人脑神经干细胞对不同储存方式及分离培养和诱导分化条件的要求

背景近年来发现神经干细胞可于体外增殖并分化为神经细胞,是用来修复替代损伤神经组织的较为理想的来源,但是神经干细胞的培养中如何提高它的增殖能力,诱导分化成需要的表现型,尚处于研究探讨阶段.目的探讨细胞冻存和非冻存方法分离培养人脑神经干细胞及诱导其向成熟神经细胞分化的培养条件.设计以细胞为观察对象,单一样本研究.单位江西医学院泌尿外科研究所,江西医学院第二附属医院神经外科.材料实验于2003-12/2004-06在江西医学院泌尿外科研究所完成.取16周龄新鲜人胚脑组织.方法用胰蛋白酶消化法从人胚脑中分离单个细胞,细胞冻存1个月后复苏或/和新鲜细胞用无血清培养基进行体外培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞生长,用血清诱导其分化;采用免疫荧光细胞化学染色方法检测培养的细胞神经巢蛋白抗原和分化后成熟神经细胞抗原神经元特异性烯醇化酶的表达.观察碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子及血清对分离培养的人脑神经干细胞增殖与分化的影响.主要观察指标①冻存与新鲜细胞后续培养的生长状况.②细胞形态变化.③神经干细胞标志物神经巢蛋白及成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶的鉴定.结果①从胚龄16周的新鲜人胚脑中成功分离出神经干细胞.人胚脑原代细胞为圆形亮球状,培养3d后可见细胞开始聚集成神经球,部分呈悬浮生长,2周后神经球增大,部分细胞增大数倍,具有极强折光性,可见分裂增殖.经传代后细胞仍保持原有特征,细胞形态不变.克隆细胞在有血清培养基中培养,24 h后可见大部分细胞贴壁生长,细胞从神经球游出分散,形态不规则;48 h后多数细胞分化为大量形态不一的、分散成片的多突起星状细胞和神经元样细胞,突起相互交织成网.②分离出的神经干细胞在体外培养条件下传代培养,并表达神经于细胞标志巢蛋白;含血清培养基培养48h分化后的细胞主要表达成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶.③冻存复苏的细胞95%以上为活细胞,与新鲜细胞比较,细胞生长状况无明显差别.结论用无血清培养条件下结合碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的作用,使干细胞体外得到了分离培养、增殖和纯化,证实其方法可行,同时冻存和新鲜细胞的比较,说明可用冻存方法保存人胚脑细胞,复苏后使用.     

人胚胎脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化特征

目的：观察人胚脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化情况。 方法：实验于2004-10／2005-04在西安交通大学医学院神经生物教研室完成。①从7～10周胚龄流产人胚胎脊髓分离脊髓神经干细胞（家属知情同意），采用无血清培养技术进行原代和传代培养。培养液组成：DMEM／F12（1：1），表皮生长因子20μg／L，碱性成纤维细胞生长因子20μg／L，重组人白血病抑制因子10μg／L，N2添加剂（终浓度为10mL/L）。②并采用免疫荧光法检测细胞的分化情况。 结果：①人胚脊髓神经干细胞形态学观察：原代细胞培养得到大量悬浮生长的神经干细胞球，形态较规则，呈圆形，细胞边界清楚，折光性强。部分细胞贴壁生长继而分化。传代培养后，细胞团生长速度明显加快；传3代以后脊髓神经干细胞易贴壁。②人胚脊髓神经干细胞的鉴定和分化结果：神经干细胞球，巢蛋白染色阳性；可诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 结论：人胚胎脊髓分离培养得到的细胞具有脊髓神经干细胞的基本特征，可进一步用于基础及临床研究。     

人胚胎脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化特征

目的:观察人胚脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化情况。方法:实验于2004-10/2005-04在西安交通大学医学院神经生物教研室完成。①从7～10周胚龄流产人胚胎脊髓分离脊髓神经干细胞(家属知情同意),采用无血清培养技术进行原代和传代培养。培养液组成:DMEM/F12(1∶1),表皮生长因子20μg/L,碱性成纤维细胞生长因子20μg/L,重组人白血病抑制因子10μg/L,N2添加剂(终浓度为10mL/L)。②并采用免疫荧光法检测细胞的分化情况。结果:①人胚脊髓神经干细胞形态学观察:原代细胞培养得到大量悬浮生长的神经干细胞球,形态较规则,呈圆形,细胞边界清楚,折光性强。部分细胞贴壁生长继而分化。传代培养后,细胞团生长速度明显加快;传3代以后脊髓神经干细胞易贴壁。②人胚脊髓神经干细胞的鉴定和分化结果:神经干细胞球,巢蛋白染色阳性;可诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:人胚胎脊髓分离培养得到的细胞具有脊髓神经干细胞的基本特征,可进一步用于基础及临床研究。     

