骨髓间充质干细胞在肌组织局部成肌分化的实验研究

目的 探讨骨髓问充质干细胞(marrow mesenchmal stem cells，MSCs)移植至肌肉组织后的原位成肌分化情况。方法 以BalB／C雌性小鼠36只，建立放射损伤合并创伤(切割伤 冻伤)的严重肌损伤模型，再将分离扩增的雄性小鼠的单纯MSCs及经10μmol／L 5-氮杂胞苷(5-azacytidine，5-Aza—CR)诱导24h的MSCs以局部注射移植法，植入雌性小鼠正常肌肉组织和创伤后的肌肉组织，采用荧光标记的原位杂交法、免疫组织化学法在移植后1、3、6、9、12及15d检测植入的MSCs在肌肉组织原位的数量变化及成肌分化情况。结果 植入的MSCs数量随着时相延长而减少；单纯MSCs植入正常肌肉组织15d，5-Aza-CR诱导后的MSCs植入正常肌肉组织6d，可见MSCs分化为肌细胞，表达desmin阳性；5-Aza-CR诱导的MSCs植入损伤肌肉组织3d，单纯MSCs植入损伤肌肉组织6d，可见MSCs分化为肌细胞，表达desmin阳性。结论 MSCs局部移植至肌肉组织局部可实现成肌分化，但经5-Aza-CR诱导后的MSCs植入损伤肌肉组织的MSCs其成肌分化时相明显早于单纯MSCs植入正常肌组织的MSCs。     

人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究

目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因。取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组。细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察。结果原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞。RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因。细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin。术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达。结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程。     

心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞后全身细胞的分布

目的 观察经心肌梗死边缘区移植骨髓间充质干细胞(MSCs)24 h和2周后的全身分布.方法 雄性SD大鼠的MSCs用溴脱氧尿苷(BrdU)标记.将雌性SD大鼠经心梗3周后随机分为2组.第1组为标记细胞(3×10,50μl)经心肌注入心梗边缘区(n=12).第2组为等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)经心肌注入心梗边缘区(n=8).移植细胞24 h及2周后,体内细胞的分布情况通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及病理切片免疫组织化学染色来评价.结果 细胞经心梗边缘区移植后可以分布在心脏以及心外脏器脾脏、肺脏和肝脏中.移植24 h后细胞主要在心脏中分布(467 467±191 387),其他脏器中的分布较少,而在2周后移植细胞在包括心脏(112 388±43 751)在内的各个脏器中的分布都很少,病理切片免疫组织化学染色结果显示与RT-PCR结果相符.结论 MSCs经心梗边缘区移植后主要在心脏中分布,同时脾脏、肺脏、肝脏中也有分布,但其分布数量随着移植时间锐减.     

结蛋白和抗肌营养不良蛋白在老年腹股沟疝患者腹内斜肌中的表达及意义

目的探索结蛋白和抗肌营养不良蛋白在腹内斜肌中的表达与老年腹股沟疝（inguinalhernia，IH）发病的关系。方法选择40例老年IH患者为研究组，20例无IH的老年阑尾炎患者为对照组，术中取同一解剖部位的腹内斜肌活组织，应用HE染色和免疫组织化学及显微镜图象分析的方法，观察HE染色下肌组织的形态及免疫组化下检测肌细胞内结蛋白和抗肌营养不良蛋白的含量。结果（1）HE染色图像分析表明：两组肌肉组织的形态学改变经分级后比较（P〈0．05），有统计学意义；（2）免疫组织化学和图像分析方法表明：老年IH患者中结蛋白的含量与对照组比较明显减少（P〈0．05）；老年IH患者中抗肌营养不良蛋白的含量与对照组比较明显减少（P〈0．05）。结论老年IH腹内斜肌的肌组织有明显的退行性改变，其肌细胞内结蛋白和抗肌营养不良蛋白表达减少，可能是老年IH发病的机理之一。     

