慢性血吸虫病孕鼠肝脏病变的计量分析

目的:了解慢性血吸虫病孕鼠肝脏的病变程度.方法:以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,在感染后100d(慢性期),雌雄小鼠交配使其受孕,在妊娠早期及分娩后取材,以图像分析仪对肝内虫卵肉芽肿进行体视学分析,同时观察孕期小鼠存活状况及虫荷.结果:各组间虫荷差异无显著性意义,但受孕组病鼠死亡明显增多,感染产后组小鼠的肝脏虫卵肉芽肿面积较感染未合笼组明显缩小(P＜0.05),其肉芽肿纤维面积也较感染早孕组及感染未合笼组显著缩小(P＜0.01).结论:妊娠期合并慢性血吸虫病使病变加重可能与免疫抑制有关.     

α干扰素治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化实验研究

目的观察IFN-α是否具有抗日本血吸虫病肝纤维化的作用及疗效.方法以日本血吸虫尾蚴感染IcR小鼠造成肝纤维化模型.10周后顿服吡喹酮杀虫治疗,继以IFN-α皮下注射治疗,并与模型对照组和0.9%氯化钠注射液治疗组比较.肝脏组织切片作苏木素-伊红、苦味酸-酸性品红染色,观察肝脏虫卵肉芽肿平均大小、胶原面积百分比及肝纤维化程度（SSS评分）.结果IFN-α治疗组肝脏虫卵肉芽肿平均大小缩小（P〈0.05）、胶原面积百分比降低（P〈0.05）、SSS评分较模型对照组下降〉2分（P〈0.05）.结论IFN-α治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化有效.     

小鼠日本血吸虫病肝纤维化肝脏CTGF的表达及意义

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染尾蚴复制小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型;RT-PCR和免疫组化分别检测小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白的表达,免疫组化方法观察各阶段肝脏α-SMA阳性细胞的表达。结果模型组10周时形成典型的肝纤维化,此时模型组小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白表达、α-SMA 细胞数达高峰,10周、14周、18周时与治疗组相比均有明显的统计学差异(P均>0.05);CTGFmRNA和蛋白表达水平与α-SMA 细胞数均呈直线相关性。结论CTGF基因和蛋白表达增高与小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成有密切关系;CTGF在小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成过程中的作用可能主要通过作用于活化的肝星状细胞来实现的。     

日本血吸虫感染对小鼠肝脏铁分布及铁蛋白表达的影响

目的 研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏铁分布及铁蛋白表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为对照组、感染6、8、10周组,每组6只。感染组经腹部皮肤接种尾蚴(20±2)只,待小鼠染虫6、8、10周时,处死小鼠留取肝脏,采用苏木精-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察小鼠肝脏病理变化,采用二氨基联苯胺(DAB)增强的普鲁士蓝(Perl’s)铁染色观察肝组织铁分布,采用免疫组织化学染色检测肝脏铁蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测小鼠肝脏铁蛋白轻链和重链mRNA的表达。结果 与对照组小鼠比较,血吸虫感染6、8、10周组小鼠肝脏颜色逐渐变深,质地逐渐变硬。HE和Masson染色显示,感染组小鼠肝组织内有虫卵沉积,围绕虫卵形成肉芽肿及纤维化,而对照组未出现虫卵肉芽肿。DAB增强的Perl’s铁染色显示,与对照组比较,感染6、8、10周组肝细胞铁染色强度降低,差异均有统计学意义(t=5.94、7.72、9.67,P均<0.05),肝血窦内有铁色素沉积,且随感染时间延长逐渐增多(t=3.89、8.59、12.50,P均<0.05),虫卵壳铁染色较强。免疫组织化...     

血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化的动态观察

目的:从形态学和血清学角度探讨血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化之间的关系.方法:用血吸虫尾蚴感染新西兰家兔,建立血吸虫病动物模型.采用石蜡切片、HE染色动态观察日本血吸虫病急性期、慢性期、晚期肝脏虫卵肉芽肿大小,放射免疫检测仪测定不同时期的血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量的变化.结果:感染第6周家兔肝脏出现虫卵肉芽肿,第12周肉芽肿缩小,周围发现成纤维细胞,至第21周时虫卵肉芽肿明显缩小,肝脏纤维化程度增高,并有纤维组织增生.同时,血清HA含量检测显示随感染时间延长,体内HA水平逐渐升高.结论:血吸虫病是一个持续进展的过程,包含虫卵肉芽肿与肝脏纤维化两大病理变化,两者间发病机制不同,肝纤维化是虫卵肉芽肿的间接延伸.     

Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。     

日本血吸虫不同感染方式对肝脏病理损害程度的影响

目的 :研究血吸虫单次感染和多次感染两种方式对宿主肝纤维化的影响。方法 :分别应用单次感染 (一次性感染尾蚴 30 0条 )和多次感染 (每次感染尾蚴 10 0条 ,共感染 3次 )两种方式 ,建立血吸虫病动物模型 ;分别于急性期、慢性期和晚期取部分家兔的肝脏组织作连续病理切片 ,测定单个虫卵肉芽肿的平均大小 ,同时检测相应时期血清中的透明质酸 (HA)和层粘连蛋白 (LN)的水平。结果 :在急性期 ,两种感染方式所形成的虫卵肉芽肿大选及血清中透明质酸和层粘连蛋白水平没有差异 (P >0 0 5 ) ;而在慢性期和晚期 ,单次感染和等量多次感染所形成的虫卵肉芽肿大小及血清中透明质酸水平有显著性差异 (P <0 0 1) ,层粘连蛋白的含量在感染的晚期有差异 (P <0 0 5 )。结论 :在感染尾蚴总量相同的情况下 ,多次感染对肝脏的损害明显比单次感染严重 ,而且更容易诱发肝纤维化。     

日本血吸虫组织蛋白酶B2在小鼠抗血吸虫再感染中的作用

目的 构建日本血吸虫组织蛋白酶B（Sjcb2）真核表达载体,检测日本血吸虫组织蛋白酶B2单独和联合吡喹酮（PZQ）在小鼠抗血吸虫再感染中的作用.方法 将60只BALB/c雌性小鼠随机均分为六组,建立日本血吸虫感染动物模型：感染组、感染攻击组、空质粒处理组、Sjcb2免疫组、吡喹酮处理组、Sjcb2联合吡喹酮处理组.Sjcb2免疫组和Sjcb2联合吡喹酮组分别在初次尾蚴感染前第21天、14天及7天接种pcDNA3.1（＋）/Sjcb2重组质粒,空质粒处理组接种pcDNA3.1（＋）空质粒.初次尾蚴感染后第六周,对吡喹酮处理组和Sjcb2联合吡喹酮处理组小鼠给予PZQ治疗.除感染组外其它各组在第八周再次进行尾蚴攻击感染.分别于第8周和第14周取各组小鼠肝脏组织做病理切片,观察虫卵肉芽肿大小;采用间接ELISA法检测血清中特异性IgE和IgG亚型（IgG1,IgG2和IgG3）;检测各组小鼠荷成虫数,计算抗血吸虫再感染率.结果 Sjcb2免疫组、联合组与其它组分别比较,小鼠荷虫数显著性减少,抗血吸虫再感染率显著升高,虫卵肉芽肿直径显著减小,IgG1水平显著下降和IgE水平显著升高（P〈0.01）.结论 Sjcb2在小鼠模型中具有抗日本血吸虫再感染作用,抗血吸虫再感染率为70.3%,抗再感染作用机制可能与特异性IgE水平升高和IgG1水平下降有关.     

维生素E对小鼠日本血吸虫性肝损害肝组织MDA、SOD及超微结构的影响

目的研究维生索E（VitE）对感染日本血吸虫小鼠肝组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性及肝细胞超微结构的影响，探讨VitE对小鼠日本血吸虫性肝损害的保护作用及其可能的机制。方法日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠构建日本血吸虫病模型，随机分成5组：正常对照组，模型组及VitE高、中、低剂量组（1、2、3组）。1、2，3组感染尾蚴同时分别给予高、巾、低剂量（150mg／kg、50mg／kg、5mg／kg）VitE，灌胃给药，每日1次共8周。于第8周末处死动物，HE及透射电镜对肝组织进行病理学检查．应用分光光度法检测肝组织MDA含量和SOD活性，并检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）水平。结果VitE抑制模型组肝脏虫卵肉芽肿反应，减小肉芽肿直径（P〈0.01），改善小鼠肝组织病理和超微结构变化；降低ALT和AST水平（P〈0．01）；降低肝组织MDA含量（P〈0.01），提高SOD活性（P〈0.01），均呈剂量效应关系。结论VitE对小鼠日本血吸虫性肝损害具有预防作用．其作用机制与VitE抑制肝脏虫卵肉芽肿和炎症反应、抗脂质过氧化作用及保护肝脏细胞免受自由基损害有关。     

