甲基化转移酶抑制剂BIX01294促进小鼠子宫基质细胞迁移、抑制基质细胞蜕膜化

目的 探讨甲基化转移酶抑制剂BIX01294(BIX)对小鼠子宫内膜基质细胞迁移和蜕膜化过程的作用和影响.方法 取妊娠第3.5天小鼠子宫分离培养得小鼠子宫内膜基质细胞,采用细胞划痕运动分析、体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化模型及Real-time PCR方法分别从形态学和分子生物学角度观察BIX对小鼠子宫内膜基质细胞迁移及蜕膜化的影响.结果 在一定浓度范围内(BIX≤15μmol/L),小鼠子宫内膜基质细胞的迁移距离随着BIX浓度的升高而增加,与对照组相比,BIX 15μmol/L处理组基质细胞的迁移距离增加最明显,差异具有统计学意义,当BIX浓度提高到20μmol/L时,细胞迁移距离增加不明显,且此时开始出现细胞的死亡;与对照组相比,BIX处理24 h组小鼠子宫内膜基质细胞Ehmt2 mRNA表达显著下调(P<0.01);并且15μmol/L BIX能够抑制小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化反应.结论 一定浓度范围的BIX通过抑制Ehmt2 mRNA在基质细胞中的表达促进小鼠子宫内膜基质细胞的迁移,并且对小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程有抑制作用.     

分化抑制因子3在胚胎植入中的作用

目的：检测分化抑制因子３（inhibitors of differentiation 3,Id3）基因在小鼠早期妊娠模型和人工诱导蜕膜化模型中子宫内膜中的表达规律;探究Id3基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用Western blot及qRT-PCR检测Id3在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;利用分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化、过表达Id3基因,分析Id3对基质细胞蜕膜化的影响。结果：Id3在小鼠早期妊娠模型中高表达于子宫内膜容受期形成阶段（孕第4天）（P蛋白质=0.001,PmRNA=0.001）,胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低（PD5蛋白质=0.026,PD5mRNA=0.038）;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Id3的表达明显低于未发生蜕膜化的对照子宫（P蛋白质=0.005,PmRNA=0.000）;体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3基因的表达（P蛋白质=0.000,PmRNA=0.001）;过表达Id3可以明显降低体外子宫内膜基质细胞蜕膜化过程;Stat3信号参与调控Id3的表达调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。结论：Id3参与小鼠胚胎植入并调控子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。     

组氨酸三聚体核苷结合蛋白1(Hint1)在胚胎植入中的作用

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（histidine triad nucleotide binding protein 1,Hint1）基因在小鼠早期妊娠过程中子宫内膜中的表达规律;探究Hint1基因在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程的作用。方法：应用免疫组化、原位杂交、Western blot和RT-qPCR检测Hint1在早期妊娠、假孕和人工诱导蜕膜化模型小鼠子宫中的表达;siRNA敲低原代分离的小鼠子宫内膜基质细胞Hint1的表达。LC-MS分析Hint1对基质细胞蜕膜化过程中脂质组学的影响。结果：在妊娠的第1至第8天Hint1表达逐渐升高,且在胚胎植入部位的表达明显高于非植入点;体内人工诱导蜕膜化小鼠子宫内膜Hint1的表达明显高于未发生蜕膜化的对照子宫;利用siRNA干扰小鼠子宫内膜基质细胞中Hint1的表达可显著影响其蜕膜化过程及脂质代谢。结论：Hint1在基质细胞蜕膜化过程中表达升高,并可能与蜕膜化过程中基质细胞的脂质代谢相关。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的 检测胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布及其生物学作用.方法取未孕动情期、真孕及假孕3～6 d小鼠子宫做切片,采用免疫组化SP法检测IGFBP-4在小鼠子宫内膜的表达情况.结果 IGFBP-4在小鼠子宫内膜主要分布于腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞及蜕膜细胞.IGFBP-4在真孕组小鼠子宫内膜于孕3 d出现阳性表达;孕4～5 d中等强度表达;孕6 d表达最强,主要分布于整个蜕膜区细胞.未孕动情期小鼠子宫内膜IGFBP-4呈弱表达.假孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4只在孕5～6 d有微弱表达.真孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4表达明显强于同期假孕组.结论 IGFBP-4在围植入期小鼠子宫内膜持续表达,提示IGFBP-4可能在小鼠胚泡植入过程发挥重要生物学作用.     

