猪自体左肺模拟原位移植模型的建立

目的建立猪自体左肺模拟原位移植模型，研究缺血，再灌注对移植肺功能的可能影响。方法健康猪21只随机分为3组，分别于游离左肺门（对照组）、缺血3h（缺血组）和缺血3h再灌注3h（IR组）后测动脉血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）、肺氧合功能（a／Aratio）、肺血管阻力（PVR）及肺顺应性值和左肺含水量。结果全部动物术后均存活，PaO2、a／Aratio、PVR及肺顺应性值和左肺含水量，IR组与对照组和缺血组之间比较差异均有显著性意义（P〈0．05）；3组间PaCO2无明显差别。结论该方法的建立为研究IR对移植肺的损伤机制提供了理想的动物模型。     

TOLL样受体2在大鼠肺移植缺血再灌注损伤期的时序性表达及意义

目的 探讨大鼠肺移植术后早期移植肺中Toll样受体2(TLR2)的表达情况及其意义.方法 三套管法建立大鼠左肺原位移植模型,应用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应动态观察TLR2 mRNA在移植肺中的表达水平,采用免疫印迹技术和免疫组织化学技术检测TLR2蛋白的表达,同时用ELISA法检测肺组织中TNF-α和IL-8的表达变化.结果 左肺原位移植术后,再灌注4 h即有TLR2 mRNA表达上调趋势,但与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).再灌注12 h和24 h组 TLR2 mRNA表达量达峰值,明显高于对照组(P＜0.01).再灌注48 h组TLR2 mRNA表达量下调,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).TLR2蛋白在再灌注12 h和24 h组呈高表达(P＜0.01).免疫组织化学染色显示阳性细胞主要是肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞.TNF-α和IL-8在移植肺各时间点均高表达(P＜0.05),在12 h至24 h细胞因子含量达高峰.结论 TLR2 mRNA和蛋白在大鼠左肺原位移植术后缺血再灌注损伤期表达上调,参与肺移植术后缺血再灌注损伤的病理生理过程.     

大鼠左肺原位移植模型的改进

目的采用改良三袖套管吻合法建立大鼠左肺原位移植模型。方法36只雄性SD大鼠随机分为供、受体。供体术前、受体再灌注2h测血气;受体术前、再灌注后2h分别记录肺动态顺应性、气道阻力和吸气峰压值。再灌注2h后取移植肺组织作病理学检查。结果再灌注2h各项气体交换指标较基础值有统计学意义（P〈0．05）。再灌注后受体的各项呼吸力学指标呈下降趋势,但较基础值无统计学意义（P〉0．05）。光镜下见移植肺肺泡壁增厚、肺泡腔和肺间质内有炎症细胞及红细胞渗出。结论改良三袖套管吻合法简化了手术操作,可用于肺移植模型的建立。     

兔肺充血模型与血浆内皮素变化及内皮素受体表达的关系

目的本实验建立动物左向右分流,当左向右分流导致血浆内皮素含量明显增高时,测定体、肺血管及组织中内皮素的表达,从而在分子生物学水平探讨内皮素与肺高压的发生发展机制.方法取新西兰兔18只,分为对照组6只,实验组12只.在主动脉与肺动脉间用人造血管建立左向右分流.分别于术前、术后1、2、5 h抽血测内皮素含量.对照组采用相同方法建立分流不予开放.术后取肺、肾动脉各1.5 cm,肺、肾组织各(1.5×1.5)cm2,采用逆转录、酶联免疫扩增法及ELISA法测定内皮素受体mRNA表达.结果实验组术后1、2 h内皮素水平均无显著差异.术后5 h内皮素水平较术前及术后2 h明显升高(P＜0.05).实验组肺动脉、肺组织内皮素A受体mRNA表达分别高于肾动脉、肾组织与对照组(P＜0.05,＜0.01).结论当肺血流量增加,血浆内皮素水平明显增高而尚未出现肺高压时,肺动脉及肺组织中内皮素A受体mRNA的表达即显著高于肾动脉及肾组织.说明在肺充血时内皮素A受体的缩血管作用占主导地位.     

