一氧化氮合酶在门静脉高压大鼠胰腺的分布

一氧化氮(ＮＯ)与消化道疾病的关系日益受到重视。我们采用依赖还原性辅酶Ⅱ硫辛酰胺脱氢酶(ＮＡＤＰＨｄｉａｐｈｏｒａｓｅ,ＮＡＤＰＨｄ)免疫组织化学方法和神经元性一氧化氮合酶(ＮＯＳ)免疫组织化学法对正常和门静脉高压大鼠胰腺组织ＮＯＳ的分布进行研究。一、材料和方法1.实验动物:同批ＳＤ大鼠,雌雄各半,体重200～270ｇ(由同济医科大学实验动物学部提供),分为3组,Ⅰ组为对照组(6只),Ⅱ组为肝硬化组(8只),Ⅲ组为肝前性门静脉高压组(8只)。肝硬化组皮下注射50%ＣＣｌ42ｍｌ/ｋｇ体重,3天1次,共计10周,经病理证实肝硬化形成。肝前性门…     

肝硬变门静脉高压症患者肝组织一氧化氮合酶的检测及意义

目的 探讨一氧化氮在肝硬变门静脉高压症发病中的作用。方法 采用免疫组织化学法对４２例肝硬变患者及２０例胆囊切除术患者的对照肝组织进行染色，检测肝细胞中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的表达，运用图像处理及分析系统对肝细胞染色进行定量分析；同时将肝硬变组按白蛋白水平分成小于３．５ｇ／ｄｌ组（２６例）和大于等于３．５ｇ／ｄｌ组（１６例），比较其肝细胞染色情况。结果 肝硬变     

一氧化氮合酶、内皮素在门脉高压大鼠肠粘膜中的表达变化

目的探讨一氧化氮合酶和内皮素-1在门脉高压大鼠肠粘膜中的表达情况。方法20只雄性SD大鼠随机分为实验组与对照组，实验组行门静脉两步结扎加左肾上腺静脉结扎；应用免疫组化SP染色法检测iNOS、ecNOS及ET-1在大鼠小肠和结肠粘膜中的表达情况。结果门静脉完全结扎后两周，实验组大鼠门静脉压力较对照组明显增高；iNOS、ecNOS及ET-1在小肠粘膜中表达强度较对照组增强，iNOS及ET-1在结肠粘膜中表达较对照组增强。结论门脉高压大鼠小肠、结肠粘膜局部病变中iNOS、ecNOS及ET-1的表达不完全一致。     

一氧化氮合酶在门静脉高压症中表达的实验研究

比较肝前(PHPH)、肝内型门静脉高压鼠(IHPH)、门腔分流鼠(PCS)以及正常鼠(SO)内脏组织和血管中原生型(cNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性及cNOS mRNA和iNOS mRNA的表达。方法:用分光光度法检测大鼠腹主动脉、门静脉、小肠和大肠组织中cNOS和iNOS活性,并用RT-PCR法半定量测定其cNOS mRNA和iNOSmRNA的表达。结果:门静脉高压鼠的动脉中iNOS活性和iNOS mRNA表达均显著地增加,其表达在转录水平受调节。cN03的活性和cNOS mRNA表达也增加,表达除在转录水平外,尚受到转最后调节。但iNOS活性和iNOSmRNA表达的增加远较cNOS活性和cNOSmRNA表达的增加为明显。结论:在门静脉高压症大鼠中NO过多产生主要是iNOS活性增加的结果。     

门静脉高压性脾动脉病变

目的 探讨肝硬化患者脾动脉壁的病理变化。方法 以光镜,电镜,免疫组化法观察２１例肝硬化患者和１５例正常人脾动脉壁的病理变化和诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｒ ｎｉｔｒｉｃ－ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）的表达。结果 与正常人对比,肝硬化患者脾动脉内膜增厚,内皮细胞不完整,内弹性膜变平并分裂和断裂,中膜平滑肌增厚,并迁移至内膜下,电镜下见平滑肌细胞变性,萎缩,有的肥大, 和表型由收     

