MK801慢性处理引起皮层神经元~3H－GABA释放的改变

ＭＫ８０１慢性处理引起皮层神经元￣３Ｈ－ＧＡＢＡ释放的改变施李正，钮心懿（中国医学科学院，中国协和医科大学药物研究所１０００５０，北京）某些急性和慢性神经退行性病变及精神紊乱与兴奋性氨基酸（ＥＡＡｓ）有关［１］。因此，发展专一性强、效能高并毒性低的兴...     

MK801对大鼠全脑缺血/再灌注ASK1信号通路影响以及神经元的保护

目的探讨MK801(dizocilpine,地佐环平)对全脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合成酶(nNOS)介导的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)信号通路及海马CA1区细胞凋亡的影响。方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型。SD大鼠腹腔注射MK801(30mg·kg-1)。通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)检测蛋白质的S-亚硝基化。然后运用免疫印迹、免疫共沉淀和免疫组织化学等方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;应用焦油紫染色的方法检测脑缺血/再灌注后海马CA1区的细胞凋亡情况。结果脑缺血/再灌注引起了ASK1的S-亚硝基化;MK801明显地抑制了脑缺血/再灌注诱导的ASK1的S-亚硝基化的增加;MK801明显降低了Thr845的磷酸化水平、增加了Ser83位的磷酸化水平,从而降低了ASK1的活性;MK801引起ASK1下游MKK4/7-JNK信号通路及下游凋亡的核通路也产生了相应的变化。结论 MK801能够抑制SD大鼠全脑缺血/再灌注引起ASK1的S-亚硝基化,进而影响ASK1凋亡信号通路,对神经元损伤起到保护作用。     

孕酮对大鼠大脑皮质神经元氨基酸类神经递质释放的影响

目的研究孕酮对大鼠大脑皮质神经元GLU和GABA释放的影响。方法孕酮(10μmol.L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,采用OPA-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测-高效液相色谱法测定处理后不同时间点(0.5、1、1.5、2、24、36、48、72)细胞培养液中GLU和GABA的水平。结果与对照组相比,孕酮处理组1、1.5、2、24、36、48、72h GLU水平均下降(P<0.01);孕酮处理组0.5、1、1.5、2、24、36、48、72h GABA水平均升高(P<0.05或P<0.01)。结论孕酮通过抑制神经元GLU的释放,促进GABA的释放来调节氨基酸类递质系统,进而影响神经系统的兴奋性。     

MK801对结肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

摘要： 目的 探究 N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型 1（NMDAR1）在结肠癌细胞 HT29 和 SW116 中的表达, 以及 NMDAR1 拮抗剂 MK801 对 HT-29 和 SW116 细胞生长抑制、 凋亡和迁移的影响。方法 采用免疫组织化学法检测 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 细胞表面 NMDAR1 的表达; 应用噻唑蓝（MTT）比色法测定 62.5、 125.0、 250.0、 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对于 HT-29 和 SW116 细胞增殖作用的影响; 应用流式细胞术检测 2 000 μmol/L 的 MK801 对 HT29 和 SW116 细胞凋亡的影响; 应用细胞划痕实验检测 50 μmol/L MK801 对于结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 迁移能力的影响。结果 结肠癌细胞 HT-29 和 SW116 均表达 NMDAR1, 且主要表达于细胞质中; 各浓度的 MK801 对 HT-29 细胞, 以及浓度为 500.0、 1 000.0、 2 000.0 μmol/L 的 MK801 对 SW116 细胞的生长抑制作用具有时 间效应关系, 24、 48 及 72 h 各 MK801 浓度组对 HT-29 和 SW116 细胞的抑制率随浓度升高整体呈增强趋势, 但抑制 率不呈明显的剂量效应关系; MK801 具有促进 HT-29 和 SW116 细胞凋亡的作用, 且主要表现诱导细胞早期凋亡; MK801 可抑制 HT-29 和 SW116 细胞迁移。结论 NMDAR1 在结肠癌细胞胞质中表达, 且 NMDAR1 拮抗剂 MK801 具有抑制肿瘤细胞生长、 迁移, 促进其早期凋亡的作用, 有望成为新一代抗肿瘤药物。     

动脉血压改变对大鼠下丘脑后部GABA释放的影响

用推～挽灌流技术,定位灌流大鼠下丘脑后部,同时iv给予去氧肾上腺素(15μg·kg·min^-1)和静脉输血(3ml/100g,wt)引起血压升高时,下丘脑后部γ-氨基丁酸(GABA)的释放率增加,而iv给予硝普钠、氯化四氯吲哚铵和控制性失血导致血压下降时,GABA的释放率减少。进一步证明下丘脑GABA能神经系统参与外周动脉血压的调节,且有降压作用。     

