薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的三七总皂苷调控自噬抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)能否通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬从而减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤机制。方法将H9c2细胞分为正常组、缺氧/复氧(A/R)组、A/R+PNS组、A/R+PNS+雷帕霉素(Rapa)组、A/R+Rapa组、A/R+羟氯喹(HCQ)组、A/R+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。通过缺氧6 h、复氧2 h建立H9c2细胞A/R模型。CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞损伤,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白PI3K、Akt、m TOR的表达,荧光法观察细胞自噬流。结果与正常组比较,A/R组H9c2细胞存活率明显下降,细胞损伤率明显升高(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P0.05),自噬体和自噬溶酶体数量显著增加,自噬流显著增强(P0.05);与A/R组比较,用PNS预处理后,H9c2细胞存活率明显上升,细胞损伤率明显降低(P0.05),自噬相关蛋白Atg5、Beclin-1表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P0.05),p62蛋白表达明显升高,与自噬抑制剂HCQ、3-MA作用相似,荧光结果显示,PNS对自噬流有明显抑制作用(P0.05);PNS预处理后p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 PNS能有效减轻H9c2细胞A/R损伤,其机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬流相关。     

山楂酸通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌CNE2细胞自噬研究

目的研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强(P<0.05);山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

甘草查尔酮A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬的研究

研究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对肾癌细胞自噬的影响,并探讨其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路的调控作用。实验以肾癌细胞系786-O,769-P细胞为研究对象,采用MTT检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞自噬状态;Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路的变化,以及抑制该通路后检测诱导自噬的变化。结果表明,LCA抑制细胞增殖呈时间-浓度依赖性,同时剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;LCA能够诱导细胞内酸性自噬泡和自噬小体的增多;LCA可明显诱导LC3-Ⅱ,beclin 1,Atg5蛋白表达,降低p62蛋白表达,同时减少Akt,m TOR的磷酸化。使用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)以及m TOR抑制剂(rapamycin,Rap)可促进LCA诱导自噬的发生。以上结果提示,LCA通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导肾癌细胞发生自噬。     

黄芪多糖抑制缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡与自噬机制研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬抑制作用的相关机制。方法:分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后制备H/R损伤细胞模型,设正常对照组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80 μmol/ml)组,各组于造模前30 min给药处理。复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡水平,Western blot法检测p-Akt、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、p-mTOR、Beclin1、LC3、P62蛋白表达。结果:与H/R组比较,APS中、高剂量细胞增殖抑制率和凋亡率显著降低(P<0.01),p-Akt、p-mTOR、Bcl-2表达量显著升高而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著升高、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.01)。结论:APS可能通过激活Akt/mTOR通路调控凋亡和自噬相关蛋白表达,对H/R所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬起到抑制作用。     

白藜芦醇联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞的作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,以人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP为研究对象,探讨白藜芦醇联合顺铂对A549/DDP细胞增殖、凋亡、自噬的影响。方法以CCK-8法检测白藜芦醇、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响,并通过Isobologram分析两药联用的协同作用;将A549/DDP细胞分为空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组、白藜芦醇+顺铂组;以Hoechst 33342染色和Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡率;免疫荧光实验检测自噬标志物LC3的表达;Western Blot实验检测各组细胞中凋亡相关蛋白、自噬标志物蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果与顺铂组比较,白藜芦醇与顺铂两药联用可以明显降低顺铂对A549/DDP细胞的IC50,Isobologram分析结果也表明二者联用对A549/DDP细胞具有协同抑制作用;与空白对照组、白藜芦醇组、顺铂组3组比较,白藜芦醇和顺铂联用可以明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P0.01),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P0.01),上调凋亡蛋白Bax、Caspase 3表达水平(P0.01),及增加自噬标志物蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平(P0.01),降低p62表达水平(P0.01);此外Western Bolt实验结果表明两药联用可以明显下调p-PI3K、p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平(P0.01)。结论白藜芦醇与顺铂联用可通过PI3K/AKT/mTOR通路,促进A549/DDP细胞自噬诱导细胞凋亡。     

马钱子碱通过调控PI3K/Akt/mTOR通路对肺腺癌细胞的抑制作用研究

目的:探究马钱子碱对非小细胞肺癌的影响及其作用机制.方法:采用CCK-8法和划痕试验法研究马钱子碱抑制A549细胞的增殖、迁移能力,Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路相关的蛋白表达,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.结果:CCK-8试验结果显示,给药组对A549细胞增殖有明显抑制作用;划痕试验显示,与空白组比较,给药组细胞迁移率明显下降(P＜0.01);Western blot结果显示,给药干预后可显著下调p-Akt、p-mTOR的表达(P＜0.001),同时给药组的mTOR、Akt、PI3K蛋白表达下调(P＜0.05);ELISA试验结果显示,采用马钱子碱进行干预后,细胞上清IL-6和TNF-α含量均显著升高(P＜0.01或P＜0.001).结论:马钱子碱可有效抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移,可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路而起作用,并通过调节TNF-α含量来达到抗肿瘤的作用.     

