新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作

OBJECTIVE: To duplicate a model of hypoxic-ischemic brain damage (HIBD) in the neonatal rat to create unilateral cerebral damage. METHODS: Healthy 7-day-old Sprague-Dawley (SD) rats were used as research subjects and randomly divided into 3 groups: the control group (n = 18), the sham operated group (n = 8), and the HIBD group (n = 19). The HIBD model was produced according to the traditional Rice model and the brains were collected when the rats were 14 days old. The weight, left/right brain weight ratio, behavioral ability, and neuropathologic changes were studied in each group. RESULTS: 1. The weight in the HIBD group increased obviously slowly and was lower than that in the control group and sham operated group (P < 0.01). 2. The abnormity of behavioral ability was found in the HIBD group, including turnover unability (63.16%), spontaneously turn left round (89.47%), convulsion (47.37%), and so on. 3. The left/right brain weight ratio was significantly lower in the HIBD group than in the other two groups (P < 0.01). 4. The pathologic features in the HIBD group were as follows: atrophy of left brain (84.21%), softening of left brain (31.58%), liquefaction of left brain (52.63%), and cavum brain (15.79%). HE staining showed the neuron damage and the proliferation of neuroglial cells in the HIBD group. There was no obvious abnormity found in the control group and the sham operated group. CONCLUSION: The model of HIBD is successful and worthy of spreading, with its cheap price, easy duplication, and higher successful rate. The reasonable ambient temperature should be kept in 36-37 degrees C.     

缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠大脑皮质突触发育的追踪研究

目的追踪研究缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠发育期间大脑皮质突触发育的影响。方法取7d龄Wistar仔鼠,随机分成实验组和假手术组(对照组)。采用形态学和形态计量学的方法对生后7d到2月(成年)分8个时段对额叶皮质的发育,进行长期跟踪研究。结果实验组6h~7d各组神经元胞质内出现空泡,线粒体肿胀、嵴模糊;核不规则、皱缩甚至溶解。脑损伤后仔鼠额叶皮质神经元[C24h:(142.0±17.3)个,E24h:(106±28.2)个,C2w:(142.5±19.23)个,E2w:(126.0±24.5)个]及神经纤维的密度(C6h:20.2±2.1,E6h:14.9±1.92,C24h:20.4±2.6,E24h:11.4±2.4)显著降低(P<0.05,P<0.01)。突触的形态计量学参数表面积密度(Sv)和面数密度(NA)降低,突触后膜致密层变薄(P<0.05,P<0.01)。结论缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠发育期间大脑皮质中突触的质量,神经元及神经纤维密度的影响,是影响智力发育的重要因素。     

建立一种改良的新生兔缺氧缺血性脑损伤模型

目的建立一种改良的新生兔缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型。方法选择孕期30 d的孕兔,随机分为正常对照组、缺氧5 min组、缺氧10 min组和缺氧15 min组。给予孕兔吸入7%二氧化碳的氮气使其窒息后剖宫产出新生兔,观察新生兔出生时的一般情况,4 d后作头颅磁共振影像(MRI)检查,5 d后处死动物采用HE染色和光镜观察新生兔脑组织结构改变,并作病理评分。结果缺氧10 min组新生兔活体观察、头颅MRI、病理改变符合窒息后HIBD动物的变化特点,MRI检查新生兔脑组织可见大片状、弥漫性分布的不均匀信号,呈稍短T2信号,白质、灰质界限模糊;正常对照组、缺氧5 min组和缺氧10 min组病理评分分别为(4±0,5.44±1.13,13.3±2.39),缺氧5 min组与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),缺氧10 min组主要见变性、坏死和小胶质细胞增生改变,与正常对照组差异有统计学意义(P<0.001),缺氧15 min组新生兔生后6 h内全部死亡,不作MRI检查及病理评分。结论向孕兔输7%二氧化碳的氮气10 min使其窒息后剖宫迅速取出新生兔是简单、快速、可靠制备HIBD模型的方法。     

缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠大脑皮质突触发育的追踪研究

目的追踪研究缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠发育期间大脑皮质突触发育的影响.方法取7 d龄Wistar仔鼠,随机分成实验组和假手术组(对照组).采用形态学和形态计量学的方法对生后7 d到2月(成年)分8个时段对额叶皮质的发育,进行长期跟踪研究.结果实验组6h～7 d各组神经元胞质内出现空泡,线粒体肿胀、嵴模糊;核不规则、皱缩甚至溶解.脑损伤后仔鼠额叶皮质神经元[C24h:(142.0±17.3)个,E24h:(106±28.2)个,C2w:(142.5±19.23)个,E2w:(126.0±24.5)个]及神经纤维的密度(C6h:20.2±2.1,E6h:14.9±1.92,C24h:20.4±2.6,E24h:11.4±2.4)显著降低(P＜0.05,P＜0.01).突触的形态计量学参数表面积密度(Sv)和面数密度(NA)降低,突触后膜致密层变薄(P＜0.05,P＜0.01).结论缺氧缺血性脑损伤对新生大鼠发育期间大脑皮质中突触的质量,神经元及神经纤维密度的影响,是影响智力发育的重要因素.     

亚低温联合复方丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的　研究亚低温联合复方丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的保护作用。方法　新生 7d的 12窝SD大鼠 6 0只 ,每窝 5只 ,按随机区组设计 ,随机分配到实验各组 ,假手术组、缺氧缺血组 (HI)、复方丹参治疗组(SMB)、亚低温组、亚低温联合复方丹参组 (以后简称联合组 )等 5个处理组 ,作MDA、SOD、NO的测定。结果　亚低温组、复方丹参组与缺氧缺血组比较 ,MDA、NO值降低 ,SOD值升高 ,P <0 .0 1,联合组与亚低温组、复方丹参组相比 ,MDA、NO值降低 ,SOD值增高 ,P <0 .0 5。结论　亚低温、复方丹参单独使用均对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)有神经元保护作用 ;而两者联合应用 ,对于神经元的保护效果更佳     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑细胞凋亡的研究

目的　利用大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型 ,观察缺氧缺血性脑损伤后不同时间细胞形态变化及细胞的死亡形式 ,为缺血缺氧性脑病提供实验和理论依据。方法　 7日龄SD大鼠 6 6只 ,随机分为对照组、假手术组和实验组 (缺氧缺血不同时间 ) ,实验组动物采用阻断左侧颈总动脉后置于含 8%O2 的低氧环境中 ,建立缺氧缺血性脑损伤动物模型。用HE、硫堇及TUNEL染色技术在光镜下观察脑组织的病理改变。结果　大鼠缺氧缺血后 3h时脑细胞即有水肿 ,6h时发现有局灶性坏死 ,12、2 4和 48h可发现大量坏死神经细胞 ;在缺氧缺血后 3h细胞凋亡出现 ,之后凋亡细胞数目明显增加。凋亡出现在细胞坏死之前。结论　新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 ,细胞死亡有凋亡和坏死两种形式。     

缺氧预处理抑制新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的观察

目的观察缺氧预处理(HPC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨HPC对新生大鼠HIBD的保护机制。方法7日龄新生SD大鼠40只随机分为空白对照组、假手术组、HIBD组、HPC组。各组实验动物于缺氧缺血后24h处死,用免疫组织化学方法,检测脑组织海马区Bcl-2和Bax表达的变化。结果与空白对照组、假手术组相比,HIBD组和HPC组海马区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达明显增多(P<0.05);与HIBD组相比,HPC组海马区Bcl-2蛋白表达明显增多,Bax蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而抑制细胞凋亡,是HPC对随后的HIBD的脑保护机制之一。     