应用MK801导致大鼠急性精神病症状、空间记忆缺陷和突触可塑性的损害

精神分裂症多数是进展性精神疾病。虽然已有认知改变在慢性精神分裂症中的研究,但单一精神病事件对记忆机制及其形成的影响还所知甚少。人服用N-甲基-D-天冬氨酸     

吗啡依赖大鼠视皮层GABA及分解代谢酶的变化

目的通过对吗啡依赖大鼠视皮层γ-氨基丁酸(GABA)含量及GAD与GABA-T活力的测定,研究吗啡成瘾过程中视皮层γ-氨基丁酸的代谢变化。方法30只SD大鼠分为6组,末次给药前10 min,后10 min,后3 h处死组及相应对照组,每组5只。纸电泳法检测各组大鼠视皮层中GABA含量,分光光度法检测GAD与GABA-T的活力。结果吗啡末次给药前处死组大鼠GABA含量(0.09±0.03)μmol/mg与对照组(0.17±0.05)μmol/mg比较,差异有统计学意义,末次给药后处死组GABA含量回复至对照组水平。结论吗啡依赖形成时视皮层处于去抑制状态。     

动脉血压改变对大鼠下丘脑后部GABA释放的影响

用推～挽灌流技术，定位灌流大鼠下丘脑后部，同时ｉｖ给予去氧肾上腺素（１５μｇ·ｋｇ·ｍｉｎ－１）和静脉输血（３ｍｌ／１００ｇ，ｗｔ）引起血压升高时，下丘脑后部γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的释放率增加，而ｉｖ给予硝普钠、氯化四氯吲哚铵和控制性失血导致血压下降时，ＧＡＢＡ的释放率减少。进一步证明下丘脑ＧＡＢＡ能神经系统参与外周动脉血压的调节，且有降压作用。     

硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ-氨基丁酸释放的影响

目的　观察硫喷妥钠对大鼠前额皮层突触体谷氨酸和γ 氨基丁酸 (GABA)Ca2 + 依赖性和Ca2 + 非依赖性释放的影响。方法　制备大鼠前额皮层粗突触体。用人工脑脊液(aCSF)孵育 ,分为 5组 :基础释放组 (Base)、硫喷妥钠 10μmol·L-1组 (THS10 )、硫喷妥钠 30 μmol·L-1组 (THS30 )、硫喷妥钠 10 0 μmol·L-1组 (THS10 0 )、硫喷妥钠 30 0 μmol·L-1组 (THS30 0 ) ,每组含 8份突触体。向每组各等份突触体反应液中加入不同浓度的硫喷妥钠 (Base组不加入 ) ,于 37℃条件下应用 30mmol·L-1KCl或 2 0 μmol·L-1veratridine诱发谷氨酸和GABA释放。应用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定各反应液中的谷氨酸和GABA浓度。观察谷氨酸和GABACa2 + 非依赖性释放时 ,aCSF中不含Ca2 + 。结果　硫喷妥钠 30、10 0、30 0 μmol·L-1可显著抑制KCl或vera tridine诱发的Ca2 + 依赖性谷氨酸释放 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 1) ,IC50 分别为 2 5 6 μmol·L-1和 2 6 3μmol·L-1;THS10与THS30组 ,THS30与THS10 0组之间差异有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 1)。硫喷妥钠各浓度组中 ,Ca2 + 依赖性GABA释放及Ca2 + 非依赖性谷氨酸和GABA释放水平与Base组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　硫喷妥钠可剂量依赖性地抑制大     

丙泊酚对大鼠海马突触体释放谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响

目的观察丙泊酚对大鼠海马突触体谷氨酸和γ氨基丁酸(GABA)Ca2+依赖性释放和非Ca2+依赖性释放的影响。方法制备突触体后用人工脑脊液(aCSF)孵育,分为7组,应用丙泊酚(propofol)的浓度分别为3(Pro3组)、10(Pro10组)、30(Pro30组)、100(Pro100组)和300μmol·L-1(Pro300组),脂肪乳剂对照组加入脂肪乳(Intralipid组),空白对照组(Control组)不加入任何药物。在观察Ca2+依赖性释放时,加入二氢海人藻酸和哌啶酸;在观察非Ca2+依赖性释放的时候,去除aCSF中的Ca2+。在37℃的条件下,应用20μmol·L-1藜芦定或30mmol·L-1KCl诱发递质释放。应用反相高效液相色谱法测定aCSF中谷氨酸和GABA的浓度。结果①Ca2+依赖性递质释放:应用藜芦定时,Pro30、Pro100和Pro300组的谷氨酸和GABA释放量低于Intralipid组(P<0.01或P<0.05);应用KCl时,各组的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。②非Ca2+依赖性释放:各组应用藜芦定和KCl诱发的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。结论丙泊酚可以抑制Ca2+依赖性谷氨酸和GABA的释放,而对非Ca2+依赖性谷氨酸和GABA释放无影响。     