人胎肺间充质干细胞分离培养条件及向心肌细胞诱导分化的可能关联

目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素。方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成。取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞。观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线。将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中。加Dulbecco修正Eagle’s基础培养液培养24h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两三次。每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle’s基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle’s(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值。用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44。人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中。每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72h后换成Dulbecco修正Eagle’s基础培养液,以后每3d换液1次。观察细胞在各组中变化情况,诱导12d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色。结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性。Dulbecco修正Eagle’s培养液比先进的Dulbecco修正Eagle’s培养液更适合于这类细胞生长。经10μmol/L5-氮胞苷诱导48h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上。结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中能够大量扩增。②并表达CD25,CD105,CD166和CD44等细胞表面标志。③10μmol/L5-氮胞苷诱导48h对该细胞向心肌细胞分化有明显促进作用。     

不同培养条件对神经干细胞分化的影响

目的:观察在不同血清浓度的诱导条件下神经干细胞定向分化为两类不同神经细胞的情况。方法:通过无血清培养的方法,将原代培养所获得的神经干细胞克隆经传代纯化后,分别接种在加入NeuralBasal,DMEM/F12+50g/L胎牛血清以及DMEM/F12+100g/L胎牛血清3种不同的培养基的培养皿中,7d后进行NF-200,GFAP免疫双标染色,在显微镜下随机选取20个视野,记数神经元和胶质细胞的比例。并进行统计学处理。结果:在无血清、50g/L以及100g/L胎牛血清浓度下,神经元与胶质细胞的比例分别为:65%:35%,45%:55%,33%:67%。在无血清和低血清浓度下,所分化的胶质细胞为原浆型星形胶质细胞,而在高血清浓度下则分化为纤维型星形胶质细胞。结论:血清浓度的高低决定了神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例,并且对所分化的胶质细胞的种类也有影响。在无血清条件下神经干细胞趋向于向神经元分化。     

肝干细胞的分离培养和诱导分化及应用

近年来,肝干细胞的基础研究已取得重大进展,肝干细胞可分化为肝细胞和胆管细胞已经得到了共识.目前多用两步胶原酶灌流消化法、密度梯度离心法、离心淘洗技术、荧光激活细胞筛选法及免疫磁珠细胞筛选法进行肝干细胞的分离纯化.然而肝干细胞的定向分化是一个复杂的过程,是在一些细胞内外因素及肝脏微环境的作用下完成的.肝脏微环境有利于干细胞的生长、分化与功能发挥.肝细胞牛长因子能够促进肝干细胞生长增殖,并且促进其向成熟肝细胞分化,肝细胞转录因子在肝干细胞的分化调控中也起重要作用.肝癌可能是肝干细胞分化不全或分化异常所致,肝干细胞可望作为靶向基因治疗肝癌极具潜力的载体细胞.     

人牙髓干细胞的体外培养及神经样诱导分化

背景：牙髓组织来源干细胞的发现及概念的确立有助于从细胞水平上认识牙齿发育和再生修复机制。目的：了解人牙髓干细胞向神经元样细胞诱导分化能力和诱导分化条件。方法：取健康青年人的第三磨牙的牙髓组织后,制成单细胞悬液,加入含有体积分数为15%胎牛血清α-MEM培养基在6孔板培养,传代培养后加入丁羟基茴香醚、forskolin、β-巯基乙醇、碱性成纤维细胞生长因子诱导剂进行培养。结果与结论：免疫荧光和反转录-聚合酶链反应检测显示,诱导2周后人牙髓细胞除了stro-1,Col-Ⅰ,牙本质涎蛋白表达阳性外,还有巢蛋白,神经元特异性烯醇化酶的表达也是阳性,而牙龈纤维细胞表达均为阴性。说明人牙髓组织中存在成体干细胞,在一定的诱导培养条件下,牙髓干细胞有向神经元样细胞分化的潜能。     

