血管紧张素Ⅱ及牛磺酸对体外培养乳鼠肥大心肌细胞心律失常发生的作用

在培养７２ｈ的乳鼠心肌细胞，血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ，ＡｇｎⅡ）１，１０，１００和１０００ｎｍｏｌ·Ｌ－１时，可浓度依赖性地增加细胞搏动频率；而牛磺酸５，１０和２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１不影响心肌细胞搏动频率，但能浓度依赖性地拮抗ＡｎｇⅡ１００ｎｍｏｌ·Ｌ－１加快心肌细胞搏动频率的作用。ＡｎｇⅡ１００ｎｍｏｌ·Ｌ－１连续作用７ｄ引起的培养乳鼠肥大心肌细胞搏动频率加快，动作电位ＡＰＡ升高，ＡＰＤ５０和ＡＰＤ９０延长，ＳＣＬ缩短；哇巴因５０ｎｍｏｌ·Ｌ－１诱发的心肌细胞搏动节律失常发生率高于常规培养组。牛磺酸２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１可抑制ＡｎｇⅡ引起的上述改变，并降低哇巴因诱发的心律失常发生率。     

银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响

目的 研究银杏内酯B对血小板活化因子(PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响。方法 从大鼠外周血分离中性粒细胞,用MTT比色法、Boyden小室法及β-葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。结果10 μmol·L^-1 银杏内酯B可显著抑制中性粒细胞的粘附反应;1～1 000 nmol·L^-1 可剂量依赖性抑制10 nmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞趋化反应,其IC₅₀为4.84 nmol·L^-1; 0.01～10 μmol·L^-1可抑制1 μmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞释放β-葡糖苷酸酶,其IC₅₀为3.56 μmol·L^-1。结论银杏内酯B能够抑制PAF刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。     

5-单硝酸异山梨酯对兔离体隐动脉交感嘌呤能缩血管反应的影响

采用兔离体隐动脉血管环张力实验及电场刺激诱发交感嘌呤能血管收缩实验，观察5-单硝酸异山梨酯(isosorbide-5-mononitrate，ISMN)对交感嘌呤能缩血管反应的作用，并分析其作用机制。结果表明，电场刺激(电压15 V，波宽1 ms，时程1 s)诱发兔离体隐动脉(去内皮)产生血管收缩反应。该收缩反应呈频率(2～16 Hz)依赖性，可被0.1 μmol·L^-1河豚毒素(tetrodotoxin)完全抑制。α₁受体阻断药哌唑嗪(1 μmol·L^-1)对2～8 Hz电刺激诱发的血管收缩反应无影响。P2X₁受体激动药α,β-亚甲基ATP(3 μmol·L^-1)脱敏P2X₁受体，同时联合应用哌唑嗪(1 μmol·L^-1)完全抑制电刺激诱发的血管收缩反应。采用一个标本一个浓度给药时，ISMN(0.1 mmol·L^-1)显著抑制8 Hz电刺激诱发的血管收缩反应，在0.3及1.0 mmol·L^-1时ISMN显著抑制各频率电刺激诱发的血管收缩反应； 1.0 mmol·L^-1 ISMN对电刺激诱发的血管收缩反应的抑制率分别为46%(2 Hz)、 47%(4 Hz)、 34%(8 Hz)和22%(16 Hz)。ISMN(0.3及1.0 mmol·L^-1)对外源性去甲肾上腺素(0.01～100 μmol·L^-1)或腺苷三磷酸(1 mmol·L^-1)诱发的血管收缩反应无影响。以上结果提示，ISMN显著抑制电场刺激诱发的交感嘌呤能血管收缩反应，其作用机制可能是ISMN作用于交感神经末梢突触前膜抑制嘌呤能神经递质产生的血管收缩反应。     

