞凋亡;BclXl基因有望成为食管癌基因治疗的新靶点。     

复方藤梨根制剂抑制胃癌转移与MMP-9、TIMP-1和E-cad表达的关系研究

目的观察复方藤梨根制剂对胃癌细胞MMP-9、TIMP-1和E—cad蛋白表达的影响,探讨其抗胃癌细胞转移的作用机制。方法以SGC-7901胃癌细胞株建立胃癌裸鼠原位移植瘤模型,将裸鼠随机分为0．9％氯化钠溶液组（对照组）、复方藤梨根制剂低剂量、中剂量及高剂量组,接受连续21d灌服治疗。待裸鼠衰竭或死亡后解剖观察肿瘤转移等情况;用免疫组化方法检测肿瘤组织中MMP-9、TIMP-1和和E—cad蛋白表达的变化。结果根据胃癌裸鼠动物模型的转移部位进行赋值评分,氯化钠溶液与中、高剂量组比较差异有统计学意义（F=5．15,P〈0．05）,与低剂量组之间比较差异无统计学意义（F=1．27,P〉0．05）。经免疫组化法检测．对照组的胃癌细胞的MMP-9明显高于中、高剂量复方藤梨根制剂组（B3．86,P〈0．05）;对照组的胃癌细胞的,TIMP-1蛋白表达明显低于中、高剂量复方藤梨根制剂组（止4．30．P〈0．05）：而E—cad表达各组之间差异无统计学意义（F=0．41。P〉0．05）。结论复方藤梨根制剂可能是通过下调MMP-9和上调TIMP-1的途径发挥抗胃癌转移作用：而对E—cad的异常表达没有明显调节作用。     

蛋白激酶与细胞凋亡信号及凋亡抑制信号的转导

蛋白激酶主要有蛋白激酶A(PKA) ,蛋白激酶C(PKC) ,钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM激酶 ) ,酪氨酸蛋白激酶 (TPK)等。近年来的研究表明 ,蛋白激酶参与了多种多样细胞凋亡的信号转导 ,并戏剧性地调节着细胞凋亡 ,有时加速凋亡 ,有时却可延迟凋亡。本文就蛋白激酶在细胞凋亡及凋亡抑制信号转导中的作用 ,以及转导凋亡信号和转导凋亡抑制信号的两类不同途径与Caspase家族的关系加以综述     

术前化疗诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察术前化疗对食管癌细胞凋亡的诱导作用。方法术前化疗方案为 BPF方案 ,术前化疗组 40例的化疗前胃镜标本和术后手术标本石蜡切片和 2 0例单纯手术组的术后手术标本石蜡切片 ,采用 DNA末端标记法染色 ,观察肿瘤细胞凋亡情况。结果 40例行术前化疗的食管癌患者中自觉吞咽困难、上腹部不适等症状明显改善的有 3 8例 ,2例无变化 ,无症状加重者。消化道钡餐检查结果显示完全缓解 3例 ,部分缓解 3 0例 ,无变化 5例 ,进展 2例。术后常规病理检查发现除病变进展的 2例外 ,其余 3 8例均可见化疗后改变。术前化疗组的胃镜标本平均为 (5 .2± 1.3 ) % ,术后标本为 (2 7.6± 3 .8) %。单纯手术组术后标本为 (4 .9± 1.6) %。结论术前使用顺铂、5 -氟尿嘧啶、平阳霉素联合化疗可以诱导食管癌细胞发生凋亡。     

外源性及内源性细胞凋亡机制研究进展

细胞凋亡是由一系列信号分子精密调控的程序性死亡过程,在光镜和电镜下,以细胞皱缩、染色质固缩、以及凋亡体形成为主要特征。细胞凋亡参与多种重要的生理过程,如免疫系统的正常发育及功能、新老细胞更替、胚胎发育、激素依赖性萎缩等。促凋亡与抗凋亡信号分子间平衡被打破是多种人类疾病的根源,如神经退行性疾病、缺血性损伤、自身免疫性疾病及多种肿瘤等。凋亡机制被完全阐明后将极大地改进其相关疾病的治疗策略。目前,细胞凋亡的信号传导大体分为两条基本途径：①外源性途径,由TNF—α,TRAIL,FAS—L等死亡受体介导;②内源性途径,由线粒体外膜通透性增加所介导。现就上述两条通路的分子机制进行综述。     