人脑神经干细胞体外培养中增殖、自我更新及多向分化潜能的观察

背景：神经干细胞为神经系统损伤的修复开辟了新的途径，也是发现某些细胞因子和其作用机制的良好模型，神经干细胞的体外培养、增殖和诱导分化的探讨是这些研究的重要基础。目的：分离培养和鉴定人脑神经干细胞。设计和方法：采用无血清培养基分离和培养人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。地点和材料：实验在福建医科大学分子医学研究中心实施。实验材料为自然流产的孕龄6—8周的人胚胎脑组织。主要观察指标：人脑神经干细胞在体外培养条件中的增殖、自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能。结果：人胚胎脑组织分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外大量增殖，经诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：从人胚胎脑皮质成功分离培养出的神经干细胞，是研究神经干细胞诱导分化的良好模型。     

人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点

目的：探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法。方法：实验于2003-09／2004—12在重庆医科大学基础研究所完成。人胚胎来源为7-12周人工药物流产胎儿，由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供，征得产妇本人同意。①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞，经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞。②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原。⑧观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响，分析其生长特点并绘制生长曲线。④采用悬浮细胞培养法扩增细胞，冷冻复苏后观察细胞的生物学特性。结果：①人胚胎神经干细胞体外生长特点：从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞。经体外传至15代，神经干细胞细胞数量扩增至200倍。②神经干细胞接种密度对增生的影响：当种植细胞的密度为1&;#215;10^5L^-1,1&;#215;10^7L^-1时，体外培养30d后仍呈单细胞贴壁状态。以1&;#215;10^9L^-1细胞密度接种时，12h后即见多个单细胞聚成的小球，悬浮生长。③神经干细胞自我更新能力的检测结果：多数单个细胞在培养后24～48h分裂为2-4个细胞的小克隆，7～10d均发展为上百个细胞的较大的克隆。④nestin抗原的表达：培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性。⑤神经干细胞多向分化能力检测：NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示，被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着，呈阳性表达。⑥神经干细胞复苏后的存活率：冻存1，4，8，12周的神经干细胞存活率基本相似[（80．2&;#177;1．8）％，（80．1&;#177;1．2）％，（79．9&;#177;0．8）％，（80．1&;#177;2．1）％，P〉0．05]。结论：成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞。经体外培养证明：人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能。     

大鼠胎鼠中脑神经干细胞的分离培养

目的 探讨神经干细胞分离、培养及鉴定的方法，并了解其生物学特性。方法 分离大鼠胎鼠腹侧中脑组织，加入丝裂原bFGF进行克隆密度细胞培养。用免疫细胞化学方法进行神经千细胞及其分化细胞的鉴定。结果 培养的神经干细胞具备神经干细胞的基本特性，以对称和不对称分裂方式增殖形成神经球，并分化为神经元、神经胶质细胞、少突胶质细胞。结论 成功建立了神经干细胞的分离培养方法。     

不同培养体系可逆改变人类胚胎干细胞的分化倾向

背景: 人类胚胎干细胞可以在饲养细胞依赖性培养体系和化学限定性培养体系下维持未分化状态,能够在体内外诱导分化成三胚层来源的细胞类型.目的: 比较饲养细胞和化学限定性培养体系对人类胚胎干细胞特性的影响.方法: 将在饲养细胞培养体系下培养27代的人类胚胎干细胞转入到化学限定性培养基体系中培养56代,然后再将其转回到饲养细胞培养体系中,将3种培养条件下的人类胚胎干细胞(饲养细胞培养体系培养70代、化学限定性培养体系培养56代、化学限定性培养体系下培养70代后转回饲养细胞培养体系下培养13代和20代)进行多能性分子标记SSEA4流式分析等检测分析,同时对3种培养条件下人类胚胎干细胞经拟胚体诱导分化后分别检测多能性基因和三胚层分化基因的表达.结果与结论: 人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定性培养体系下表现出不同的诱导分化倾向,在化学限定性培养体系下表现出向神经诱导分化抑制,这种不同的诱导分化倾向可发生可逆性转换,当人类胚胎干细胞由化学限定性培养体系转回到饲养细胞培养体系时,诱导分化倾向表现出与其在饲养细胞下诱导分化一致的模式.在拟胚体分化中,多能性基因Nanog高可能对诱导分化倾向起着重要作用.与此同时,人类胚胎干细胞SSEA4细胞亚群发生相应的变化,人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定下培养体系下表现的分化倾向与人类胚胎干细胞亚群所占的比例存在关联.     

