miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

目的用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用。方法用miR-140模拟物(miR-140模拟物组)、miR-140阴性对照(阴性对照组)转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低(χ~2=5.550,P0.05;χ~2=6.995,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为(0.55±0.02)、(0.89±0.06)和(1.05±0.06)。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.823,P0.05;t=11.480,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为(0.98±0.11)、(0.68±0.07)和(0.38±0.04)。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(t=7.990,P0.05;t=21.348,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为(0.57±0.12)、(0.78±0.08)和(1.08±0.21)。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.921,P0.05;t=18.657,P0.05)。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。     

沉默葡萄糖调节蛋白94对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的机制

目的探讨沉默葡萄糖调节蛋白94(GRP94)对乳腺癌MCF7细胞的影响及可能的作用机制,旨在对GRP94在乳腺癌发生发展中的作用及机制提供数据参考。方法将人乳腺癌细胞株MCF7细胞随机分为空白对照组、空白转染组和实验组,其中空白转染组和实验组分别转染siRNA和siRNA-GRP94,采用CCK8实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测GRP94 mRNA表达,Western blot检测GRP94、c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达。结果实验组GRP94 mRNA和蛋白表达量分别为(0.106±0.031)和(0.211±0.068),明显低于空白对照组的(0.984±0.122)和(0.943±0.117)及空白转染组的(0.980±0.120)和(0.946±0.121),差异有统计学意义(P0.05)。实验组培养24 h、48 h MCF7细胞增殖A值分别为(0.426±0.120)和(0.547±0.114),明显低于空白对照组的(0.864±0.121)和(1.064±0.117)及空白转染组的(0.870±0.119)和(1.060±0.110),差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞凋亡率为(8.92±1.01)%,明显高于空白对照组的(3.16±0.64)%和空白转染组的(3.20±0.59)%,差异有统计学意义(P0.05)。实验组MCF7细胞c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白相对表达量分别为(0.813±0.104)、(0.214±0.067)和(0.511±0.121),明显低于空白对照组和空白转染组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 GRP94可抑制乳腺癌MCF7细胞增殖、诱导凋亡,可能与其下调c-myc、CyclinD1、Survivin蛋白表达有关。     

siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响研究

目的探讨siRNA沉默Fas死亡结构域相关蛋白(DAXX)基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移行为的影响,为临床诊断提供参考依据。方法培养MCF-7细胞,观察组对细胞进行siRNA-DAXX转染,空白组不对细胞进行任何处理,对照组对细胞进行siRNA-NC转染,(1)使用RT-PCR和Western Blot法分别检测三组DAXX mRNA和蛋白表达水平,(2)使用MTT法检测三组细胞增殖能力,(3)使用Transwell小室实验检测三组细胞迁移能力。结果 (1)观察组DAXX表达水平与空白组及对照组对比差异有统计学意义(P<0. 05),siRNA能够显著抑制DAXX基因表达和蛋白合成,(2)Western blot显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的62. 93%,(3)RT-PCR显示DAXX基因被沉默后,观察组细胞增殖率仅为空白组或对照组的77. 24%;(4)Transwell小室实验结果显示,与空白组及对照组相比,观察组细胞穿过小室的几率显著降低,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 siRNA沉默DAXX基因表达后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力和迁移能力显著减低,DAXX是一种肿瘤促进基因。     

小干扰RNA技术对沉默乳腺细胞中DEK基因的表达及乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA技术对沉默乳腺细胞中DEK基因的表达及乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响,为乳腺癌的分子诊断及靶向治疗奠定理论基础。方法以人类正常乳腺癌细胞系Hs578Bst作为对照,蛋白质印迹(Western bloting)检测MCF-7、T47D、MDA-MB-231、BT549乳腺癌细胞中DEK蛋白表达;MCF-7细胞分为空白组、阴性对照组、DEK转染组,转染48 h后,Western bloting检测DEK、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 DEK基因在MCF-7、T47D、MDA-MB-231、BT549细胞中的相对表达量均显著高于Hs578Bst,差异有统计学意义(均P0.01);RNA干扰可显著降低乳腺癌细胞DEK的蛋白相对表达量;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Notch1、Hes1蛋白相对表达量与空白组差异无统计学意义(均P0.05),DEK转染组细胞存活率及Notch1、Hes1蛋白相对表达量显著低于空白组,细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著高于空白组,差异有统计学意义(均P0.01)。结论抑制乳腺癌细胞DEK基因表达可显著降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调Notch1信号通路有关。     