依达拉奉对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的:探讨依达拉奉(Edaravone)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法:7日龄新生SD大鼠122只随机分为缺氧缺血组(HI组)、大剂量治疗组、小剂量治疗组和假手术对照组,制成HIBD动物模型,在缺氧缺血(hypoxia-is-chemia,HI)后即刻分别腹腔注射依达拉奉或生理盐水,连续注射5天。HI后24、48、72h各时间点检测脑组织匀浆MDA和SOD含量;电镜观察海马超微结构变化;TUNEL法检测HI后72h各组脑皮层神经细胞凋亡;Morris水迷宫实验评价35天学习和记忆能力变化。结果:HI后24、48、72h各时间点,大剂量治疗组与HI组MDA和SOD含量相比差异有极其显著性(P<0.01),小剂量治疗组与HI组相比差异无显著性(P>0.05);TUNEL染色结果示HI后72h各组缺血侧脑皮层凋亡细胞数,大剂量治疗组[(206.83±21.94)个/2500个细胞]较HI组[(317.67±24.27)个/2500个细胞]明显减少,差异有显著性(P<0.01),而小剂量治疗组[(301.30±17.61)个/2500个细胞]较HI组也减少,但差异无显著性(P>0.05)。结论:缺氧缺血后腹腔注射大剂量依达拉奉对新生鼠HIBD有明显保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤中的细胞骨架改变

脑缺氧缺血是临床上常见的病理过程,缺氧缺血后引起广泛的神经元损伤,这种损伤的病理过程极其复杂,与多种因素有关,其中细胞骨架(cytoskeleton)的改变在脑缺氧缺血性损伤的发生发展中起重要的作用。目前研究最多的影响细胞骨架的因素有Rho-GT-Pasec、aspases、Ca2 等。本文将对     

别嘌呤醇对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的　探讨别嘌呤醇 (ALLO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的影响。方法　将新生 7日龄SD大鼠 14 3只随机分为别嘌呤醇治疗组、缺氧缺血对照组和假手术组 ,缺氧缺血后即刻、2 4和 4 8h分别腹腔注射ALLO或生理盐水 ,然后观察ALLO对HIBD模型鼠缺氧缺血 (HI)后 4 2h脑含水量、72h脑神经元凋亡(TUNEL法 )及超微结构改变、14d体质量增长率、脑病理改变 (海马神经元死亡率 )、30d学习分辨能力和记忆保持能力 (三臂迷宫试验 )等的影响。结果　脑含水量 :治疗组缺血侧 [( 84 .75± 4 .5 2 ) % ]含水量较对照组[( 92 .32± 3.75 ) % ]明显减少 (P <0 .0 1) ;TUNEL染色结果 :HI后 72h缺血侧脑组织可见较多凋亡细胞。治疗组缺血侧皮质凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 93.6± 10 .8)和 ( 110 .5± 16 .9)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 1],治疗组缺血侧海马凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 83.2± 11.5 )和 ( 94 .2± 12 .3)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 5 ];超微结构改变 :对照组凋亡细胞数为 18%左右 (计数 30个视野 ) ,而治疗组为 6 %左右 ,治疗组细胞坏死、丢失也较对照组减轻 ;HI后 14d体质量增长百分率 (WIP) :治疗组 [( 16 7.0± 33.6 ) % ]较对照组 [( 135 .6±4 7.5 ) % ]无显著性差异 (P >0 .0 5     

骨质疏松性骨折的小鼠模型探索

目的建立操作简单、重复性好的骨质疏松性骨折小鼠动物模型,以用于中老年女性绝经后骨质疏松性骨折愈合情况的研究。方法选取12周龄健康的C57BL/6J雌性小鼠50只,其中基线组10只,去势组20只,假手术组20只。常规饲养1周后,处死基线组小鼠并测量血清雌激素水平,去势组小鼠通过腹正中切口行双侧卵巢切除,假手术组小鼠切除双侧卵巢周围等量的脂肪组织。去势后4周对小鼠的左大腿行后外侧切口,暴露股骨,从膝关节处逆行插入钢针进行髓内固定,直视下用手术刀切断股骨中下1/3段部分,造成股骨的横行或斜行骨折。两组小鼠在骨折术后2周和4周分别处死10只,测量血清雌激素水平、骨痂处骨密度（BMD）及Micro-CT情况。结果术后2周和4周假手术组雌激素浓度均高于去势组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。术后2周和4周假手术组和去势组BMD、骨体积、骨体积分数比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。虽然术后2周假手术组和去势组骨小梁分离度（Tb.Sp）比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但术后4周两组Tb.Sp比较差异有统计学意义（P＜0.05）,而术后2周和4周两组骨小梁结构模型指数比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论小鼠骨质疏松性骨折模型具有操作简单、直观稳定等优点;去势后的小鼠成骨能力明显下降,可用于原发性绝经后骨质疏松性骨折的愈合及其骨代谢的细胞、分子及信号通路的机制研究。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的制作

