不同细胞因子组合对神经干细胞分化的影响

目的:探讨不同细胞因子组合对神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法:采用不同组合的细胞因子(bFGF EGF; bFGF PDGF;bFGF BDNF;bFGF)分离培养大鼠海马神经干细胞,并用免疲细胞化学技术研究神经干细胞的分化情况。结果:在bFGF、bFGF EGF、bFGF BDNF及bFGF PDGF不同因子或因子组合中,均能诱导神经干细胞分化,分化后的神经元比例分别为(14.5±1.2)%、(14.7±1.8)%、(23.3±2.1)%、(35.5±2.4)%,神经干细胞的分化比例趋势为bFGF PDGF >bFGF BDNF>bFGF EGF>bFGF(P<0.05)。姑论:PDGF对bFGF促进神经干细胞向神经元定向分化有较好的协同作用。     

全反式维甲酸联合细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的 探索全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)在诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞过程中的作用.方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含ATRA、bFGF、EGF的条件培养基对培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定.结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星形胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP) .结论 ATRA联合细胞因子具有诱导BMSCs在体外分化为神经元样细胞的能力.     

脑缺血大鼠脑脊液对神经干细胞存活及分化的影响

目的：探讨脑缺血大鼠脑脊液对新生大鼠海马神经干细胞生存及分化的影响。方法：将脑缺血大鼠脑脊液加入神经干细胞的培养液中，观察神经干细胞存活及贴壁细胞团的分化．并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果：悬浮培养细胞实验组较对照组有明显差异；贴壁培养细胞分化的细胞数量较对照组明显增多。结论：脑缺血大鼠脑脊液可促进体外培养神经干细胞存活，并且促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响实验研究

目的研究星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响。方法随机在我院动物实验中心选取3只大鼠为研究对象,将本次实验均分为普通星形胶质细胞的培养的对照组以及星形胶质细胞与神经干细胞互不接触状态下共同培养的实验组。对比两组星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响效果。结果实验组的纯化星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记为阳性,其细胞纯度高到96%,且在神经元特异性烯醇化酶阳性细胞与酪氨酸羟化酶阳性细胞均比对照组多。结论星形胶质细胞不仅可以加快神经干细胞向神经元细胞的分化以及向多巴胺神经元细胞的分化,而且可以延长神经元存活时间,降低神经元凋亡率。     

胚胎大鼠神经干细胞体外分化的激光共聚焦显微镜观察

目的:采用激光扫描共聚焦显微镜观察体外培养胎鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化情况。方法:利用无血清培养方法,分离培养胚胎大鼠大脑NSCs,进行体外扩增培养、传代;采用溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入、双重免疫荧光细胞化学标记方法和激光扫描共聚焦显微镜,用神经细胞的特异性抗体(神经元β-微管蛋白、胶质纤维酸性蛋白),鉴定NSCs向神经元与星形胶质细胞分化的情况。结果:从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并表达神经上皮干细胞蛋白(Nestin)抗原。在血清诱导下,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞2种神经细胞的特异性抗原,NSCs分化为星形胶质细胞神经元的比例分别为(43.70±8.55)%和(23.00±3.69)%。结论:从胎鼠大脑皮质分离出的细胞可获得呈集落样生长的神经干细胞团,并能表达NSCs的特异性抗原;激光扫描共聚焦显微镜可清晰地观察到培养细胞具有分化为神经元和星形胶质细胞的潜能。     

胎鼠脑神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的 研究胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的分离、培养及鉴定方法。方法 从孕15d胎鼠的大脑皮层和海马区脑组织中获取NSCs,在含有B27、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12无血清培养液中培养;传代后用5%胎牛血清培养液诱导NSCs分化。结果 体外分离培养的NSCs在无血清培养液中形成大量的神经球。经3-5代传代的细胞生长稳定。经巢蛋白染色鉴定,大部分为阳性细胞,神经细胞球经胎牛血清培养液贴壁培养后可分化为神经元特异烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白和半乳糖脑苷脂表达阳性的细胞。结论 从孕15d胎鼠大脑皮质和海马组织分离出的NSCs具有自我更新能力和多向分化潜能,其在5%胎牛血清培养液中具有向神经元和神经胶质细胞分化的潜能。     

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经巢蛋白（Nestin）的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高（49.7%）。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

EGB对大鼠神经干细胞分化为星形胶质样细胞的影响

目的：观察银杏叶提取物（EGB）对大鼠海马神经干细胞（NSCs）增殖及分化为星形胶质样细胞的影响。方法：取新生24h内的Wistar大鼠海马组织的细胞进行体外培养，1周后将其接种在培养板中．观察不同浓度的EGB对细胞的生长作用．并检测胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：各实验组NSCs的生长明显好于对照组．免疫细胞化学显示：同一时间内，诱导NSCs分化为星形胶质样细胞的百分率增高；同一浓度的EGB，诱导神经干细胞分化为星形胶质样细胞的百分率随着时间的延长呈上升的趋势。结论：EGB能促进神经干细胞的存活、增殖及向星型胶质样细胞的方向分化。     