髓源抑制细胞对HBV转基因小鼠肝脏炎症损伤抑制作用的研究

目的：建立HBV抗原特异性细胞毒性T细胞（CTLs）介导的小鼠肝炎模型,探讨肿瘤诱导的髓源抑制性细胞（MDSCs）在免疫介导的HBV转基因小鼠肝损伤中的有效性。方法制备新鲜的HBV转基因小鼠肝脏匀浆,予普通小鼠腹腔注射,1次/周,连续4周,以诱导致敏小鼠（Sensitized-mice）产生HBV抗原特异性CTLs（HBV-specific CTLs,HBV-CTLs）。分离致敏小鼠脾脏来源HBV-CTLs,静脉回输给高复制型HBV转基因小鼠,分别在注射前,注射后1 d、3 d、6 d和9 d经眶后取血测血清ALT/AST水平。分离荷瘤小鼠骨髓来源的MDSCs,静脉注射给HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠,并在注射后24 h,经眶后取血测血清ALT/AST水平,肝脏组织经固定、石蜡包埋、HE染色进行组织形态学检测。结果致敏小鼠脾脏来源的HBV-CTLs可诱导HBV转基因小鼠肝组织损伤,血清ALT、AST水平呈升高趋势;且与CTLs注射组小鼠相比,CTLs联合MDSCs注射组小鼠肝脏组织损伤程度减轻,小鼠血清转氨酶水平显著降低[ALT：（254.5±25.50）vs （80.67±11.57）,P ＜0.05;AST：（301.5±40.50）vs（249.0±79.00）,P ＞0.05）]。结论静脉回输肿瘤诱导的MDSCs可有效减轻HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠中肝组织损伤。     

骨髓间充质干细胞、肌样细胞藻酸钙复合凝胶在压力性尿失禁大鼠尿道周围的成肌效应研究

目的 探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)藻酸钙复合凝胶与经5-氮杂胞苷诱导的肌样细胞藻酸钙复合凝胶在压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)大鼠尿道周围的成肌效应.方法 SD大鼠BMSC体外分离、培养、鉴定;用5-氮杂胞苷诱导生成肌样细胞;2％藻酸钠与1％氯化钙溶液以5∶1体积比配制藻酸钙凝胶,分别与BMSC和肌样细胞复合用于微量注射.72只6周龄雌性SD大鼠建立SUI模型后分为BMSC凝胶组、肌样细胞凝胶组、单纯凝胶组和空白对照4组,每组再分为3小组,于膀胱颈尿道移行部黏膜下肌层注射相应的复合凝胶.4周、8周时取各组大鼠尿道横截面进行HE染色、荧光示踪照相以及结蛋白、α-横纹肌动蛋白(α-SMA)染色检查. 结果 获得的BMSC第3代细胞表面细胞因子抗体CD29阳性率为89.4％、CD34为3.3％、CD45为2.5％、CD105为46.0％,荧光示踪照相见第3代培养细胞表达强绿色荧光.BMSC凝胶组和肌样细胞凝胶组4周、8周时,凝胶边缘血管长入并逐渐增多,荧光示踪BMSC聚集于新生血管周围,肌样细胞呈长梭形样生长,结蛋白、d-SMA明显阳性表达. 结论 BMSC、肌样细胞藻酸钙复合凝胶在大鼠SUI实验模型的微环境中具有向肌细胞分化的潜力.BMSC直接体内微环境诱导分化与5-氮杂胞苷体外诱导形成肌样细胞后植入体内微环境继续分化,短期结果无明显差异.     

