PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中的相互作用机制

目的探讨磷脂酰肌醇3–激酶/蛋白激酶B/哺乳动物靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)两条信号通路对胃癌细胞功能的影响及相互作用机制。方法使用PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂AZD8055、MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用于胃癌MGC-803细胞。应用CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;蛋白印迹法(Western blot)检测通路关键蛋白的表达。结果联合使用LY294002(25μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)、AZD8055(0.1μmol/L)与AZD6244(125μmol/L)能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖活性,且联用组比单独作用组具有更强的抑制效果(P 0.05);联用组诱导细胞凋亡数量和阻滞于G0/G1期的MGC-803细胞数量增多,高于单独作用组(P 0.05)。与LY294002、AZD8055和AZD6244单独作用相比,LY294002与AZD6244、AZD8055与AZD6244联用组MGC803细胞p-AKT、p-P70S6K和p-ERK1/2蛋白表达明显受到抑制(P 0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR和MAPK/ERK两条信号通路在胃癌MGC-803细胞的生长中具有协同调控作用,对于两条信号通路的多靶点抑制能够更加明显的抑制癌细胞生长。     

Rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MGC-803细胞影响

目的探讨rapamycin作用于胃癌细胞株MGC-803后对细胞生长影响及其作用机制。方法体外培养胃癌细胞株MGC-803,使用不同浓度rapamycin干预MGC-803细胞。采用MTT法检测细胞增殖变化;实时荧光定量PCR(QPCR)检测关键基因的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果与对照组相比,rapamycin对胃癌MGC-803细胞的增殖活性有明显的抑制作用,呈现出剂量依赖性(P0.05)。Rapamycin显著抑制PI3K、AKT、m TOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05);Rapamycin能抑制p-m TOR、p-P70S6K蛋白的表达;Rapamycin将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P0.05)。结论靶向m TOR抑制剂rapamycin可通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路进而调控胃癌细胞的生长。     

三氧化二砷及联合紫杉醇对胃癌MGC 803细胞的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)及联合紫杉醇用药对人体外胃癌细胞株MGC803的生长抑制作用和形态变化。方法胃癌MGC803细胞进行体外培养后,在不同时间段内,MTT法观察不同浓度As2O3以及As2O3和紫杉醇联合用药对人体外胃癌细胞株MGC803的生长抑制情况和集落形成情况;电镜下观察药物作用后的MGC803细胞超微结构变化。结果 MTT显示随着As2O3或联合紫杉醇作用时间的延长,对肿瘤细胞的抑制率逐渐增强,其中单独三氧化二砷对肿瘤细胞d 3抑制最强,d 4有所下降;除0.5μmol/L As2O3作用下,d 3抑制率(29.50±0.41)%,与对照组(19.17±0.63)%比较没有统计学差异外(P0.05),其余各组随药物浓度的升高,其抑制率就越高,与对照组(19.17±0.63)%比较差异有统计学意义(P0.05),且同一As2O3浓度下联合用药对肿瘤细胞的抑制作用均强于单一用药,两者比较P0.05;集落形成实验表明随着As2O3及联合药物浓度的增加,胃癌细胞的集落形成率逐渐下降,与对照组(90.34±0.57)%比较P0.05;电镜下,肿瘤细胞出现不同程度的凋亡改变,伴有细胞的坏死。结论 As2O3对人胃癌MGC803细胞具有明显的抑制作用,其d 3抑制作用最强,并且联合紫杉醇用药可以增强其疗效,延缓耐药性的发生,提高化疗的疗效,适合在临床上短期小剂量应用化疗。     

三氧化二砷对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402作用相关机制的研究

目的研究As2O3诱导多药耐药人肝癌细胞Bel-7402/VCR凋亡及相关基因表达的情况。方法MTT法观察细胞生长和对VCR敏感性,应用形态学手段和流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组织化学研究多药耐药相关基因表达的影响。结果As2O3对Bel-7402/VCR及Bel-7402细胞的生长抑制均呈明显的量效关系;Bel-7402/VCR及Bel-7402凋亡细胞百分比随着As2O3作用时间延长和作用浓度的增加明显增加;As2O3对Bel-7402/VCR及Bel-7402MDR1阳性表达率为81.6%和80.2%。结论As2O3在体外表现出较强的逆转肝癌多药耐药性作用。     