组蛋白去乙酰化酶参与调控神经干细胞分化的研究进展

神经干细胞是一种多能干细胞,具有自我更新及多向分化潜能,在一定条件下能分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞。神经干细胞的分化不仅由细胞周围微环境决定,且受基因调控。神经干细胞的分化复杂,其中组蛋白去乙酰化酶[1]结合细胞内转录因子和信号通路可调节神经干细胞的分化,主要影响神经干细胞分化过程中的转录,从而影响细胞的发育。     

人胚胎神经干细胞体外培养及其增殖与分化的研究

目的 建立神经干细胞分离、培养及分化的鉴定技术，观察神经干细胞增殖、分化的特点。方法 从人胚胎海马区分离神经干细胞，采用无血清培养基，进行体外扩增培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞；利用流式细胞仪和细胞生长曲线检测神经干细胞的增殖能力。结果 从人胚胎脑海马区分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞团中大部分为nestin表达阳性细胞。贴壁分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论 用上述方法分离培养的细胞能表达nestin蛋白，具有自我更新和增殖能力，并具有向神经元、星形胶质细胞分化的潜能，具备神经干细胞的特征，可用于细胞移植等相关研究。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定

目的：从新生大鼠海马分离培养并鉴定神经干细胞。方法：应用含有碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮生长因子（EGF）的无血清条件培养基，采用无底物的悬浮培养法培养神经干细胞，并用免疫细胞化学技术鉴定传代后形成的细胞团。结果：EGF bFGF可能明显地促进神经干细胞分裂增殖，免疫细胞化学检测发现传代后形成的细胞团中的细胞均表达神经上皮干细胞蛋白（Nestin)。结论：我们成功地建立了新生大鼠海马神经干细胞培养模型。     

不同细胞因子体外诱导神经干细胞向神经细胞分化的研究

目的观察碱性纤维母细胞生长因子、白血病抑制因子、脑源性神经营养因子及不同组合对成年SD大鼠脑神经干细胞在体外分化为神经细胞的作用。方法用含碱性纤维母细胞生长因子（bFGF）、B27的无血清细胞培养技术体外培养成年SD大鼠脑神经干细胞,单细胞克隆后行Nestin免疫细胞化学染色;根据培养液中所加营养因子的不同将单细胞克隆传代细胞分为5组培养：bFGF、LIF、BDNF、bFGF＋LIF、bFGF＋BDNF组,此5组细胞培养1周,进行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。结果单细胞克隆培养后克隆球细胞表达Nestin;与bFGF组、LIF组、BDNF组相比,bFGF＋BDNF组和bFGF＋LIF组神经干细胞分化为神经细胞的比例较高（P〈0．01）,其中bFGF＋BDNF组神经细胞的比例最高。结论在bFGF培养条件下,BDNF促进成年SD大鼠脑神经干细胞向神经细胞分化的能力高于LIF。     

BDNF和红景天甙对体外神经干细胞向GABA能神经元分化的研究

目的:探讨BDNF和红景天甙对体外神经干细胞向GABA能神经元分化的研究.方法:取新生大鼠海马组织,将培养的神经干细胞分为对照组;实验组:BDNF组、红景天甙组、BDNF和红景天甙组,免疫荧光双标观察并测定Brdu/NSE,Brdu/GAD65阳性分化率.结果:BDNF和红景天甙组Brdu/NSE、Brdu/GAD65阳性分化率14d达最高,其余各组Brdu/NSE阳性分化率7d达最高;BDNF组Brdu/GAD65阳性分化率7d最高,对照组和红景天甙组无明显变化;BDNF和红景天甙组14d Brdu/NSE、Brdu/GAD65阳性分化率均高于对照组、BDNF组和红景天甙组(P<0.05),且Brdu/GAD65阳性分化率高于本组3、7d(P<0.05).结论:①红景天甙有利于神经干细胞向神经元方向分化;②红景天甙可以提高BDNF对神经干细胞定向分化的能力;③BDNF与红景天甙联合有利于神经干细胞向GABA能神经元分化.     