大鼠神经干细胞体外培养及分化

神经干细胞的研究是最近几年来神经科学及胚胎发育学的热点问题。人们通常认为成年哺乳动物的中枢神经系统组织是不可再生的，中枢神经系统损伤或神经系统退行性病变将只能由神经胶质爬行替代，遗留难以弥补的神经系统功能缺损。而神经千细胞特别是在成年哺乳动物中枢神经系统中发现的神经千细胞对以上观点产生了巨大的冲击。随着神经干细胞的研究深入，必将为神经系统损伤性、退行性疾病的彻底治愈，甚至神经移植治疗带来一次革命性突破。     

胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞分离培养及向肝细胞的诱导分化

背景:目前研究认为在胚胎发育后的多种组织中存在一类干细胞群体,可分化为不同胚层的组织细胞;但又不同于胚胎干细胞,随着妊娠期间胚胎的发育胚胎干细胞会逐渐失去部分分化潜能,会出现一些特殊表型或分子标记,如CD105,称其为胚胎后亚全能干细胞.目的:根据胚胎后亚全能干细胞表达CD105的特性分离胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞,经体内外诱导使其分化为肝细胞样细胞并检测其功能.设计、时间及地点:动物随机分组,细胞分子生物学实验,于2003-03/2005-03在天津市第三中心医院卫生部人工细胞工程技术研究中心完成.材料:取22周龄左右胎儿股骨和胫骨骨髓分离出胚胎后亚全能干细胞.以雌性成年SCID鼠作为干细胞移植的受体.CD105免疫磁珠为德国Miltenyi Biotec产品.鼠抗人白蛋白抗体为美国Sigma产品.碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为英国PEPROTECH产品.方法:利用密度梯度离心结合免疫磁珠方法分离胎儿骨髓CD105(+)胚胎后亚全能干细胞,体外培养,用含30 μg/L肝细胞生长因20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的诱导培养基将其向肝细胞样细胞诱导分化.将24只SCID鼠随机分为干细胞治疗组和对照组,每组12只,均按800 mg/kg的剂量向腹腔内注射D-氨基半乳糖制备肝损伤模型.造模次日,干细胞移植组鼠在肝原位输注106左右CD105(+)细胞,对照组分别输注106左右的CD105(-)细胞或同等体积的培养液.主要观察指标:于干细胞移植后2,7d,1,3个月对肝脏组织行免疫组化检测人源白蛋白表达.结果:免疫磁珠筛选后的细胞免疫细胞化学检测CD105呈弱阳性表达:细胞在对数生长期的倍增时间为30 h左右:约传10代后进入衰退期.SCID鼠移植胚胎后亚全能干细胞3个月后在小鼠肝脏中可见有点状或小灶状的人白蛋白表达,对照组未见表达.结论:来源于胎儿骨髓的胚胎后亚全能干细胞可以在肝脏微环境下转化为肝细胞样细胞.     

胰腺干细胞的分离培养与诱导分化

胰岛素替代治疗是目前最常用于治疗糖尿病的方法,许多难治型糖尿病患者则通过胰腺或胰岛移植成功地控制了血糖。但由于胰腺供体的缺乏以及移植排斥反应的存在,限制     

本期专题：胰腺干细胞的分离培养与诱导分化

1小鼠胰腺千细胞在胎鼠成纤维细胞饲养层条件下的体外连续传代培养,见2009年13卷40期7964～7968页。2昆明小鼠胰腺干细胞分离培养及特异性标志物巢蛋白的鉴定,见2007年11卷7期1285-1283页     

人胚胎生殖干细胞的体外培养研究

本实验在综合分析目前国内外人胚胎生殖细胞（EG细胞）的培养条件后,采用组织块培养法,以同源胚胎的成纤维细胞为饲养层,在不添加任何细胞因子的情况下,对人EG细胞进行体外培养。该培养体系确保了在培养过程中人EG细胞有充足的来源,避免了胰酶以及一些机械操作对原始生殖细胞（PGCs）的损伤,同时也避免了由于用小鼠成纤维细胞做饲养层,而对培养体系造成的异种蛋白的污染。这是关于建立人EG细胞合适的体外培养体系的一次有意义的探索。     

分离培养不同胚龄人神经干细胞的方法比较

目的:探讨不同胚龄人神经干细胞分离和培养的最适条件,为神经干细胞的基础及应用研究打下基础。 方法:采用无血清培养和单细胞克隆技术,从胚龄10周和20周人脑海马组织中分离和培养神经干细胞,并应用免疫细胞化学染色予以鉴定。 结果:从两个不同胚龄的人脑海马组织中均分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,未包被组10周龄的人胚脑海马组织在高密度悬浮培养法时神经干细胞生长不良,在其他密度及培养法均有神经干细胞克隆球形成;20周的人胚脑海马组织仅在中等密度悬浮培养法及 高密度贴壁培养法中有克隆球形成;包被组两种胚龄海马组织在各种密度培养法神经干细胞均生长不良。 结论:人胚脑海马组织中存在具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,且胚龄越大,培养难度越大;高密度贴壁培养法适宜各胚龄神经干细胞的分离培养。     