慢性孵育β-淀粉样肽(25-35)对培养大鼠海马神经元外向钾电流的影响

目的　研究慢性孵育β-淀粉样肽_(25-35) (β-AP_25-35)对海马神经元上瞬时外向钾电流(I_A)和延迟整流钾电流(I_K)的影响。方法　在培养的大鼠海马神经元上用膜片钳全细胞记录钾通道电流。结果　β-AP_25-35 3μmol·L^-1 孵育细胞24h ,I_K 电流幅度增加(44.3±5.4)% ,电流密度由(30.4±6.4)pA·PF^-1 增加至(43.8±4.7)pA·PF^-1 ;β-AP_25-3510μmol·L^-1 孵育12h ,I_K 电流幅度增加(69.8±4.1) % ,电流密度增加至(51.6±7.9)pA·PF^-1,呈浓度依赖性;β-AP_25-35引起的I_K 增加对TEA 5mmol·L^-1 敏感;β-AP_25-35上调I_K 的作用主要发生在β-AP_25-355用药后48h内。β-AP_25-35对I_A无显著性影响。结论　β-AP_25-35选择性地增加海马神经元上I_K,这一作用可能与β-AP的神经毒性有关     

慢性孵育β淀粉样肽25-35对培养大鼠海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响

目的研究慢性孵育β淀粉样肽_25-35(β-AP_25-35)对海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响。方法用RT-PCR方法检测mRNA的表达,用光密度扫描法半定量测定表达变化。结果在正常培养的海马神经元上延迟整流(Kv2.1,Kv1.5),瞬间外向(A型)(Kv4.2,Kv1.4),钙激活的大电导(rSlo)钾通道亚型均有表达。β-AP_25-35 3 μmol·L^-1孵育细胞24 h后,Kv2.1 mRNA的表达明显上调,其它亚型则无显著性变化;β-AP_25-35上调Kv2.1 mRNA的作用主要发生在β-AP_25-35应用后48 h内;60 h后Kv2.1 mRNA表达水平显著下调。结论Kv2.1转录水平的上调可能参与β-AP_25-35选择性地增加海马神经元上延迟整流钾电流(I_K)的作用。     

3H-乙炔雌二醇环戊醚的吸收、分布和排泄

给雌大鼠口服氚标记的乙炔雌二醇环戊醚(EECPE)后半小时血液中即可测出放射性,但10小时后才达高峰。在胃肠道的生物半衰期为13小时,说明³H-EECPE的吸收较慢。猴服³H-EECPE后1小时血液即可测出放射性,4小时达高峰。³H-EECPE被吸收后,在大鼠和猴体内的分布均以脂肪组织的浓度最高,脑组织的浓度也较高,而在靶器官—子宫、输卵管、乳腺—的浓度却不高。³H-EECPE在各组织中均有较长时间的储留,尤其在脂肪组织中储留的时间更长,这可以解释其口服后的长效作用。³H-EECPE的主要排泄途径为粪,自尿排出较少。由于在体内储留,所以排泄缓慢。     

INVOLVEMENT OF PACAP IN ACID-INDUCED HCO3RESPONSE IN RAT DUODENUMS

Pituitary adenylate cyclase activating polypeptides (PACAP) stimulate duodenal HCO₃⁻secretion in the rat. The present study was performed to determine whether endogenous PACAP is involved in the mechanism of acid-induced HCO₃⁻response in the duodenum, using a PACAP antagonist, PACAP6-27. Under urethane anaesthetised conditions, a duodenal loop that was made between the pylorus and the area just above the outlet of the common bile duct was perfused with saline, and the HCO₃⁻secretion was measured at pH 7.0 using a pH-stat method and by adding 10 mmHCl. Duodenal HCO₃⁻secretion was significantly stimulated by i.v. administration of PACAP-27 (8 nmol kg⁻¹) as well as vasoactive intestinal polypeptide (VIP: 8 nmol kg⁻¹). The effect of PACAP-27 (8 nmol kg⁻¹) was equivalent to that induced by prostaglandin E₂(300 μg kg⁻¹, i.v.) and significantly suppressed by either PACAP6-27 (40 nmol kg⁻¹, i.v.) or VIP antagonist (Ac-Tyr¹,d-Phe²-VIP: 40 nmol kg⁻¹, i.v.). These peptide antagonists suppressed duodenal HCO₃⁻secretory response to VIP but did not have any effect on either basal or PGE₂-stimulated HCO₃⁻secretion. On the other hand, the duodenal mucosa responded to acidification by increasing HCO₃⁻secretion in a indomethacin-sensitive manner, and this process was also significantly suppressed by both PACAP6-27 and VIP-antagonist. Duodenal damage induced by acid perfusion (100 mmHCl for 4 h) was significantly worsened by PACAP6-27, VIP antagonist as well as indomethacin at the doses that suppressed acid-induced HCO₃⁻secretion. These findings suggest that PACAP may play a role in local modulation of the duodenal mucosal integrity, by mediating the HCO₃⁻secretory response induced by mucosal acidification.     

