miR-33a-5p通过靶向作用于S1PR1抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的初步探讨miR-33a-5p和鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)在人乳腺癌细胞中的表达水平,确认二者的潜在靶向关系并观察miR-33a-5p及S1PR1的表达调控对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100及4种乳腺癌细胞中miR-33a-5p、S1PR1的相对表达水平并分析二者相关性;生物信息学方法及双荧光素酶报告基因分别预测和鉴定miR-33a-5p与S1PR1基因的靶向关系,并检测miR-33a-5p mimics转染MDA-MB-231细胞后S1PR1蛋白的表达。后将细胞实验分5组:miR-33a-5p对照组(miRNC)、miR-33a-5p模拟物组(miR-33a-5p mimics)、S1PR1空载体组(pLV-NC)、S1PR1过表达组(pLV-S1PR1)以及miR-33a-5p mimics+pLV-S1PR1组,MTT和划痕实验分别检测各组细胞增殖和迁移能力。结果与正常乳腺上皮细胞HBL-100比较,miR-33a-5p及S1PR1在4种乳腺癌细胞系中的表达分别显著降低和升高(P0.05;P0.01),且二者呈显著负相关性(r=-0.994;P=0.006);预测及验证结果显示,S1PR1为miR-33a-5p的靶基因,且miR-33a-5p mimics能显著降低MDA-MB-231细胞中S1PR1蛋白的表达(P0.01);与miR-NC组比较,miR-33a-5p mimics显著降低了细胞增殖、迁移能力(均P0.01);与pLV-NC组比较,S1PR1过表达显著增加了细胞增殖、迁移能力(P0.05;P0.01);且与pLV-S1PR1组比较,miR-33a-5p mimics能显著逆转S1PR1过表达对细胞增殖、迁移能力的促进作用。结论 miR-33a-5p能显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移,其作用机制与靶向负调控S1PR1密切相关。     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

TRAIL联合Res对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和Caspase表达的影响

目的研究TRAIL联合白藜芦醇（Res）对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和caspase表达的影响。方法MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞表面DR4、DR5蛋白的表达;分光光度法检测caspase-3、caspase-8相对活性;荧光定量PCR检测DR4、DR5及caspase-3、caspase-8 mRNA的表达。结果50μmol／L和100μmo/L,Res分别与50ng／mL TRAIL联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率及细胞凋亡率分别与单独应用相应浓度的Res和TRAIL比较,均存在显著差异（P〈0．01）。50μmol／L和100μmol／LRes分别与50ng／mLT RAIL联合作用后,caspase-3、caspase-8的相对活性与对照组及单用TRAIL、Res比较均明显增强,差异显著（P〈0．01）。Res作用后,细胞表面DR4、DR5荧光指数与对照组比较明显增强。荧光定量PCR结果显示与对照组比较．Res作用后DR4、DR5mRNA表达上调;与单独用药比较,TRAIL联合Resetcagpase-3、easpase-8 mRNA表达上调。结论TRAIL和Res联合应用对诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡具有明显的协同效果,其作用机制可能与增加DR和caspase活性有关。     

微小RNA-10a-5p促进紫草素抗卵巢癌细胞的作用

目的 初步探究微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)在紫草素抗卵巢癌中的作用。方法 基于数据库分析miR-10a-5p在肿瘤中的表达水平;瞬时转染miR-10a-5p mimic及NC,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-10a-5p的表达水平;使用CCK-8实验检测紫草素对SKOV3细胞的半数抑制浓度(IC₅₀);通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;活死细胞染色比较细胞死亡情况。结果 miR-10a-5p在多种肿瘤中异常表达,与对照组相比,转染miR-10a-5p mimic后可上调SKOV3细胞中miR-10a-5p的表达水平约80倍,差异有统计学意义(P<0.000 1); miR-10a-5p可促进卵巢癌细胞的凋亡,提高SKOV3细胞对紫草素的敏感性,其IC₅₀由2.45μmol/L降低至1.40μmol/L,降幅达42.9%。与NC相比,转染mimic可促进SKOV3细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与17.71%,P=0.007 5)。与无紫草素相比,紫草素可显著促进卵巢癌细胞的凋亡...     

