中医药调控线粒体自噬防治慢性肾脏病的研究进展北大核心CSCD

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患病率逐年上升,已经成为高度流行的疾病,严重影响患者的生活质量,并造成家庭负担。引起慢性肾脏病的疾病很多,主要包括各种原发的以及继发的肾小球肾炎、肾小管损伤和肾血管的病变等。常规内科治疗虽在一定程度上可以缓解临床症状,但有时仍难阻止CKD的进展。中医药治疗CKD具有安全性较高,不良反应较少的特点,且临床疗效肯定,其活性成分可以通过多途径、多靶点发挥协同作用,延缓疾病进展,但其作用机制尚未完全阐明。通过回顾和研究该领域的国内外文献发现,线粒体自噬异常是不同形式肾脏疾病发病机制的共同特征。近年来,已有大量实验研究证明通过PINK1/Parkin信号通路和线粒体自噬受体途径调控线粒体自噬可延缓CKD的进展,保护肾功能。因此中医药通过相关途径调控线粒体自噬防治CKD成为近年来非常有潜力的治疗靶点。该文收集中医药通过相关途径调控线粒体自噬在防治CKD方面具有明确疗效的文献,以期为防治CKD,延缓其进入终末期肾脏病提供新靶点和新策略。     

基于PINK1-Parkin介导的线粒体自噬研究当归芍药散对AD大鼠的影响

基于PINK1-Parkin信号通路,探讨当归芍药散对链脲佐菌素(streptozocin, STZ)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)大鼠模型线粒体自噬影响的作用机制。通过双侧侧脑室注射STZ构建AD大鼠模型,实验分为正常组、模型组、当归芍药散低剂量组(12 g·kg^-1·d^-1)、当归芍药散中剂量组(24 g·kg^-1·d^-1)、当归芍药散高剂量组(36 g·kg^-1·d^-1)。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能,透射电镜和免疫荧光共定位检测线粒体自噬情况,免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1 (PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、LC3BⅠ/LC3BⅡ、p62蛋白的表达。与正常组比较,模型组大鼠学习记忆功能显著降低(P<0.01),PINK1、Parkin表达降低(P<0.05),而LC3BⅠ/LC3BⅡ、p62表达显...     

基于脾-线粒体相关理论探讨加味四君子汤对脑缺血再灌注线粒体自噬的影响

目的 探讨加味四君子汤对脑缺血再灌注线粒体自噬的干预及机理。方法 32只大鼠分为假手术组、MCAO组、脑复康组、加味四君子汤组。采用改良线栓法制备脑缺血再灌注模型。用改良神经功能缺损评分表(mNSS)进行神经功能评分,透射电镜观察线粒体特征,生化试剂盒检测线粒体膜电位、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性、超氧阴离子含量(O₂^-·),免疫印记法检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、融合蛋白2(mfn2)、自噬相关蛋白PINK1、Parkin、BNIP3、LC3Ⅱ/Ⅰ水平的变化。结果 与假手术组比较,MCAO组完整的线粒体数量减少,且大多形态肿胀或缩小,基质变淡并出现空泡化,嵴突消失,线粒体外膜不完整;与MCAO组比较,加味四君子汤组线粒体数量明显增多,受损线粒体形态仍有轻度肿胀,但外膜大致完整,嵴有断裂但嵴突未消失。与假手术组比较,MCAO组神经功能缺损评分明显升高(P<0.01),线粒体膜电位水平和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0...     

扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg·kg^-1)、扶脾柔肝方组(8.54 g·kg^-1)、扶脾方组(4.58 g·kg^-1)、柔肝方组(3.96 g·kg^-1)。采用四氯化碳腹腔注射和乙醇灌胃复制HF大鼠模型,灌胃给药4周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);HE、Masson染色观察病理变化情况;电镜观察大鼠肝组织超微结构;Western Blot和qRT-PCR方法检测大鼠肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的HF程度明显,胶原容积分数明显增加(P<0.01),电镜发现自噬小体增多,线粒体结构损害,大鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达上调(P<...     