藤茶提取物对血吸虫病肝纤维化的影响

目的 观察藤茶提取物对血吸虫病肝纤维化的治疗作用.方法 制备藤茶提取物,将80只小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、吡喹酮组和吡喹酮+藤茶提取物组.除正常对照组外,其余各组每只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴诱导肝纤维化模型.吡喹酮组和吡喹酮+藤茶提取物组于小鼠感染尾蚴8周后灌胃相应的药物.实验结束后取小鼠肝脏称重,计算肝脏指数;观察小鼠肝脏形态;另取固定部位肝组织做病理组织学检查.结果 血吸虫感染8周后,吡喹酮治疗组小鼠肝脏指数与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但吡喹酮+藤茶提取物组小鼠肝脏指数较模型组显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05).吡喹酮及吡喹酮+藤茶提取物组小鼠干预后肝纤维化分级及评分均较模型组降低,吡喹酮+藤茶提取物组又较吡喹酮组显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 藤茶提取物可改善血吸虫病肝脏形态及肝纤维化小鼠肝组织结构,减轻肝纤维化程度,降低血吸虫肝纤维化小鼠病理评分,对血吸虫病肝纤维化有明显的治疗作用.     

经脾脏注射血吸虫虫卵实验方法的探讨

报告应用经脾脏注射虫卵法建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型，并与自然感染模型作比较。结果表明，脾脏注射组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为１００％，其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程均与自然感区染模型相似。本实验提示经脾脏注射虫卵是一种较好的、建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的方法。     

小鼠日本血吸虫模型肝组织坏死形态学观察

建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型和自然感染模型，发现早期肝脏出现，片状或灶性凝固性坏死，后期发生纤维组织增生。提示肝组织凝固性坏死诱发肝纤维化，与虫卵肉芽肿引起的纤维化协同作用可能是血吸虫性肝硬化的又一发生机理。     

一氧化氮与血吸虫病肝损伤发病机制的关系研究

为了研究一氧化氮在血吸虫病肝损伤发病中的作用，采用Ｓ－Ｐ免疫组织化学法，观察家兔（ｎ＝４０）经皮肤感染血吸虫尾蚴后８、１２、１６、２０、２４周家兔肝诱导型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）和巨噬细胞（ＣＤ６８）的免疫组织化学表达与定位。结果显示，血吸虫病家兔肝的虫卵肉芽周围、门静脉分支管壁、肝窦壁、中央静脉壁有ｉＮＯＳ和ＣＤ６８阳性免疫反应物，肝细胞内有ｉＮＯＳ阳性免疫反应物。正常家兔肝脏ｉＮＯＳ和ＣＤ６８免疫组织化学染色均为阴性。认为一氧化氮在血吸虫肉芽形成及肝脏微循环障碍中具有重要作用     

Congenital infection of rabbits with Schistosoma japonicum and protective immunity of offspring

Background Recently congenital infection with Schistosoma japonicum (S. japonicum) has been domonstrated in pigs, rabbits, mice and dogs. We explored the rabbit as an animal model for the congenital infection of schistosomiasis japonica and assessed the effect of a congenital S. japonicum infection on the resistance of rabbit kittens to a postnatal challenge infection.Methods Sixteen pregnant New Zealand white rabbits were infected with a single dose of S. japonicum cercariae. The exposed animals were divided into three groups according to the gestation age at the time of infection. Diagnosis of prenatally acquired S. japonicum infection in the rabbit kittens was primarily based on serological tests in combination with parasitological and histopathological findings. Congenitally infected kittens were challenged percutaneously with 100 S. japonicum cercariae to assess the effect of a congenital S. japonicum infection on kitten resistance to a postnatal challenge infection.Results The overall prevalence of congenital infection in offspring of infected mothers was 20% (12/60). The congenital infection rate in group L (late gestation) was much higher than in group E (early gestation) and group M (mid-gestation) (P&lt;0.05). After a postnatal challenge infection, prenatally infected kittens had a 54.66% worm reduction rate, 41.45% egg reduction rate, and 51.76% granuloma size reduction rate compared to nave kittens.Conclusions This study demonstrates the possibility of congenital infection of S. japonicum in rabbits and the resistance of congenitally infected kittens to a postnatal challenge infection. These results have important implications not only for epidemiological investigations, but also in designing government control programs for schistosomiasis.     

