白血病抑制因子在小鼠早孕期子宫内膜表达规律及调节的研究

目的 :研究在小鼠胚泡着床中白血病抑制因子 (LIF)的生物学作用以及卵巢激素对LIF表达的调节。方法 :收集孕 1～ 8d小鼠子宫内膜 ,并以动情间期小鼠子宫内膜作为对照 ;将孕 2～ 4d小鼠随机分为 4组 ,分别灌服戊酸雌二醇 (10 0 0 μg/kg)、安宫黄体酮(10 0 0 μg/kg)、戊酸雌二醇 (10 0 0 μg/kg) +安宫黄体酮 (5 0 0 μg/kg)或植物油 ,孕 4d收集子宫内膜。采用流式细胞仪检测LIF在小鼠早期妊娠子宫内膜中的表达规律以及卵巢激素对LIF的调节作用。结果 :LIF呈时序性表达 ,孕第 1、2天表达量与未孕期相似 ,第 3天开始升高 ,第 4天达高峰 ,此后缓慢下降 ,第 7天降到未孕期水平 ;戊酸雌二醇对小鼠孕早期子宫内膜的LIF表达有上调作用。结论 :LIF可能是小鼠胚泡着床过程中的一个重要细胞因子 ,它在孕早期子宫内膜的表达受卵巢激素的调控     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

小鼠胚泡黏附时子宫内膜Galectin-1的变化

目的：探讨小鼠胚胎黏附时子宫内膜Galectin-1的变化。方法：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠d5小鼠胚泡黏附时着床点、着床旁子宫内膜总蛋白，以同龄未交配鼠子宫内膜为对照，差异蛋白质组学显示pⅠ约5．1、分子量约15ku的蛋白点在着床点、着床旁子宫内膜表达上调，且在着床点更明显。对此蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint，PMF)。结果：Mascot：PMF在SWISS．PROT数据库查询为鼠源性Galectin．1。RT．PCR．~果显示d5孕小鼠子宫内膜Galectin．1mRNA水平也明显增加。结论：Galectil9．1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

α-1,3岩藻糖转移酶各亚型在小鼠胚胎着床前后子宫内膜表达的半定量研究

目的 :研究小鼠胚胎着床前后蜕膜组织α 1,3岩藻糖转移酶 (FucT)III～VII型的表达及其在胚胎着床中的作用。方法 :取未孕和孕 1～ 7d小鼠子宫内膜 ,每组 6例。用RT PCR法测定III～VII型mRNA水平的表达 ,并经测序鉴定。结果 :正常小鼠内膜有一定的FucT IV的表达 ,其表达在妊娠第 1天和胚胎着床前后即妊娠第 4天出现峰值。结论 :5种糖基转移酶中只有FucT IV参与了胚胎着床的过程。它的作用可能是参与了胚泡表面特异性抗原Lex等抗原的糖基化 ,从而促进胚胎的植入。     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

PCNA在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的作用。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)及免疫组化方法分别检测未孕(d0)及早孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜PCNA mRNA和蛋白的表达。结果:随着小鼠妊娠天数的增加,PCNAmRNA及蛋白表达量也逐渐增高,在孕d4、d5达到峰值,孕d6、d7逐渐下降。结论:在胚泡植入窗口期子宫内膜PCNA的高表达,可能参与了子宫内膜蜕膜化过程,在胚泡早期植入中发挥作用。     

米非司酮对围植入期小鼠子宫内膜中STAT3表达的影响

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠胚泡植入过程中的生物学作用。方法:将孕鼠随机分为米非司酮组、溶剂组和空白对照组,用免疫组织化学技术和图像分析方法检测各组小鼠孕3～8 d子宫内膜中STAT3的动态表达,并对其进行半定量分析。结果:溶剂组和对照组小鼠子宫内膜中STAT3的表达在孕3 d明显增强,孕4 d达到峰值,且溶剂组和对照组间在孕3～8 d各时间点的表达差异无统计学意义;米非司酮组STAT3的表达较2个对照组显著降低(P<0.01),在孕4 d亦无表达高峰。结论:STAT3是介导胚泡植入的重要因子之一,米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调STAT3的表达,影响子宫内膜容受性的建立,阻碍胚泡顺利植入。     

核因子-κB在小鼠胚泡着床前后子宫表达的初步研究

探讨核因子-κB(NF-κB)在小鼠胚泡着床过程中是否存在的短暂激活。方法:采用免疫组织化学检测小鼠子宫内膜NF-κB的亚基p65蛋白的定位和表达,Western印迹法检测子宫内膜NF-κB的抑制性蛋白IκBα的降解。结果:p65在小鼠胚胎着床前后子宫内膜均有表达,其部位主要在腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆部分,基质细胞和子宫肌层也有微弱表达。妊娠后子宫内膜p65的表达增加,妊娠d5达最高值,d8仍然维持较高水平;而d5IκBα的降解最明显。结论:NF-κB可能通过其短暂激活来参与调节小鼠胚泡着床。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。     