大鼠左肺原位移植模型手术技术改进

目的 探讨建立更简便有效的大鼠左肺原位移植模型.方法 将40只雄性SD大鼠随机分成供、受体2组,采用手术技术改进的三套管法建立大鼠左肺原位移植模型.结果 2例手术死亡,18例手术获得成功,受体手术时间平均(35±4)min,术后均存活30 d以上,阻断大鼠的右肺门前后行动脉血气分析,结果无明显差异(P＞0.05).结论 该方法具有操作简单,成功率高,手术时间短的特点,可用于建立大鼠左肺原位移植模型.     

气管切开插管大鼠肺组织病理及肺泡灌洗液肺泡表面活性物质相关蛋白A浓度的变化情况

目的 探讨气管切开插管大鼠肺组织病理及肺泡灌洗液肺泡表面活性物质相关蛋白A(SP-A)的变化情况.方法 将36只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为空白对照组(A组)18只、气管切开插管模型组(B组)18只.于建立模型后24h、72 h、168 h分别取各组大鼠6只,并取右肺组织行病理切片检查,进行Smith评分评估肺组织损伤情况;取左肺肺泡灌洗液检测SP-A浓度.结果 肺组织病理结果显示B组大鼠在建模后24 h、72 h、168 h均有不同程度的水肿、肺泡及间质炎症、出血、肺不张等肺组织损伤,各时间点Smith评分均明显高于A组(P＜0.05),并随着时间的延长而增高(P＜0.05).B组大鼠肺泡灌洗液SP-A浓度在各时间点均明显高于A组(P＜0.05),且随气管切开插管时间的延长而降低(P＜0.05).结论 气管切开插管可导致水肿、肺泡炎症、出血、肺不张等肺组织损伤及肺部固有免疫功能紊乱,SP-A有保护肺组织作用,气管切开插管早期SP-A代偿性增高,随后逐渐下降.     

大鼠在体肺低温缺血再灌注损伤模型的建立

目的:为探讨缺血-再灌注(IR)对移植肺损伤的可能机制,建立大鼠在体肺低温IR损伤模型。方法:模拟临床肺移植建立大鼠在体肺低温IR损伤模型。分别于游离左肺门(对照组,A组)、缺血4h(缺血组,B组)和缺血4h再灌注4h(IR组,C组)后测定动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、气道峰压(Paw)以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量和左肺含水量,并取左肺组织作病理学观察。结果:所有动物术后全部存活。PaO2、Paw、BALF蛋白含量及左肺含水量,C组与A组及B组之间的差异显著(P<0.01);三组间PaCO2无明显差异(P>0.05);肺病理改变以C组最严重。结论:该方法的建立为研究IR对移植肺的损害机制提供了较为理想的动物模型。     

体外循环犬单肺缺血再灌注损伤模型的建立

目的 建立体外循环单肺缺血再灌注损伤动物模型.方法 6只健康杂种犬阻断左肺动脉,终止左肺血供及通气,造成左肺缺血,并循体外循环60 min后开放左肺动脉,恢复左肺血供及通气形成再灌注损伤,左肺再灌注2.5h后结束实验,右肺全程维持血供及通气.于CPB前（T1）、阻断左肺动脉并循60 min（T2）、再灌注2.5h（T3）三个时间点观察肺组织病理学变化并进行评分,对比肺动态顺应性（CD）、氧和指数（OI）、呼吸指数（RI）变化比例.结果 ①病理学变化：CPB后左、右肺组织见大量炎性细胞浸润,肺泡间隔增宽,肺泡壁断裂甚至坏死;左肺病理改变较右肺严重;②病理切片评分：CPB后左、右肺病理评分逐渐升高;T1时点左、右肺组织评分无差异,T2、T3时点左肺评分明显高于右肺;③CD、OI、RI变化比例：CPB后CD、OI明显下降,RI明显升高;左肺CD、OI下降程度、RI升高程度较右肺明显.结论 本实验动物模型建立成功,能全面地模拟临床心脏手术过程,对CPB肺保护相关研究有着积极的推动作用.     