严重烧伤大鼠胸腺诱导型一氧化氮合酶表达对细胞凋亡的影响

目的观察严重烧伤大鼠胸腺诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达对胸腺细胞凋亡的影响,探讨一氧化氮(NO)与胸腺病理损害的关系。方法将56只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(8只)、烧伤组(24只)、烧伤 硫酸甲基异硫脲(SMT)组(24只)。后两组大鼠背部造成30％TBSAⅢ度烧伤,伤后分别立即静脉注射等渗盐水、等渗盐水 SMT(7．5 mg／kg);对照组不予烧伤及SMT处理。两烧伤组分别于伤后6、24、72 h检测胸腺重量、胸腺细胞凋亡情况(原位缺口末端标记法)、胸腺iNOS表达情况(免疫组织化学染色法),采用体视学方法测定阳性细胞密度,每时相点8只;同时测定对照组相应指标。结果烧伤组大鼠伤后24、72 h胸腺重量分别为(153±14)、(91±22)mg,明显轻于对照组[(243±12)mg,P<0．01];烧伤 SMT组此时明显高于烧伤组(P<0．01)。对照组大鼠胸腺皮、髓质可见散在少量凋亡阳性细胞、iNOS阳性细胞。烧伤组大鼠伤后6 h胸腺皮质有凋亡阳性细胞及少量iNOS阳性细胞;伤后24 h时凋亡阳性细胞分布于被膜下皮质、皮髓交界处及髓质,iNOS阳性细胞广泛出现在小叶间隔内血管旁;伤后72 h时凋亡阳性细胞使胸腺皮质广泛呈现棕褐色;伤后6～72 h烧伤组iNOS阳性细胞呈进行性增加(P<0．05)。烧伤 SMT组大鼠伤后各时相点阳性细胞较少且分布不均,凋亡灶少见,未见iNOS阳性细胞。烧伤组大鼠伤后24、72 h凋亡阳性细胞密度分别为(2．428±0．728)×10-5／μm3、(5．586±1．233)×10-5／μm3,高于对照组和烧伤 SMT组(P<0．01)。结论严重烧伤大鼠伤后早期胸腺细胞凋亡率增加,iNOS在胸腺表达增强并促进了胸腺细胞凋亡;SMT则能部分改善这一现象。     

贫铀对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响

目的:通过研究贫铀(DU)颗粒气管灌注后大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的变化,揭示DU对生殖系统的毒性作用机制。方法:W istar大鼠随机分为气管灌注生理盐水对照组和DU 1、3、5 mg组,每组5只。3个月后提取大鼠睾丸总RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。凝胶成像分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量法分析iNOSmRNA的变化。结果:对照组无iNOSmRNA表达,各染铀组扩增产物电泳条带吸光度A值明显高于对照组(P<0.05),其中3 mg组产物电泳条带A值最高,5 mg组A值明显低于1 mg组和3 mg组(P<0.05)。结论:DU颗粒气管灌注能使大鼠睾丸iNOSmRNA表达水平升高,DU剂量增高到一定程度则使iNOSmRNA表达水平降低,这种变化可能与DU化学毒性和辐射损伤的复合作用有关。     

异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.     

缺血预处理对大鼠部分肝脏切除术后肝脏一氧化氮合酶的影响及意义

目的 探讨缺血预处理（IPC）对大鼠部分肝脏切除术后肝脏一氧化氮合酶（NOS）的影响及意义。方法 20只SD大鼠随机分为2组：单纯热缺血组（WI）和缺血预处理组（IPC）。WI组于缺血前、再灌注后0．5、1、2、3h，IPC组于IPC前、IPC结束时、再灌注后0．5、1、2及3h分别切取肝脏组织约0．1g，用荧光定量PCR法检测其内皮型NOS（eNOS） mRNA和诱导型NOS（iNOS） mRNA。结果 两组肝脏热缺血再灌注后早期eNOS mRNA表达均增强，IPC组的表达高于WI组（P〈0、01或P〈0．05）。两组肝脏热缺血再灌注1h后iNOS mRNA开始表达，IPC组的表达低于WI组（P〈0．05）。结论 IPC可能通过促进肝脏热缺血再灌注早期eNOS mRNA的表达和抑制其稍后iNOS mRNA的表达，而发挥其对大鼠肝脏切除术中肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用。     