三氧化二砷对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402作用相关机制的研究

目的研究As2O3诱导多药耐药人肝癌细胞Bel-7402／VCR凋亡及相关基因表达的情况。方法MTT法观察细胞生长和对VCR敏感性,应用形态学手段和流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组织化学研究多药耐药相关基因表达的影响。结果As2O3对Bel-7402／VCR及Bel-7402细胞的生长抑制均呈明显的量效关系;Bel-7402／VCR及Bel-7402凋亡细胞百分比随着As2O3作用时间延长和作用浓度的增加明显增加;As2O3对Bel-7402／VCR及Bel-7402MDR1阳性表达率为81．6％和80．2％。结论As2O3在体外表现出较强的逆转肝癌多药耐药性作用。     

穗花杉双黄酮对人胃癌细胞株MGC-803增殖抑制及凋亡的影响

目的:研究穗花杉双黄酮在体外对人胃癌细胞MGC-803增殖抑制及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测穗花杉双黄酮对MGC-803细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测穗花杉双黄酮对MGC-803细胞凋亡的影响;应用Western bolt检测其对MGC-803细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:穗花杉双黄酮在对MGC-803细胞给药24后,与空白组相比,能显著MGC-803细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系。AnnexinV/PI双染法结果显示穗花杉双黄酮能诱导MGC-803细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系,Western bolt结果显示,穗花杉双黄酮能上调Bax表达,下调Bcl-2表达。结论:穗花杉双黄酮能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡;其机制可能是通过上调Bax表达,下调Bcl-2而实现。     

三氧化二砷对人鼻咽癌细胞放射增敏作用的体内实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合放射治疗对人鼻咽癌细胞系(CNE-1)的生长抑制作用。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪(FCM)碘化丙啶(PI)染色法观察不同浓度As2O3与放射联合和单纯As2O3对CNE-1的杀伤和诱导凋亡作用。结果细胞生长抑制随着As2O3剂量的增加而增强;放射组的细胞存活率均低于单纯As2O3组。结论As2O3对鼻咽癌细胞株CNE-1有明显的放射增敏效应。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤RD细胞株凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD(RD细胞株)增殖及诱导凋亡的作用. [方法]以不同浓度的As2O3处理RD细胞株,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡率. [结果]4～8 μmol/L hs2O3能以时间剂量依赖的方式抑制RD细胞株的增殖,并诱导其凋亡,在流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少;低浓度As2O3(＜2μmol/L)则有轻微促增殖作用,细胞周期向S期和G2/M期集中,G0/G1期细胞减少. [结论]As2O3浓度≥4μmol/L时,可明显抑制RD细胞株的生长并促进细胞凋亡,其临床应用还需进一步研究.     

三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株,分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理,用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况;采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化,细胞DNA含量的分布,测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加,Bcl-2基因的表达明显降低;在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰,使S期细胞减少,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡,其主要机制与增强Bax、Fas的表达,下调Bcl-2的表达,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,阻止细胞的有丝分裂,抑制端粒酶活性有关。     

大蒜预防胃癌的细胞学机制研究

目的：探讨大蒜预防胃癌的细胞学机制,为大蒜预防胃癌提供理论依据。方法：以低分化胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３为靶细胞,用ＭＴＴ法检测大蒜汁（ＧＪ）对肿瘤细胞活性的影响,透射电镜、ＤＮＡ凝胶糖电泳和原位缺口标记法（ＴＵＮＥＬ）分析细胞凋亡。结果：ＧＪ能有效抑制ＭＧＣ－８０３细胞的活性,并诱导其凋亡。形态学变化表现为细胞皱缩,染色质凝集、碎裂,沿核膜内缘分布,凋亡小体形成等;基因组ＤＮＡ沿核小体之间断裂,电     

