血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡和蛋白表达实验研究

目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠海马CA1区神经元凋亡和bcl-2及Bax蛋白表达,探讨其在VaD发病过程中的作用。方法制备VaD大鼠模型,分别在造模后第7、14、21天用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其bcl-2及Bax蛋白表达。结果模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡神经元,14d时凋亡神经元达高峰,21d时仍有大量神经元凋亡。模型组bcl-2蛋白在7和21d时表达增加,14d时表达高峰,与正常组比较差异均有显著意义(P<0.01);模型组Bax蛋白表达在7d时达高峰,14d时开始下降,与正常组比较差异仍有显著性意义(P<0.01),至21d表达与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。结论海马CA1区神经元的大量凋亡丢失,可能是脑卒中后发生VaD的病理基础;在脑卒中早期,从分子水平抑制Bax蛋白表达、促进bcl-2蛋白表达可能是阻抑神经元凋亡、避免脑卒中后VaD发病的最佳途径之一。     

瘦素对血管性痴呆大鼠认知功能的改善作用

目的 研究瘦素脑内注射对双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)所致血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能的改善作用.方法 在缺糖缺氧培养条件下,观察瘦素对体外培养的海马神经元的保护作用,以及Western Blotting检测海马神经元瘦素受体的表达.在大鼠海马区预注射瘦素的基础上,用2VO法制作VaD大鼠模型,Morris水迷宫测试瘦素治疗后认知功能的改善情况,Tunel染色测定各组大鼠海马脑组织内细胞凋亡的变化.结果 体外培养海马神经元上存在着瘦素受体的表达,在缺糖缺氧培养12h后,海马神经元出现大量的细胞凋亡,凋亡率为(72.96±6.25)%,而在瘦素预处理1μg和5μg组,细胞凋亡率分别为(46.33 ±7.85)%和(23.58±5.08)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).瘦素脑内注射的VaD大鼠,与未予治疗的VaD大鼠组相比,VaD瘦素治疗组大鼠找到平台的潜伏期缩短(P<0.01),找到平台的平均速度加快(P<0.01),与痴呆组相比,瘦素治疗组大鼠脑组织海马区凋亡细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 瘦索对大鼠体外培养和脑组织内海马神经元具有神经保护作用,脑内注射瘦素可以明显改善VaD大鼠的认知功能.     

缺血/缺氧性神经细胞凋亡与中药黄精药理作用研究进展

缺血／缺氧性脑损伤常见于脑中风、癫痫、老年性痴呆等脑疾病，其病理损害主要是缺血／缺氧所引发的损伤，即急性期导致神经元坏死及慢性期导致神经元凋亡。缺血性脑损伤时神经细胞凋亡和坏死并存，共同参与梗塞区的形成；凋亡主要位于半暗区，坏死发生于缺血中心区。抑制半暗区向缺血中心区的发展是缺血性脑血管病治疗的关键．即抑制神经细胞凋亡的发生有利于缺血性脑血管疾病的治疗。     

β淀粉样蛋白与阿尔茨海默病研究

阿尔茨海默病 (ＡＤ)是一种慢性进行性的神经系统变性病 ,其临床特点是进行性痴呆。目前研究认为 ,其发病原因是大脑皮层及脑区细胞间隙的 β淀粉样蛋白 (Ａβ) ,通过多种途径引发促进神经元细胞凋亡和细胞内多聚Ｔａｕ蛋白沉积 ,同时克隆方法研究已证实淀粉样蛋白前体基因突变或多态性与ＡＤ发病的关系极其密切。β淀粉样蛋白前体 (ＡＰＰ)是一种跨膜蛋白。越来越多的证据显示神经细胞的凋亡参与ＡＤ的发病 ,而且ＡＰＰ突变对细胞凋亡的引发起重要作用 ,其中聚集性Ａβ对神经细胞的毒性更大 ,并且其他一些致病因素都是通过Ａβ对神经元的直…     