诱生型一氧化氮合酶在胆道感染大鼠肝细胞中的表达

目的　了解诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)在胆道感染大鼠肝细胞中表达的情况及其规律。方法　制作大鼠胆道感染模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ黄递酶组织化学法检测大鼠肝细胞中iNOS的表达。结果　大鼠胆道感染 2h后肝细胞即有iNOS的表达切片积分光度(13 5 8± 0 6 4) ,与对照组切片积分光度 (3 5 9± 0 2 8)相比 ,P <0 0 1。 8h达到峰值切片积分光度(2 9 2 7± 0 90 ) ,2 4h至 48h仍有较高表达切片积分光度分别为 (19 47± 0 6 5 )和 (19 96± 0 78)。结论　胆道感染时肝细胞可持续高效地表达iNOS ,提示胆道感染时肝脏是合成NO的重要器官 ,并可能对胆道感染的转归具有重要影响     

诱导型一氧化氮合成酶在迟发性血管痉挛中的作用

目的　以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用。方法　 3 2只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组 ,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛 ,对照组枕大池注射生理盐水。第 8天行脑血管造影 ,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮 (NO)浓度。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )法和免疫组织化学法测定并评价iNOSmRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达。结果　颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉 (MCA)明显变细 ,大脑中动脉中段直径 (MD)与镫骨动脉中段直径 (SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少 3 0 %。对照组脑脊液中NO浓度为 (11.70± 2 .62 ) μmol/L ,实验组脑脊液中NO的浓度为(5 5 .67± 12 .84)μmol/L。iNOSmRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质 ,其中基底动脉表达最强。 结论　iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤。     

Overexpression of inducible nitric oxide synthase in gastric mucosa of rats with portal hypertension: correlation with gastric mucosal damage

BACKGROUND: An increased biosynthesis of nitric oxide (NO) has been implicated in the hyperdynamic circulation and development of collaterals of portal hypertension (PHT) because of its potent vasodilatory effects. NO is synthesized from L-arginine by three different isozymes of nitric oxide synthase (nNOS, iNOS and eNOS). Thus, the expression of inducible NOS (iNOS) might account for NO overproduction in PHT. However, in previous investigations, the role of iNOS in the pathogenesis of PHT gastropathy remained controversial. Our current study was in both molecular and protein levels to determine whether the expression of iNOS is responsible for PHT gastropathy. MATERIALS AND METHODS: PHT was induced experimentally by partial ligation of the portal vein. Fourteen days after partial ligation of the portal vein, the rats were randomly assigned to receive either vehicle or L-NAME (NOS inhibitor) at doses of 5 mg/kg/day, 10 mg/kg/day, or 25 mg/kg/day by gastric lavage twice a day for 1 week. Sham operated rats served as controls. Northern hybridization and in situ hybridization are used to compare the expression of gastric mucosa iNOS mRNA in the PHT rats and the controls. NO was measured by the Griess method after reduction of nitrate to nitrite with nitrate reductase. Immunohistochemical staining was carried out to detect the iNOS protein. In addition, the severity of gross gastric mucosal lesions was evaluated macroscopically by a gross ulcer index. RESULTS: The iNOS expression at both mRNA and protein was prominently increased in PHT rats, accompanied with the enhanced NO production. The gastric mucosa iNOS mRNA and serum NO levels were significantly decreased after L-NAME administration (P < 0.05). However, the markedly reduced gastric mucosal damage in PHT rats was observed only at high does of L-NAME (25 mg/kg/day) administration. CONCLUSION: PHT triggers overexpression of iNOS mRNA and proteins in rat gastric mucosa, but that this alone does not account for PHT gastropathy.     