结缔组织生长因子与大鼠移植肺纤维化的关系

检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在大鼠移植肺内的表达,并探讨其与移植肺纤维化的关系.方法:检测结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠移植肺内的表达,并探讨其与移植肺纤维化的关系.方法:取20只Wister大鼠作为供体,20只SD大鼠作为受体,进行原位左肺移植.急性排斥反应组(AR)大鼠于术后1周处死,慢性排斥反应组(CR)大鼠于术后6周处死,均取其移植肺作标本,取正常Wister大鼠肺标本作对照组(NH),每组10只.测取并计算肺组织的湿/干重比值(W/T);采用HE及Van Gieson染色观察肺组织病理形态,并进行纤维化的半定量评分;采用免疫组织化学方法检测CTGF在肺组织中的表达.结果:肺的W/T比值逐步减小(AR vs.NH:3.48±0.47 vs.4.67±0.51,P＜0.05;CR vs.AR:2.85±0.52 vs.3.48±0.47,P＜0.05);移植肺组织显示:大量炎性细胞浸润、肺间质纤维化、肺泡结构破坏、阻塞性肺炎、肺实变,CR组较AR组更明显;纤维化评分,AR组明显高于NH组(0.98±0.47 vs.0.00±0.00),CR组(2.35±0.52)明显高于AR组,(均P＜0.01).CTGF在移植肺组织中有明显表达,且CR组较AR组更高(P＜0.01),而正常肺无表达.结论:CTGF表达与移植肺纤维化密切相关,且参与了移植肺纤维化的病理过程.     

山莨菪碱预处理对兔肺缺血再灌注后肺水肿的保护作用

目的探讨山莨菪碱预处理对兔肺缺血再灌注后肺水肿的保护作用及作用机制。方法建立在体兔肺缺血再灌注动物模型,10~12周龄健康家兔24只,雌雄不拘,体重2 200~2 600 g,随机分为3组,每组8只。山莨菪碱组于左肺缺血再灌注处理前静脉给予山莨菪碱3 mg/kg预处理,对照组进行左肺缺血再灌注处理,假手术组只开胸并套带不行缺血再灌注处理。各组左肺缺血1 h,再灌注3 h后结扎并切取左肺下叶,部分行组织学观察,部分通过测量肺湿干重的方法计算肺含水量,余肺组织按试剂盒说明书检测组织髓过氧化酶(MPO)含量。最后经兔股静脉注射2%伊文思蓝(1.5 mL/kg),然后取左肺上叶,参照Udaka的方法比较3组肺血管通透性。结果缺血再灌注处理后,对照组肺含水量、MPO含量及伊文思蓝含量分别为(6.59±0.53)g/g干重、(1.16±0.14)U/g.prot和(172.8±15.5)μg/g湿重,明显高于假手术组的(4.34±0.37)g/g干重、(0.53±0.09)U/g.prot和(103.3±11.2)μg/g湿重(P均<0.05),组织损伤严重并可见严重的肺水肿,山莨菪碱组上述指标水平分别为(5.62±0....     

兔肺移植早期肺组织中细胞间黏附分子-1表达的变化

目的:探讨兔肺移植术后早期肺组织中细胞间黏附分子1(ICAM1)表达的变化。方法:30只家兔随机分成对照组和肺移植组。肺移植组行同种异体左肺原位移植,阴性对照组只游离夹闭肺动脉,空白对照组不做任何处理。应用免疫组织化学(SP)法及半定量RTPCR方法,对3组兔肺组织中ICAM1蛋白及其mRNA表达进行检测。结果:肺移植组肺泡上皮及肺血管内皮ICAM1蛋白阳性率显著高于阴性及空白对照组(P<0.01),ICAM1mRNARTPCR扩增产物相对密度显著高于阴性及空白对照组(P<0.05)。结论:移植肺组织中ICAM1表达上调,可能参与了移植肺再灌注损伤。     