养阴化瘀解毒方通过PI3K/Akt信号通路调控低氧环境下结肠癌细胞的自噬和凋亡

目的：观察不同氧浓度环境对结肠癌细胞增殖、自噬的影响，并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨养阴化瘀解毒方在低氧环境下对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法：HCT-116细胞分为常氧组、1%低氧组、5%低氧组，通过细胞增殖与毒性检测（MTS）法检测细胞存活率，单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察不同氧浓度下细胞自噬荧光表达情况；在5%低氧微环境下用养阴化瘀解毒方干预HCT-116细胞，分为正常组、空白血清组、养阴化瘀解毒方组（养阴化瘀解毒方含药血清5%、15%、25%）；通过MTS法计算各组细胞的抑制率；单丹磺酰尸胺（MDC）染色检测各组自噬细胞率的变化；利用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）流式细胞术检测各组细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同组自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、酵母Atg6同源物（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP-3)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋...     

苦豆碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控前列腺癌细胞自噬与凋亡

目的：探讨苦豆碱对前列腺癌PC3、LNCaP细胞的抑制作用及其可能机制。方法：采用不同浓度(0、25、50、100、200、400、800、1 600μmol)苦豆碱处理前列腺癌PC3、LNCaP细胞。CCK-8法及克隆形成实验检测PC3、LNCaP细胞增殖活性;光学显微镜观察细胞形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅱ表达;Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin 1、P62及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达。结果：CCK-8及克隆形成实验结果提示苦豆碱以浓度依赖性抑制PC3、LNCaP细胞活力,与空白对照组(0.1%DMSO)比较,100、200μmol苦豆碱处理后的PC3、LNCaP细胞形态发生明显变化,流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高,免疫荧光染色结果显示PC3和LNCaP细胞胞质LC3Ⅱ绿色荧光点状表达数量增多,自噬加强,Western Blot结果显示凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低;自噬相关蛋白Beclin 1表达及LC3Ⅱ/LC...     

甘草查尔酮A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬的研究北大核心CSCD

研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对肾癌细胞自噬的影响,并探讨其对磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）信号通路的调控作用。实验以肾癌细胞系786-O,769-P细胞为研究对象,采用MTT检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;吖啶橙（acridine orange,AO）染色观察细胞自噬状态;Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路的变化,以及抑制该通路后检测诱导自噬的变化。结果表明,LCA抑制细胞增殖呈时间-浓度依赖性,同时剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;LCA能够诱导细胞内酸性自噬泡和自噬小体的增多;LCA可明显诱导LC3-Ⅱ,beclin 1,Atg5蛋白表达,降低p62蛋白表达,同时减少Akt,m TOR的磷酸化。使用PI3K/Akt抑制剂（LY294002）以及m TOR抑制剂（rapamycin,Rap）可促进LCA诱导自噬的发生。以上结果提示,LCA通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导肾癌细胞发生自噬。     

麻芍平喘汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制气道上皮细胞自噬

目的：探讨麻芍平喘汤（MSPC）通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对脂多糖（LPS）诱导的人支气管气道上皮样细胞（16HBE）自噬的影响。方法：选用人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测LPS诱导的16HBE活性影响和麻芍平喘含药血清对16HBE细胞活性影响;以CCK-8法筛选出的适宜条件的LPS诱导16HBE细胞,并测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量鉴定模型成立,制备麻芍平喘汤含药血清作用于LPS诱导的16HBE,将细胞分为正常组、LPS组、LPS+MSPC组、LY294002+LPS组、LY294002+LPS+MSPC组。透射电镜观察细胞的自噬囊泡和超微结构的变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测5组炎症因子白细胞介素（IL）-5、IL-6、TNF-α、IL-10的表达水平。结果：...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨炙甘草汤抗大鼠MIRI致室速和室颤的作用机制