整合素α_v、α_4、β_3、β_1在不同发育时期小鼠胚卵中的表达

目的:观察小鼠受精后1~4 d胚卵(原核期、2-细胞期、4~8-细胞期、胚泡期)整合素αv、α4、β3、β1的表达。方法:用免疫组织化学ABC法检测妊娠1~4 d小鼠胚卵整合素αv、α4、β3、β1的表达。结果:整合素αv、α4、β3、β1在小鼠妊娠1~4 d的胚卵上均有表达,表达强弱不等。整合素αv、α4、β3在受精后第2日表达最强,整合素β1在受精后第3日表达最强;整合素αv在受精后第4日和α4、β3、β1在受精后第1日表达最弱。结论:妊娠1~4 d小鼠胚卵持续表达整合素αv、α4、β3、β1,提示它们可能与小鼠胚卵在输卵管中的运输有关。     

小鼠子宫内膜着床期碱性成纤维细胞生长因子及其受体免疫组织化学观察

为进一步阐明碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)在胚泡着床中的生物学作用 ,本文采用免疫组织化学的方法检测了 b FGF及其受体在小鼠早期妊娠子宫中的分布状况。结果显示 :b FGF及其受体广泛分布于子宫内膜各种细胞中 ,其分布呈现出明显的阶段性变化。受精后 4～ 5 d,b FGF及其受体在子宫内膜上皮和腺上皮中呈阳性反应。随胚泡植入的进行 ,b FGF及其受体在蜕膜细胞中的表达逐渐增加 ,至受精后 d8达到高峰。结果提示 ,b FGF可能是小鼠胚泡着床过程中的一个重要调节因子     

AP-1蛋白在胚胎着床前后小鼠子宫内膜的表达

目的 :研究子宫内膜原癌基因AP 1蛋白在小鼠胚胎着床前后的动态变化 ,了解AP 1在胚泡着床中的作用。方法 :采用Immuno blot和Western blot方法检测AP 1蛋白的表达。结果 :AP 1蛋白的表达高峰出现在小鼠早孕的第 4天、第 5天 ,一直维持到妊娠第 7天 ,每毫克组织的积分光密度值分别为 6 0 .2± 4 .2 1,5 2 .6± 7.0 9,5 0 .2± 5 .89和 5 0 .0±3.6 1。结论 :AP 1蛋白参与了胚胎着床过程中的信号传导并可能与胚胎的早期分化有关。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

Comparison of Pregnancy, Implantation, and Multiple Gestation Rates for Day 3 Versus Day 5 Embryo Transfers

Purpose : To compare pregnancy, implantation, and multiple gestation rates resulting from day 3 and day 5 embryo transfers after in vitro fertilization emphasizing a subset of patients who met criteria for day 5 transfer but elected to undergo day 3 transfer. Method : A retrospective analysis of day 3 and day 5 embryo transfers from January 2001 to June 2002 were evaluated in a community teaching hospital setting. A total of 331 patients 40 years old were included. Using Student's t test, ²test, and Fisher's exact test, we compared the pregnancy, implantation, and multiple gestation rates. Results : Pregnancy, implantation, and multiple gestation rates were not significantly different between the subgroup who met criteria for day 5 embryo transfer but elected day 3 transfer. There was no significant difference between similar parameters in the overall comparison of day 3 versus day 5 embryo transfers. Conclusions : Blastocyst transfers have similar multiple gestation rates, pregnancy rates, and implantation rates when compared to day 3 embryo transfers.     

Expression of galectin-3 in mouse endometrium and its effect during embryo implantation

This study investigated the expression pattern of galectin-3 (Gal-3) in mouse endometrium during early pregnancy and its function during embryo implantation. The expression of Gal-3 was measured at the mRNA level using real-time PCR and at the protein level using immunohistochemistry and Western blotting. The expression of Gal-3 mRNA and protein in the pregnant group was higher than in the non-pregnant group, and mRNA and protein expression reached their maximum levels on days 4 and 2, respectively. Immunohistochemistry results showed that Gal-3 protein presented in luminal epithelium and glandular epithelium and reached its maximum on days 6–8 and days 2–4 after pregnancy, respectively. The number of embryos implanted decreased substantially when Gal-3 was knocked down in mouse endometrium. In conclusion, increased Gal-3 expression after pregnancy is required for embryo implantation.     

Extended embryo culture reduces the implantation rate on day 4 and day 5 when only a maximum of three embryos are cultured beyond the pronuclear stage

OBJECTIVES: To study the potential of embryo transfer after 3, 4 or 5 days of embryo culture under the German embryo protection law according to which only a maximum of three zygotes are allowed to be cultured for embryo transfer. STUDY DESIGN: In a prospective study, 273 patients with assisted reproductive treatment were randomly allocated for transfer on days 3, 4 or 5. Pregnancy and implantation rates were evaluated in regard to day of transfer and results were compared by Chi-square or ANOVA test. RESULTS: Out of 234 transfer cycles, 79 were performed on day 3, 76 on day 4 and 79 on day 5. Pregnancy and implantation rates were 41.8%/27.1% for transfer on day 3, 27.6%/14.1% for day 4 transfer and 16.5%/8.8% for transfer on day 5. These results were significantly different for pregnancy rates on day 3 versus day 5 (P < 0.001) and for implantation rates on day 3 versus day 4 (P < 0.005) and day 3 versus day 5 (P < 0.001). CONCLUSIONS: These findings suggest that extended embryo culture is not beneficial when the option for embryo selection at later stages of development is not available.