二十碳五烯酸（EPA）对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察二十碳五烯酸（EPA）对人胃癌细胞系增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以终浓度为10、20、40μg／ml的EPA作用于SGC-7901和MGC-803人胃癌细胞系24-72h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术分析细胞周期分布与细胞凋亡,利用荧光探针rhodamine 123测定线粒体膜电位,酶联免疫吸附法测定线粒体和胞浆中细胞色素C水平,荧光光谱法测定凋亡效应酶半胱天冬蛋白酶-3（caspase-3）活性。结果经10-40μg／ml EPA处理的胃癌细胞增殖率显著降低,且呈现时间依赖性。与对照组比较,经40g／ml EPA作用72h后,SGC-7901和MGC-803细胞G0／G1期细胞的比例均增加（P=0.006、P=0.009）。经40g／ml EPA作用24h后,胃癌细胞线粒体膜电位显著低于对照组（P=0.001、P=0.047）;线粒体内细胞色素C的含量明显少于对照组（P=0.001、P=0.000）,而细胞浆中细胞色素C含量显著高于对照组（P=0．001、P=0．000）。在SGC-7901细胞中,caspase-3活性随着EPA（40g／mL）作用时间延长而升高。结论EPA通过诱导细胞周期阻滞和激活线粒体通路,抑制人胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷联合全反式维甲酸对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的:探讨三氧化二砷(AS2O3)联合全反式维甲酸(ATRA)对人浆液性卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用及其机制。方法;四甲基偶氮唑蓝光吸收法(MTT)、流式细胞术及免疫荧光法检测体外培养的SKOV3细胞在AS2O3单独作用及联合ATRA作用下对卵巢癌细胞生长的抑制及促凋亡作用。结果:单用ATRA对SKOV3细胞的生长无影响;单用AS2O3可以抑制SKOV3细胞的生长;联合使用AS2O3和ATRA较单用AS2O3对SKOV3细胞的抑制作用强(P<0.05);流式细胞术证实:5.0μmol/LAS2O3联合1.0μmol/LATRA作用48h时,SKOV3细胞出现G2/M期阻滞增强、S期减低(P<0.05);AnnffxinV染色检测到早期凋亡细胞增多,晚期凋亡及继发性坏死细胞减低(P<0.05)。结论:AS2O3能上调SKOV3细胞中细胞周期抑制蛋白P27的表达,ATRA联合AS2O3可以增强上述效应。故ATRA对诱导SKOV3细胞凋亡有增敏效应,该效应过程可能依赖于细胞周期负性调控因子P27蛋白的过度表达。     

白藜芦醇预防性给药诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的观察

目的研究白藜芦醇预防性给药诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的作用。方法用胃癌MGC-803细胞株建立裸鼠胃癌移植瘤模型,通过白藜芦醇预防性给药,采用瘤体体积计算、透射电镜及原位末端标记染色（TUNEL）方法观察不同剂量白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤的生长和细胞凋亡的影响。所有数据均以（x±s）表示,数据分析采用SPSS13.0软件,多组间均数比较采用单因素方差分析,用SNK-q检验进行两两比较,P〈0.05为差异有统计学意义。结果白藜芦醇中、高剂量组能明显抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长,抑制率达到49.38%（P〈0.05）;电镜观察白藜芦醇各用药组出现凋亡细胞的典型形态;TUNEL法检测模型组、白藜芦醇低、中和高剂量组的凋亡细胞阳性表达率（%）分别为（14.254±4.344）,（31.270±4.461）,（44.082±3.436）和（58.809±4.060）（P〈0.01）,随着白藜芦醇用药剂量的增加,肿瘤细胞凋亡率上升。结论通过预防性给药,白藜芦醇能够抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长,诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞发生凋亡。     

