应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析

目的建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性。方法采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性。结果20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%)。个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09~0.27之间,平均遗传距离为0.1693。雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%。NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象。结论实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析。本树鼩群体具有较好的遗传多样性。     

树鼩微卫星DNA的多态性研究

目的 探索并建立一种检测树鼩群体遗传多样性的方法.方法 利用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对30只树鼩个体的11个微卫星位点进行了遗传检测.结果 所选的11个微卫星DNA位点中,有9个具有高度多态性,2个微卫星DNA位点多态性较差.结论 所研究的树鼩微卫星位点中,有9个符合遗传标记特点,可用于检测树鼩群体的遗传多样性.     

中缅树鼩微卫星分子标记的筛选

目的筛选中缅树鼩微卫星分子标记,逐步填补中缅树鼩特异性遗传标记的空白。方法建立中缅树鼩基因小片段插入文库,利用5’端地高辛标记的(CA)15探针从约1500个菌落中选出36个阳性克隆。对这些克隆进行测序,发现其中15个含有重复序列,其中1个为重复克隆,1个因两端序列太短而不能设计引物。结果用Primer3软件设计13对引物。PCR结果,13对均有条带。退火温度分布在44～52℃之间。阳性克隆率为2.4%,微卫星克隆率为1%。结论利用地高辛标记探针筛选树鼩微卫星分子标记所得的微卫星克隆率,可达到传统放射性核素标记探针同等的效果,并可避免放射性危害。树鼩微卫星分子标记的筛选将为下一步进行基因组结构的分析、树鼩遗传连锁图谱的构建、分子进化和标记辅助选择等提供大量的微卫星标记。     

恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的比较分析

目的：对比分析恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的特点和差异。方法：利用非接触式自动角膜内皮细胞仪SP3000P分别对6只恒河猴（12眼）和20只树鼩（40眼）进行角膜内皮细胞测量,并获得角膜的8个相关参数：中央角膜厚度（CCT）、最小细胞面积（Smin）、最大细胞面积（Smax）、平均细胞面积（Savg）、细胞面积标准差（SSD）、细胞面积变异系数（CV）、细胞密度（CD）和六边形细胞百分比（HG）,并结合文献与人眼的相关参数进行对比分析。结果：SP3000P角膜内皮细胞仪能在较短时间内完成恒河猴和树鼩角膜内皮的图像采集和参数的检查,耗时无显著性差异。恒河猴和树鼩CCT分别为（449.2±12.8）μm和（262.4±24.6）μm; Smin分别为（120.4±26.3） S/μm2和（153.2±42.9） S/μm2; Smax分别为（705.0±130.8） S/μm2和（468.7±109.3） S/μm2; Savg分别为（351.1±26.1）和（295.4±18.9）S/μm2; SSD分别为（113.1±27.4）和（75.9±27.3）S/μm2; CV分别为（31.9±6.0）和（25.3±8.3）; CD分别为（2874.2±203.8）p/cell﹒mm-2和（3399.3±224.7）p/cell﹒mm-2; HG%分别为（58.6±9.1）和（94.0±9.7）。二者的上述参数差异均有显著性差异（P＜0.05）。树鼩角膜厚度比恒河猴小,内皮细胞面积、变异系数也较恒河猴小,但是角膜内皮细胞密度和六边形细胞比例显著高于恒河猴。恒河猴角膜厚度、角膜内皮细胞变异系数和六边形细胞比例与人眼高度相似,但内皮细胞密度低于人眼;树鼩角膜厚度为恒河猴的60%、人眼的50%,但角膜内皮细胞密度和平均细胞面积更接近于10~20岁人眼。结论：恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的形态和各项参数均有显著差异,各自与人眼角膜内皮细胞既有相似之处,也有不同点,恒河猴和树鼩均是研究人类角膜内皮疾病可以选择的合适实验动物。     

基于微卫星DNA标记分析福建猕猴与河南猕猴的遗传多样性

目的应用微卫星DNA标记分析福建猕猴与河南猕猴的遗传多样性。方法采用14个微卫星DNA标记技术对福建猕猴与河南猕猴遗传多样性进行分析,经基因组DNA提取、PCR扩增、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等,用POPGENE 1.32等软件统计分析。结果14个微卫星位点均存在高度的遗传多态性,共检测到了等位基因166个,其观察等位基因数(Na)在5~15个,平均为10.071 5个;有效等位基因数(Ne)为3.6046~11.8788;杂合度(H)为0.7357~0.9325;香隆信息指数(I)为1.3957~2.5578;多态信息含量(PIC)为0.6750~0.9095。以14个微卫星标记为测度,福建猕猴的Ne、H、I和PIC的平均值均低于河南猕猴。结论本研究有效地分析了福建猕猴与河南猕猴两群体的遗传多态性,为今后建立两种群遗传质量监测方法提供理论依据。     

