苦参碱诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的研究

目的 观察苦参碱是否能诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡及凋亡相关基因的变化。方法 0－3.0g/L苦参碱处理HepG2细胞,光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL法原位检测DNA断裂;流式细胞仪检测凋亡峰;AnnexinV-FITC/PI双标记检测早期凋亡;免疫组化和原位杂交法检测wp53,bcl-2,bax,c-myc,Fas等凋亡相关基因的表达,采用真彩色图像分析仪定量检测。结果 1.5-3.0g/L苦参碱可诱导HepG2凋亡,并且使凋亡相关基因wp53,bax,Fas表达上调,而抗调亡基因bcl-2,c-myc表达下调。结论 一定浓度的苦参碱可诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,并且该凋亡与凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

HBV对肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15中MMP-2及MMP-9的表达影响

目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9在肝细胞癌(HCC)细胞系HepG2和HepG2.2.15中的表达情况,探讨乙型肝炎病毒(HBV)对肝癌细胞系(HepG2,HepG2.2.15)中MMP-2、MMP-9表达的影响及其与癌细胞侵袭转移之间的关系。方法用明胶酶谱法检测HepG2细胞和稳定转染了HBV质粒的HepG2.2.15细胞中MMP-2和MMP-9的表达情况,观察两种细胞的某些生物学活性,用细胞生长曲线检测两者的生长速度。结果明胶酶谱法检测HepG2细胞中MMP-9的表达水平高于HepG2.2.15细胞(P<0.05),而两者MMP-2的表达差异不显著(P>0.05)。细胞生长曲线显示HepG2细胞的生长速度快于HepG2.2.15细胞。结论通过体外鉴定肝细胞癌细胞系HepG2细胞和HepG2.2.15细胞生长状态的差异,揭示了HBV的细胞内感染过程中HBV对肝细胞癌的生长具有一定的影响。HBV可影响明胶酶MMP-2和MMP-9的分泌及活性,进而对肿瘤的侵袭转移产生一定的影响。     

MMP2、MMP9在肾癌中的表达及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶－2（MMP2）和基质金属蛋白酶－9（MMP9）在肾癌中的表达及预后的关系。方法：采用S－P法对41例肾癌、5例政党肾组织的MMP2和MMP9进行检测,结合临床资料进行分析,结果：MMP2和MMP9的阳性表达分别为56．1％和43．9％;MMP2和MMP9在高分期、高分级肾 表牵阳性率较低分期,低分级肾癌高（P＜0．05）;MMP2和MMP9阳性表达与阴性表达5年生存率有显著差异（P＜0．05）。MMP2和MMP9的阳性表达高的肾癌患者易侵袭,转移,预后差。结论MMP2和MMP9参与肾癌的侵袭和转移,可作为判断预的指标。     

MMP—2，MMP—9，TIMP—1和TIMP—2在肝癌中原位表达

OBJECTIVE: To explore the expression and clinical prognostic significance of matrix metalloproteinase-2 mRNA (MMP-2 mRNA), tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 mRNA (TIMP-2 mRNA), matrix metalloproteinase-2 protein (MMP-2), matrix metalloproteinase-9 protein (MMP-9), tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 protein (TIMP-1), and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 protein (TIMP-2) in the hepatocellular carcinomas (HCCs). METHODS: Fifty-six specimens of HCCs from 56 patients, who were followed-up, were investigated by in situ hybridization with specific probes for MMP-2, TIMP-2, and by immunohistochemistry with anti-MMP-2, MMP-9 and anti-TIMP-1, TIMP-2 monoclonal antibody. We analyzed the data with chi-square test, spearmans correlation analysis, monovariate Kaplan-Meier plot and multivariate Cox regression analysis. RESULTS: 1. The positive expression of MMP-2mRNA, TIMP-2mRNA, MMP-2 protein, MMP-9 protein, TIMP-1 protein and TIMP-2 protein in the 56 HCCs cases were 48 (85.7%), 35 (62.5%), 44 (78.6%), 41 (73.2%), 30 (53.6%), and 38 (68%), respectively. 2. We found over-expression of MMP-2 mRNA, MMP-2 protein, and MMP-9 protein, but low expression of TIMP-1 protein in the 56 cases of HCCs (P < 0.01, P < 0.05). 3. There was a positive association between TIMP-2mRNA and TIMP-2 protein expression, and between MMP-2 mRNA and MMP-2 protein in HCCs, respectively (r = 0.316, P < 0.05; r = 0.356, P < 0.05). 4. Over-expression of MMP-2 mRNA was positively correlated to the tumor size and TNM classification (r = 0.441, P < 0.001; r = 0.340, P < 0.05), and MMP-9 protein was related to shortened survival (P < 0.05). 5. In both monovariate Kaplan-Meir plot and multivariate Cox regression analysis, the expression of MMP-2 protein and MMP-9 protein were linked to unfavorable prognosis. These results were further confirmed by multivariate analysis in which MMP-2 protein and MMP-9 protein emerged as independent prognostic factors for poor survival regardless of the age, tumor size, tumor grades, TNM classification and expression of MMP-2mRNA, TIMP-2mRNA, TIMP-1 protein and TIMP-2 protein. The hazard ratios of expression of MMP-2 protein and MMP-9 protein were 3.875 and 4.528, respectively. CONCLUSION: The over-expression of MMP-2mRNA, MMP-2 protein and MMP-9 protein and the imbalance between MMP-2 and TIMP-2 play pivotal roles in the degradation of excellular matrix of HCCs. MMP-2 and MMP-9 immunoreactive protein have been closely related to a shortened survival independent of major prognostic indicators in the primary HCC and increase the risk of the patients after the operation.     