小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.     

妇产科概论：解剖、生理和组胚学

应用小鼠月经模型对子宫内膜白细胞周期性变化的研究；月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异；超排卵对金黄地鼠子宫内膜超微结构的影响；2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究；妊娠中滋养细胞融合的研究进展。     

孕激素对早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子- Ⅰ受体基因表达的调控

目的　探讨孕激素对体外培养的人早孕蜕膜基质细胞胰岛素样生长因子 - 受体 (IGF- R)基因表达的影响。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)技术半定量检测不同浓度孕激素作用 72小时后及 0 .1μm ol/ L孕激素作用不同时间后人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达水平。结果　体外培养的人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA呈强阳性表达 ,孕激素降调 IGF- R m RNA的表达 ,并与浓度呈显著负相关 (r=- 0 .6 80 ,P<0 .0 0 1)。孕激素终浓度为 0 .1μm ol/ L时 ,IGF- R m RNA的表达与作用时间无显著相关性 (r=0 .0 0 5 ,P>0 .0 5 )。结论　孕激素可能通过降调人早孕蜕膜基质细胞中 IGF- R m RNA的表达 ,调节基质细胞的增殖和蜕膜化 ,对早期妊娠的维持起重要作用     

组蛋白甲基化酶MLL1在小鼠围着床期子宫内膜的表达

目的:探讨组蛋白甲基化酶MLL1在小鼠围着床期子宫内膜的表达规律及对胚胎着床的作用。方法:收集妊娠小鼠(D0、D1、D4、D5、D6、D8)子宫内膜,分别采用RT-PCR和Western Blot检测小鼠内膜MLL1 mRNA和蛋白的表达情况,利用免疫组化检测MLL1蛋白的定位;宫角注射MLL1抑制剂进行干预。结果:①MLL1、HOXA10 mRNA的表达量在妊娠后随天数逐渐上升,且在D4达到高峰(P<0. 05),而后逐渐下降;②免疫印迹发现MLL1蛋白,与mRNA表达趋势相同,在小鼠妊娠后上调,D4表达最强(P<0. 05),而后下降;免疫组化发现在D0和D1、D4,MLL1蛋白主要表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮;妊娠D5,MLL1主要表达于子宫基质细胞中,妊娠D6、D8主要表达于蜕膜化细胞中;③宫角注射MLL1抑制剂后,与空白组相比,抑制组胚胎着床数量明显减少,并且MLL1 mRNA和蛋白的表达水平低于溶剂组和空白对照组。结论:组蛋白甲基化酶MLL1可能参与了子宫内膜容受性的建立和胚胎植入的过程;还可能参与了胚胎植入后的子宫内膜蜕膜化反应。     

产科——正常妊娠

070807Luminex液相蛋白芯片用于研究着床窗期子宫内膜和早孕蜕膜基质细胞的细胞因子的表达谱/陈士岭…∥生殖医学杂志·—2007,16(2)·—77~81探索着床窗期子宫内膜和早孕期蜕膜基质细胞的细胞因子谱表达及其对胚胎着床和早期妊娠的可能影响。方法:获取着床窗期子宫内膜基质细胞(ESC)和早孕期蜕膜基质细胞(DSC)进行体外培养,采用Luminex液相蛋白芯片技术检测细胞培养上清液中15种细胞因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、颗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-…     

血管内皮生长因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布状况和规律.方法 应用免疫组化SP法检测妊娠3～6 d昆明小鼠围植入期子宫内膜VEGF的表达情况,并以动情期未孕小鼠子宫做对照.结果 在小鼠子宫内膜中可检测到VEGF的表达,其表达具有时间特异性和细胞特异性.孕3 d,VEGF在子宫内膜的腔上皮和基质细胞中呈弱表达;孕4～5 d,VEGF在基质细胞和腔上皮上表达最强;孕6 d,VEGF表达较强,但主要表达于蜕膜细胞.结论 围植入期小鼠子宫内膜持续表达VEGF,且在植入前后表达最强,提示VEGF可能在小鼠胚胎的植入过程中发挥重要作用.     