基于微卫星DNA标记的恒河猴遗传多样性研究

目的分析评估恒河猴遗传多样性水平,为建立标准化的恒河猴监测方法提供基础资料。方法利用19个微卫星DNA标记对恒河猴遗传多样性进行分析,经基因组DNA提取、PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳等,用POPGENE1．32软件及Excel进行统计分析。结果19个微卫星座位均呈现出了高度多态性,共检测到了等位基因164个,各座位的观察等位基因数在6—11个之间,平均为8．6316个;各基因座位的有效等位基因数在3．5727—8．9416个之间,平均为6．0709个;各微卫星座位的观察杂合度在0．2560—0．6364之间,群体平均值为0．4309;期望杂合度在0．7230～0．9010之间,群体平均值为0．8270;多态信息含量在0．6771—0．8874之间,群体平均值为0．7979;香隆信息指数在1．4249～2．2662之间,群体平均值为1．8901;本研究检测的19个微卫星座位均偏离Hardy—Weinberg平衡（P〈0．01）。结论所研究的恒河猴群体遗传多态性比较丰富,本实验为今后建立恒河猴质量监测方法提供理论依据。     

无特定病原体金定鸭微卫星DNA遗传多样性分析

目的 利用微卫星标记对无特定病原体金定鸭群进行遗传多样性分析。方法 采用微卫星标记,对SPF金定鸭种群中71个个体进行遗传多样性分析。结果SPF金定鸭种群中17个位点上共检测到119个等位基因,每个微卫星座位上等位基因数介于3～13;该SPF金定鸭群体中有13个位点（PIC > 0.5）呈现出高度多态,平均杂合度为0.5816 ± 0.0142,其它位点均呈现出中度多态。仅有5个位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余12个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,达到极显著水平（P<0.01）。结论 该SPF金定鸭群体内均存在丰富的遗传多样性,满足建立封闭群的遗传特征,可以利用该群体继续开展无特定病原体金定鸭封闭群的建立。     

树鼩下丘脑定位

本实验对55例树鼩颅脑进行测量,其中14例作全脑冰冻连续切片。观察和测量了下丘脑的外形和大小,以及下丘脑距APO额切面、HO水平切面和正中矢状切面的距离,为从体表上测定树鼩下丘脑在颅内的位置提供一些数据。     

树鼩、恒河猴和大鼠脑发育的比较研究

目的研究树鼩脑发育变化,并进行比较研究,为树鼩替代啮齿类和部分替代猴作为脑疾病模型奠定基础.方法用3%戊巴比妥钠按每千克体重1.2mL深度麻醉SD大鼠、树鼩和恒河猴,处死取脑;分离海马、小脑,称重并进行统计学分析.结果三种动物从新生到亚成体阶段,脑的绝对重均分别增加5.86、6.77和2.05倍;然而,小脑和海马的增重却没有明显的规律性.结论树鼩智力水平明显高于大鼠,可以考虑用树鼩替代啮齿类和部分替代猴作为脑疾病模型.     

树鼩5个生化位点与11个微卫星标记位点的初步研究

目的初步建立树鼩生化与微卫星标记检测法.方法参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法,对树鼩某些同工酶进行活性测定.根据树鼩特异DNA序列,合成引物,扩增树鼩基因组DNA.结果树鼩Es-1,Trf,Akp-1,Ce-2四个生化位点呈遗传多态性,而Es-3生化位点无遗传多态性;所选的11个微卫星DNA位点中,有9个具有高度多态性,2个微卫星DNA多态性较差.结论初步建立了树鼩生化及微卫星标记的方法,为深入研究树鼩的遗传背景积累了基础资料.     

成年中缅树鼩大脑BDNF、trkB、ChAT mRNA与蛋白的表达

目的 观察成年中缅树鼩大脑BDNF、trkB、ChAT mRNA及蛋白的表达。方法 利用q-PCR和Western blotting方法检测成年中缅树鼩大脑海马、基底核和皮层BDNF、trkB、ChAT mRNA及蛋白的表达。结果 成年树鼩大脑BDNF mRNA在海马最高,与基底核和皮层差异具有显著性(P<0.01);trkB mRNA在海马最低,额叶皮层最高,二者间差异显著(P<0.05);ChAT mRNA在海马、基底核和额叶皮层的表达差异无显著性(P>0.05)。成年树鼩大脑BDNF蛋白表达在基底核最高,与海马或皮层有显著性差异(P<0.01);树鼩大脑3个部位trkB、ChAT蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论成年树鼩大脑海马、基底核和皮层ChAT mRNA表达与蛋白表达具有一致性;而BDNF、trkB mRNA表达与蛋白表达不对应。推测树鼩大脑BDNF/trkB比ChAT具有更为复杂的转录水平调控模式,树鼩可能是研究BDNF/trkB基因表达的影响机制的良好动物。     

树鼩胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果　获得的树CETPcDNA(在GenBank中的注册号为AF334 0 33)长 16 36bp ,编码 485个氨基酸 ,其成熟蛋白由 477个氨基酸组成 ,比人多一个氨基酸 (Gly318) ,该蛋白与人、家兔的同源性分别为 88%和 82 %。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守 ,但在Asn34 2位的N 糖基化位点缺失 ,可能使其转运胆固醇酯的活性增加 ,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较 ,初步分析了树CETP蛋白与功能相关的结构特点。结论　树CETP糖基化的特点有可能是该动物对动脉粥样硬化具有不易感性的分子机理之一     