诱导型一氧化氮合成酶对同系大鼠移植肠运动功能的作用

目的 观察诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)对同系原位全小肠移植术后早期移植肠运动功能的影响.方法 分为对照组、移植组、L-NIL治疗组,每组12只大鼠.对照组行十二指肠造瘘术,另两组均行同系原位全小肠移植及十二指肠造瘘术,术后分别给予生理盐水、L-N6-(1-亚氨乙基)-赖氨酸(L-NIL).于术后2 d,各组取6只获取肠段行病理组织学检查,观察炎性损伤程度,并采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测iNOS mRNA及蛋白表达水平.各组另6只行小肠传输实验,观测小肠传输功能.结果 移植组呈明显炎性损伤改变,iNOS mRNA及蛋白表达水平(1.278±0.142)%,(56.33±5.16)%较对照组(0.066±0.016)%,(9.17±3.17%)上调(P＜0.01),较对照组小肠传输延迟(P＜0.01).L-NIL治疗组炎性损伤程度较移植组减轻,iNOS mRNA及蛋白表达水平(0.588±0.096)%,(26.17±4.14)%较移植组下调(P＜0.01),且小肠传输延迟有改善(P＜0.01).结论 iNOS在术后早期移植肠炎症损伤及其引发的肠运动功能障碍中可能起重要作用.     

白细胞介素-10对大鼠脊髓诱导型一氧化氮合酶基因表达的干预作用

目的　探讨诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA在损伤脊髓组织中的表达规律及白细胞介素 (IL) 10的干预作用。方法　将 64只SD大鼠随机分为 3组 :单纯脊髓损伤 (SCI)组、IL 10组及假损伤组 (Sham组 )。除Sham组不致伤脊髓外 ,均以改良Allen(10 g× 5cm)打击法制作大鼠急性SCI模型 ,IL 10组于脊髓损伤后 3 0min腹腔注射IL 10溶液 10 μg ,分别于伤后 3、12、2 4、48及 72h处死 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法测定损伤脊髓组织iNOSmRNA的表达情况 ,并与单纯SCI组和Sham组作对照。结果　脊髓无损伤时未发现iNOSmRNA表达 ,损伤后逐渐出现表达上调 ,于伤后 12h明显增强 ,2 4h达高峰 (0 .60 85± 0 .0 166) ;IL 10组中 2 4h亚组iNOSmRNA表达 (0 .5 70 5± 0 .0 2 0 3 )出现抑制性改变 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　IL 10可明显抑制大鼠脊髓损伤后iNOSmRNA的高表达     

一氧化氮在大白鼠肝硬变门静脉高压症中的作用

为探讨一氧化氮在肝硬变形成过程中的作用，我们通过观察一氧化氮合成酶在正常鼠和肝硬变、门静脉高压症大鼠肝脏的分布，同时测定了门静脉血亚硝酸盐／硝酸盐离子水平，并监测两组动物的血液动力学指标。结果发现：正常鼠肝脏的一氧化氮合成酶染色阴性，肝硬变鼠肝脏的再生假小叶内肝细胞的一氧化氮会成酶染色为强阳性；两组动物门静脉血的亚硝酸盐／硝酸盐离子的浓度分别为９．８±３．２ｕｍｏｌ／Ｌ，２６．７±６．８ｕｍｏｌ／Ｌ，差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）；肝硬变大鼠的门静脉压力、门静脉血流量显著高于正常大鼠（Ｐ＜０．０５），而内脏血管阻力显著低于正常大鼠（Ｐ＜０．０５）。结果提示：一氧化氮在肝细胞的损伤及肝硬变门静脉高压的血液动力学改变中起重要作用。     

抗氧化剂抑制内毒素性休克大鼠诱导型一氧化氮合酶基因表达

感染性休克时循环机能障碍的显著特点表现为进行性、顽固性低血压,伴对血管活性药物敏感性降低,以至组织器官灌注不足、重要器官机能代谢障碍,病死率仍高达30％～70％。休克时循环机能障碍所涉及的病理生理机制极其复杂,脂质过氧化物的堆积和NO的爆发生成是其中的关键病理因素之一。我们以往的研究中发现抗氧化剂能部分逆转内毒素休克大鼠的血管低反应性,为了进一步探讨其治疗学机制,本实验对抗氧化剂在内毒素性休克大鼠iNOS mRNA表达中的作用进行了观察。     