雌性大鼠、小鼠生殖系统与人子宫内膜甾体激素分泌细胞的研究

对雌性大鼠、小鼠的生殖系统,人的子宫内膜与蜕膜进行了3-β-羟基甾体脱氢酶(3-β-HSDH)和脂类的组织化学研究。结果表明:在大鼠和小鼠的卵巢内,颗粒黄体细胞和膜黄体细胞3-β-HSDH呈强阳性反应,卵泡膜内层细胞与间质细胞呈中等程度阳性反应;大鼠与小鼠子宫内膜的表面上皮与腺上皮呈阳性反应;人早孕期蜕膜中的子宫腺上皮细胞与大蜕膜细胞呈阳性反应:在大鼠与小鼠的输卵中偶尔见到阳性反应物质;在人的子宫内膜中,没有见到阳性反应。本研究证明,雌性大鼠和小鼠除卵巢有分泌甾体素的功能外,子宫也有分泌甾体激素的功能。人早孕期蜕膜组织中的子宫腺与大蜕膜细胞都能分泌甾体激素。     

巨噬细胞移动抑制因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义。方法应用免疫组化SP法检测妊娠1～8d小鼠子宫内膜MIF的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照。结果在小鼠子宫内膜的所有组织均可检测到MIF的表达,主要表达于腺上皮、腔上皮及基质中的细胞团。MIF在妊娠1～3d表达较强,妊娠4～5d表达较弱,主要表达于子宫内膜的腔上皮和腺上皮;妊娠6～8d,MIF表达再次增强,但主要表达于基蜕膜和次级蜕膜区。结论妊娠1～8d小鼠子宫持续表达MIF,提示MIF可能参与小鼠胚泡植入及胚泡植入后的发育过程。     

高脂饮食诱导的肥胖早孕小鼠子宫内膜蜕膜反应受损

目的： 探讨高脂饮食诱导的肥胖对小鼠子宫内膜蜕膜反应的影响。 方法： 将12只4周龄健康C57BL/6J雌性小鼠随机分为高脂组和对照组（每组6只）,分别饲喂高脂 （22?kJ/g）、 正常 （16?kJ/g） 饲料12周。每周测量小鼠体重,喂养12周后测量小鼠体长、体宽并检测空腹血清三酰甘油和总胆固醇水平。将雌鼠与健康C57BL/6J雄鼠合笼交配,收集妊娠第7天子宫组织,采用苏木精-伊红染色观察子宫内膜细胞形态,Masson染色观察子宫内膜胶原纤维;采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测子宫内膜蜕膜反应相关蛋白表达。分离原代小鼠子宫内膜基质细胞,油酸、棕榈酸模拟高脂环境进行干预,雌二醇、孕酮诱导细胞发生蜕膜反应后,油 红O、 Bodipy染色观察脂滴累积情况,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测蜕膜反应相关标志物的基因和蛋白表达。 结果 ：饲养12周后,高脂组体重明显高于对照组（ P <0.01）,两组体长无明显差异（ P >0.05）,但高脂组体宽显著大于对照组（ P <0.01）,血清三酰甘油和总胆固醇水平均显著高于对照组（均 P <0.05）。高脂组胚胎着床数显著少于对照组（ P <0.01）,高脂组子宫内膜基质细胞向蜕膜细胞转换缓慢且形态异常,蜕膜反应标志物骨形成蛋白（BMP）2、同源异形框A10（HOXA10）表达水平均低于对照组,其中两组HOXA10表达水平差异有统计学意义（ P <0.01）。油红O、Bodipy染色结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞经高脂处理后,脂滴堆积明显增多,鬼笔环肽染色发现其细胞骨架形态异常,蜕膜反应相关基因 dtprp 、 HOXA10 以及蛋白BMP2、HOXA10、环氧合酶2的表达水平均明显低于对照组（均 P <0.05）。 结论 ：高脂饮食诱导的肥胖会损伤小鼠子宫内膜的蜕膜反应。     