冷驯化对中缅树鼩褐色脂肪组织适应性产热的影响

目的 探讨环境温度对中缅树鼩体重、褐色脂肪组织产热活性及解偶联蛋白1含量的影响,为建立树鼩肥胖模型提供理论依据。 方法 将40只体重相似的成年健康中缅树鼩随机分为5组 (每组8只)：对照组 (0 d),置于25±1 ℃,12L:12D条件下饲养;以及置于5±1 ℃,12L:12D条件下分别驯化7 d,14 d,21 d和28 d组。驯化结束后测定动物的体重、非颤抖性产热 (NST)、褐色脂肪组织 (BAT)重量以及解偶联联蛋白1 (UCP1)的含量。 结果 与对照组(0 d)相比,冷驯化组中缅树鼩的体重、NST、BAT重量以及UCP1含量都显著增加,BAT颜色也明显加深,冷驯化28 d后,体重增加了26.32％,NST增加了20.65%,BAT重量增加了53.85%,UCP1含量增加了43%。UCP1含量与BAT重量和NST显著正相关。 结论 中缅树鼩可能通过冷驯化诱导BAT组织增生和UCP1表达上调,从而增强BAT产热活力以增加能量支出,推测BAT可能作为以能量学途径治疗肥胖的靶器官。     

云南青阳参遗传多样性的AFLP研究

目的 探讨云南青阳参居群内、居群间和种子间的遗传多样性。方法 利用AFLP分子标记技术检测云南不同生态环境中青阳参居群间、居群内及不同植株间和同一植株不同双生蓇葖果的不同种子间遗传多样性。结果 居群内遗传多样性比居群间遗传多样性丰富,居群间有效基因等位数（N_e）、Nei’s 基因多样性（H）、Shannon’s指数（I）分别为1.172、0.105、0.161,居群内最高为1.217、0.121、0.177;种子之间遗传多样性H值为0.095,I值为0.145）高于双生蓇葖果间（H值为0.121,I值为0.182）。结论 云南青阳参遗传多样性较低,需要进行保护;在云南3个生态环境中,楚雄的青阳参遗传多样性较其他地区丰富,AFLP图谱中也出现与该生态环境相一致的特异条带。     

微卫星标记在布氏田鼠封闭群遗传结构研究中的应用

目的：使用微卫星标记分析连续三代布氏田鼠封闭群遗传结构的稳定性。方法使用高盐沉淀法从鼠尾中提取布氏田鼠基因组DNA,将筛选出7对微卫星引物并用荧光标记（ Fam）,然后对布氏田鼠封闭群连续三代的基因组DNA进行PCR扩增,测序仪检测PCR产物,整理原始数据并对布氏田鼠基因组DNA进行微卫星分析。结果由平均有效杂合度和多态信息含量的分析得出该布氏田鼠种群传代过程中保持着较高而且稳定的杂合度。结论该实验结果说明本实验室布氏田鼠封闭群的遗传结构比较稳定。     

树鼩腺病毒（TAV）PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩腺病毒(TAV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TAV基因组序列,选择19418-19917区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。设计1对特异性引物建立TAV PCR检测方法,考察其特异性和灵敏度。应用该PCR方法对60份树鼩血DNA及56份树鼩粪便DNA进行检测。结果所建立的PCR检测方法经特异性和灵敏度测定,最低可检测13.5 x10-7μg/m L,与其他腺病毒无交叉,特异性好,灵敏度较高。60份树鼩血DNA检测均为阴性,56份树鼩粪便DNA检测有24份阳性,通过测序证实树鼩粪便中TAV感染率为42.9%,与扩增结果一致。结论建立的树鼩腺病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩腺病毒的常规检测中。     

云南省鼠疫偶然宿主树鼩中鼠疫噬菌体的分离及流行病学意义

目的 调查云南省部分鼠疫疫源地鼠疫偶然宿主树鼢肠道中携带能裂解鼠疫菌的噬菌体的状况,并探讨其流行病学意义.方法 在云南省8个市/县(弥勒市、弥渡县、宜良县、梁河县、元江县、玉龙县、文山市及临沧市)捕获树鼩,采集其盲肠标本,以鼠疫菌疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离噬菌体,电镜观察形态,并通过宿主谱检测其宿主特异...     

河南产不同居群柴胡遗传多样性分析

目的 研究河南野生柴胡遗传多样性。方法 利用伏牛山区和太行山区的4个居群36份个体的ITS序列进行了遗传多样性分析。结果 基于ITS序列共得到13个单倍型（A～M）,单倍型多样性指数（H）为0.758±0.001 3,核酸多样性指数（π）为0.004 73,遗传分化系数（Gst）为0.319 8,种群间基因流（Nm）为0.53。结论 河南野生柴胡种群具有较高的遗传多样性,但部分地区已经造成了柴胡遗传多样性的降低,柴胡种群间地理距离会限制种子介导的基因流。