人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点

目的:探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法。方法:实验于2003-09/2004-12在重庆医科大学基础研究所完成。人胚胎来源为7～12周人工药物流产胎儿,由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供,征得产妇本人同意。①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞,经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞。②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原。③观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响,分析其生长特点并绘制生长曲线。④采用悬浮细胞培养法扩增细胞,冷冻复苏后观察细胞的生物学特性。结果:①人胚胎神经干细胞体外生长特点:从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞。经体外传至15代,神经干细胞细胞数量扩增至200倍。②神经干细胞接种密度对增生的影响:当种植细胞的密度为1×105L-1,1×107L-1时,体外培养30d后仍呈单细胞贴壁状态。以1×109L-1细胞密度接种时,12h后即见多个单细胞聚成的小球,悬浮生长。③神经干细胞自我更新能力的检测结果:多数单个细胞在培养后24～48h分裂为2～4个细胞的小克隆,7～10d均发展为上百个细胞的较大的克隆。④nestin抗原的表达:培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性。⑤神经干细胞多向分化能力检测:NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示,被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着,呈阳性表达。⑥神经干细胞复苏后的存活率:冻存1,4,8,12周的神经干细胞存活率基本相似[(80.2±1.8)%,(80.1±1.2)%,(79.9±0.8)%,(80.1±2.1)%,P>0.05]。结论:成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞。经体外培养证明:人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能。     

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及自然分化的初步观察

目的 神经干细胞体外培养的成功是进一步研究其分化机制的基础，从胚胎大鼠脑室下区分离、培养、鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)，并观察其向神经元的分化情况。方法 分离胚胎SD大鼠脑室下区的组织，采用无血清原代及传代培养方法，获得具有克隆能力的细胞群；应用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞并检测分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达；应用流式细胞检测技术观测神经干细胞随时间向神经元的分化情况。结果 从胚胎大鼠脑室下区分离培养的细胞群具有克隆增殖能力，表达神经上皮干细胞蛋白(nea6n)，分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原；随着贴壁后分化时间的延长，表达nestin的细胞数量从80．5％下降到10．9％，向神经力特异性烯醇化酶(newonspecific enolase，NSE)阳性细胞数量则从1．1％上升到31．6％。结论 用本方法分离的细胞具有自我更新和增殖能力，并具有多分化潜能，是中枢神经系统的干细胞；随着分化时间的延长，神经干细胞数量下降，而神经元比例有明显上升。     

人胎肾间充质样干细胞分离鉴定及其向脂肪和成骨细胞的分化

目的：分离纯化人胎肾中的间充质样干细胞，在化学因子作用下诱导其定向分化，并对其生物学特性进行初步鉴定。方法：实验于2005—10／2006-01在暨南大学医学院血液病研究所完成。①利用二步离心法、密度梯度离心法及细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎肾间充质样干细胞。细胞来源为自然流产胎儿，供者知情同意。②流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志。（3）添加常规诱导液诱导其向脂肪分化[以脂肪诱导分化液（DMEM／F12＋体积分数为0．1的胎牛血清＋1μmol／L地塞米松＋5u／mL胰岛素＋200μmoL／L消炎痛）进行培养]、成骨细胞分化（完全培养基中加入0．1μmoL／L地塞米松，10mmol／L β-磷酸甘油，50μmoL／L维生素C进行培养）并加以鉴定。结果：从人胎肾中成功分离纯化得到间充质样干细胞：（DP6代细胞有79．1％的细胞处于静止期／DNA合成前期。②表达CD29，CD44，CDl05和CD166，不表达造血细胞标志CD15，CD34，CD45。（3）不表达与移植物抗宿主病相关的HLA—DR，CD80，CD86，CD40，CD40L。④在向成骨分化的诱导液中培养后，间充质样干细胞发生形态变化，碱性磷酸酶染色阳性，出现钙结节；在脂肪诱导分化液内培养后，细胞形态发生变化，油红O染色阳性。结论：人胎肾中含有间充质样干细胞，人胎肾间充质样干细胞具有多向分化潜能，且免疫原性弱，可以作为组织工程和细胞治疗种子细胞的来源之一，但目前存在较难分离纯化，细胞产量不大的不足。