从阴阳自和角度探讨灰树花多糖对CIF模型线粒体自噬蛋白PINK1和Parkin的调节效应

目的:探讨灰树花多糖调节化疗相关性疲劳(CIF)模型骨骼肌线粒体异常的机制。方法:将60只6～8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、灰树花多糖低剂量组(5 mg·kg~(-1))和灰树花多糖高剂量组(10 mg·kg~(-1)),每组15只。将除空白组以外的小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-Fu,40 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续5 d,同时灰树花多糖低、高剂量组分别给予不同剂量灰树花多糖灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,期间测量体质量及抓力。第13天处死动物取腓肠肌,测SOD和MDA含量,透射电镜观察腓肠肌线粒体形态,Western Blot法检测线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达情况。结果:与空白组相比,模型组抓力显著下降(P0.05),SOD显著降低(P0.01),MDA显著升高(P0.01),灰树花多糖组抓力显著高于模型组(P0.05),灰树花多糖高剂量组SOD显著高于模型组(P0.05),灰树花多糖组MDA显著低于模型组(均P0.01)。电镜结果显示模型组骨骼肌线粒体肿胀变形,且有大量空泡变性,线粒体内嵴排列紊乱或不清晰,灰树花多糖组骨骼肌肌节仍有部分排列紊乱或断裂现象,但可见较多自噬的线粒体。Western Blot结果显示模型组线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达显著下降(P0.01),灰树花多糖可显著增加PINK1和Parkin的表达(P0.01)。结论:灰树花多糖可以改善CIF骨骼肌SOD与MDA失衡,增强线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的表达,促进线粒体自噬。     

基于中医卫气与经络之气理论探讨重症肌无力病机与治则

经络之气即神气,基于中医卫气与神气理论,笔者认为重症肌无力病机在于大气亏虚（以卫气为主）、神气失养及大气郁滞（以卫气郁滞为主）、神气不通,即卫气虚滞、神气不达,治当以调补卫气,通络达神。“调”即调节,即是要调畅卫气的气机,卫气郁滞者,需排除阻碍卫气运行的障碍,如内舍于脏腑经络的湿热、痰湿、滞气、瘀血或其他内外邪气;“补”即补益卫气,其方法主要有补益肺气、脾气、肾气3种。卫气亏虚重在于补,辅之以调;卫气郁滞重用调法,辅以补法,卫气虚滞并重者则调补结合。卫气得补得调,神气得以温养护卫。久病入络,重症肌无力多有络脉瘀滞之象,为加强通络之力,临床可选用一些擅入络脉药物协助通络,使神气达于肌肉,肌肉则能动作。     

联合microRNA测序及体外实验探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制*

目的：探究miR-15b介导PINK1/Parkin线粒体自噬通道在心力衰竭过程中的作用机制,寻找防治心衰的新靶点。方法：通过高通量测序检测心衰患者与健康志愿者体内表达差异micro RNA;体外实验培养HL-1心肌细胞,通过Ang II诱导心肌细胞损伤模型,采用细胞转染技术过表达和抑制miR-15b水平,利用q RT-PCR检测miR-15b转染效能及在各组的表达水平;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与PINK1靶标关系;运用Western Blot检测自噬蛋白Beclin-1、LC3B及线粒体自噬通道蛋白PINK1、Parkin等表达水平;运用免疫荧光法检测心肌细胞PINK1、Parkin蛋白表达情况。结果：心衰患者和健康志愿者外周血中micro RNA表达存在明显差异,其中心衰患者外周血清miR-15b水平上调明显[log2(Fold＿change)>1; P<0.01],通过对miR-15b靶基因进行预测,发现PINK1是其靶标,并通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定miR-15b与PINK1之间的靶向关系。细胞实验中,与空白组相比,模型组miR-15b...     