Survivin启动子调控的PUMA基因表达载体对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨构建带有肿瘤特异性Survivin启动子的PUMA基因表达载体pUC57-Survivin-PUMA对乳腺癌MCF-7细胞的肿瘤特异性促凋亡作用。方法:化学合成PUMA基因片段克隆至pUC57质粒,构建重组质粒pUC57-PUMA;克隆Survivin启动子序列,取代pUC57-PUMA质粒原有的CMV启动子,构建重组质粒pUC57-Survivin-PUMA,测序鉴定。实验设置pUC57-PUMA组、pUC57-Survivin-PUMA组、阴性对照组(pUC57group)和空白对照组(blank group)。将以上各组分别转染人乳腺癌MCF-7细胞及人正常乳腺Hs 578Bst细胞。转染后48h,western blot技术检测各组细胞中PUMA蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:重组质粒经测序鉴定证实符合设计要求,构建成功;MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的PUMA蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中只有pUC57-PUMA组的PUMA蛋白表达较其他3组显著增高(P<0.05)。MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的细胞凋亡率分别为29.02%和29.31%,均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中仅pUC57-PUMA组的细胞凋亡率较其他3组显著增高(P<0.05)。结论:Survivin启动子调控的PUMA表达载体能显著增高乳腺癌MCF-7细胞中PUMA的表达,进而促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡,而对正常乳腺Hs 578Bst细胞的凋亡不产生影响。     

负载乳腺癌干细胞RNA树突状细胞疫苗抗肿瘤免疫机制的研究

目的:通过制备负载乳腺癌干细胞RNA的树突状细胞疫苗,研究其抗肿瘤免疫机制.方法制备乳腺癌干细胞RNA树突状细胞疫苗的采用细胞毒性试剂盒检测2种乳腺癌干细胞疫苗[(A组,CD44+CD24-+MCF-7-CTLs)、(B组,MCF-7-CTLs)]和(C组,DC-CTLs)的体外细胞杀伤能力.取24只小鼠均分为四组:A1组皮下接种活化的A组疫苗+MCF-7乳腺癌细胞;B1组接种活化的B组疫苗+MCF-7乳腺癌细胞;C1组皮下注射活化的DCs-CTLs+MCF-7乳腺癌细胞;D1组单用MCF-7乳腺癌细胞作为对照.分析裸鼠接种后肿瘤在体内的生长情况.结果:体外对CD44+CD24-+MCF-7乳腺癌细胞杀伤能力强度:A组>B组>C组(P<0.05).体外对MCF-7乳腺癌细胞杀伤能力强度:B组>A组>C组(P<0.05).在体成瘤实验显示,B1组和A1组的成瘤时间分别为第7周和第6周,明显长于D1组(第1周)和C1组(第2周)(P<0.05).结论:CD44+CD24-乳腺癌干细胞RNA树突状细胞疫苗诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞能够产生特异性免疫应答,从而发挥抗肿瘤作用.     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine~(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。     