抗衰老酶1-p53信号通路在吸入麻醉致原代海马神经元细胞凋亡中的神经保护作用

目的:探讨抗衰老酶1(sirtuin 1,SIRT1)在七氟醚(sevoflurane,Sev)联合一氧化二氮(N_2O)吸入麻醉导致的原代海马神经元细胞凋亡中的作用。方法:原代海马神经元予以1.3%Sev联合50%N_2O吸入麻醉(对照组给予50%O_2)处理2 h,或吸入麻醉前分别予以SIRT1拮抗剂sirtinol(50μmol/L)、salermide(50μmol/L)或激动剂resveratrol(100μmol/L)处理24 h。24 h后收集细胞,采用蛋白质印迹法检测Bax、剪切型半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3,c-caspase-3)、剪切型聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[cleaved poly (ADP-ribose) polymerase,c-PARP]、磷酸化组蛋白H2A家族成员X(phosphorylated H2A histone family member X,γ-H2AX)、SIRT1和乙酰化p53[acetylated p53(lysine 381),acetyl-p53]蛋白水平,采用免疫荧光染色法检测c-caspase-3、SIRT1和acetyl-p53蛋白的分布及表达情况。结果:Sev联合N_2O吸入麻醉显著上调原代海马神经元中促凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、c-PARP及DNA损伤相关指标γ-H2AX的表达水平(P0.05);同时麻醉组SIRT1蛋白表达水平也显著升高,而acetyl-p53表达水平显著降低(P0.05)。吸入麻醉处理前给予SIRT1拮抗剂sirtinol或salermide预处理可抑制吸入麻醉引起的SIRT1蛋白表达上调,但增加了促凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、c-PARP及DNA损伤指标γ-H2AX的表达(P0.05);SIRT1激动剂预处理则呈现相反的结果(P0.05)。结论:Sev联合N_2O吸入麻醉引起的SIRT1-p53信号通路激活可抑制其所致的原代海马神经元细胞凋亡。     

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降...     

miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估中的临床价值

目的探讨miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断和预后评估的临床价值。方法选取2014年1月至2016年12月在该院就诊的胃癌患者血清标本117例为胃癌组,选择同期在该院行胃镜检查诊断为息肉的患者血清标本75例和健康体检者血清标本45例分别设为胃息肉组和健康对照组。比较各组研究对象血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平,观察胃癌患者血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平与临床病理因素和随访2年胃癌患者预后的关系,以及其在诊断胃癌和预测胃癌患者2年内死亡的效能。结果胃癌组术前血清miR-181a-5p表达水平明显高于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌术后血清miR-181a-5p表达水平较术前明显降低(P<0.01);胃癌组术前血清miR-451a表达水平明显低于胃息肉组和健康对照组(P<0.01),而胃息肉组的血清miR-181a-5p表达水平明显高于健康对照组(P<0.01),胃癌组术后血清miR-451a表达水平较术前明显升高(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测诊断胃癌的灵敏度为77.8%,特异度为97.3%,曲线下面积均明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.01),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。血清miR-181a-5p和miR-451a表达水平在不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度的胃癌患者中差异有统计学意义(P <0.001)。死亡组患者血清miR-181a-5p表达水平明显高于存活组(P <0.01),而血清miR-451a表达水平明显低于存活组(P<0.01)。血清miR-181a-5p和miR-451a联合检测在预测胃癌患者2年内死亡的灵敏度为100.0%,特异度78.6%,曲线下面积明显高于miR-181a-5p和miR-451a单项检测(P<0.05),而miR-181a-5p与miR-451a的曲线下面积差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合检测血清miR-181a-5p和miR-451a在胃癌诊断中具有重要临床价值,其表达水平与患者的预后具有重要关系,在预测2年内死亡具有较高的效能。     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响

【目的】探讨莪术醇对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响。【方法】10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养小鼠黑色素瘤B16细胞。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,检测细胞增殖、迁移和miR-7-5p含量;miR-7-5p inhibitor预处理后,再用莪术醇100μmol/L处理B16细胞,检测细胞增殖和迁移。【结果】不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,细胞490nm吸光度值均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,细胞490 n m吸光度值降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量莪术醇(50、100、200μmol/L)处理B 16细胞后,穿膜细胞数均低于对照组,且随着莪术醇浓度的增加,穿膜细胞数降低显著,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过real-time PCR验证miR-7-5p inhibitor转染B16细胞后的抑制效果,NC-inhibitor和miR-7-5p inhibitor转染后细胞miR-7-5p表达分别为(1.02±0.10)和(0.41±0.14),差异有统计学意义(P<0.05)。抑制B16细胞miR-7-5p表达后,观察莪术醇对细胞增殖的调控,与NC inhibitor相比(1.413±0.108),miR-7-5p inhibitor升高莪术醇处理B16细胞490nm吸光度值(1.697±0.089),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】莪术醇能够抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和迁移,其机制可能与增加miR-7-5p表达有关。     

多柔比星对p53缺陷细胞MDA-MB-231表达乳腺癌易感基因1和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶的影响