基于AMPK、p38MAPK及COX Ⅳ探讨脾主肌肉与重症肌无力的关系

重症肌无力是一种难治性的自身免疫性疾病,其发病机制尚未明确。该病属于中医"痿证"范畴,临床治法以健脾益气为主。AMPK和p38MAPK信号通路能调节肌肉PGC-1α的表达,COX Ⅳ是线粒体氧化磷酸化过程中的关键酶,三者均与线粒体能量代谢密切相关。研究表明多种神经肌肉病均存在线粒体能量代谢异常,故文章从线粒体能量代谢相关信号通路AMPK、p38MAPK及COX Ⅳ入手,进一步探讨脾主肌肉与重症肌无力的关系。     

何首乌苷对大脑中动脉栓塞再灌注模型大鼠皮层线粒体自噬的调控作用及神经保护机制

目的 研究何首乌苷（2,3,5,4′-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-O-glucoside,THSG）在脑缺血再灌注（cerebralischemia/reperfusion,CI/R）中对大鼠皮层神经元的保护作用。方法 采用线栓法建立大鼠短暂性大脑中动脉栓塞再灌注（transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,tMCAO/R）模型。雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和THSG低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。采用Longa 5分法评估神经功能缺损情况; TTC染色检测大鼠脑梗死体积百分比;苏木素-伊红（HE）染色检测神经元结构; Nissl染色检测Nissl小体数量; Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、PTEN诱导的激酶1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1）、Parkin、微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、p62的蛋白表达;透射电镜观察皮层神经元线粒体自噬情况;免疫荧光检测神经元Parkin、LC3的表达。结果 THSG显著降低了MCAO/R大鼠脑梗死体积百分比和神经功能缺损评分（P＜0.05、0.001）,降低了MCAO/R大鼠皮层神经元结构损伤和Nissl小体丢失的现象,下调了皮层区cleaved Caspase-3、Bax、p62蛋白表达（P＜0.05、0.01、0.001）,上调了皮层区Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达（P＜0.01）,促进皮层神经元中自噬体的数量增加以及PINK1、Parkin蛋白表达（P＜0.05、0.001）。结论 THSG能显著改善MCAO/R大鼠皮层神经元损伤,其神经保护机制与促进PINK1/Parkin依赖性线粒体自噬途径有关。     

细胞自噬与中医“阴阳”及“气”理论相关性探讨

<正>自噬是通过膜结构包裹需降解物形成自噬体,与溶酶体融合以降解自噬体内物质,降解产物可作为新合成蛋白质和细胞器的原料,对维持细胞内稳定起着重要作用[1],然而过度自噬则可引起细胞死亡,即"自噬性细胞死亡",也称为Ⅱ型程序化细胞死亡。自噬通过什么机制在"促进生存"和"诱导死亡"间切换,目前尚不完全明了,但可能与细胞代谢失衡、消耗过度有关[2]。其蕴含着中医阴阳失衡的病机学内涵。李秀惠等[3]认为细胞自噬可能是阴阳平衡的微观基础。     

基于PINK1/Parkin通路探讨小续命汤调控急性脑缺血再灌注后线粒体自噬的分子机制及神经细胞凋亡的影响

目的:探讨小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注后线粒体自噬中PINK1/Parkin通路及神经细胞凋亡的影响.方法:将120只大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤组、小续命汤+线粒体自噬抑制剂组.采用线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,栓塞1h后恢复灌注24 h,再灌注24h后各组均选取20只.各组大鼠均于造...     