缺血性脑损伤中原代培养神经元凋亡的观察

目的 探讨原代培养的神经元在模拟缺血性脑损伤过程中细胞凋亡的发展规律和机制。并对不同的凋亡检测方法进行比较和评价。方法 对Wistar大鼠大脑皮质神经元进行原代培养，运用流式细胞仪(FCM)、TUNEL等手段检测缺血性损伤各时间点的神经元凋亡以及Caspase-3在神经元中的表达。结果 流式细胞仪与TUNEL检测均显示：在血清剥夺和缺氧后0．5h、6h神经元的凋亡率显著增高，Caspase-3表达阳性率亦随之增高。结论 血清和氧剥夺早期由于神经元内的保护性基因反应性上调，抑制Caspase-3的激活及凋亡的进展，随着损伤时间的延长。抑制凋亡基因向促凋亡基因转换，导致神经元进一步凋亡。FCM与TUNEL二者相结合有助于更为准确地检测神经元凋亡。     

脑立轻胶囊对血管性痴呆大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响

目的研究脑立轻胶囊对血管性痴呆大鼠神经细胞凋亡的影响。方法血管性痴呆模型采用双侧颈总动脉永久性结扎制备,用TDT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测。结果脑立轻胶囊大剂量组能明显减少海马CA1区神经细胞凋亡,与模型组比较有显著差异(P<0.05),与尼麦角林组比较无统计学意义。结论脑立轻胶囊能明显抑制大鼠海马CA1区神经细胞的凋亡,这可能是脑立轻胶囊治疗血管性痴呆的主要机制之一。     

Alzheimer病神经元凋亡的Aβ级联假说

Alzheimer病(AD)是最常见的一种老年期痴呆综合征，痴呆的发生与神经元的凋亡密切相关。β淀粉样蛋白可诱导神经元凋亡，在AD的发病中起关键作用。本文对β淀粉样蛋白与AD的神经元凋亡的关系进行综述。     

补肾化痰祛瘀法对血管性痴呆大鼠认知功能的保护作用

目的研究补肾化痰祛瘀方对血管性痴呆（VaD）大鼠认知功能的改善作用。方法在缺糖缺氧培养条件下,观察补肾化痰祛瘀方血清对体外培养的海马神经元的保护作用。用双侧颈总动脉永久性结扎法（2VO）制备VaD大鼠模型,造模前予灌胃治疗,Morris水迷宫测试治疗后VaD大鼠认知功能的改善情况,TUNEL染色测定各组大鼠海马脑组织内细胞凋亡的变化。免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果在缺糖缺氧培养条件下,体外培养海马神经元出现大量的细胞凋亡,而预先加入补肾化痰祛瘀方的血清进行处理后,细胞凋亡率明显下降。补。肾化痰祛瘀方灌胃治疗的VaD大鼠,与未予治疗的VaD大鼠组相比,治疗组大鼠找到平台的潜伏期缩短（P〈0．01）,穿越平台次数增多（P〈0．01）;与痴呆组相比,补肾化痰祛瘀方治疗组大鼠脑组织海马区凋亡细胞数明显减少,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达显著增加,凋亡基因Bax蛋白表达降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论补肾化痰祛瘀方对大鼠体外培养和脑组织内海马神经元具有神经保护作用,补肾化痰祛瘀方治疗可以明显改善VaD大鼠的认知功能。     

全身亚低温对脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法 应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)常温组脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24小时达高峰，2天后开始下降，14天时仍高于假手术组；(2)亚低温组脑缺血再灌流后，凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区，数量相对较少，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组；(3)常温组脑缺血再灌流2小时后，神经细胞Caspase-3 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，24小时达高峰，2天后逐渐下降，至14天略高于假手术组；(4)亚低温组脑缺血再灌流后，神经细胞Caspase-3 mRNA的表达也主要位于缺血周围区，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血再灌流后。缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程，Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用，亚低温可能通过Caspase-3 mRNA途径抵抗脑缺血损伤。     

复方丹参方对血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡的作用

目的　检测拟血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡,研究复方丹参方对血管性痴呆患者神经细胞凋亡的作用。方法 血管性痴呆大鼠模型采用王蕊等人的方法建立,用末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测脑神经细胞凋亡。结果 　复方丹参方能减少神经细胞凋亡,与模型组(37.1±7.9)比较P<0.01。结论 复方丹参方比喜得镇更能一定程度地抑制神经细胞凋亡。     

JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用

目的:初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法:离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain,OGD/R)模型建立。随机分组:A组对照组(n=6);B组JNK抑制剂组(n=6);C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4 h后,再复氧复糖4、12、24 h,应用MTT法检测细胞凋亡。结果:成功建立OGD/R模型;脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组,但B组和C组间差异不显著。结论:JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。     