目的探讨阿霉素对p53缺陷乳腺癌MDA-MB-231细胞表达脱氧核糖核酸(DNA)损伤修复相关蛋白乳腺癌易感基因1(BRCA1)和聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP-1)的影响。方法免疫印迹(Westernblot)检测不同浓度阿霉素干预后MDA-MB-231细胞表达BRCA1和PARP-1及其PARP-1活性的动态变化。结果阿霉素干预后BRCA1和PARP-1活性呈现出不同的变化:阿霉素能抑制PARP-1的活性,但当给予恢复一定时间时,PARP-1活性将有所上调(0.5、1、1.5、2μmol/L浓度下PARP-1光密度比值4.998、5.356、5.626和6.047vs对照组3.320);BRCA1表达不受时间影响,但在低浓度呈现高表达,当浓度达到2μmol/L时BRCA1表达有所下调但然高于对照组(0.784vs0.612);而PARP-1表达在整个过程中基本无变化,随着阿霉素浓度提高,其断裂有所增加;阿霉素能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,在2μmol/L浓度时细胞凋亡率增加至6.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿霉素持续作用能抑制人MDA-MB-231乳腺癌细胞的PARP-1活性,但一定恢复时间能增强PARP-1活性;阿霉素对BRCA1蛋白表达影响呈现先增加后减少的趋势。     

microRNA-100诱导视网膜神经节细胞氧化应激损伤的机制研究

目的探讨基因调节因子-100(miRNA-100)在氧化应激(OS)诱导视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤中的机制。方法培养RGC5细胞,加入100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢(H_2O_2)建立氧化应激损伤模型。检测RGC5细胞凋亡情况,Real-time PCR检测miRNA-100基因表达情况,观察氧化应激对RGC5细胞miR-100表达的影响以及抑制miR-100后对RGC5细胞保护作用,Western Blot方法分析miR-100对RGC5细胞的作用机制,分析抑制胰岛素生长因子-1受体(IGF1R)对氧化应激损伤RGC5细胞凋亡的影响。结果 RGC5细胞凋亡率随氧化应激损伤程度加重而增高,且氧化应激损伤程度越重,RGC5细胞中miR-100表达越高,各组间差异有统计学意义(P 0. 05);转染miR-100组RGC5细胞凋亡率较对照组明显降低,而RGC5细胞中miR-100表达水平也明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05); miR-100下调组RGC5细胞中p Trk B蛋白、p AKT蛋白、p ERK蛋白较对照组明显增加,差异有统计学意义(P 0. 05);抑制IGF1R组氧化应激损伤RGC5细胞凋亡率明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论氧化应激损伤可诱导CGR5细胞凋亡,miRNA-100参与了RGC5细胞凋亡过程,下调miRNA-100可有效调节RGC5细胞凋亡,其可能机制与miRNA-100调节靶基因IGF1R,从而激活了Trk B、AKT、ERK信号通路有关。     

乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平对预后的预测价值

目的 探讨乳腺癌组织中微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、同源异型盒基因B3(HOXB3)水平对患者预后的预测价值。方法 选取2016年1月至2017年5月于该院就诊的75例乳腺癌患者,收集患者的乳腺癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-10a-5p水平,免疫组织化学染色观察乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3表达,蛋白质印迹法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3水平;对患者进行5年随访,将生存的59例患者(生存组)记为预后良好,死亡的16例患者(死亡组)记为预后不良;比较乳腺癌组织和癌旁正常组织、生存组和死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平;采用Spearman相关分析乳腺癌组织miR-10a-5p与HOXB3水平的相关性;采用受试者工作特征曲线评估乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平及二者联合检测对患者5年内死亡的预测价值;采用Logistic回归分析乳腺癌患者5年内死亡的影响因素。结果 乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于癌旁正常组织,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于癌旁正常组织(...     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为si-THAP9-AS1组、si-NC组、miR-505-3p组、 miR-NC组、si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组...     

硫酸乙酰肝素在MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sufate,HS)在抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖过程中对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated pr otein,GRP78)及相关凋亡蛋白表达的影响.方法:培养人乳腺癌上皮MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的HS链.采用噻唑蓝比色法检测HS对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.应用Westem blot法分别检测GRP78蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:HS对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P<0.05).HS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并随着剂量的增大,细胞的凋亡率升高(P<0.05).HS抑制MDA-MB-231细胞GRP78蛋白的表达(P<0.05).HS可促进Bax蛋白表达(P<0.05),但抑制Bcl-2蛋白的表达(P<0.05).结论:HS通过减少MDA-MB-231细胞的GRF78、Bcl-2的表达,增加Bax表达来促进肿瘤细胞的凋亡,发挥其抗肿瘤作用.     