BAG-1基因在Luminal型乳腺癌中的表达及其对他莫昔芬敏感性的影响

目的探讨Bcl-2结合抗凋亡基因(BAG-1)与Luminal型乳腺癌细胞株MCF-7对他莫昔芬(TMA)敏感性的关系以及可能的作用机制。方法 (1)采用免疫组织化学法检测Luminal型乳腺癌组织和癌旁组织中BAG-1的表达;(2)采用药物浓度梯度间歇诱导法体外建立MCF-7耐药细胞,采用MTT法测定TMA对MCF-7和MCF-7/TMAR细胞增殖活性的影响;(3)采用RNA干扰技术靶向沉默MCF-7/TAMR细胞BAG-1的表达;(4)采用RT-PCR法和Western blot法检测MCF-7细胞和MCF-7/TAMR细胞BAG-1、ER、p-AKT和p-ERK1/2 mRNA和蛋白的表达水平。结果 (1)乳腺癌组织中BAG-1的高表达率明显高于癌旁组织(P0. 05);(2)MCF-7/TAMR细胞中BAG-1、p-AKT和p-ERK1/2相对表达量明显高于MCF-7细胞(P0. 05);两组细胞ER表达情况差异无统计学意义(P0. 05); TMA对MCF-7/TAMR细胞增殖活性的抑制作用明显低于MCF-7细胞(P0. 05);(3)经siRNA BAG-1转染后,MCF-7/TAMR细胞增殖活性明显低于阴性对照组细胞(P0. 05); p-AKT和p-ERKmRNA和蛋白表达水平下调,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0. 05)。结论下调BAG-1可降低AKT和ERK磷酸化水平,从而提高Luminal型乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。     

不同乳腺癌细胞体外侵袭力差异及影响因素

目的探讨不同乳腺癌细胞系体外侵袭能力的差异并筛选其影响基因。方法以2种常见的乳腺癌细胞系MCF-7(低转移株)和MDA-MB-231(高转移株)为研究对象,通过细胞划痕实验、细胞黏附实验以及Transw ell侵袭实验分析2种乳腺癌细胞体外侵袭能力差异,实时荧光定量PCR筛选肿瘤侵袭转移相关基因在细胞间的表达差异并采用细胞免疫组化SP法进一步确认。结果 MDA-MB-231细胞24、48 h的平均迁移距离分别为(218.75±20.16)、(211.50±16.54)μm,明显高于MCF-7细胞的迁移距离[分别为(130±29.62)、(119.50±25.65)μm](P0.01);MDA-MB-231细胞黏附能力明显高于MCF-7细胞;MDA-MB-231细胞24 h平均穿膜细胞数[(57.75±4.19)个]明显多于MCF-7细胞[(35.50±4.20)个](P0.01);实时荧光定量PCR结果显示,与MCF-7细胞比较,MDA-MB-231细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)及乳腺癌候选抑制蛋白1(BCSC-1)表达水平[分别为(0.09±0.01)、(0.15±0.03)]均明显降低(P0.01),而基质金属蛋白酶14(MMP-14)表达水平(14.43±1.01)明显升高(P0.01)。细胞免疫组化结果显示,MDA-MB-231细胞ICAM-1以及BCSC-1的表达水平明显低于M CF-7细胞,而M M P-14表达水平明显高于M CF-7细胞。结论乳腺癌细胞系M DA-M B-231的体外侵袭能力明显高于MCF-7细胞,细胞侵袭力可能与细胞内ICAM-1、BCSC-1低表达及MMP-14高表达有关。     

微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用

目的：探讨微小RNA（miR）-21在乳腺癌细胞（MCF7）中的作用。方法：对MCF7细胞转染miR-21,采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4（PDCD4）表达;用噻唑蓝（MTT）比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖;流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果：经免疫组织化学检测,转染组未见染色,对照组细胞胞质呈棕褐色,转染组PDCD4的表达明显低于对照组,MTT法检测转染组细胞活力增加（P〈0.05）。转染组的凋亡率为（3.14±0.24）%,明显低于空白组、空质粒组的（8.04±0.02）%、（9.41±0.53）%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：PDCD4是miR-21的靶基因之一,miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。     

RNA干扰hTERT基因对人乳腺癌细胞株MCF-7周期及凋亡影响的研究

目的 观察载体介导的RNA干扰技术能否有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的hTERT的表达及其对细胞周期及凋亡的影响.方法 构建2个针对hTERT基因表达短发夹状siRNA的真核表达载体（pshRNA-hTERT）并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过RT-PCR检测该基因mRNA,Western blot蛋白质检测,端粒酶活性检测,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡等方法检测RNAi效果,从中筛选出基因沉默效果好的靶位点.结果 转染乳腺癌细胞后,pshRNA - hTERT1,2质粒均能抑制hTERT基因表达,mRNA表达分别下调了54.6%,55.2% 蛋白表达分别下调46.6%,47.8%.端粒酶活性均明显下降.对乳腺癌细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加.结论 RNAi在体外明显抑制乳腺癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.     