人参皂甙Rg1保护多巴胺能神经元的实验研究

帕金森病(PD)是中老年人常见的一种中枢神经系统变性疾病，其特征性病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元变性坏死。近年来许多证据显示氧化应激反应增强是导致帕金森病黑质多巴胺能神经元凋亡的主要因素。传统的帕金森病治疗包括多巴胺替代疗法、抗胆碱能药物等，近年神经元保护治疗也逐步成为新的治疗热点。人参皂甙是从祖国传统中药人参中提取的有效成分之一，已有的研究提示，人参皂甙Rg1可保护大鼠大脑皮质神经细胞，防止细胞凋亡的发生。但是，人参皂甙Rg1对多巴胺能神经元是否也有保护作用，国内外尚未见文献报道。     

机械性脑白质损伤后皮层神经元凋亡的证据及其分布特征

目的 探讨细胞凋在机构性脑白质损伤后皮层神经细胞病理变化中的作用及其分布特征。方法 雄性健康SD36只随机分为假手术组（12只）和模型组（24只），用模型组动物制作大脑皮层下横切模型。于致伤后不同时间片锴动物，用TUNEL原位末端标记和常规病理组织学方法观察损伤区及相应皮层神经细胞变化的性质和规律。结果 致伤后横切处出血，损伤组织内神经元再现坏死改变，胶质细胞增多。大脑皮层Ⅱ-Ⅴ层神经细胞多出现切缩改变。伤后12d后，相应皮层内即再现散在早期凋亡神经元，随后逐渐增多，7d后又趋减少，伤后19d皮层内仍可检出凋亡神经元。在损伤区凋亡神经元少见，可见部分胶质细胞凋亡。结论 脑白质损害时，损伤相应部位皮层神经元主要表现为凋亡。在损伤区，神经元和胶质细胞主要表现为坏死。层内凋亡神经元主要分布于第Ⅱ-Ⅴ层，其时间分布呈一单峰状曲线，凋亡峰出现在伤后第7d前后至少持续19d。     

针灸治疗血管性痴呆的实验研究进展

血管性痴呆（vascular dementia,VaD）是由缺血或出血性脑血管疾病而引起的一组以认知能力下降为主要特征的临床综合征,是发生率仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）的第二大类型痴呆,也是唯一有预防可能的一种类型的痴呆。近年,随着人口老龄化,血管性痴呆的发生率呈现明显上升的趋势。目前研究表明,针灸可通过调节细胞凋亡、神经递质缺乏、氧化应激、炎性损伤、神经血管损伤等多种机制参与血管性痴呆的治疗;研究存在的主要问题：实验研究中采用的VaD动物模型不统一,多数实验研究设计欠严谨,且样本量偏小,在今后的研究中可规范实验设计,以信号通路作为切入点,为临床治疗VaD提供确切的实验依据。     

阿尔茨海默病与血管性痴呆的临床特征比较

目的研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和血管性痴呆(vascular dementia,VaD)的临床特征,寻找鉴别诊断的有效方法.方法共纳入112名AD患者和92名VaD患者,包括在北京协和医院就诊的门诊痴呆患者和流行病学调查中的受访痴呆患者,AD患者均接受过头颅MRI检查,VaD患者都有头颅MRI或CT检查的资料.按照国际标准诊断痴呆、很可能AD和很可能VaD.比较AD和VaD患者在认知功能、行为症状、日常活动能力等方面的差异,确定临床鉴别诊断的有效指标.结果不同痴呆阶段的AD和VaD患者有着不同的临床特征,二者之间的鉴别指标随痴呆的进展而变化:轻度AD患者延迟记忆明显减退;轻度VaD患者计算力障碍更突出.鉴别中度AD和VaD患者的有效指标是学习能力和注意力.轻中度AD在理财和打电话上逊于VaD患者,VaD主要在与肢体活动有关的日常活动中表现退步.中重度VaD患者因智能和机体的双重衰退生活自理能力的急剧减退,其ADL总分明显高于同阶段AD患者(P＜0.05).重复收敛行为始终是鉴别AD和VaD患者的有效指标.结论AD和VaD具有不同的临床特征,二者间的差别是由各自的病变性质、部位和病理生理机制所决定的.     