中药单体治疗AD线粒体自噬的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种以思维和个人日常活动的独立性逐渐下降为主要特征的神经退行性疾病,它也是痴呆的主要类型。最新的研究发现,线粒体自噬与AD的发病密切相关,同时多种中药有效成分对线粒体自噬参与的AD发生、发展过程有较好的治疗作用。本文总结了PINK1-Parkin通路、ROS和NAD⁺介导的线粒体自噬在AD发病过程中所体现的关键性作用,并详尽阐述了小檗碱、穿心莲内酯、β-细辛醚等多种中药单体从多靶点、多角度保护线粒体自噬功能受损防治AD的研究进展。     

左、右归丸干预PINK1/Parkin信号通路调控绝经后骨质疏松症自噬的机制

目的：观察左、右归丸对绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠骨髓组织磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）诱导激酶1(PINK1)/Parkin信号通路介导自噬的影响,以此探索左、右归丸防治PMOP的机制。方法：将100只2月龄未生育雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、左归丸组、右归丸组和补佳乐组,每组20只。除假手术组,其余组均摘除双侧卵巢,连续给药12周后取材,检测骨密度（BMD）、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）、血清骨钙素（BGP）含量以及PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达等指标。结果：与假手术组比较,模型组BMD、BV/TV、Tb.Th显著降低（P<0.01）,Tb.Sp显著升高（P<0.01）,血清BGP含量显著增加（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达均显著上调（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著下调（P<0.01）。与模型组比较,各给药组BMD、BV/TV、Tb.Th显著升高（P<0.05,P<0.01）,Tb.S...     

基于脾肾亏虚相关研究探讨重症肌无力的治疗

本文基于中医、实验等研究脾肾亏虚的相关性探讨重症肌无力治疗的中西医结合理论基础.中医认为,重症肌无力在中医临床多以虚证辨证而治,与脾肾关系最为密切.实验证明,通过补脾健肾法可改变脾肾亏虚型动物模型或患者的ATP、肌糖原、脂肪含量以及骨骼肌细胞缺氧及线粒体结构等更好的协调免疫应答改善脾肾亏虚症状.     

从线粒体生物合成及其调控信号通路探讨脾虚与重症肌无力的相关性

重症肌无力属于中医的"痿证",以脾虚为基本病机,脾虚可出现线粒体结构和功能异常。重症肌无力发病机制除由免疫介导外,线粒体结构和功能障碍引起的肌细胞损伤机制亦起着重要作用。PGC-1α是调控线粒体生物合成信号通路中最关键的调控因子,以PGC-1α为核心的信号通路异常可能是重症肌无力发病的一个重要原因,因此有必要从PGC-1α及其调控信号通路入手探讨脾虚与重症肌无力的相关性。     

基于痰瘀生风理论探讨动脉粥样硬化与线粒体自噬的相关性

近年来从线粒体自噬角度治疗动脉粥样硬化越来越受到重视。中医学认为动脉粥样硬化的病理变化属于本虚标实,与痰瘀生风理论密切相关。线粒体自噬可清除受损的线粒体、促进线粒体更新,就如中医搜风祛痰治法。从中医痰瘀生风理论出发,探讨线粒体自噬与动脉粥样硬化的关系,为临床治疗动脉粥样硬化性疾病提供理论基础。     

肉桂醛通过PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬促进糖尿病大鼠创面愈合机制

目的 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链尿佐菌素（STZ）及手术制备全层皮肤缺损的方法制备糖尿病大鼠创面模型,观察肉桂醛对糖尿病大鼠创面愈合情况的影响,并基于PTEN诱导假定激酶（PINK）1/帕金森病蛋白（Parkin）信号通路介导的线粒体自噬探讨肉桂醛对糖尿病大鼠创面的治疗机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白组12只,糖尿病组36只,糖尿病组随机分为模型组、肉桂醛组和贝复新组,每组12只,空白组与模型组创面常规消毒后予生理盐水,肉桂醛组创面局部外敷含4 μmol·L^-1肉桂醛的聚乙二醇400（PEG 400）凝胶,贝复新组创面外敷贝复新凝胶,每日换药1次。观察各组创面愈合率,取干预后7、14 d大鼠创面组织,苏木素-伊红（HE）染色观察局部组织病理变化,免疫组化（IHC）检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、胶原纤维的表达情况,免疫荧光（IF）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白和mRNA的表达情况。结果 腹腔注射STZ后,与空白组比较,糖尿病组大鼠随机血糖值显著升高（P<0.01）,均高于16.7 mmol·L^-1,且在造模后一段时间持续保持高血糖状态。与空白组比较,模型组大鼠创面肉芽组织生长、愈合情况较差,创面愈合率显著降低（P<0.01）;干预后7 d,空白组创面已有鳞状上皮覆盖,与空白组比较,模型组大鼠创面仅创缘少量结痂,创面中大量炎细胞浸润,组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）;干预后14 d,空白组创面肉芽组织成熟,愈合良好,与空白组比较,模型组创面炎细胞浸润和红细胞渗出尚未完全消退,组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肉桂醛组和贝复新组大鼠创面愈合情况较好,创面愈合率显著升高（P<0.01）,干预后7 d组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin及LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）,干预后14 d组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论 肉桂醛能促进糖尿病创面愈合,上调创面愈合率,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,增加VEGF、胶原纤维蛋白的水平,其机制可能是通过调节PINK1/Parkin信号通路表达,激活线粒体自噬,抑制炎症反应,增加血管新生和胶原合成,从而达到促进糖尿病大鼠创面愈合的目的。     