新生小鼠神经干细胞体外培养、分化及鉴定

目的 简化神经干细胞原代培养的取材及步骤,明确体外定向诱导分化条件,为进一步神经干细胞移植相关实验提供基础条件。方法 新生24 h昆明种小鼠无菌条件下冰上取大脑组织,经机械分离加胰酶消化吹打后,加入含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基中培养;加入不同浓度胎牛血清诱导其分化,应用免疫荧光技术行巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2染色,对培养细胞鉴定。结果 新生小鼠提取神经干细胞可形成神经球,并稳定增殖传代,经诱导可定向分化为神经元及星形胶质细胞。结论 新生小鼠较胎鼠取材简单,可培养高质量神经干细胞,血清浓度同向星型胶质细胞方向的分化概率呈正相关。     

GM-1对新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察不同剂量神经节苷脂(GM—1)对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:从新生大鼠海马组织分离出神经干细胞,分别培养于基础培养液(阴性对照组) ,加入三种不同剂量GM—1(实验组)及含有b FGF(阳性对照组)的神经干细胞培养液。采用神经干细胞球直接计数法测定细胞的增殖能力,并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果:3个实验组神经干细胞的增殖能力较阳性对照组无明显差异,较阴性对照组差异显著,贴壁培养细胞分化发现3个实验组分化能力明显低于阳性对照组。结论:GM—1对新生鼠神经干细胞的增殖起促进作用,对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

Human neural progenitor and stem cells: US20080107633A1

Background: The application is in the field of neural stem cells (NSCs) and cellular therapy. Objective: It aims at establishing conditions for the isolation and propagation of neural progenitor and stem cells from human fetal tissue, with high rate of growth and high yields of differentiation into the neuronal, astroglial and oligodendroglial pathways. Methods: Neural progenitor and stem cells were isolated from fetal forebrain tissue and propagated as neurospheres, in defined medium in the presence of leukemia inhibitory factor (LIF). Three protocols were designed to differentiate human fetal neural progenitor and stem cells into their progenies. Results: The application claims the generation of human fetal neural progenitor and stem cells with a doubling rate between 5-10 days. It claims the differentiation of the neural progenitor and stem cells in vitro, into neurons, astrocytes and oligodendrocytes with high yields, e.g., 20 to 35% for neuronal cells. Conclusion: The establishment of human neural progenitor and stem cells with high rate of growth and high yields of differentiation provides a source of cells for therapy, particularly for the treatment of neurodegenerative diseases, like Alzheimer's and Parkinson's diseases.     

bFGF和BDNF对MCAO大鼠海马区神经干细胞原位增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）对大鼠脑缺血损伤后海马区（SGZ）神经干细胞原住增殖的影响。方法：将Wistar大鼠84只随机分为空白对照组（12只）、bFGF组（24只）、BDNF组（24只）、bFGF＋BD—NF组（24只）。采用线辁法制作局灶性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。分别于缺血再灌注后3d、7d、14d、28d处死大鼠。免疫组织化学方法动态检测SGZ区BrdU、Nestin的表达。结果：各组SGZ区的BrdU和Nestin阳性细胞均在脑缺血3d后开始增加,7d达到高峰,14d后开始下降,28d降至最低水平;与空白对照组相比,均有统计学意义（P〈0．05）;其中bFGF＋BDNF组Brdu和Nestin阳性细胞数增加更明显。结论：侧脑室注射bFGF、BDNF可促进脑缺血大鼠SGZ区内源性神经干细胞原位增殖;bFGF和EGF联合应用对脑缺血大鼠神经干细胞原位增殖效应有协同作用。     

人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

目的研究人神经干细胞（hNSCs）移植对大鼠脊髓损伤的修复作用，并初步探讨其作用原理。方法分离、培养和鉴定hNSCs。24例成年SD大鼠分为移植组12例和对照组12例，均采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作脊髓损伤模型，第9天移植组于损伤脊髓中心分别注入经CM-DiI标记的hNSCs混悬液，对照组注入人DMEM／F12培养液。术后第4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化；术后每7天行BBB评分，评定大鼠后肢运动功能恢复情况。数据进行成组设计资料的t检验。结果成功建立hNSCs的体外培养体系；移植的hNSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，并向脊髓损伤头尾端迁移，免疫组织化学荧光染色示移植细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞；移植组大鼠BBB评分高于对照组（P〈0．05）。结论移植到大鼠损伤脊髓中的人神经干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞，并可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。     

Differentiation of hippocampal stem cells into functional neurons: evolving our understanding of monoamine oxidase-A inhibition

Depression affects many millions of people worldwide and much is still unknown with respect to the mode of action of antidepressant drugs. The hippocampus has been associated with many psychiatric disorders, including clinical depression. Recently, stem cells have also been shown to reside within discrete regions of the hippocampus and can differentiate under a variety of conditions into neural cells. In this issue, Chiou et al. have elegantly demonstrated that cells isolated from the rat hippocampus, and treated with the antidepressant moclobemide, may be differentiated in vitro into neural cells exhibiting features to those of serotoninergic neurons. They have also suggested that this process was mediated, in part, through the expression of specific antiapoptotic genes (Bcl-2 and Bcl-XL) and via activation of extracellular-regulated kinase. This work raises the attractive possibility that the use of antidepressants, such as moclobemide, may exert neuroprotective and potentially neurogenerative effects not just in vitro, but also in vivo, through the selected differentiation of stem cells into functional neurons. The exact mechanisms by which such antidepressants differentiate neural stem cells still remains to be fully elucidated.