STAT3-siRNA诱导前列腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达诱导人前列腺癌细胞凋亡的机制。方法 针对人STAT3mRNA序列设计合成编码干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,转染人前列腺癌细胞株PC3,采用Western blot、Northern blot观察STAT3基因表达抑制后Bcl-2,C-Myc与Cyclin D1表达的变化,并用流式细胞技术及吖啶橙染色方法观察细胞凋亡。结果成功构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,并成功转染PC3细胞;Northern blot及Western blot结果 证实重组质粒在mRNA及蛋白水平均显著抑制STAT3基因表达,抑制率分别为60%及75%,并证实随着STAT3表达的抑制Bcl-2,C-Myc及Cyclin D1的表达明显下调。FCM及吖啶橙染色结果表明上述重组质粒可诱导PC3细胞凋亡。结论 STAT3-siRNA可抑制STAT3在人前列腺癌细胞的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。其机制与STAT3抑制Bcl-2,C-Myc及Cyclin D1表达有关。     

不同藤梨根样品中多糖含量的比较研究及应用

目的分析比较不同产地、不同采收期、不同年限藤梨根及其不同部位中多糖的含量。方法采用水提醇沉法及冷冻干燥法制备粗多糖样品,采用苯酚一硫酸法测定各样品中多糖的含量。结果多糖样品的线性范围为2．5~20μg／ml,平均回收率为102．2％。诸暨样品多糖的平均含量最高,浦江样品的最低;浦江4年的多糖含量低于浦江4年秋的多糖含量,磐安2009的多糖含量低于磐安2009秋的多糖含量;诸暨1年的多糖含量低于诸暨2年的多糖含量,而浦江4年的多糖含量低于浦江3年,并且低于浦江2年的多糖含量;浦江3年韧皮部的多糖含量低于其木质部的多糖含量。结论产地、年限、采收期对藤梨根中多糖的含量有影响,且其不同部位的多糖含量也不相同。     

藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究

本研究探讨藤黄酸（gambogi cacid,GA）对K562细胞的抑制作用及机制。以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562／A02细胞;用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色分析细胞周期;AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平。结果显示：藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖。K562／A02细胞（GA〉2μg/ml）比K562细胞（GA〉0．5μg／ml）需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡。藤黄酸0、0．5、1．0、2．0μg／ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响。藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低。藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞比例与对照相比分别上升2．19％、-1．95％、34．01％;作用48小时分别上升60．4％、71．3％、77．7％。结论：藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的。藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期。藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K562细胞的凋亡。     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226发生Caspase非依赖性细胞凋亡的实验研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)作用于骨髓瘤细胞RPMI8226引起非Caspase依赖性细胞凋亡。用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测RPMI8226细胞的凋亡率,Western blot方法检测细胞BCL-2及Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,As2O3(0.1-20μmol/L)作用于人骨髓瘤细胞RPMI8226 24,48,72 h显示出明显的增殖抑制作用(P<0.05),呈浓度和时间依赖性。与As2O3(10μmol/L)单独处理组相比,zVAD-fmk(20μmol/L)与As2O3联合处理组的凋亡率未见明显变化。与As2O3(10μmol/L)单独处理组比较,zVAD-fmk与As2O3联合处理组Caspase-3、BCL-2蛋白表达明显升高。结论:As2O3对RPMI8226细胞的增殖有明显的抑制作用。As2O3可诱导RPMI8226细胞发生凋亡,其凋亡过程中可能存在Caspase非依赖性细胞凋亡程序。     