SDF-1α/CXCR4信号通路在轴向应力刺激促进骨再生中的作用研究

目的通过轴向应力刺激促进骨再生,观察基质细胞衍生因子1α/趋化因子CXC亚族受体4(stromal cell-derived factor 1α/cysteine X cysteine receptor 4,SDF-1α/CXCR4)信号通路变化,探讨轴向应力刺激促进骨再生的机制。方法取72只雄性新西兰大白兔,于右后肢胫骨近端内侧制备直径8 mm圆形皮质骨缺损并脱蛋白松质骨支架修复模型,随机分为3组(n=24)。A组腹腔注射PBS,B组术肢给予应力刺激治疗+腹腔注射PBS,C组术肢给予应力刺激治疗+腹腔注射CXCR4拮抗剂(AMD3100)。术后2、4、8、12周,摄X线片并采用Lane-Sandhu X线评分标准评价骨愈合情况,取标本行HE染色观察新生骨组织及支架降解,免疫组织化学染色观察VEGF、CXCR4表达水平;4、8周取标本Western blot检测SDF-1α及CXCR4蛋白表达水平;12周行Micro-CT检查,计算新生骨体积及新生骨密度。结果 X线片检查示,除术后2周各组骨缺损区及支架无明显变化外,4、8及12周时B组骨愈合评分均高于A、C组(P0.05)。12周时Micro-CT扫描可见B组骨缺损修复、髓腔再通,新生骨体积及骨密度均高于A、C组(P0.05)。HE染色显示,术后4周开始B组骨再生及支架降解均明显快于A、C组。免疫组织化学染色示,各组VEGF及CXCR4阳性表达均在4周达峰值;各时间点B组VEGF及CXCR4表达量均显著高于A、C组(P0.05)。Western blot检测显示,4、8周时B组SDF-1α与CXCR4表达量均显著高于A、C组(P0.05)。结论轴向应力刺激促进骨再生可能与其促进骨缺损区组织高表达SDF-1α,激活与其下游调控BMSCs募集的CXCR4信号有关。     

A型肉毒毒素在治疗咬肌肥大中的作用

目的 评价A型肉毒毒素在治疗咬肌肥大中的作用。方法 2005年8月至2014年1月,对15例咬肌肥大患者行A型肉毒毒素治疗,并应用B型超声于术前和术后4、12、24周测量咬肌厚度。结果 本组患者术后随访6个月,咬肌注射A型肉毒毒素后4、12、24周,咬肌厚度萎缩(15.60±4.96)%、(27.72±9.13)%和(24.32±8.86)%。结论 A型肉毒毒素能有效减少咬肌厚度;B型超声测量能有效地反映咬肌萎缩的程度。     

结直肠癌细胞株趋化因子受体的表达及其趋化实验

目的 观察结直肠癌细胞株趋化因子受体CXCR4的表达及其趋化实验,探讨CXCR4在结直肠癌转移中的作用.方法 培养结直肠癌细胞株HT-29、SW480,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色、Western blot检测结直肠癌细胞株的趋化因子受体CXCR4表达.采用SDF-1诱导的趋化实验模型检测两种结直肠癌细胞株的趋化活动.结果 免疫组织化学检测每100个HT-29或SW480细胞表达CXCR4蛋白的阳性率分别为48.7%和52.6%,RT-PCR和Western blot检测显示CXCR4呈阳性表达;趋化实验表明区化因子SDF-1处理组的细胞移动计数(HT-29:27.6±3.9;SW480:25.3±4.4)显著高于空白对照组(HT-29:9.6±2.5;SW480:9.8±2.1)和抗体处理组(HT-29:9.1±3.1;SW480:9.3±2.0).结论 结直肠癌细胞株可表达CXCR4,趋化因子SDF-1可以趋化结直肠癌细胞.     

凝血酶敏感蛋白2在小鼠角膜碱烧伤后修复过程中的表达

目的观察小鼠角膜碱烧伤后修复过程中凝血酶敏感蛋白2(TSP2)的表达情况。方法制作小鼠角膜碱烧伤模型(实验组,35只)。采用HE染色、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察对照组(正常小鼠5只)及实验组小鼠碱烧伤后3、6、12、24、48、96、192h(每时相点5只)角膜组织的形态学改变和TSP2、tsp2的表达情况。结果HE染色显示,实验组小鼠伤后24h起角膜内有明显的血管生成。免疫组织化学和RT-PCR检测结果一致显示,TSP2及tsp2在对照组及实验组小鼠角膜组织中均有表达,多见于上皮层的基底层。与对照组的TSP2表达水平(0.48±0.15)比较,实验组小鼠伤后3h TSP2的表达水平即上升(P<0.05),即6h达第1个峰值1.54±0.45,24h降至低谷0.73±0.19,随后又回升,96h时达第2个峰值1.79±0.63,此后下调,至伤后192h降至对照组水平(P>0.05).tsp2的表达趋势与之相似。结论小鼠角膜碱烧伤后TSP2的表达量随时相点的变化呈波动的趋势,这一变化可能属于应激条件下的代偿性增高。     

