LncRNA HOTAIR靶向miR-34a-5p调节类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的机制研究

目的:研究长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)对类风湿关节炎滑膜细胞(MH7A)凋亡的调控作用及其作用机制.方法:运用脂质体将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-HOTAIR组(转染pcDNA-HOTAIR)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagom...     

miR-146a-5p在恶性肿瘤中的研究进展

miR-146a-5p是miR-146a家族中主要成员之一,根据其作用靶基因的性质常被标记为肿瘤促进因子或肿瘤抑制因子,并在恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。近年来研究发现,miR-146a-5p很有可能成为新的识别恶性肿瘤的生物学分子标志物或成为一种药物靶点。本文对miR-146a-5p在恶性肿瘤中的研究进展加以综述,为进一步研究miR-146a-5p与恶性肿瘤的关系提供思路。     

miR-34a-5p下调Notch1表达增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性

目的:本研究旨在阐明miR-34a-5p是否通过下调Notch1表达,进而增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的化疗敏感性.方法:qRT-PCR测定MCF-10A细胞与MDA-MB-231细胞miR-34a-5p的表达水平;以miR-34a mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR与wes...     

血浆外泌体miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病中的表达及诊断价值

目的 研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法 通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对照组)样本进行临床验证：采用差速离心法提取血浆外泌体,透射电子显微镜,粒径分析,Western blot对其鉴定,采用RT-qPCR检测血浆外泌体中miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病组和对照组中的表达水平,并通过ROC曲线评价二者在结核病中诊断价值。结果 透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。在临床验证中,以内参和外参同时校准,结核组患者血浆外泌体中miR-26a-5p表达水平低于对照组(P<0.000 1),结核组患者血浆外泌体中miR-151a-3p表达水平高于对照组(P<0.000 1),与生物信息学结果一致。作为诊断标记,以内参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的曲线下面积(AUC)分...     

miR-181a-5p在皮肤成纤维样细胞衰老中的作用和机制

摘要:目的 观察 miR-181a-5p在 H2O2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对 细胞自噬和凋亡的影响。方法 采用200μmol/LH2O2诱导大鼠皮肤成纤维样 RS1细胞6h,构建细胞衰老模型。将细 胞分为5组:H2O2处理组、mimic-NC 组、mimic组、inhibitor-NC 组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将 miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT 法检测细胞增殖活性;qPCR 检测细胞 miR-181a-5p表达水平。利用流 式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用 Westernblot检测细胞 LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关 基因5(autophagyrelated5,ATG5)蛋白表达水平。结果 与正常 RS1细胞比较,H2O2诱导后的 RS1细胞增殖活性显著 降低(P<0.05),而 miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与 H2O2处理组比较,mimic组 RS1细胞排列紊乱,细胞 轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和 ATG5表达显著降低(均 P<0.05);inhibitor组 RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和 ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论 H2O2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞 miR-181a-5p表达增加,且上调 miR-181a5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。     

miR-34a-5p过表达靶向抑制MET对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响

目的探究miR-34a-5p过表达对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响。方法荧光素酶实验检测miR-34a-5p与MET靶向关系。构建MET pcDNA载体过表达MET,将miR-34a-5p与pcDNA-MET单独或联合转染HepG2,将细胞随机分为4组:Control、mimic、MET和mimic+MET组进行后续实验。克隆形成法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell检测细胞侵袭、Western blot检测Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;构建肝癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为Control组和mimic组,检测裸鼠30 d肿瘤体积变化和第30天肿瘤重量,通过免疫组化方法检测Ki67阳性表达率、TUNEL染色细胞凋亡。结果结果表明,miR-34a-5p和MET存在直接靶向作用关系。与Control组相比较,mimic组细胞克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、PCNA蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Ca...     

miR-21a-5p靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的 miR-21a-5p对脂多糖( LPS)处理的 RAW264. 7 巨噬细胞的调控作用及分子机制研究.方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测不同浓度 LPS处理的巨噬细胞中 miR-21a-5p水平;应用 miR -21a-5p模拟物( mimics)和阴性对照( miRNA-NC)分别转染 LPS处理...     

miR-219a-5p在胃癌中的甲基化调控及生物学功能研究

目的 检测miR-219a-5p在胃癌及其癌旁组织中的表达并分析其启动子区域甲基化水平,探讨其对胃癌细胞系生物学功能的影响。方法 利用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)方法检测胃癌及其癌旁组织中miR-219a-5p的表达及甲基化水平,通过细胞增殖实验和流式细胞仪检测过表达miR-219a-5p后对胃癌细胞增殖和凋亡的影响;体外细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-219a-5p的表达水平在胃癌患者的癌组织中呈现普遍下调,miR-219a-5p在癌组织中的相对表达量(0.769±0.95)明显低于癌旁组织表达(2.114±5.10),差异具有统计学意义(P<0.05);且miR-219a-5p表达下调组的DNA甲基化水平比表达上调组明显升高;过表达miR-219a-5p的胃癌细胞系MGC-803细胞增殖能力和迁移侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),过表达组凋亡比例明显...     