乳腺癌患者MMP9和C-erbB-2的表达及意义

目的:探讨乳腺癌患者MMP9和C-erbB-2的表达与转移的之间的关系.方法:应用免疫组化法对48例乳腺癌患者MMP9和C-erbB-2阳性者进行检验分析.结果:48例中MMP9阳性过表达有34例,C-erbB-2阳性过表达31例,两者均阳性表达者26例.淋巴结转移中MMP9阳性过表达有17例(85%),C-erbB-2阳性过表达18例(90%),两者表达与转移密切相关.结论:在乳腺癌患者中MMP9和C-erbB-2表达提示转移几率增加,可以作为乳腺癌的预后指标.     

HepG2细胞系载脂蛋白B表达的调控研究

探讨白细胞介素－１１（ＩＬ－１１）及乙醇对人肝肿瘤细胞系（ＨｅｐＧ２）载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）ｍＲＮＡ表达及蛋白分泌的作用。培养ＨｅｐＧ２细胞，分组加入不同深度ＩＬ－１１进行浓度试验，收集培养液及细胞。用火箭电泳法及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分别检测训ａｐｏＢ含量及ＨｅｐＧ２细胞ａｐｏＢ ｍＲＮＡ的表达。ＩＬ０１１及乙醇抑制试验按同法分组进行。结果ＩＬ－１１能抑制ＨｅｐＧ２细胞ａｐｏＢ表达与分泌，且     

榄香烯注射液对人肝癌细胞系HepG2体外增殖的影响

目的:观察榄香烯注射液对人肝癌HepG2细胞株体外增殖的影响及其特点,并初步探讨其可能的相关作用机制。方法:以5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照组,应用噻唑蓝比色法检测不同浓度榄香烯实验组HepG2细胞的吸光度值、增殖抑制率,并应用流式细胞检测技术(FCM)测定HepG2细胞周期分布特点。结果:HepG2细胞经榄香烯作用36 h后折光率减弱,细胞体积缩小、漂浮细胞增多,细胞生长受到显著抑制,并呈现出明显的时间依赖效应关系。在细胞周期分布特点及抑制率参数上,榄香烯组与空白对照组相比有统计学差异(P<0. 01),而与5-Fu组比较,二者之间无统计学差异(P>0. 05)。同时榄香烯使HepG2细胞周期分布特点发生改变,表现为G0/G1期和G2/M期细胞比例上升,S期细胞比例下降,并且与5-Fu组呈现出相似的趋势。结论:榄香烯注射液在体外能通过抑制肝癌HepG2细胞株DNA复制发挥抑制其增殖的作用。     

MMP—2在膀胱癌和阴茎癌中表达的比较

目的：探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein．ase—2 MMP—2)在膀胱癌和阴茎癌中的表达及意义。方法：采用免疫组化法对MMP—2在42例膀胱癌和45例阴茎癌中的表达进行研究。结果：MMP—2在膀胱癌中的阳性表达率为28．57％(12／42)，在阴茎癌中的阳性表达率为57．78％(26／45)；在膀胱移行细胞癌和腺癌中的阳性率分别为23．68％(9／38)、75．00％(3／4)，两者比较有显著性差异(P＜0．01)。在阴茎癌高分化组阳性率为45．16％，中分化组阳性率为85．7％，两组比较有显著性差异(P＜0．05)。结论：MMP—2在移行上皮癌与鳞状上皮癌中均有表达，其在鳞癌中的表达高于移行细胞癌，腺癌细胞的高表达提示腺癌细胞的浸润性高于移行细胞癌。     