前胡丙素对培养乳鼠心肌细胞自发性收缩及动作电位的影响

用倒置显微镜闭路电视系统及细胞内标准微电极法,记录培养心肌细胞的自发性收缩及动作电位,结果发现:应用Pra-C5min后,心肌细胞收缩频率及细胞边缘运动的速度同时下降。Pra-C10,30和100μmol·L^-1剂量依赖性的方式抑制心肌细胞的收缩速度,分别抑制24%,43%和50%。pra-C(10和30μmol·L^-1)显示了抑制心肌细胞收缩频率的作用,分别抑制13%和19%。Nif3μmol.L^-1分别缩短APD₅₀和APD₉₀14%及17%,但同样浓度的verapatmil则抑制APA27%,缩短APD₅₀8%,分别延长APD90及SCL10%和43%。Pra-C10,30和100μmol·L^-1缩短APD₅₀7%,14%和18%。Pra-C100μmol·L^-1有抑制APA及延长SCL的作用。结果提示,Pra-C对心肌细胞收缩及动作电位的作用可能与其阻滞Ca²⁺通道有关。     

生物降解型左旋18-甲基炔诺酮微球在大鼠的药代动力学

用放射免疫法研究了左旋18-甲基炔诺酮(LNG)微球和LNG微晶在大鼠的药代动力学。大鼠单次imLNG微晶35mg·kg^-1后4.88h.血药峰值达67.66nmol·L^-1,MRT为10.16d,T_{<0.32nmol·L^-1}为41.50d;而单次imLNG微球20.4,41.1和83.3mg·kg^-1后,血药分别于6,4.67和4.33h达峰浓度15.19,33.61和38.55nmol·L^-1,MRT分别为69.23,65.12和63.25d,T_{<0.3nmol·L^-1}分别为167.81,169.73和167.23d。可见LNG微球在大鼠的MRT和T_{<0.32nmol·L^-1}分别约为LNG微晶的6.6和4.2倍,提示该微球具有明显的缓释长效作用,且初始血药峰值明显低于肌注LNG微晶。     

钾通道阻断剂部分抑制三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡

目的研究钾通道阻滞剂对三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡的作用。方法采用MTT法评价HeLa细胞的存活情况，采用膜片钳技术记录HeLa细胞的电压依赖性钾电流。结果As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h引起显著的HeLa细胞死亡，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h后存活的细胞表现明显的电压依赖性钾电流密度增加。+80 mV电压下，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育组电流密度(61±18) pA/10 pF(n=8)明显高于对照组(38±10) pA/10 pF(n=8,P<005)。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被共同孵育钾通道阻滞剂四氨基吡啶(3 mmol·L^-1)或四乙基铵(5 mmol·L^-1)所部分抑制。3 mmol·L^-1四氨基吡啶或5 mmol·L^-1四乙基铵对HeLa细胞无明显细胞毒作用。结论As₂O₃长期处理增加HeLa细胞的电压依赖性钾电流。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被钾通道阻滞剂四氨基吡啶或四乙基铵部分抑制。     

白屈菜红碱逆转不同浓度葡萄糖培养的乳鼠心肌细胞肥大及其相关机制的探讨

 研究白屈菜红碱对不同浓度葡萄糖培养的乳鼠心肌细胞肥大的作用,并进一步探讨其相关的作用机制。通过建立乳鼠心肌细胞培养模型,随机分成对照组（5 mmol·L^-1）、高糖组（10、15、20及25.5 mmol·L^-1）、高糖（25.5 mmol·L^-1）+ 不同浓度白屈菜红碱（1及8 μmol·L^-1）组、对照（5 mmol·L^-1）+ 不同浓度白屈菜红碱 (1及8 μmol·L^-1) 组,分别测定各组心肌细胞直径和蛋白质含量,并应用Western blotting检测心肌细胞蛋白激酶C ( protein kinase C,PKC )-α、PKC-β₂的表达及其磷酸化水平。结果表明,高糖培养组心肌细胞直径、蛋白质含量以及PKC-α、PKC-β₂的表达和磷酸化水平均高于对照组,并呈现浓度依赖性; 而分别在对照组和高糖组 ( 25.5 mmol·L^-1）加入不同浓度的白屈菜红碱后,心肌细胞直径、蛋白质含量、PKC-α、PKC-β₂的磷酸化水平以及PKC-α的总表达水平均降低,并且这种效应随着白屈菜红碱浓度的增高而增强; 但在对照+白屈菜红碱 ( 1 μmol·L^-1) 组, PKC-β₂的总表达水平并没有出现显著性降低。本研究表明白屈菜红碱可逆转葡萄糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大, 对高糖环境中的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与PKC途径有关。     