5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路机制研究

【目的】探讨5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路机制。【方法】HPV阳性宫颈癌细胞SiHa随机分为对照组、低剂量组(10μmol/L 5-氟尿嘧啶)、高剂量组(40μmol/L 5-氟尿嘧啶)和Wnt抑制剂(ICG-001)组(10μmol/L ICG-001),除对照组给予无菌磷酸盐缓冲液外,其余各组分别给予对应剂量的药物。比较各组细胞的增殖、凋亡情况(凋亡率和凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9)及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(Wnt、β-catenin)的表达水平。【结果】5-氟尿嘧啶能明显抑制HPV阳性宫颈癌细胞增殖,提高细胞凋亡率和细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9的表达水平(P<0.05);5-氟尿嘧啶处理后Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt和β-catenin的表达明显减弱(P<0.05),且随着剂量的增加,上述效果越明显(P<0.05)。【结论】5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。     

天麻素干预对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡、活力及PI3K／AKT信号通路蛋白的影响

【目的】探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）蛋白表达量及蛋白激酶 B（AKT ）信号通路在过氧化氢（H2 O2）诱导的 PC12细胞中的作用及天麻素的干预对其通路的影响。【方法】PC12细胞随机分为正常对照组,模型组（400μmol／L H2 O2）,天麻素低、中、高浓度组（0．1、1、10μmol／L 天麻素＋400μmol／L H2 O2）。咪唑蓝法检测各组细胞活力,Hoechst 染色观察各组细胞凋亡情况,比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase 3）、Caspase 8及 Caspase 9活性,western blot 分析 Bcl‐2、Bax 及 PI3K 蛋白表达量与 AKT 磷酸化水平。【结果】与正常对照组比较,模型组中细胞活力下降,细胞凋亡率提高,Caspase 3、Caspase 8及 Caspase 9活性提高,Bcl‐2及 PI3K 表达量下降,Bax 表达量上升,AKT 磷酸化水平降低,差异均具有统计学意义（ P ＜0．01）;与模型组比较,天麻素低、中、高浓度组细胞活力提高,细胞凋亡率降低,Caspase 3、Caspase 8及 Caspase 9活性降低,Bcl‐2、PI3K 蛋白表达量及 AKT 磷酸化水平提高,天麻素中、高浓度组 Bax 表达量降低,差异均具有统计学意义（ P ＜0．01）。【结论】天麻素可通过激活 PI3K／AKT 信号通路,从而抑制 H2 O2诱导的 PC12细胞凋亡。     

碳酸酐酶Ⅸ抑制剂对乳腺癌细胞在低氧环境下的生长抑制作用及其机制

目的探讨碳酸酐酶Ⅸ(carbonic anhydraseⅨ, CAⅨ)抑制剂对人乳腺癌MCF-7细胞在低氧环境中的增殖抑制作用和机制。方法人乳腺癌MCF-7细胞培养24 h后,采用实时定量PCR法检测细胞在1%低氧和21%正常氧气环境下CAⅨmRNA相对表达量;将对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞分为25、50、100μmol/L U-104组(分别加入含25、50、100μmol/L U-104的细胞培养液进行处理)和对照组(加入等量细胞培养液),低氧环境下培养48 h后,采用MTT法检测各组人乳腺癌MCF-7细胞的存活率,采用AnnexinV/PI双染流式细胞术检测对照组和100μmol/L U-104组细胞凋亡率;培养24 h后,采用Western blot法检测对照组和50、100μmol/L U-104组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白相对表达量。结果培养24 h后,MCF-7细胞1%低氧环境中CAⅨmRNA相对表达量(23.93±4.02)高于21%正常氧环境(1.00±0.00)(P0.05);培养48 h后,对照组及25、50、100μmol/L U-104组细胞存活率[100%、(57.30±5.06)%、(28.84±3.52)%、(9.63±2.58)%]依次降低(P0.05),100μmol/L U-104组细胞凋亡率[(89.46±3.05)%]高于对照组[(6.54±0.92)%](P0.05);培养24 h后,对照组及50、100μmol/L U-104组细胞Bcl-2蛋白相对表达量(0.576±0.040、0.253±0.030、0.103±0.020)依次降低(P0.05),Bax蛋白(0.103±0.020、0.216±0.020、0.413±0.030)和caspase-3蛋白(0.216±0.020、0.373±0.010、0.540±0.020)相对表达量依次增高(P0.05)。结论 CAⅨ抑制剂U-104在低氧条件下对乳腺癌MCF-7细胞有明显增殖抑制作用,其机制可能是U-104抑制了CAⅨ在低氧状态下的活性,激活Bax、caspase-3和抑制Bcl-2,从而诱导乳腺癌细胞的凋亡。     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。