RP11-444D3.1与SOX5基因共表达激活cofilin/LIMK/Rac信号通路介导子宫内膜癌侵袭机制研究

目的:研究RP11-444D3.1与SOX5基因共表达对子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭的影响，并探究其分子机制。方法:通过过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的腺病毒转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,构建过表达RP11-444D3.1和SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞，通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中RP11-444D3.1和SOX5基因mRNA表达水平，通过划痕实验和Transwell实验检测过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的子宫内膜癌细胞的侵袭能力，并通过Western blot法检测cofilin/LIMK/Rac信号通路蛋白的相对表达量。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比，过表达RP11-444D3.1与SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞具有更强的侵袭能力(均P<0.05),同时，cofilin蛋白的表达降低，LIMK/Rac蛋白的磷酸化水平上调。结论:RP11-444D3.1与SOX5基因均可激活cofilin/LIMK/Rac信号通路，共表...     

白细胞介素-8在着床前后小鼠子宫内膜及胚胎的定位研究

目的:研究着床前后小鼠子宫内膜及胚胎白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的定位变化.方法:应用免疫组织化学技术,观察IL-8在妊娠4d和妊娠8d小鼠子宫内膜及胚胎的表达部位.结果:妊娠4d(着床前),IL-8主要表达在子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质;胚泡的内细胞团和滋养层细胞亦有阳性表达.妊娠8d(着床后),子宫内膜的腔上皮IL-8表达呈阴性,腺上皮和蜕膜细胞均呈弱阳性;胚胎IL-8表达呈阴性.结论:IL-8可能参与胚泡着床的过程,但与胚胎分化、发育无密切关系.     

TGF-β1对小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对小鼠子宫内膜基质细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,在此细胞培养体系中加入不同浓度的 TGF-β1,终浓度为0．1、2．5、5．0、10．0、20．0 ng／mL ,培养48 h 后通过 ELISA 法检测培养液中 MMP-9的含量。结果与对照组比较,实验组随 TGF-β1浓度的增加,小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达上升,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论小鼠子宫内膜基质细胞体系中,TGF-β1可能通过调控 MMP-9的表达,参与调节细胞外基质代谢。     

多效生长因子对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响

目的：构建多效生长因子（PTN）基因过表达载体,研究PTN对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响。方法：根据GenBank中已发表的PTN基因序列,设计含酶切位点的特异性引物,进行PCR扩增及胶回收后,与pGEM-T载体连接,经限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与pcDNA3.1（+）载体融合得到PTN过表达质粒,将其转染至体外分离培养的小鼠子宫基质细胞中,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测子宫基质细胞中PTN mRNA表达水平及PTN过表达作用下蜕膜化标志性分子Prl8a2和Prl3c1表达水平。对照组为转染pcDNA3.1（+）空载体的子宫基质细胞。结果：PTN过表达质粒经双酶切鉴定后,结果与目的基因条带吻合,测序结果与GenBank中小鼠PTN基因序列同源性为100%。与对照组比较,PTN过表达载体组小鼠子宫基质细胞中PTN、Prl8a2和Prl3c1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PTN过表达能够使小鼠子宫内膜基质细胞中蜕膜化标志分子的表达水平升高,提示PTN可能在小鼠子宫内膜蜕膜化过程中起促进作用。     

STAT3与胚泡植入关系的实验研究

目的观察信号转导和转录激活因子3（STAT3）在早孕小鼠子宫内膜中的表达,探讨STAT3与胚泡植入的关系。方法取未孕动情期及孕1～8d的小鼠子宫做切片,采用免疫组织化学SP法和图像处理系统,对STAT3在早孕小鼠子宫内膜的表达位置和强度进行检测。结果①STAT3主要分布于小鼠子宫内膜腔上皮、腺上皮和蜕膜细胞。②妊娠小鼠子宫内膜腔上皮和腺上皮中STAT3的表达随妊娠进行逐渐增强,孕4d呈强阳性表达,此后表达逐渐减弱;而蜕膜细胞的表达从孕5d开始逐渐增强。③未孕组小鼠子宫内膜中STAT3弱表达。结论①STAT3参与胚泡植入过程和子宫内膜容受性的建立。②STAT3还可能参与了植入后胚泡滋养层的扩展、分化及子宫内膜蜕膜化反应。