胍丁胺对异丙肾上腺素诱发人心房纤维迟后除极的影响

用标准微电极技术研究胍丁胺对异丙肾上腺素 (Iso) 诱发人心房纤维迟后除极的影响. 结果如下：(1) 胍丁胺 (1-10 mmol·L^-1)以浓度依赖地方式明显抑制Iso (20 nmol·L^-1) 诱发人心房纤维的迟后除极;(2) 预先应用咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体拮抗剂咪唑克生(0.1 mmol·L^-1) 可阻断胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用;(3) 预先应用一氧化氮合酶抑制剂硝基-L-精氨酸甲酯(0.5 mmol·L^-1),不影响胍丁胺 (10 mmol·L^-1) 对Iso(20 nmol·L^-1)诱发迟后除极的抑制作用. 结果表明,胍丁胺对Iso诱发人心房纤维迟后除极的抑制作用可能是由于咪唑啉受体和α₂肾上腺素受体介导钙内流减少所致.     

哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常的离子作用靶点哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常的离子作用靶点

目的观察哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌单细胞离子通道的作用,确定两药诱发心律失常时离子靶点和最佳靶点,建立细胞水平的心律失常模型。方法用全细胞膜片钳技术记录哇巴因和乌头碱对酶解法分离的豚鼠和大鼠心肌细胞离子通道的作用。结果5 μmol·L^-1哇巴因使豚鼠心肌细胞APD延长、I_Ca-L增加、I_k减少、I_k1减少;1 μmol·L^-1乌头碱使大鼠心肌细胞APD延长、I_Ca-L增加、I_to减少、I_k1增加。结论哇巴因和乌头碱诱发心律失常的离子靶点有APD,I_Ca-L,I_k,I_to和I_k1,而最佳靶点应为APD,I_Ca-L,I_k 和I_to。在单细胞水平分别应用哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常,具有稳定性高、条件可控、重复性好等优点,可用于药物筛选和机制研究。     

牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

在培养的单个SD乳鼠心肌细胞,观察了牛磺酸对KCl, 去甲肾上腺素(NE)和毒毛花苷G引起的胞浆游离Ca^２＋浓度(［Ca^２＋］_i)变化的影响. 当细胞外CaCl₂浓度为1.3 mmol·L^-１时, 牛磺酸10, 20 mmol·L^-１不影响心肌细胞静息［Ca^２＋］_i; 但能浓度依赖性地抑制35 mmol·L^-１ KCl和1 μmol·L^-１毒毛花苷G升高［Ca^２＋］_i的作用.10 μmol·L^-１ NE在含Ca^２＋的缓冲液中能引起双相的［Ca^２＋］_i变化, 即快速升高相和持续升高相.牛磺酸20 mmol·L^-１能抑制NE引起的［Ca^２＋］_i持续升高, 而对快速升高相无显著影响. 在无 Ca^２＋ 的缓冲液中, 牛磺酸不影响NE升高［Ca^２＋］_i的作用. 结果提示牛磺酸可能通过减少心肌细胞电压依赖性Ca^２＋内流和Na⁺/Ca^２＋交换而抑制KCl, NE和毒毛花苷G引起的［Ca^２＋］_i升高.     

脑啡肽对培养新生大鼠海马胶质细胞白介素1α基因表达的影响

用逆转录-聚合酶链反应技术研究了脑啡肽对培养的新生大鼠海马胶质细胞IL-1α基因表达的影响. 结果发现, 脂多糖(10 mg·L^-1)能诱导海马胶质细胞IL-1α基因表达, 当预先用甲硫脑啡肽(0.1 nmol·L^-1)或亮脑啡肽(0.1 nmol·L^-1)处理海马胶质细胞, 则脂多糖诱导的海马胶质细胞IL-1α基因表达受到抑制, 且脑啡肽的作用可被阿片受体阻断剂纳洛酮所阻断. 结果提示脑啡肽对脂多糖诱导大鼠海马胶质细胞IL-1α基因表达的抑制性影响可能是通过海马胶质细胞或神经细胞上的阿片受体介导的.     