口腔鳞状细胞癌中Paxillin 和MMP－9 的表达及其临床意义

目的: 探讨口腔鳞状细胞癌中Paxillin 和MMP－9 的表达及其临床意义。方法: 采用免疫组织化学－
SP 法检测55 例口腔鳞状细胞癌组织中Paxillin 和MMP－9 的表达,用Spearman 秩相关分析两者之间的相关,用
χ2 检验分析Paxillin 和MMP－9 表达与临床病理参数的关联。结果: ( 1) 本实验结果显示,Paxillin 表达在癌细胞
质和/或胞膜,呈棕黄色。55 例口腔鳞状细胞癌中阳性率为67． 27%( 37 /55) 。MMP－9 主要表达在癌细胞质内,
少量有细胞膜表达,呈黄色。55 例口腔鳞状细胞癌中阳性率为65． 45% ( 36 /55) 。( 2) Spearman 秩相关分析结
果显示,在口腔鳞状细胞癌中Paxillin 和MMP－9 表达呈正相关,关系系数为: rs = 0． 349,P＜0． 05。( 3) Paxillin 和
MMP－9 表达率均与淋巴结转移有关,Paxillin 表达与肿瘤的分化程度有关,与临床分期、年龄、性别无显著关联。
结论: ( 1) Paxillin 和MMP－9 在淋巴结转移组中的表达率均显著高于无淋巴结转移组,提示Paxillin 和MMP－9
表达可能与口腔癌的侵袭转移生物学行为有关联。( 2) Paxillin 和MMP－9 在口腔癌呈正相关,从该结果可推测
在口腔癌的发生发展过程中二者在某一信号通路上具有协同作用。     

苦参碱对人肝癌细胞HepG2的细胞形态影响和相关增殖因素的变化

观察夺参碱作用于ＨｅｐＧ２细胞后,光镜和电镜下细胞形态结构改变以及ＡＦＰ、ＰＣＮＡ和分裂指数的变化。方法倒置显微镜下观察活细胞形态;光镜下观察Ｗｒｉｇｈｔ和苏丹Ⅲ染色的细胞形态和分裂指数;扫描和透射电镜观察细胞表面和内部超微结构改变;免疫组化和图像分析,检测ＡＦＰ和ＰＣＮＡ。结果未用药细胞具有肿瘤细胞典型的形态特征,细胞的分裂指数为５３．８％,胞浆内未见秀明颗粒和空泡,苏丹Ⅲ染色为阴性。;免疫组化     

Y-27632通过抑制ROCK通路降低内皮细胞中基质金属蛋白酶2和9表达

目的：探讨ROCK通路抑制剂Y-27632对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinase 2 and 9,MMP2,MMP9)的表达与活性的影响。方法：体外培养原代HUVEC,分别予以TNF-α (25 ng/mL)、TNF-α+Y-27632(10 μmol/L)处理24 h。 Real-time PCR检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、MMP2和MMP9 mRNA的表达水平;明胶酶谱检测MMP2和MMP9蛋白活性的改变情况。结果：与对照组相比,TNF-α明显上调ICAM-1,VACAM-1,MMP2,MMP9 mRNA的表达(P<0.01)和MMP2,MMP9的蛋白活性(P<0.05);与TNF-α处理组相比,Y-27632可显著抑制ICAM-1,VCAM-1,MMP2和MMP9 mRNA的表达(P<0.01),下调MMP2和MMP9的蛋白活性(P<0.05)。结论：Y-27632可以抑制TNF-α诱导的HUVEC炎症反应和MMP2,MMP9 mRNA和蛋白活性水平。     

黑色素瘤细胞系基质金属蛋白酶9的表达与转移能力的研究

目的探讨三种不同的黑色素瘤细胞系的基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达情况与它们的侵袭转移潜能。方法黑色素瘤细胞系（WM35、WM983 a、WM451）,经细胞培养,利用western blot方法检测以上各细胞系MMP9表达情况,并利用细胞黏附实验和划痕实验检测各细胞系的转移能力。结果转移能力相对较高的细胞系WM451和WM983 a MMP9表达量、划痕愈合能力和黏附性明显高于WM35细胞系;WM451的MMP9表达高于WM983 a,但二者之间在划痕愈合及黏附性上无明显差异。结论黑色素肿瘤细胞系的侵袭转移潜能与其产生MMPs的能力密切相关。     

DESI2基因在肝细胞癌中的表达及其对HepG2细胞凋亡的影响

目的：研究DESI2基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞的影响。方法 Real-time PCR检测53例肝细胞癌与相应癌旁组织中DESI2 mRNA表达。构建DESI2基因真核表达载体pcDNA3．3-DESI2,转染HepG2细胞。 Western blot检测转染后HepG2细胞DESI2蛋白的表达,流式细胞术双标记法检测细胞凋亡率。结果与癌旁组织相比,DESI2 mRNA在肝细胞癌组织中表达下调63．95％。转染DESI2基因真核表达载体pcDNA3．3-DE-SI2后,HepG2细胞DESI2蛋白表达明显增加,细胞凋亡率明显增加。结论 DESI2基因在肝细胞癌中表达下调,其表达上调能够促进肝癌细胞凋亡。     

茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用机制的实验研究

目的探讨茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的作用机制.方法琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞凋亡,RT-PCR检测HepG2细胞中Bcl-2、BaxmRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果MeJA作用HepG2细胞48h后：DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显典型＂梯＂状条带;细胞Bcl-2mRNA表达水平明显下降（P〈0.05）而BaxmRNA表达水平明显增高（P〈0.05）;Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平明显降低（P〈0.01）而Bax蛋白表达水平显著增加（P〈0.01）.结论茉莉酸甲酯通过降低抑凋亡相关基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达,上调促凋亡相关基因BaxmRNA及蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡的发生.     

肝细胞癌中 BTG2基因的表达及其对肝细胞癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的：研究肝细胞癌中BTG2基因的表达以及BTG2基因对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR测定47例肝细胞癌组织中BTG2基因的表达情况。构建表达载体pcDNA-BTG2,转染HepG2细胞。转染后,蛋白质印迹法检测转染后BTG2蛋白的表达,MTT法测定细胞生长抑制率,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果与癌旁组织相比,BTG2 mRNA在肝细胞癌组织中表达明显下调（P＜0．01）。且BTG2的表达与肝细胞癌的分级相关,随着分化程度的升高呈逐渐增加的趋势,但与肝细胞癌的分期及淋巴结转移、远处转移无关。转染表达载体pcDNA-BTG2能够显著上调HepG2细胞中BTG2蛋白的表达,同时,细胞生长抑制率及凋亡率明显增加（ P＜0．01）。结论在肝细胞癌中BTG2基因表达下调,其表达上调能够抑制肝癌细胞增殖并促进凋亡。     

circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况。结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P <0.05)。各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果：(1)不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <...     

HepG2细胞系皮下接种与肝原位接种成瘤的比较研究

目的 探讨皮下接种成瘤与原位接种成瘤在内环境不同情况下对肿瘤生长、侵袭转移能力的影响.方法 选取人肝癌细胞系HepG2进行体外培养.将BALB/c裸鼠随机分为皮下瘤接种、肝脏原位细胞接种两组.观察裸鼠成瘤率、裸鼠存活率、肿瘤生长速度、肿瘤病理学特点及远处脏器转移.结果 HepG2细胞体外生长状态良好,增殖活跃.皮下接种成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,对周围组织有侵袭,但无转移.肝脏原位细胞接种组成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,对周围肝组织和腹壁有侵袭,肝内转移率70%,肺转移50%.结论 HepG2细胞皮下和肝原位接种易成瘤,可用于肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)体内研究的实验模型.如果进行HCC的侵袭转移的机制及药物干预治疗等方面的研究,肝原位接种成瘤更能模拟人类肿瘤生长的条件.     

贝伐珠单抗引起肝癌细胞HepG2的血管内皮生长因子受体2上调表达

目的 探讨贝伐珠单抗对肝癌细胞HepG2 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF） 相关受体的影响。 方法 通过不同浓度的贝伐珠单抗降低培养液中VEGF 来模拟低浓度VEGF 的肿瘤微环境,RT-PCR、ELISA、Western lotting 检测肿瘤细胞VEGF 相关受体表达水平的变化。 结果 细胞培养液的VEGF 浓度大幅度下降（P ＜ 0.05） ;可溶性VEGFR2 的浓度出现了上升（P ＜ 0.05） ;HepG2 细胞VEGF 和VEGFR1 表达水平无明显变化（P ＞ 0.05） ;VEGFR2 表达水平出现了明显的上调（P ＜ 0.05）。 结论 贝伐珠单抗导致了肝癌细胞HepG2 大幅度上调了VEGFR2 的表达。     

水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究

目的探讨水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)表达的抑制作用。方法采用MTT法检测水蛭提取物对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,根据回归方程计算出半数抑制浓度(IC50)。以1/2 IC50含药量的水蛭提取物处理肝癌HepG2细胞,并以5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-cdR)处理作阳性对照,处理72 h时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化等方法检测肝癌HepG2细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT13b mRNA及蛋白表达水平。结果肝癌HepG2细胞DNMT1呈高表达,DNMT3a、DNMT3b呈中低度表达。经水蛭提取物处理后肝癌HepG2细胞DNMT1、DNMT3a表达水平明显下降,DNMT3b基本不表达,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),与5-Aza-cdR组比较,水蛭提取物组降低DNMT1作用弱于5-Aza-cdR,降低DNMT3a、DNMT3b作用明显优于5-Aza-cdR组(P<0.05)。结论水蛭提取物能抑制肝癌HepG2细胞DNTMs表达,参与DNA去甲基化作用可能是水蛭抗肿瘤的机制之一。