联合VEGF和Ang-1基因治疗促进移植皮瓣血管化的实验研究

目的探讨联合VEGF和Ang-1基因治疗促进移植皮辩血管化的可行性,提高皮瓣存活率。方法自行构建pcDNA3／VEGF165质粒和pcDNA3-hAng-1质粒,并移植于大鼠缺血皮瓣,皮瓣早期断蒂,观察皮瓣的存活率、VEGF及Ang-1蛋白表达和CD34免疫组化染色观察血管生成情况,计算微血管密度。结果VEGFl65、Ang—1双基因联合移植、VEGF165单基因移植、Ang-1单基因移植大鼠缺血皮瓣后,与空白质粒移植组和生理盐水对照组的皮瓣存活率分别为（95．6±3．9）％、（83．2±3．5）％、（80．2±3．7）％、（41．5±2．9）％、（42．2±2．5）％。基因治疗组体内检测均有VEGF、Ang-1蛋白的表达上升。术后第7d时五组皮瓣中点处的毛细血管密度分别为（17．8±1．7）个／mm^2、（19．1±1．6）个／mm^2、（50．1±5．7）个／mm^2、（53．2±6．3）个／mm^2、（69．4±7．5）个／mm^2;第14d时毛细血管密度分别为（28．6±3．7）个／mm^2、（30．5±2．9）个／mm^2、（65．2±5．8）个／mm^2、（75．4±6．8）个／mm^2、（88．9±7．1）个／mm^2。结论联合VEGF和Ang-1基因治疗可以可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率。     

EBV—miRNA—BHRF1—1对鼻咽癌细胞p53基因表达的影响

目的通过研究EBV-miRNA-BHRF1—1对鼻咽癌细胞p53基因表达的调控作用,探讨其对鼻咽癌患者基因治疗的应用价值。方法利用已构建好的EBV—miRNA-BHRF1—1表达质粒及空质粒载体,分别作为转染BHRF1—1质粒组和空质粒组,设置加入PBS转染的CNE-2细胞株作为对照组（PBS组）,转染至鼻咽癌细胞株。采用RT—PCR方法检测鼻咽癌相关基因（p53基因）的mRNA水平,Western检测p53蛋白表达水平,并利用CCK-8比色法检测鼻咽癌细胞的生长情况。结果BHRF1-1组细胞BHRF1—1表达量为（0．98±0．05）,高于空质粒组（0．66±0．10）及PBS组（0．65±0．12）（均P〈0．01）,BHRF1-1组、空质粒组、PBS组的细胞p53 mRNA表达量分别为（0．65±0．07）、（0．98±0．06）、（0．99±0．03）,BHRF1—1组均低于空质粒组和PBS组（均P〈0．01）;BHRF1—1组细胞内p53蛋白表达量低于空质粒组和PBS组。BHRF1—1组的细胞增殖抑制率（14．9％）高于空质粒组（11．2％）和PBS组（2．5％）（均P〈0．01）。结论EBV—miRNA—BHRF1—1能有效的调控声3基因mRNA水平及其蛋白翻译水平,并可能对鼻咽癌细胞株的增殖有一定的抑制作用。     