血管紧张素Ⅱ对乳大鼠心肌细胞时钟基因表达的影响

目的　为研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致左心室肥厚是否与时钟机制有关。方法　分离纯化培养的7d龄乳大鼠心肌细胞,分别加入AngⅡ和(或)替米沙坦(Tel)处理,然后提取总RNA ,用RT PCR检测评价心肌细胞时钟基因(Bmal1,mPer2 ,Dbp)的转录水平。结果　与对照组心肌细胞相比,0 .1μmol·L- 1AngⅡ处理72h使心肌细胞时钟基因转录水平显著上调;0 .1μmol·L- 1Tel能拮抗0 .1μmol·L- 1AngⅡ对心肌细胞时钟基因转录上调的作用。结论在正常培养乳大鼠心肌细胞中,时钟基因以日周期节律方式振荡表达,AngⅡ诱导其表达增强,Tel从受体水平拮抗AngⅡ的诱导作用。     

T型钙通道在心肌肥厚大鼠心肌细胞钙内流中的作用

目的研究T型钙通道在心肌细胞钙离子内流中的作用及其对心脏兴奋收缩耦联的可能影响。方法测定选择性T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔对培养的SD乳大鼠心室肌细胞和二肾一夹心肌肥厚大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激使乳大鼠心室肌舒张期细胞[Ca2+]i增高,收缩期细胞[Ca2+]i降低,[Ca2+]i上升和下降的时间延长。米贝拉地尔1.25～5μmol·L-1浓度依赖性降低AngⅡ引起的细胞[Ca2+]i变化。在心肌肥厚模型大鼠,咖啡因刺激后,[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显降低。而米贝拉地尔25mg·kg-1·d-1(灌胃给药7～9周)组加入咖啡因刺激后细胞内[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显增高。结论T型钙通道异常开放可以引起心肌细胞内钙超载。阻断T型钙通道,可能通过改善肌浆网摄取及释放钙的功能而抑制心肌细胞钙超载。     

白介素-2通过阿片κ受体抑制心肌细胞的收缩作用

本文采用酶解分离大鼠心室肌细胞 ,用视频跟踪系统测定单个心室肌细胞收缩 ,以研究白介素 2(IL 2 )对心肌细胞的作用及其机理 .结果发现 :①IL 2 (0 .5～ 2 0 0kU·L- 1)浓度依赖性地抑制成年鼠单个心室肌细胞的收缩 ;②纳洛酮 (10nmol·L- 1)和nor binaltorphimine(nor BNI,10nmol·L- 1)可阻断IL 2的收缩抑制作用 ;③百日咳毒素 (PTX ,5mg·L- 1)预处理后 ,取消了IL 2对心肌细胞收缩的抑制作用 ;④U7312 2预处理可阻断IL 2的收缩抑制作用 .结果表明 ,IL 2对酶解分离心室肌细胞收缩的抑制作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的Gi蛋白和磷脂酶C     

四肽FMRFa对大鼠心室肌Na+/Ca2+交换的抑制

目的　研究四肽FMRFa对大鼠单个心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换的作用。方法　用膜片钳全细胞记录法测定成年大鼠心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换电流(I_Na⁺/Ca²⁺)和其他离子通道电流。结果　FMRFa对大鼠心室肌细胞I_Na⁺/Ca²⁺呈浓度依赖性抑制,100μmol·L^-1浓度时抑制内向和外向I_Na⁺/Ca²⁺密度分别达60.1%和56.5%,对内向电流及外向电流的IC₅₀分别为20μmol·L^-1和34μmol·L^-1。FMRFa5μmol·L^-1抑制I_Na⁺/Ca²⁺内向和外向电流密度分别为38.7%和34.9%,但FMRFa5μmol·L^-1及20μmol·L^-1对L型钙电流、钠电流、瞬时外向电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用。结论　FMRFa对大鼠心室肌细胞是一个特异性Na⁺/Ca²⁺交换抑制剂。     

血管紧张素Ⅱ诱导培养的牛脑微血管内皮细胞凋亡及其机制

目的　研究AngⅡ对牛脑微血管内皮细胞(BCMEC)有无诱导凋亡的作用。方法　利用流式细胞仪和透射电子显微镜检测体外培养的BCMEC凋亡。结果　流式细胞术显示AngⅡ (0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)呈浓度依赖性诱导BCMEC凋亡。 10 μmol·L- 1AngⅡ诱导的BCMEC凋亡不能被 10 0 μmol·L- 1AT1受体拮抗剂氯沙坦所抑制 ,而能被 15 0kU·L- 1超氧化物歧化酶所部分抑制。BCMEC经 10 μmol·L- 1AngⅡ刺激 18h后 ,呈现胞浆浓缩、染色质凝集、核碎裂和凋亡小体形成等凋亡的超微结构变化。结论AngⅡ能诱导BCMEC凋亡 ,其机制可能与其刺激BCMEC产生的氧自由基有关。AngⅡ诱导脑血管内皮细胞凋亡可能是其参与脑血管疾病的机制之一     