无心跳供体大鼠同种异体左肺原位移植模型的热缺血时限

 目的 建立无心跳供体（NHBD）大鼠同种异体左肺原位移植模型，比较不同热缺血时间（WIT）对大鼠移植肺功能和结构的影响。方法 将32只SD大鼠按供受体随机配对成16对，分成4组，分别为有心跳供体组（对照组，HBD）、NHBD热缺血1 h组、（实验组，NHBD1h）、热缺血2 h组（实验组，NHBD2h）和热缺血3 h组（实验组，NHBD3h），每组4对。供肺摘取后置于4℃低钾右旋糖苷（LPD）液中4 h。采用三“袖套”套管法行左肺原位移植术。测定和观察移植前、移植后10 min、1 h和2 h的右颈动脉血气，移植后2 h的左肺静脉血气、移植肺湿/干重比和组织形态学改变。结果 NHBD1h组移植肺再灌注10 min、1 h和2 h所采集的右颈动脉血PaO2数值（177.8 ± 15.5、162.0 ± 19.3和195.5 ± 26.4）和对照组HBD组（187.3 ± 34.4、191.8 ± 36.6和198.8 ± 36.6）的差别没有统计学意义；再灌注10 min和2 h，NHBD2h组右颈动脉血PaO2数值（154.8 ± 25.2和116.5 ± 32.1）以及NHBD3h组（121.0 ± 28.2和88.3 ± 23.6）和对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。移植肺再灌注2 h后，NHBD1h组左肺静脉血PaO2数值与对照组的差别没有统计学意义（132.3 ± 33.8 vs. 143.8 ± 17.1），NHBD2h和NHBD3h组与对照组的差别均有统计学意义（78.8 ± 16.1 vs. 143.8 ± 17.1，70.8 ± 15.5 vs. 143.8 ± 17.1，P<0.05）。NHBD3h组的湿/干重比数值和肺损伤程度病理评分与对照组的差别有统计学意义（P<0.05）。结论 本实验成功建立了NHBD大鼠同种异体左肺原位移植模型，在本实验动物模型中，大鼠可以耐受的WIT为1 h。     

THE EFFECT OF PROSTAGLANDIN E1 ON PULMONARYBLOOD FLOW AFTER RETROGRADE FLUSH ANDCOLD STORAGE OF LUNGS

ReSllm6 Objectif Nos studes Precedentes out montrd une panne fonCtion de la greffe pulmonaire traitde Prdalablementper perfusion forcde retrograde et un stockage d froid inns ~. L' etude Prdsente a pour but de determiner l' effet de ~ surlefiot mngUin du poumon trait4 Prdalablement per perfusion retrograde forcde et un stockage d froid. met~. 12poumons donneurs canins out ate trait4s per perfusion r4tFograde de solution UW. Chez 6 animaux du grouch A, 250ng furent injectes dans l' artrdre…     

再灌注后移植肺组织ICAM-1的表达及其意义

目的 :探讨再灌注后移植肺组织ICAM 1表达的变化及其意义。方法 :4 2只大鼠随机分成正常对照组、假手术组、缺血再灌注组。建立大鼠自体左肺模拟原位移植模型 ,采用免疫组化法检测肺组织ICAM 1表达的变化 ,并进行图像分析。结果 :①正常对照组及假手术组ICAM 1仅在少量肺血管内皮细胞 (VECs)和肺泡Ⅰ型上皮细胞 (PⅠ )中呈弱阳性表达 (分别为 1.0 8± 0 .0 4和 1.0 8± 0 .0 5 ) ;②再灌注后肺VEC、PⅠ、肺泡巨噬细胞及支气管上皮细胞等均可见大量ICAM 1表达 ,至再灌注 12h达到最高峰 (3.4 3± 0 .6 6 ) ,与再灌注 0h比较 ,P <0 .0 1;③ICAM 1表达呈强阳性部位伴有中性粒细胞的聚集。结论 :再灌注后移植肺组织ICAM 1表达上调 ,可能参与移植肺再灌注损伤     

Ischemic preconditioning enhances donor lung preservation in canine lung transplantation

OBJECTIVE: To prove the protective effect of lung ischemic preconditioning on enhancing the canine lung preservation and reducing allograft lung dysfunction after transplantation. METHODS: Ten pairs of adult canines underwent left lung allotransplantation. Five donors were treated with ischemic preconditioning [their left hilus was clamped for 10 minutes and released for 15 minutes (Group IP)], and five donors were not treated with ischemic preconditioning (Group C). The donor lungs were flushed with 4 degrees C Euro-Collin's solution (ECS) and stored in the same solution for two and a half hour, then transplanted to the recipient canines, who were observed for one to two hours after transplantation. The lung venous blood of the recipient and the donor lung tissue were collected just after thoracotomy and one hour after reperfusion of the transplanted lung in both groups. RESULTS: The number of polymorphonuclear (PMN) was significantly higher in Group IP than in Group C (P < 0.05). However, the number of PMN in lung interstitium under microscope was less in Group IP than in Group C. The thromboxane (TXB2), malondialdehyde (MDA) and mean pulmonary artery pressure (MPAP) contents were significantly lower in Group IP than in Group C (P < 0.05). The superoxide dismutase (SOD) and the lung venous blood oxygen tension (PvO2) contents were significantly higher in Group IP than in Group C (P < 0.05). Histological findings showed less damages in Group IP than in Group C. CONCLUSIONS: The protective effect of ischemic preconditioning together with ECS flush and storage is superior to using ECS alone. The possible mechanisms may be that ischemic preconditioning inhibits the accumulation and activation of PMN in lung tissue and reduces the production of oxygen free radicals.     