老龄大鼠慢性脑灌注不足对海马区神经元的影响

目的　初步探讨海马CA1区神经细胞凋亡与丢失在血管性痴呆形成中的作用。方法　采用Pulsinelli四血管阻断 ( 4 vesselolclusion ,4VO)改良法建立血管性痴呆大鼠模型 ,穿梭箱系统检测大鼠的学习记忆能力。应用免疫组化法检测海马CA1区caspase 3蛋白的表达 ,TUNEL法测定神经细胞的凋亡。应用甲苯胺蓝染色计数CA1区残余大锥体细胞。结果　 4VO 3d组大鼠CA1区caspase 3蛋白的表达及TUNEL阳性细胞最多 ,随后逐渐减少 ,2周组与对照 (CO)组相比仍有非常显著差异 (P <0 0 1) ,而 4周组基本达稳定状态 ,与CO组相比无显著差异 (P >0 0 5 )。 4VO各组大鼠CA1区大锥体细胞丧失率随术后时间的延长逐渐增加 ,大鼠CA1区大锥体细胞丧失率与AAR比率呈非常显著负相关 (r =-0 979,P <0 0 1)。结论　海马CA1区神经细胞凋亡可导致大锥体细胞严重丢失 ,CA1区大锥体细胞的丢失是血管性痴呆形成的重要病理学基础之一。     

体外培养皮层神经元氧糖剥夺致细胞凋亡模型的建立

目的采用简便、有效的方法建立体外培养神经元氧糖剥夺致凋亡的模型。方法新生大鼠皮层神经元培养7d后,全量换液为不含葡萄糖的Earle’s液,并以灭菌液体石蜡封闭。MAP-2荧光染色观察神经元损伤情况,采用LDH和Tunel法检测大鼠皮层神经元大致死亡和凋亡情况。结果随着氧糖剥夺时间的延长,神经元损伤加重并发生凋亡,与对照组比较有显著差异。结论无糖Earle’s液培养并配合灭菌液体石蜡封闭,可以模拟神经元缺血缺氧,导致神经元凋亡。     

慢性脑缺血与阿尔茨海默病

当前阿尔茨海默病(AD)是痴呆的主要类型,并且是导致老年人死亡的第四大原因。关于AD的病因很多,现在认为慢性脑缺血可能为AD的病因。因为慢性脑缺血能够导致脑组织不同程度的病理损伤,其引起的β淀粉样肽的沉积、神经元的凋亡、能量代谢障碍、免疫氧化损伤可能是AD的发病机制。现对慢性脑缺血在AD发病的作用和其最终导致AD的原因进行综述。     

慢性压迫性脊髓损伤神经细胞的变化

目的：观察在慢性压迫性脊髓损伤时，脊髓的一般组织病理变化及脊髓内神经元和神经胶质细胞的凋亡情况。方法：健康家兔16只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组为手术对照组；C组为慢性压迫组。采用慢性泛影葡胺胶囊逐级压迫建立慢性脊髓压迫动物模型，造成家兔第2腰髓节段的慢性压迫。用Nissl染色法观察脊髓的一般组织病理学变化，用原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡情况。结果：C组在Nissl染色下白质中神经胶质细胞增生，以后索最明显；灰质中神经元尼氏体淡染或消失，神经元萎缩。灰质中标记细胞主要存在于Ⅰ，Ⅱ板层，压迫区明显，其相邻的首尾端次之。A,B两组的表现正常。结论：慢性压迫性脊髓损伤是导致脊髓一般组织发生病理变化及神经细胞凋亡的重要原因。     

甘氨酸对氧糖剥夺诱导大鼠神经元损伤的抗凋亡作用

目的 探讨甘氨酸对氧糖剥夺诱导神经元损伤的作用及机制。方法 采用体外培养的大鼠原代神经元建立氧糖剥夺模型,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和甘氨酸处理组,应用MTT、流式细胞术等方法检测甘氨酸对神经元活性、生存率、细胞凋亡的影响; 应用蛋白质印迹测定甘氨酸对凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Bad、Bax的影响。结果 甘氨酸能够提高大鼠原代神经元活力和存活率,减少细胞凋亡,并且能够增加抗凋亡因子Bcl-2,降低促凋亡因子Bax的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 甘氨酸对氧糖剥夺神经元有明显的保护作用,该作用可能与促进抗凋亡因子、抑制促凋亡因子释放有关。