地黄饮子通过调控miR-34a-5p影响细胞凋亡及炎性反应治疗阿尔茨海默病的机制

目的观察地黄饮子治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的作用机制。方法采用大鼠侧脑室注射Aβ1-42寡聚体法建立AD动物模型。按照随机数字表法将75只SD雄性大鼠分为正常组、模型组、微小核糖核酸-34a-5p(miR-34a-5p)抑制剂组(80.0 mg/kg)、地黄饮子高剂量组(86.4 g/kg)、地黄饮子低剂量组(21.6 g/kg),每组15只,连续给药4周。采用Morris水迷宫法检测大鼠空间学习记忆能力,TUNEL法观察大鼠海马病理改变,Real-time PCR法检测大鼠海马miR-34a-5p、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、Toll样受体4(TLR4)、髓样细胞分化标志物88(MyD88)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期时间延长(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.05...     

miR-146a-5p表达与新生儿坏死性小肠结肠炎肠道损伤严重程度的相关研究

目的 ·检测新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)肠道miR-146a-5p表达水平,并分析其与NEC患儿肠道损伤严重程度的相关性.方法 ·收集2014年1月—2018年12月于上海交通大学附属儿童医院普外科就诊的NEC和肠闭锁(intestinal atresia,IA)...     

MiR-590-5p对ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡以及LOX-1表达的影响

目的:研究miR-590-5p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的调节作用,观察miR-590-5p对HUVECs凋亡的影响。方法:HUVECs经ox-LDL(50μg/mL)作用不同时间(0~48 h)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-590-5p的表达变化。HUVECs转染miR-590-5p模拟物(miR-590-5pmimics)后ox-LDL继续作用48 h。RT-qPCR和Western印迹分别检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达情况。FCM检测HUVECs凋亡率的变化。结果:随ox-LDL作用时间的延长,HUVECs凋亡率逐渐升高,miR-590-5p表达逐渐下调。miR-590-5p模拟物转染后可以降低LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。结论:miR-590-5p可抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与下调LOX-1基因表达有关。     

miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用

目的 研究miR-146a-5p对无水乙醇刺激的胃黏膜上皮细胞的保护作用。方法 选取胃黏膜上皮细胞(GES-1),将细胞分为空白组和模型组,通过无水乙醇刺激建立胃溃疡模型。采用MTT法检测两组细胞增殖率,RT-qPCR检测miR-146a-5p、白细胞介素1受体关联激酶1(IRAK1)、核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)和白细胞介素6(IL-6)的表达水平,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测两组细胞中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6和白细胞介素10(IL-10)的含量。采用Targetscan数据库预测miR-146a-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。进一步通过过表达和敲减miR-146a-5p后观察靶点蛋白的变化,以确定miR-146a-5p和靶点蛋白的调控关系。过表达miR-146a-5p和敲减IRAK1后,Western blot检测IRAK1、NF-κB p65和IL-6蛋白的表达,ELISA法检测细胞中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量。结果 MTT结...     

lncRNA PWAR5通过靶向miR-30a-5p/SOCS3分子轴降低心肌炎心肌细胞的损伤

目的 研究长链非编码(lncRNA)PWAR5在脂多糖诱导心肌炎时对心肌细胞的保护作用及分子机制.方法 分离培养大鼠原代心肌细胞,分别采用载有PWAR5序列的慢病毒(PWAR5组)和空载慢病毒(Control组)进行感染,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率.采用脂多糖诱导心肌炎后,MTS法检测PWAR5对...     

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

【摘要】目的 探讨四味土木香散（STP）对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法 第一部分：Wistar大鼠随机分为假手术（sham）组、模型（Mod）组、Mod+STP高、中、低剂量（STP-H、STP-M、STP-L）组、Mod+阳性药卡托普利（CAP）组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分：Wistar大鼠随机分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂（agomir）组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂（DAPT）组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果 第一部分：STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。第二部分：与Mod组比,STP-H组 TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。结论 STP可通过抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。     

lncRNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症致急性肺损伤中的作用机制研究

目的 探讨lnc RNA NEAT1/miR-181a-5p/bcl-2轴在脓毒症急性肺损伤（ALI）中的作用及机制。方法 结扎盲肠头尾端穿孔（CLP）构建脓毒症ALI小鼠模型,将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组和ALI组,每组各8只。术后24 h取肺组织,测定肺湿/干比（W/D）,苏木素-伊红（HE）染色后光镜观察肺组织形态学改变,qRT-PCR检测肺组织长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1,NEAT1的海绵miR-181a-5p以及结合蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1和mi R-181a-5p的结合情况。通过Western blot检测肺组织中miR-181a-5p结合蛋白bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与假手术组相比,ALI组小鼠W/D明显升高（P <0.01）;HE染色发现ALI组部分肺组织呈实质肺泡萎缩或消失。与假手术组相比,ALI组小鼠肺组织中lncRNA NEAT1的表达水平显著升高（P <0.01）,miR-181a-5p的表达水平显著降低（P <0.01）,bcl-2的表达水平...     

miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用。结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Panc-1和MIA Pa Ca-2的生长受到抑制(P<0.05),早期凋亡率分别增加13.6%和11.0%(P<0.05),细胞集落数目分别下降27.3%和27.8%(P<0.05),Panc-1细胞S期细胞百分比降低11.8%(P<0.05)。结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用。