VEGF转染VEC促进移植皮瓣血管化的实验研究

目的探讨VEGF165基因转染血管内皮细胞促进移植皮瓣血管化的可行性,提高皮瓣存活率。方法利用脂质体介导pIRES2-EGFP/VEGF165质粒体外转染VEC。27只SD大鼠随机分为3组,转染组和内皮细胞组大鼠缺血皮瓣内分别加入1ml浓度为1×106个/亳升的含有转染质粒pIRES2-EGFP/VEGF165血管内皮细胞和未转染正常血管内皮细胞的DMEM培养基,对照组注射相同量DMEM培养基。皮瓣早期断蒂,观察皮瓣的皮瓣存活率、HE染色和CD34免疫组化染色观察血管生成情况,计算微血管密度。结果VEGF165基因转染VEC、单纯的VECC移植大鼠缺血皮瓣后,与对照组的皮瓣存活率分别为98.6%±3.9%、83.2%±3.5%、42.5%±2.1%,差异有统计学意义(p<0.05)。术后第7d时三组皮瓣中点处的毛细血管密度分别为(60.4±6.5)个/毫米2、(58.2±6.3)个/毫米2、(17.8±1.7)个/毫米2;第14d时毛细血管密度分别为(91.9±7.1)个/毫米2、(74.4±6.8)个/毫米2、(28.6±3.7)个/毫米2。结论VEGF165转染血管内皮细胞可以可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率。     

瑞舒伐他汀对人单核-巨噬细胞组织因子表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对氧化修饰低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人单核-巨噬细胞组织因子（TF）表达影响及可能机制。方法据实验要求分空白对照组、OX-LDL组、多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组。RT-PCR检测各组血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）mRNA,TFmRNA表达,ELISA检测各组TF蛋白表达。结果OX-LDL组与空白对照组比较,LOX-1mRNA、TFmRNA表达增加[（3．25156±0．15772）VS（1±0）;（2．522451±0．138967）VS（1±0）],其差异均有统计学意义（P〈0．01）。多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组与OX-LDL组比较,LOX-1mRNA、TFmRNA表达减少[（2．95139±0．157253）VS（3．25156±0．15772）、（2．877343±0．156558）VS（3．25156±0．15772）;（1．811956±0．169699）VS（2．522451±0．138967）、（1．687701．4-0．174647）vs（2．522451±0．138967）],其差异均有统计学意义（P〈0．05）。ox-LDL组与空白对照组比较,TF蛋白表达增加[（207．7233±1．154701）VS（184．8467±0．871799）],差异有统计学意义（P〈0．01）。多聚肌苷酸组、瑞舒伐他汀组与OX-LDL组比较,TF蛋白表达均减少[（197．8733±1．505003）vs（207．72334-1．154701）、（202．95674-2．722744）VS（207．7233±1．154701）],差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LOX-1可能介导OX-LDL诱导的人单核-巨噬细胞TF表达增加。瑞舒伐他汀可通过下调单核-巨噬细胞LOX．1mRNA的表达下调TFmRNA表达,从而下调TF蛋白表达。     

RNA干扰iNOS基因对颊鳞癌细胞凋亡影响的实验研究

目的研究RNA干扰iNOS基因的表达对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RNA干扰技术,通过脂质体介导,将含有iNOS特异性发夹状小RNA（short hairpin RNA,shRNA）的pGenesil-1质粒转染入颊鳞癌Bca885细胞株。观察pGenesil-1质粒载体转染率、免疫组化检测细胞中iNOS的蛋白表达的改变情况、流式细胞仪检测Bca885细胞的凋亡率。采用SPSS12．0统计软件统计分析。结果在脂质体介导下,将含iNOS特异性shRNA的质粒转染入颊鳞癌细胞后。实验组Bca885细胞中iNOS蛋白表达低于两对照组,具有统计学意义（P〈0．01）;三组细胞的凋亡率分别为12．05±0．18、3．31±0．12和2．46±0．09．实验组高于两对照组,具有统计学上意义（P〈0．01）。结论RNA干扰可以降低iNOS基因的表达,达到基因沉默的效果;沉默iNOS基因可提高Bca885细胞的凋亡．从而降低Bca885细胞的细胞增殖活性。     