人体肌卫星细胞培养的实验研究

目的 了解人体肌卫星细胞在体外培养条件下的生物学特性。方法 标本取自创伤病例的四肢骨骼肌,消化、提纯后,在生长培养液内培养10天,细胞生长至汇合后分化培养5天。倒置显微镜观察,绘制细胞生长曲线,计算细胞融合率,结蛋白免疫细胞化学方法（ABC）法鉴定肌卫星细胞。结果 细胞消化、提纯后纯度为90％。在生长培养液内肌卫星细胞分裂增生;在分化培养条件下,汇合状态的肌卫星细胞发生融合,形成肌管,分化培养24小时细胞融合率开始明显增加,分化72小时融合率达到高峰。结论 人体肌卫星细胞在适当的培养条件下可以增生、分化,形成肌纤维。结蛋白免疫细胞化学染色是早期鉴定肌卫星细胞的有效方法。     

PATHOGENESIS OF SUXAMETHONIUM-INDUCED MUSCLE DAMAGE IN THE BIVENTER CERVICIS MUSCLE IN THE CHICK

Muscle damage induced by suxamethonium, and the influence ofhalothane on it, has been examined by measuring the efflux ofcreatine kinase (CK) in the biventer cervicis muscle of thechick. Whereas halothane and suxamethonium alone did not increasethe enzyme efflux significantly, the combination of the twowas associated with significant increase in the concentrationof CK in the bathing medium by 59–157%. The increase inCK was prevented by adding chlorpromazine 100 µmol litre^–1to the medium, suggesting the involvement of phospholipasesin the pathogenesis of suxamethonium-induced muscle damage.     

大鼠股薄肌异位寄养后恢复神经再支配的组织学观察

目的探讨大鼠股薄肌异位寄养后恢复神经再支配的方法。方法取8月龄健康雄性SD大鼠60只,体重400～500g;随机分为三组,每组20只,分别为对照组、运动神经吻合组和感觉神经吻合组。将右侧股薄肌切取后寄养于左侧股部,对照组：离断的闭孔神经不作处理;运动神经吻合组：离断的闭孔神经与左侧股神经分支吻合;感觉神经吻合组：离断的闭孔神经与左侧隐神经吻合。术后25周观察股薄肌大体形态并测量肌湿重,组织学切片嗜银染色观察神经末梢情况及神经吻合口横断面的结构。结果对照组股薄肌萎缩明显,肌肉色泽苍白,肌湿重为204.0±15.3mg;运动神经吻合组和感觉神经吻合组股薄肌与神经连接佳,萎缩不明显,肌湿重分别为394.8±12.9mg和389.2±13.5mg,两组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。感觉神经吻合组的组织学观察可见神经再生轴突弥散生长,无完整的运动终板;运动神经吻合组再生的神经轴突向肌纤维生长并终于运动终板。结论运动或感觉神经吻合能有效减轻异位寄养的骨骼肌失神经性萎缩,促进神经再支配的恢复。     