模拟犬单肺移植灌注系统的研究

目的:建立模拟犬单肺移植灌注系统,为移植肺的保护研究提供平台。方法:应用体外循环机和膜肺分别模仿心脏做功和组织耗氧,模拟临床肺移植建立犬离体左肺原位移植模型。结果:模拟移植后,灌注流量稳定可调,移植肺气体交换好,膜肺模拟组织耗氧可行。结论:该模型为研究缺血再灌注对移植肺损伤机制提供了良好的平台。     

40例猪原位肝移植成功率分析

目的 :通过比较猪原位肝移植手术不同训练阶段的手术成功率 ,分析手术要点和技巧 ,阐明开展肝移植手术前进行动物手术训练的必要性。方法 :模拟经典原位肝脏移植手术 ,比较分析连续 40次手术中的第 1～ 10次 (A组 )和第 31～ 40次 (B组 )的成功率。结果 :A组受体猪存活 5头 (5 0 % ) ,B组受体猪存活 9头 (90 % ) ,B组手术死亡率明显降低 (P <0 .0 1) ,手术时间明显缩短 (P <0 .0 1) ,供肝的冷缺血时间明显缩短 (P <0 .0 1) ,血管吻合质量提高。结论 :肝脏移植手术有很强的专业技巧性 ,开展正式肝移植手术之前 ,通过动物手术训练掌握肝移植手术操作要点和技巧是完全必要的     

大鼠肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态观察

目的研究大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注0min、30min、1h、2h,6h及12h采取肺组织及左房血标本,测定血氧分压、肺组织湿／干重比,并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构,确定凋亡发生。TUNEL法测定肺组织中凋亡指数。台盼蓝活体染色评价细胞死亡程度,并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。结果肺IR后,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多,并且不同程度出现形态学改变,细胞体积缩小变圆,细胞核呈多形性,核被膜外折或内陷,核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状,胞浆浓缩,胞浆内嗜锇性板层体减少、排空增多,细胞膜上微绒毛减少或消失,提示细胞凋亡发生,肺泡Ⅰ型上皮细胞则少有上述改变。单独缺血30min,肺泡细胞凋亡指数无增高。肺再灌注后0．5h起,肺泡细胞凋亡指数显著增高,再灌注2h时达到高峰。与细胞凋亡指数相比,坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。结论肺IR后发生凋亡的主要是肺泡Ⅱ型上皮细胞。肺泡细胞凋亡指数于再灌注2h达到高峰。肺泡细胞坏死指数与肺功能损害的相关性较凋亡指数更显著。     

米力农雾化吸入对大鼠肺移植后肺缺血再灌注损伤的影响

目的 观察米力农雾化吸入对大鼠原位肺移植后肺缺血再灌注损伤的影响,并探讨可能的机制.方法 30只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分成3组,每组10只.假手术组(Ⅰ组),开胸游离左肺门,未行肺移植;肺移植组(Ⅱ组),左肺移植后开放再灌注2h;肺移植后吸入米力农治疗组(Ⅲ组),在左肺移植后再灌注开始的同时予0.4 mg/mL米力农雾化吸入2h.再灌注2h后行动脉血气分析计算氧合指数[动脉血氧分压(Pa O2)/吸入氧浓度(Fio2)]和肺内分流率(Qs/Qt),检测肺湿干比及髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量,并对左肺组织进行病理学检查.结果 Ⅰ组、Ⅲ组的氧合指数均显著高于Ⅱ组(P值均＜0.05),肺内分流率、湿干比均显著低于Ⅱ组(P值均＜0.05).Ⅰ组、Ⅲ组的MDA、MPO及iNOS均显著低于Ⅱ组(P值均＜0.05),eNOS均显著高于Ⅱ组(P值均＜0.05).病理学检查结果显示,与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组左肺组织充血明显且炎性细胞明显增多;而Ⅲ组较Ⅱ组左肺炎性细胞明显减少.结论 米力农雾化吸入可减轻大鼠肺移植后肺组织的缺血再灌注损伤.可能的作用机制与增加eNOS活性、降低iNOS活性、减少肺组织内炎性细胞浸润、减轻内皮细胞功能紊乱有关.