目的:通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨炙甘草汤干预心肌缺血再灌注损伤(MIRI)致心律失常(室速和室颤)的作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,炙甘草汤低、中、高剂量组(11.43,22.86,45.72 g·kg~(-1)),稳心颗粒组(2.43 g·kg~(-1)),连续给药干预10 d。末次给药2 h,采用结扎冠状动脉左前降支法制备大鼠MIRI模型,记录心电图的变化。造模成功后采集血液及心脏组织,检测血清中肌酸肌酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)及丙氨酸氨基转移酶(AST)的含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌肌钙蛋白(CtnI)的含量;免疫组化法检测心肌PI3K,Akt,mTOR的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC-3),自噬标志物Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达及磷酸化p-PI3K,p-Akt,p-mTOR的水平。结果:模型组大鼠100%发生室速,91.67%发生室颤;与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,AST以及CtnI的含量显著升高(P0.01),心肌组织中PI3K,Akt,mTOR表达显著升高(P0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Beclin1的相对表达量显著升高(P0.01),p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR显著降低(P0.01);与模型组比较,炙甘草汤高剂量组室速、室颤发生率显著降低(P0.01),较其他给药组持续时间短(P0.01);炙甘草汤高剂量组CK,LDH,AST水平及CtnI含量显著降低(P0.01);炙甘草汤给药组的PI3K,Akt,mTOR的表达随剂量的增加而显著降低(P0.01);LC-3,Beclin1的表达随炙甘草汤各剂量组的增加有不同程度地下降(P0.01),而PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达比值明显升高(P0.05,P0.01)。结论:炙甘草汤预处理能使异常升高的心肌酶CK,LDH,AST,CtnI降低,抑制细胞的过度自噬,上调PI3K,Akt和mTOR的表达,说明炙甘草汤抗MIRI致心律失常的作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

红景天苷联合顺铂对人胃癌HGC-27细胞生物学功能的抑制研究

目的：探讨红景天苷联合顺铂通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路对人胃癌HGC-27细胞的生物学功能的抑制作用及其机制。方法：选取人胃癌细胞株HGC-27,随机分为空白组、红景天苷组(40μmol/L红景天苷)、顺铂组(10μmol/L顺铂)、联合组(40μmol/L红景天苷+10μmol/L顺铂)。采用四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用实时聚合酶链反应检测PI3K、Akt、mTOR mRNA表达情况,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K、Akt、磷酸化Akt(phospho-Akt, p-Akt)、mTOR、磷酸化mTOR(phospho-mTOR,p-mTOR)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(B-celllymphoma-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bc...     

葛根素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其分子机制研究

[目的] 探索葛根素（Puerarin）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及其可能的分子机制。[方法] 以二甲基亚砜（DMSO，空白组）、葛根素（50、100、200 μg/mL）、顺铂20 μg/mL分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞。48 h后，CCK-8法检测细胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平，吖啶橙染色法观察细胞自噬状况，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、激活型半胱氨酸蛋白酶（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、酵母ATG6同源物（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达。[结果] 与空白组比较，葛根素100、200 μg/mL组和顺铂20 μg/mL组HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.01），p-Akt、p-mTOR、bcl-2表达明显下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-I、LC3-Ⅱ表达明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化（p-Akt/Akt比值）降低且Bax/bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.01）。与顺铂20 μg/mL组比较，葛根素200 μg/mL组细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高（P<0.05或P<0.01），自噬溶酶体数量明显增多（P<0.05），p-Akt、p-mTOR表达下调而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅱ明显上调（P<0.05或P<0.01），Akt磷酸化降低且Bax/Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-I比值升高（P<0.01）。[结论] 葛根素具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与自噬的作用，该作用具有一定的剂量依赖性；抑制Akt/mTOR/Beclin1通路进而诱导促凋亡、促自噬相关蛋白表达和活化可能是其重要的分子机制。     

基于Akt/mTOR信号通路探讨洋地黄毒苷调控甲状腺滤泡上皮细胞自噬与凋亡的机制

目的 探究洋地黄毒苷对脂多糖刺激下的人甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-roi3-1凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法 (1)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷低剂量组、脂多糖+洋地黄毒苷中剂量组及脂多糖+洋地黄毒苷高剂量组,各组进行对应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色观察各组细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin 1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70S6K蛋白表达情况。(2)将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷组、脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组,各组进行对应处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR及p70S6K蛋白表达情况。结果 (1...     