乳腺癌促红细胞生成素及其受体表达和肿瘤微血管生成关系研究

目的研究乳腺癌患者Epo／Epo—R表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法对82例患者分别应用常规方法检测血红蛋白（Hb）值、用酶联免疫法检测血清Epo水平和应用免疫组化法检测Epo—R和肿瘤微血管密度（MVD），并进行相关分析。结果（1）82例肿瘤患者的Epo为（18．64±20．42）mU／ml，明显高于对照组的（8．10±4．96）mU／ml（P〈0．05）。Epo水平和Hb值之间相关分析r=-0．5259（P〈0．001）。（2）有贫血患者的Epo水平明显高于无贫血患者和对照组，而无贫血患者和对照组之间则无明显差异。（3）贫血和无贫血患者的Epo—R分别为（51．69±28．70）％和（43．47±19．84）％（P〉0．05）；贫血和无贫血患者的MVD分别为28．31±8．07和32．00±7．66（P〉0．05）。（4）Epo-R的表达与Epo水平和Hb值的高低无关；肿瘤血管的生成与Epo-R的表达和Epo水平、Hb值均不相关。结论乳腺癌患者的Epo水平明显增高，并与Hb值呈负相关；Epo-R和MVD的表达与患者有无贫血无关：肿瘤血管的生成与Epo-R的表达和Epo水平、Hb值均不相关。     

丁苯酞对帕金森病大鼠脑组织Bax、TH表达的影响

目的研究丁苯酞(3-n-butyl phthalide,NBP)对帕金森病(parkinson disease,PD)动物模型黑质Bax、TH表达的影响,以探讨NBP对帕金森病的脑保护作用。方法 2012年4—10月90只SD大鼠随机分为三组,PD组立体定向注入6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),NBP组立体定向注入6-OHDA,NBP溶液灌胃4周,直至处死;对照组立体定向注入抗坏血酸生理盐水。处死后制作快速冷冻切片用免疫组化分别检测Bax、TH阳性细胞数,用原位杂交法分别检测Bax mRNA、TH mRNA的阳性细胞数。计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果三组大鼠中正常组未见旋转大鼠,>6 r/min PD组18只,NBP组7只,NBP组比PD组显著减少(P<0.05)。免疫组化法各组都检测到了Bax、TH的阳性细胞表达,结果示NBP组术侧黑质Bax阳性神经元数量(35.1±6.4)较PD组明显下降(99.5±13.1),比较差异有统计学意义(P<0.05);NBP组术侧黑质TH阳性神经元数量(95.8±9.4)较PD组(53.6±9.5)明显升高,比较差异有统计学意义(P<0.05)。原位杂交ISH法各组都检测到了Bax mRNA、TH mRNA的阳性细胞表达,结果示NBP组术侧黑质Bax mRNA阳性神经元数量(23.7±6.3)较PD组(54.5±7.8)明显下降,比较差异有统计学意义(P<0.05);NBP组术侧黑质TH mRNA阳性神经元数量(48.8±7.5)较PD组(29.4±5.2)明显升高,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NBP能够降低Bax的表达,增加TH的表达,对PD有脑保护作用。     

VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达

目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水平的变化。结果 10、20、50 ng/μl VEGF-C处理后,细胞增殖指数分别为(1.00±0.03)、(1.25±0.05)、(1.55±0.08)、(2.13±0.08),呈剂量依赖性升高(P0.05)。细胞周期S期比率呈剂量依赖性升高(P0.05),分别为(30.91±0.09)%、(37.95±0.27)%、(45.05±0.40)%、(64.26±0.20)%;细胞凋亡率呈剂量依赖性降低(P0.05),分别为(12.4±0.3)、(11.4±0.2)、(9.6±0.15)、(5.5±0.25)。Bcl-2、cyclin D1蛋白表达呈剂量依赖性升高。结论外源性VEGF-C通过细胞内信号的传递,诱导cyclin D1的表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,来促进Hela细胞增殖;诱导Bcl-2的表达,抑制凋亡。