广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定

【目的】研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响。【方法】抽提广东菲牛蛭基因组DNA ,根据已发表的水蛭素基因设计一对引物 ,从基因组DNA扩增出一特异性的大约 70 0bp片段 ,再回收、克隆和测序。【结果】广东菲牛蛭水蛭素基因全长为 6 42bp ,基因有 4个外显子 ,被三个内含子隔开。与马尼拉菲牛蛭水蛭素基因Hm1、Hm2 的同源性分别为 90 %与和 88 6 %。【结论】地理因素会影响菲牛蛭水蛭素基因结构的变异。     

广东菲牛蛭生活水体的化学环境

蛭类俗称蚂蟥,是传统中药。《本草纲目》对水蛭的药理、疗效、使用方法作了较全面记载。现代药理实验表明水蛭注射液能使肿瘤细胞坏死、消失,对网状内皮细胞有增强作用。与非吸血蛭类比较,吸血的菲牛蛭唾液腺含有较丰富的抗血液凝固水蛭素,在医药学上有重要价值。有关吸血蛭类繁殖饲养研究,国内谭恩光(2002)曾报道广东菲牛蛭H irud inariam an illensis Lesson的生长和生殖,及吸血山蛭的生态分布、生长、摄食和生殖[1~3]。国外K eegan(1968)对东南亚的菲牛蛭生活习惯进行观察[4]。1992年Steiner从产自马尼拉的菲牛蛭中分离纯化新的水蛭素,…     

广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定

目的：研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响。方法：抽提广东菲牛蛭基因组DNA，根据已发表的水蛭素基因设计一对引物，从基因组DNA扩增出一特异性的大约700bp片段，再回收，克隆和测序。结果：广东菲牛蛭水蛭素基因全长为642bp，基因有4个外显子，被三个内含子隔开，与马尼拉菲牛蛭水蛭素基因Hm1,Hm2的同源性分别为90％与88．6％，结论：地理因素会影响菲至蛭水蛭素基因结构的变异。     

菲牛蛭素体内外抗凝实验研究

目的:研究广西菲牛蛭中提取的两种菲牛蛭素--菲牛蛭素A(Bufrudin A,BA)和菲牛蛭素B(Bufrudin B,BB)在人体外及动物体内的抗凝作用.方法:观察菲牛蛭素在人体外及动物体内对部分活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)的影响.结果:在体内外实验中,BA、BB均能明显延长活化部分APTT、PT及TT,但两者的三个指标有明显差异性,其中BA对TT的作用最显著,BB则对PT的作用更强.结论:广西菲牛蛭中的抗凝物质BA、BB在体内外均有较强的抗凝活性.     

菲牛蛭素对血管新生作用的研究

目的：通过菲牛蛭素刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管,研究其对血管新生的影响.方法：体外培养HUVEC,以血管内皮生长因子（VEGF）作阳性对照药,采用四甲基噻唑蓝（MTT）比色法测定菲牛蛭素对HU-VEC细胞活力的影响,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测菲牛蛭素对HUVEC培养液中VEGF释放含量的影响;制备CAM模型,生理盐水作对照,观察不同浓度菲牛蛭素对血管生成的影响.结果：菲牛蛭素终浓度0.25 U/mL时细胞活力最强,与空白对照组比较增殖率为28.4％,且在此浓度培养液中VEGF含量最高,比空白对照组高出80.7％;与生理盐水对照组比较,CAM血管总数明显增加,大、中血管数增加显著（P＜0.01）,小血管数变化不明显（P＞0.05）,其中以22 U/mL剂量组增生作用最明显.结论：菲牛蛭素对血管新生具有促进作用,这可能为缺血性疾病治疗提供依据.     