诱导型一氧化氮合成酶在大鼠坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞的表达

目的通过研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,明确其在ANP所致肺损伤中的作用。方法72只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP组、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组,每组24只。逆行性胰胆管注射3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取AM,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,AM分泌iNOS水平及iNOSmRNA表达情况,并行肺组织学检查。结果ANP大鼠AM iNOS的表达随时间进展而增强,同时肺损伤也逐渐加重。L-NAME组则恰好相反,与ANP组相比有显著性差异(P<0.05)。结论ANP发生后,肺泡巨噬细胞iNOS表达增强,并促进肺损伤。     

血管内皮生长因子对关节软骨细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的关节软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法 体外培养SD乳鼠关节软骨细胞,用白细胞介素(IL)-1β诱导的方法建立骨关节炎(OA)体外模型,实验分为4组,每组加入不同处理因素进行干预,A组:(正常对照组)不加任何处理因素;B组:10 μg/L VEGF;C组:10 μg/L IL-1β;D组:10 μg/L VEGF+ 10 μg/LIL-1β。采用实时荧光定量PCR( Real Time PCR)检测iNOS mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法( Western blot)检测iNOS蛋白的表达。结果 iNOS mRNA的表达:A组iNOS mRNA无表达,B组(9.64±1.64)、C组(17.27±2.01)及D组(28.93±6.63),3组的iNOS mRNA表达量显著升高,进一步组间比较,D组软骨细胞iNOS的mRNA表达水平明显高于B组(P＜0.01)及C组(P＜0.05),C组软骨细胞iNOS的mRNA表达水平高于B组(P＜0.05)。iNOS蛋白的表达:A组iNOS蛋白无表达,B组(0.44±0.12)、C组(0.74±0.07)及D组(1.38±0.38),3组的iNOS蛋白表达量显著升高,进一步组间比较,D组软骨细胞iNOS的蛋白表达水平明显高于B组(P＜0.01)及C组(P＜0.05),C组软骨细胞iNOS的mRNA表达水平高于B组(P＜0.01)。结论 在OA的发病过程中,VEGF可能通过上调软骨细胞iNOS的表达发挥重要作用。     

盐酸戊乙奎醚对创伤性休克兔肠组织诱导型一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量的影响

目的 研究盐酸戊乙奎醚(penehyclidine hydrochloride,PHC)对创伤性休克兔复苏后肠黏膜损伤的保护作用.方法 采用Lamson's法建立创伤性休克动物模型,24只健康日本长耳大白兔,采用随机数字表法分为4组(每组6只):对照组(Con组)、生理盐水复苏组(NS组)、PHC处理组(PHC组)、山莨菪碱(anisodamine,ANI)处理组(ANI组).分别在休克前(T1),休克末(T2),复苏后即刻(T3)、2 h (T4)、4 h(T5)、6 h(T6)等6个时间点动态观察MAP和HR,实验结束后放血处死动物取小肠组织,观察肠组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活性和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量的变化,光镜下检查组织病理学变化. 结果 各实验组动物T2时的MAP显著降低(均≤45 mmHg)(1 mmHg=0.133 kPa);与Con组和PHC组比较,T3-T6时NS组的MAP显著低于T1时,差异有统计学意义(P＜0.05).与Con组和PHC组比较,T3～T6时NS组的HR较T1时显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);NS组、PHC组和ANI组肠组织iNOS活性[(4.39±0.44)、(1.59±0.49)、(1.62±0.62) U/mg]及NO含量[(5.81±0.27)、(2.10±0.24)、(2.15±0.30) μmol/g]与Con组[(0.70±0.24) U/mg、(0.70±0.32)μmol/g]比较,差异有统计学意义(P＜0.05).NS组肠组织iNOS活性及NO含量显著高于PHC组、ANI组,差异有统计学意义(P＜0.05).病理组织学检查显示PHC组和ANI组肠黏膜损伤较NS组显著减轻. 结论 PHC和ANI有助于稳定创伤性休克兔的血流动力学,对创伤性休克造成的肠黏膜损伤有一定的保护作用,其作用机制可能是通过抑制iNOS活性,从而减少NO含量的生成而起作用的.