bFGF植入失神经骨骼肌对肌卫星细胞增殖与肌萎缩影响的实验研究

目的探讨bFGF植入失神经腓肠肌后填补神经营养因子丢失、促进肌卫星细胞增殖、延缓肌萎缩的作用。方法将28只健康雄性Wistar大鼠随机分成实验组和对照组,每组14只。切断大鼠左下肢坐骨神经,制备失神经支配动物模型。实验组于同侧腓肠肌内植入盛有0.1gbFGF的硅胶管,对照组植入盛有生理盐水的硅胶管。术后14d和30d取材行大体观察,电生理检测纤颤电位波幅变化,腓肠肌湿重测量,组织学观察,图像分析仪检测及透射电镜观察。结果术后14d和30d对照组腓肠肌萎缩程度及与周围结缔组织粘连程度均较实验组明显加重。术后14、30d,实验组腓肠肌纤颤电位波幅为(0.2206±0.3010)μm,对照组为(0.1552±0.0503)μm;实验组肌湿重为(2.4757±0.2546)g,对照组为(1.4591±0.6425)g;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。术后14、30d实验组HE染色示腓肠肌内肌卫星细胞核较对照组增多;Mallory三色染色示对照组蓝色结缔组织略多于实验组;PCNA染色示实验组呈阳性反应,棕黄色细胞核略多于对照组;维生素C银染示实验组肌纤维间维生素C浓度和结缔组织增生均低于对照组。透射电镜观察术后30d,对照组肌丝排列紊乱或模糊不清等萎缩改变的肌纤维及肌纤维间的胶原纤维多于实验组。术后30d,实验组肌纤维直径和截面积分别为(66.3686±12.6727)μm和(2096.1129±311.5639)μm2,对照组分别为(55.5040±4.9450)μm和(1418.0680±264.9537)μm2;实验组PCNA阳性肌细胞核数量为(116.200±5.357)个,对照组为(53.000±3.937)个;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF具有促进失神经腓肠肌的肌卫星细胞增殖、延缓肌纤维萎缩和抑制肌纤维向结缔组织增生的作用。     

缝匠肌在股四头肌成形术中的应用

目的　探讨解决部分伸直型膝关节僵硬,在股四头肌成形术后遗留伸膝无力,站立不稳,易跪倒等并发症。方法　1978 年～1997 年,在股四头肌成形术原切口上进行延长,游离缝匠肌,其止点不切断,移至髌骨前固定,加强伸膝装置力量,术后即刻进行膝关节被动、主动伸屈功能锻炼。结果　手术12 例,随访到9 例,随访时间9～25 个月,平均随访14个月。关节平均活动度,由术前15°增至102°,伸膝平均肌力,由术前Ⅱ级增至Ⅳ级。结论　缝匠肌前移手术加强了伸膝装置的力量,可解决膝关节伸直型僵硬、股四头肌成形术中伸膝肌力减弱,是一种较理想简便的方法     

内镜辅助下肌瓣剥离转移术

目的：探讨整形外科用内镜在肌瓣剥离和切取中应用的可行性和其优缺点。方法：对5例外伤后胫骨外露、1例头皮撕脱伤所致颅骨外露患者,在内镜辅助下切取肌瓣,其中背阔肌和腹直肌各3例,游离肌瓣吻合血管移植之后,肌瓣表面植薄中厚皮,对临床资料进行回顾分析。结果：全部伤口一期愈合。结论：内镜辅助下的肌瓣剥离方法较传统肌瓣切取方法有可以明显缩小供区切口长度和减轻手术创伤的优点。     

胸锁乳突肌下端切断术治疗肌性斜颈

目的：本文报告54例肌性斜颈手术治疗经验。方法：对54例肌性斜颈行胸锁乳突肌下端切断术治疗。结果：疗效优者达85．2％,无一例并发症。结论：胸锁乳突肌下端切断术,操作简单、安全,是一种值得信赖的治疗方法。     

ACCESSORY SOLEUS MUSCLE: A PROBLEM OF AWARENESS

Reports of accessory soleus muscle are rare, perhaps as a result of it often remaining unrecognized. It presents as a swelling behind the ankle and may be mistaken for a tumour or inflammatory lesion, as occurred in the first of a series of three cases. The other two were incidental findings, one in a 30 year old man with an open tibial fracture and the other in a 9 month old child with a club foot. Patients present with either pain or a diagnostic problem. When large, it may make wearing of footwear difficult. Computerized tomography with electromyography enables confirmation of the diagnosis. Pain is relieved by epimysiotomy and when encountered incidentally during surgery, incision of the epimysium is all that is needed. Excision of the muscle may be considered only if wearing of footwear is difficult. The significance of its presence in a case of club foot is unknown. Disinsertion of its insertion was all that was required to obtain surgical correction of the deformity in the present case. Awareness of the condition will prevent unnecessary surgery in asymptomatic cases.