纤维蛋白原平板法测定水蛭素活性

目的:报告一种新的水蛭素活性测定方法--纤维蛋白原平板法.方法:以纤维蛋白原作为底物,在纤维蛋白原平板上进行免疫扩散反应,精确测量沉淀圈直径,绘制标准凝血酶活力标准曲线.在标准曲线上查出凝血酶与水蛭素反应后的剩余凝血酶活力,计算出水蛭素活性.结果:系列活力浓度10、5.0、2.5、1.25、0.625、0.312 5 NIH/ml的标准凝血酶其免疫扩散沉淀圈直径与酶活力呈良好的线性关系(r=0.9959).结论:采用系列活力浓度的标准凝血酶与被水蛭素抑制后的剩余凝血酶同在一块纤维蛋白原平板上进行免疫扩散反应的方法,实验成本低,操作简便,结果客观,准确度较好.     

不同试剂处理对菲牛蛭冻干粉抗凝活性的影响研究

目的:研究比较不同试剂处理对菲牛蛭冻干粉抗凝血活性的影响。方法:采用凝血酶直接滴定法对不同试剂处理后的菲牛蛭冻干粉的抗凝血活性进行测定。结果:与对照组相比较,乙酸乙酯、正己烷、环己烷、丙酮、石油醚、蒸馏水6种试剂对菲牛蛭冻干粉抗凝血活性基本无影响;甲醇和乙醇对其活性损失最大,超过33%;氯仿、二氯甲烷损失较小,接近17%。结论:菲牛蛭冻干粉抗凝血活性强弱与其处理的试剂有较大关系。在菲牛蛭深加工时,建议选择石油醚、乙酸乙酯、蒸馏水3种试剂,既可保证其安全性,也能有效保留菲牛蛭冻干粉的抗凝血活性,最大程度利用资源。     

广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。     

滴定分析法在现行药品质量标准中的应用

<正>滴定分析法是化学定量分析法中最重要的一种分析方法。它是将一种已知准确浓度的试剂溶液(即滴定液)滴加到被测物质的溶液中,直到所加的试剂溶液与被测物质按化学式计量关系反应完全为止,根据滴加的试剂溶液的浓度和体积计算出被测物质的含量的方法。该法快速、准确、操作简便、应用广泛。依据滴定液与被测物质之间所发生的化学反应类型不同可将滴定分析法分为酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法和氧化还原滴定法[1]。现代分析技术虽然在药品检     

凝血酶与出血性脑组织损伤的相关性动物实验研究

目的 观察大鼠脑内注入凝血酶或全血后神经细胞凋亡和脑组织水肿的动态改变，并观察凝血酶特异性抑制剂（水蛭素）能否减轻凝血酶对脑组织的损伤。方法 成年168只SD大鼠随机分为5组，即凝血酶组、脑出血组、凝血酶加水蛭素组、脑出血加水蛭素组和生理盐水对照组，分别向大鼠右侧基底节区注入凝血酶、全血、凝血酶加水蛭素、全血加水蛭素和生理盐水，于注射后6、24、72h，7d取脑组织，检测脑组织水含量（干湿重法）、神经细胞的凋亡情况（Tunel法）。结果 与生理盐水对照组比较，凝血酶组和脑出血组的脑组织水含量及凋亡细胞数明显增加。时效学研究显示脑出血组脑组织水肿和神经细胞凋亡开始于术后6h，72h达高峰，7d后下降；凝血酶组开始于术后6h，24h达高峰，72h下降。与生理盐水对照组比较，脑出血组术后6h凋亡细胞数无统计学差异（P〉0、05），凝血酶组注入凝血酶后6h凋亡细胞数有明显增加（P〈0、05）。水蛭素干预后脑出血组和凝血酶组的脑组织水含量和神经细胞凋亡数明显降低（P〈0、05）。结论 大剂量凝血酶诱导的组织水肿和细胞凋亡在24h达高峰，脑出血后组织水肿及细胞凋亡均于72h达高峰可能与脑出血后凝血酶逐渐由血肿释放有关，水蛭素能显著减轻脑组织水肿和神经细胞凋亡。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。