人参总皂苷对血管紧张素Ⅱ所致乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的 探讨人参总皂苷(TG)对血管紧张素 (Ang Ⅱ) 所致心肌细胞肥大的抑制作用及其可能的机制。方法 培养3 d的乳大鼠心肌细胞加入TG 50, 100和200 mg·L^-1,同时加入AngⅡ 0.1 μmol·L^-1,作用48 h后行HE染色测定细胞直径,Bradford法测定蛋白质含量;Fura-2/AM负载检测细胞内游离钙离子浓度(_i);实时PCR法检测心肌细胞心房利钠因子(ANF),钙调神经磷酸酶(CaN)和细胞外信号调节激酶1(ERK1)mRNA的表达;Western蛋白质印迹法检测CaN的α-亚基(CnA)和促分裂原活化的蛋白激酶磷酸酶1(MKP1)蛋白的表达。结果 在AngⅡ的作用下,心肌细胞直径由(32±8)μm增加至(79±17)μm,蛋白质含量由每个细胞的(416±9)pg增加至(541±16)pg,ANF mRNA表达由34±5上调至268±36;_i明显升高,CaN和ERK1 mRNA以及CnA蛋白表达显著上调。TG 50, 100和200 mg·L^-1使AngⅡ所诱导增大的细胞直径分别缩小15.3%, 37.7%和51.2%(P<0.05),并使AngⅡ所增加的细胞蛋白质含量分别减少4.0%, 15.6%和19.4%,_i显著下降以及 ANF, CaN和ERK1 mRNA表达和CnA蛋白表达明显下调(P<0.05),而MKP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 TG对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有明显抑制作用,其分子机制可能与抑制CaN和ERK信号转导通路有关。     

钩藤碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的抑制作用

目的研究钩藤碱(Rhy)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其可能的作用机制。方法应用胰酶消化法制备新生大鼠原代心肌细胞,培养3d后,随机分为正常对照组、模型组(AngⅡ0.1μmol·L-1)、Rhy1,3和10μmol·L-1组。心肌细胞加入Rhy0,1,3和10μmol·L-1,30min后再加入AngⅡ0.1μmol·L-1作用48h。采用LeicaQwinV3图像分析系统测量心肌细胞的表面积,BCA法测定总蛋白质含量,激光共聚焦显微镜检测心肌细胞[Ca2+]i,比色法测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,实时荧光定量PCR检测心房利钠因子(ANF)、心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达。结果与正常对照组比较,AngⅡ0.1μmol·L-1明显诱导心肌细胞肥大,心肌细胞表面积由每个细胞(167±28)μm2增加至(462±42)μm2(n=6,P<0.01),总蛋白质含量由平均每个细胞(211±10)pg增加至(299±12)pg(n=6,P<0.01),ANFmRNA表达亦增加,由48±4增加至227±9(n=6,P<0.01);心肌细胞[Ca2+]i荧光强度由93±18增加至149±9(n=6,P<0.01),NOS活性和NO含量分别由(0.76±0.03)kU·L-1和(1.36±0.10)μmol·L-1降低至(0.45±0.09)kU·L-1和(0.73±0.04)μmol·L-1(n=6,P<0.01);另外,NOSmRNA表达降低,CaNmRNA和ERK2mRNA表达增加(P<0.01)。与模型组比较,Rhy1,3和10μmol·L-1可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,对表面积的抑制率分别为50%,57%和61%(P<0.05,P<0.01),对蛋白质含量的抑制率分别为7%,10%和23%(P<0.05,P<0.01),对ANFmRNA表达的抑制率为42%,56%和66%(P<0.01);明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞[Ca2+]i增加,抑制率分别为15%,20%和28%(P<0.01);另外,可增加NOS活性,促进NO释放,并显著增加eNOSmRNA表达,降低CaNmRNA和ERK2mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论 Rhy可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与促进NO释放、抑制CaNmRNA和ERK2mRNA表达有关。