血吸虫果糖二磷酸醛缩酶诱导 Th2免疫偏移的研究

目的：分析日本血吸虫感染以及虫源性糖蛋白果糖二磷酸醛缩酶（SjFBPA）刺激后小鼠脾脏细胞中白介素4（IL-4）、白细胞分化抗原 CD8a 因子表达量的动态变化，并探讨 SjFBPA 与辅助型 T 细胞（Th2）免疫应答的关系。方法血吸虫尾蚴感染 C57小鼠10只，设正常对照组。感染8周后处死小鼠，取脾脏制备淋巴细胞悬液；用藻红蛋白（PE）标记 CD8a 抗体，藻青蛋白（APC）标记 IL-4抗体进行细胞染色；流式细胞仪检测细胞因子表达量的变化。10只正常 C57小鼠处死后取脾脏制成淋巴细胞悬液，加 SjFBPA 蛋白体外刺激，按上述流程刺激方法检测细胞。结果小鼠感染血吸虫8周后脾细胞中 IL-4、CD8a 的表达量分别为（22．39±5．93）％、（11．34±2．15）％，正常对照组脾细胞中 IL-4、CD8a 的表达量分别为（1．39±0．52）％、（1．98±0．84）％，差异有统计学意义（P ＜0．01）。SjFBPA 体外刺激小鼠脾细胞的 IL-4、CD8a 的表达量分别为（14．14±1．16）％、（8．99±0．81）％，正常对照组脾细胞中 IL-4、CD8a 的表达量分别为（1．86±0．93）％、（1．69±0．56）％，差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论 SjFBPA 在血吸虫感染中具有诱导 Th2免疫偏移的作用，树突状细胞作为提呈细胞参与该免疫反应。     

日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外IL-2转录水平的实验观察

应用RT PCR方法对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL 2从mRNA转录水平进行研究 ,以探讨该细胞因子mRNA转录水平的动态变化及其在肉芽肿形成与调节过程中的作用。结果显示 ,未感染和感染 3周小鼠脾细胞均无IL 2表达 ,感染后第 5周的小鼠脾细胞出现IL 2特异性条带 ,感染后第 8周IL 2表达明显增强 ,感染后第 1 0、1 2周无论SEA或ConA都不能诱导IL 2mRNA的转录。表明IL 2表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行 ,提示IL 2可能在肉芽肿形成和调节过程中起重要作用。     

IL-6RFP 在小鼠血吸虫感染中对肝细胞的保护作用

目的：探讨鼠白介素6受体融合蛋白（mIL-6RFP）在BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型中对肝细胞的保护作用。方法通过亲和层析方法获得可阻断白介素-6（IL-6）的mIL-6RFP,经人类肝癌细胞（HepG2）IL-6刺激及阻断实验检测纤维蛋白原（fibrinogen,FGG）和结合珠蛋白（haptoglobin, HP）的 mRNA 表达变化,体外验证重组蛋白 mIL-6RFP 的生物活性。建立 BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型,于感染第24天起经尾静脉注射 mIL-6RFP,隔天注射每次100μg／只,感染第42天剖杀小鼠。HE 染色法检测小鼠肝脏肉芽肿面积,荧光定量 PCR 法检测小鼠肝组织 IL-1β、IL-13、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和趋化因子1（CXCL1）的 mRNA 表达,连续监测法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。结果 HepG2细胞实验显示 mIL-6RFP 可降低IL-6对该细胞的刺激作用,显著下调 FGG 和 HP 的表达（P＜0．05）。在小鼠感染模型中阻断 IL-6后,肝功能指标 ALT和 AST 与溶剂对照组相比均显著下降（P ＜0．05）,肉芽肿病变无显著性差异。结论在 BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型中 mIL-6RFP 可明显改善肝细胞功能,但对肉芽肿形成未见明显作用。