凋亡相关基因PDCD5与三氧化二砷诱导卵巢癌细胞凋亡的相关性研究

目的探讨凋亡相关基因人程序化死亡分子5（PDCD5）在三氧化二砷（As2O3）诱导卵巢癌细胞凋亡过程中发挥的作用。方法流式细胞仪检测，并在荧光显微镜下观察PDCD5在As2O3诱导卵巢癌细胞凋亡前后的表达状况。结果PDCD5在卵巢癌细胞系中表达，经As2O3孵育后PDCD5的表达强度增加，其增加量与As2O3的剂量有关。结论凋亡促进剂PDCD5在As2O3诱导的卵巢癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

Survivin基因在胃癌中表达的研究

目的研究凋亡抑制基因survivin在胃癌组织中的表达。方法运用S-P免疫组化技术,检测survivin基因在93例胃癌组织、20例正常胃黏膜组织以及胃癌细胞株MGC-803中的表达。结果Survivin基因在20例正常胃黏膜组织中不表达,而93例胃癌组织中有66例表达阳性,占71%,两者差异有统计学意义(P<0.01),胃癌细胞株MGC-803中survivin呈高表达。Survivin基因表达阳性率与胃癌组织的分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关,而与浸润程度不相关。结论Survivin基因的特异性高表达在胃癌的发生发展中起重要作用,其过度表达可能提示胃癌预后不良。     

白藜芦醇对裸鼠移植瘤bcl-2与bax基因表达影响

目的探讨白藜芦醇预防性给药对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因bcl-2、bax表达影响。方法胃癌MGC-803细胞建立裸鼠胃癌移植瘤模型,白藜芦醇低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)和高(150 mg/kg)剂量预防性给药;透射电镜、原位末端标记染色(TUNEL)法观察各组裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡发生情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化法检测各组裸鼠胃癌移植瘤组织内bcl-2、bax基因和蛋白表达情况。结果白藜芦醇低、中、高剂量用药组细胞凋亡情况明显高于模型组,中、高剂量组bcl-2值分别为(0.26±0.072)和(0.24±0.083),低于模型组(0.41±0.056),差异有统计学意义(P<0.05);中、高剂量组bax值分别为(1.31±0.11)和(1.47±0.089),高于模型组(1.17±0.045),差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示bcl-2蛋白表达低于模型组,而bax蛋白表达高于模型组。结论白藜芦醇诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡作用与上调bax和下调bcl-2表达有关。     

5-氮-2''-脱氧胞苷和三氧化二砷对HL60白血病细胞的影响

目的：研究5－氮－2'－脱氧胞苷和三氧化二砷联合作用于HL60白血病细胞。方法：培养粒系白血病细胞，与5－氮－2'－脱氧胞苷、三氧化二砷一起培养后用生长曲线、表面分人抗原、细胞周期二倍体峰及过氧化物酶等指标来测定其抗肿瘤作用。结果：5－氮－2'－脱氧胞苷和三氧化二砷均有抑制生长曲线，诱导分化作用，两者合用后作用比单用强。结论：三氧化二砷可增强5－氮－2'－脱氧胞苷的抗肿瘤作用。     

雷公藤红素抑制MGC - 823细胞增殖和迁移及诱导凋亡

目的 探索雷公藤红素对MGC - 823细胞的增殖，迁移及诱导凋亡的作用，并探讨其作用机制。方法 0、1、2、4、6、8、12 μM雷公藤红素作用于MGC - 823细胞，采用MTT法检测增殖比率。0、1、2和4 μM雷公藤红素作用于MGC - 823细胞0、24、48和72 h，显微镜下观察细胞形态，采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡，western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl - 2、Bax、Akt、p - Akt等的表达水平。结果 经雷公藤红素作用后，MGC - 823细胞的增殖率均下降（P＜0.05）；细胞数量减少，体积缩小，皱缩变圆，部分不再贴壁，细胞核缩小；细胞迁移率减小（P＜0.05）；早期凋亡率增加（P＜0.05）；MGC - 823细胞中Bax表达升高，Bcl - 2和p - Akt表达降低（P＜0.05）。结论 雷公藤红素对MGC - 823细胞的增殖和迁移有抑制作用，并诱导其凋亡。