基于线粒体融合分裂探析脾胃失调与重症肌无力的关系

重症肌无力为难治性疾病,属中医"痿证"范畴,调理脾胃是中医临床常用治法。肌肉运动无力为其最突出表现,实质上是骨骼肌的收缩与舒张失常。骨骼肌的收缩和舒张是一种耗能运动,需要线粒体参与供能。研究发现,重症肌无力患者肌肉组织存在线粒体形态结构异常[1],而重症肌无力模型大鼠也存在骨骼肌线粒体结构与功能的改变[2]。线粒体融合分裂不仅在维持线粒体自身的结构功能方面扮演着重要角色,还与神经、骨骼肌病变等密切相关,故有必要从线粒体融合分裂角度,进一步探讨脾胃失调与重症肌无力的相关性。     

基于PINK1/Parkin信号通路探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性髓系白血病Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用

目的：探讨芪连益髓清毒颗粒（QLYS）通过PINK1/Parkin信号通路对急性髓系白血病（AML）Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用。方法：体外培养Molm-13细胞株,大鼠灌胃QLYS后制备含药血清。采用空白血清和不同浓度的QLYS含药血清分别干预Molm-13细胞,观察各组细胞的增殖情况、ATP水平、ROS水平,PINK1、Parkin、P62和LC3的变化水平。此外,采用MDC法检测自噬荧光强度,并用自噬抑制剂3-MA进行反向验证。结果：QLYS含药血清可显著抑制Molm-13细胞增殖（P<0.05,P<0.01）,提高ROS水平和MDC荧光强度（P<0.01,P<0.05）,降低ATP水平（P<0.05,P<0.01）,增强PINK1、Parkin和LC3表达（P<0.05,P<0.01）,降低P62表达（P<0.01）,3-MA可降低QLYS含药血清诱导的自噬水平（P<0.05）。结论：QLYS可通过激活PINK1/Parkin信号通路促进Molm-13细胞线粒体自噬。     

从脾论治冠心病线粒体自噬调控铁死亡机制研究

“从脾论治”冠心病理论最早可见于《黄帝内经》,动脉粥样硬化的发生主要源于脾脏功能不足,无法有效地输送食物化生的精微营养,养分积聚而为痰浊,痰瘀交阻于血脉,造成血管阻塞。铁死亡是一个特定的细胞凋亡过程,与氧化应激有着紧密联系,其特征是在其中产生了活性氧(ROS)和脂质过氧化。线粒体作为一种重要的生物分子,能够影响铁元素、氧化应激、脂质和能量代谢等因素来调控铁死亡的进程,同时也能起到激活或抑制的作用。线粒体自噬-铁死亡机制共同影响了冠状动脉粥样硬化进程。此文探索线粒体自噬-铁死亡机制在脾虚痰瘀所致脉道不利中的作用,为临床治疗冠心病提供新思路。