萜类化合物Telekin通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导HGC-27细胞自噬

目的:研究从天名精中分离得到的萜类化合物Telekin诱导的胃癌细胞HGC-27自噬并探讨其分子作用机制。方法:MTT法研究Telekin对不同肿瘤细胞的细胞毒活性;透射电镜观察Telekin诱导的HGC-27细胞自噬;用mRFP-GFP-LC3点状聚集物的形成,评价HGC-27细胞内自噬流的变化;MTT法研究用不同自噬抑制剂氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)和mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)预处理时,Telekin对HGC-27细胞的细胞毒活性,研究自噬与细胞死亡的关系。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin1、p-Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白的表达。结果:MTT实验结果表明Telekin对胃癌细胞HGC-27具有较好的细胞毒活性和一定的选择性;透射电镜和激光共聚焦显微镜观察到Telekin诱导HGC-27细胞发生了明显的自噬和显著的自噬流变化;用Rapamycin预处理时增强了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值由22.78μM降为14.4μM。用3-MA和CQ预处理后降低了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值从22.78μM增加为30.06μM和29.46μM,说明自噬促进了细胞死亡;Western blot结果显示Telekin降低了p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达,增强了p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达,而对PI3K、Akt、mTOR、ULK1、Beclin1总蛋白没有明显影响。结论:Telekin通过降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达水平,增强p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平,来诱导HGC-27细胞发生自噬,从而促进细胞死亡。     

丹参酮ⅡA调控PI3K/Akt/mTOR通路对高脂血症大鼠肝脏自噬的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮Ⅱ改善高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法:30只SPF级,健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。正常组每日给予普通大鼠饲料喂饲;模型组、治疗组予高脂饲料喂饲。造模4周后,治疗组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射;正常组、模型组予等体积生理盐水腹腔注射。用药8周后,全自动生化分析仪检测大鼠血脂情况,HE、油红O染色观察肝脏组织形态学变化,Western blot技术检测PI3K、p-Akt、p-mTOR及Beclin1蛋白表达。Real time-PCR技术检测Beclin1 mRNA水平。结果:与正常相比,模型组TG、TC和LDL-C水平升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01);与模型组相比,治疗组TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均无明显改变(P>0.05)。形态学结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠肝脏脂肪空泡与脂质沉积减少。Western blot结果显示,与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平上调,Beclin1蛋白表达水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组pAkt、p-mTOR蛋白表达水平下调,Beclin1蛋白表达水平上调(P<0.01),PI3K蛋白表达水平呈下调趋势。Real time-PCR结果显示:与正常组相比,模型组Beclin1 mRNA水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组Beclin1mRNA水平上调(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路,增强高脂血症大鼠肝脏自噬水平,减少肝脏脂质沉积。     

红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的机制研究

目的研究红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用及其作用机制。方法将MDA-MB-435细胞分为对照组和红花多糖0.5、1.0 mg/mL组。MTT法及流式检测仪分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞生长及凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting法分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组比较,红花多糖0.5 mg/mL组MDA-MB-435细胞抑制率为(21.52±2.43)%,红花多糖1.0 mg/mL组细胞抑制率为(27.73±3.75)%,显著高于红花多糖0.5 mg/m L组(P0.05);与对照组比较,红花多糖能够显著提高MDA-MB-435细胞凋亡率(P0.01),且呈剂量依赖性。RT-PCR及Western blotting实验结果显示,与对照组比较,红花多糖能够使MDA-MB-435细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05、0.01)。结论红花多糖能有效抑制MDA-MB-435细胞的生长,促进其凋亡,作用可能是通过对PI3K/Akt/mTOR通路的阻断实现的。     

透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞H3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响,探讨透骨草提取物对SKOV-3细胞作用的分子机制.方法：免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达的影响.结果：37.8 μg/mL透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白表达明显低于与对照组（P＜0.05）,表明透骨草提取物可下调SK-OV-3细胞PI3k/Akt/mTOR蛋白的表达.结论：透骨草提取物可能通过PI3k/Akt/mTOR途径抑制SK-OV-3细胞增殖.     

氧化苦参碱通过 PTEN/PI3K/Akt/mTOR 通路对人膀胱癌 T24 细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨氧化苦参碱能否通过第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶向基因(Phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten/phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PTEN/PI3K/Akt/mTOR)通路对人膀胱癌T24细胞的增殖、凋亡产生影响。方法:T24细胞复苏传代后与不同剂量氧化苦参碱共培养,MTT法检测不同剂量氧化苦参碱对T24细胞增殖的影响,流式细胞仪检测氧化苦参碱对T24细胞凋亡的影响,Hoechst光镜观察氧化苦参碱对T24细胞核形态的影响,Western blot检测氧化苦参碱对T24细胞PI3K、Akt、mTOR、PTEN蛋白表达的影响。结果:与0μmol/L组比较,氧化苦参碱各剂量组T24细胞的增殖率下降,凋亡率升高,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降,PTEN蛋白表达上升,且在一定范围内存在剂量依赖性(P 0.05)。结论:氧化苦参碱可能通过PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路抑制T24细胞的增殖,促进其凋亡。