地黄管食通口服液对放射治疗食管癌细胞凋亡及相关调控基因蛋白的影响

目的：观察以养阴润燥、清热解毒为基本治法组方的中药复方制剂地黄管食通口服液对放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡的影响，分析该口服液作用机制。 方法：实验于2004—11／2005-08在郑州大学动物实验中心SPF级实验室（动物实验）和郑州大学分子医学重点实验室（其他实验）完成。①选用清洁级Wistar大鼠125只，6～8周龄，雌雄不拘。取20只大鼠作为空白对照组；其余大鼠均皮下注射甲基戊基亚硝胺溶液5mg／kg造成食管癌模型，每周1次，连续16周，每周称体质量1次，根据体质量增长调节注射给药量。末次大鼠注射给予甲基戊基亚硝胺溶液后，除20只大鼠（模型组）外，将其余造模大鼠用氯胺酮腹腔注射麻醉（0．1g／kg，2mL／kg），应用^60Co放射治疗机进行大鼠食管局部^60Co照射，剂量为2Gy／d。连续5d。②末次照射24h后，分别给予相应受试药物，动物分组及给药情况如下：空白对照组（n=20）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）；模型组（n=20）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）；放疗组（n=17）：灌胃蒸馏水10mL／（kg&;#183;d）：六味地黄丸组（n=17）：灌胃六味地黄丸（成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓；河南宛西制药股份有限公司生产，批号：20010691；9g／粒）生药含量4．5g／（kg&;#183;d）；地黄管食通口服液低、中、高剂量组（n=17）：灌胃地黄管食通口服液（地黄管食通口服液：成分为熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹疫、茯苓、山豆根、冬凌草；由河南中医学院第一临床医学院制剂中心提供，批号：020117；10mL／支）生药含量0．5．1．0，1．5g／（kg&;#183;d）。每组均干预5周。③采用原位末端标记法检测细胞凋亡情况，计数细胞凋亡比例的均数为凋亡指数。④采用免疫组化方法检测P53，Bcl-2蛋白表达：P53和Bcl-2蛋白阳性反应均呈棕黄色颗粒。按显色有无及阳性细胞多少可分为4个等级：阴性（-）：整个切片未见阳性染色；弱阳性（＋）：阳性细胞数〈25％；中度阳性（＋＋）：阳性细胞数25％-50％；强阳性（＋＋＋）：阳性细胞数〉50％。⑤两组计量和计数资料差异比较采用t检验和X^2检验。 结果：纳入125只大鼠，各组取10只用于结果分析。①细胞凋亡指数：地黄管食通各剂量组明显高于模型组（P〈0.05-0．01），六味地黄丸组和地黄管食通各剂量组明显高于放疗组（P〈0．05—0.01）。②P53蛋白表达阳性率：模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组（P〈0．05-0．01）。地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组（P〈0．05—0．01），以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显（P〈0．01）。③Bcl-2蛋白表达阳性率：模型组、放疗组、六味地黄丸组均明显高于空白对照组（P〈0.05-0．01）。地黄管食通口服液各剂量组明显低于放疗组（P〈0．05-0．01），以地黄管食通口服液高剂量组与放疗组差异最明显（P〈0．01）。 结论：地黄管食通口服液可促进放射疗法治疗后食管癌细胞凋亡，该作用发生可能与抑制P53蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达有关。     

直流小电场诱导乳腺癌细胞凋亡及其机制的初步研究

目的研究直流小电场对于乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其可能机制。方法应用体外直流小电场作用于乳腺癌细胞系MCF7,观察其对乳腺癌细胞凋亡和重要基因 p5 3、Rb以及E2F1表达的影响。 结果直流小电场对乳腺癌细胞有明显的诱导作用 ,2 0 0mV/mm组癌细胞大量脱落 ,电场组凋亡癌细胞数目随电场强度升高而增多 (P <0 0 1)。电场组p5 3、Rb基因mRNA表达明显升高 ,E2F1基因mRNA表达明显下降。结论直流小电场对乳腺癌细胞具有明显的凋亡诱导作用并可能与 p5 3、Rb以及E2F1基因的表达相关。     

TNF相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制的研究

本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（hrsTRAIL）单用或联合阿糖胞苷（Ara—C）诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制。在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象，分5组进行细胞培养：对照组、Ara—C组、rsTRAIL组、同时给药组（Ara—C＋rsTRAIL）、先后给药组（Ara—C→rsTRAIL）。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率；应用Annexin V／PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率；使用流式细胞术检测不同浓度的Ara—C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性。结果表明：rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡。先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组。先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组。5mg／L、10mg／LAra—C作用于HL-60细胞24小时，其细胞表面DR5表达水平升高，大于对照组。结论：rsTRAIL抑制HL-60细胞生长．诱导HL-60细胞凋亡。Ara—C上调HL-60细胞表面DR5表达水平。增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用。Ara—C和rsTRAIL联合用药时，在先加Ara—C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好，其机制可能与Ara—C上调细胞表面DIL5表达水平和（或）增强细胞内caspase-8的活性有关。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究

为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用,探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-Ⅴ和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase3的活性,采用Western-blot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达。结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低。结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase3的活性而诱导凋亡。