丁基苯酞对原代培养胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响

用分光光度法和放射免疫分析法分别检测NO及cGMP水平,同时观察l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞外液NO及胞浆内cGMP水平的影响。结果表明,d-NBP(0.1～100μmol·L^-1)对低糖低氧条件下或含N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)或含KCl的培养基中皮层神经细胞外液NO及细胞内cGMP水平明显升高,而l-NBP(0.1～100μmol·L^-1)则能明显降低NO和cGMP水平。提示:d-NBP和l-NBP对低糖低氧,NMDA或KCl诱导的NO释放和cGMP生成有相反的作用。     

丁基苯酞对大脑中动脉阻断后皮层组织中花生四烯酸释放及磷脂酶A2基因表达的影响

目的　研究丁基苯酞（dl-NBP), d-NBP和 l-NBP对大脑中动脉阻断(MCAO) 6 h后缺血区皮层中花生四烯酸(AA)释放及磷脂酶A₂（PLA₂）基因表达的影响。方法　阻断大脑中动脉起始部造成局灶性脑缺血模型。HPLC检测AA。Northern blot检测皮层中PLA₂基因表达。结果　MCAO后6 h,皮层中AA释放明显增加。于脑缺血后5 min 和120 min,给dl-NBP(10或20 mg.kg^-1) 和尼莫地平(0.5 mg.kg^-1) 可显著抑制AA的释放。d-NBP和l-NBP作用比较,显示d-NBP有与dl-NBP相似的作用,而l-NBP则无明显影响。Northern印迹结果表明,脑缺血6 h,皮层中PLA₂的基因表达增强。 dl-NBP和d-NBP(10, 20 mg.kg^-1,ip)皆可使表达降低,而l-NBP对缺血脑组织中PLA₂的基因表达的升高无明显影响。结论　dl-NBP和d-NBP可抑制MCAO后脑组织中AA释放和PLA₂的基因表达。     

NEURAMIDE STIMULATES ADRENOCORTICOTROPIN BUT NOT PROLACTIN RELEASE FROM RAT PITUITARY

Neuramide (NMD), a substance found in crude preparations of porcine stomach extract, is a viral inhibitor that also has putative immunostimulatory effects. The effects of NMD on stress-hormone (ACTH and prolactin—PRL) release were assessed inin vivoandin vitrostudies. In the former, blood levels of corticosterone and PRL were measured in NMD-treated male rats.In vitroexperiments were performed to evaluate the effects of NMD and three of its fractions (obtained with high performance liquid chromatography) on ACTH and PRL release from perfused rat pituitary slices. NMD increased plasma corticosterone levelsin vivoand produced dose-dependent increases inin vitropituitary release of ACTH. No effects on PRL secretion were observedin vivoorin vitro. The stimulatory effects on ACTH release were caused by the NMD fraction with a molecular weight of >5000<10000Da.     

靛玉红及其乙基和十八烷基衍生物在动物体内命运的比较

N₁′-乙基靛玉红(79002)对动物移植性肿瘤的抗癌活性优于靛玉红;而N₁′-十八烷基靛玉红(79005)则较靛玉红差。本文比较了³H-靛玉红及³H-79002和³H-79005在小鼠及大鼠的体内命运。结果表明,³H-79002吸收最易,瘤内放射性最高,组织内存留时间较长;而³H-79005吸收最难,给药后以胃肠分布的放射性最高,组织内存留时间最短。这些结果表明三者体内过程的差别与其抗癌活性的差别相一致。     

四肽FMRFa对大鼠心室肌Na+/Ca2+交换的抑制

目的　研究四肽FMRFa对大鼠单个心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换的作用。方法　用膜片钳全细胞记录法测定成年大鼠心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换电流(I_Na⁺/Ca²⁺)和其他离子通道电流。结果　FMRFa对大鼠心室肌细胞I_Na⁺/Ca²⁺呈浓度依赖性抑制,100μmol·L^-1浓度时抑制内向和外向I_Na⁺/Ca²⁺密度分别达60.1%和56.5%,对内向电流及外向电流的IC₅₀分别为20μmol·L^-1和34μmol·L^-1。FMRFa5μmol·L^-1抑制I_Na⁺/Ca²⁺内向和外向电流密度分别为38.7%和34.9%,但FMRFa5μmol·L^-1及20μmol·L^-1对L型钙电流、钠电流、瞬时外向电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用。结论　FMRFa对大鼠心室肌细胞是一个特异性Na⁺/Ca²⁺交换抑制剂。