目的 :建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)模型 ,并讨论模型制作中的有关问题。方法 :健康 7日龄SD新生大鼠随机分为空白对照组 (n =18) ,假手术组 (n =8)和HIBD模型组 (n =19) ,采用经典Rice法制作新生大鼠HIBD模型 ,于 14日龄处死 ,观察HIBD后大鼠体重增长情况 ,左、右脑重比值变化 ,行为能力表现 ,以及脑组织病理形态学改变。结果 :①HIBD模型组体重增长明显慢于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。②HIBD组制成模型后全部发生行为异常改变 ,6 3 .16 %翻身不能 ,89.47%自发或夹尾左旋 ,抽搐占 47.37%。空白对照组和假手术组未见行为异常表现。③HIBD模型组左 /右脑重比值明显低于空白对照组和假手术组 (P <0 .0 1)。④肉眼观察HIBD组左脑萎缩者占 84.2 1%,出现软化灶占 31.5 8%,液化灶 5 2 .6 3 %,形成空洞脑者占 15 .79%;HE染色可见左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生 ;空白对照组和假手术组左、右脑无明显异常。结论 :本方法制作新生大鼠HIBD模型成功 ,该模型价格相对低廉、成功率高、重复性好、易于制作 ,值得进一步推广。模型制作中环境温度应保持在 36～ 37℃。     

NMDA受体在缺血缺氧性脑损伤中的研究进展

缺血缺氧性脑损伤是当今社会一个倍受关注的疾病,N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyL-D-aspartate,NMDA)受体及其亚基与介导缺血缺氧性脑损伤密切相关。缺血缺氧性脑损伤的发病机制复杂,现仅就缺血缺氧性脑损伤时NMDA受体的作用以及临床研究进展作如下综述。     

裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的建立

目的建立适合移植实验使用的裸鼠造血微环境损伤动物模型。方法分别用3．5Gy、5Gy、6．5Gy、8Gy4个^60Coγ辐射剂量照射裸鼠，检测经过辐照后各组裸鼠1、3、5、7、14、21d血象变化，检测辐射后1、7、14、21d裸鼠骨髓基质CFU—F形成情况，用流式细胞仪检测辐射后1、7、14、21d骨髓基质细胞VCAM-1的表达。结果8．0Gy辐射剂量裸鼠死亡率100%；3．5Gy、5Gy、6．5Gy辐射剂量组裸鼠的造血损伤均能在辐射后21天之内自我恢复；6．5Gy组骨髓CFU—F于移植后7d（22±6）、14d（33±6）较3．5Gy、5Gy组均具有显著降低（P〈0．01），VCAM-1表达于7d（21．67±7．45）、14d（22．33±9．07）、21d（23．33±4．51）较对照组显著降低（P〈0．01）、较3．5Gy组差异有显著性（P〈0．05），21d（23．33±4．51）较5Gy组（34．00±4．36）差异有显著性（P〈0．05）。结论6．5Gy是裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的适宜辐射剂量。     

新生儿缺氧性脑损伤血小板参数的监测及临床意义

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤与血小板参数的关系及临床意义。方法63例缺氧性缺血性脑损伤患儿,其中HIE组40例,HIE合并颅内出血组23例;36例咽下综合征患儿为对照组。测定各组患儿血小板参数。结果脑损伤组血小板(PLT)和血小板比积(PCT)较对照组明显降低(P<0.01),血小板平均容积(MPV)和血小板分布宽度(PDW)则较对照组明显升高(P<0.01)。HIE组与HIE合并颅内出血组比较除PLT在HIE合并颅内出血较HIE组有显著降低(P<0.05)外,PDW、MPV及PCT两组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论对窒息新生儿检测血小板参数,有助于判断缺氧性缺血性脑损伤情况及指导治疗。     

新生大鼠脑缺氧缺血损伤时的COX-2表达变化

目的采用免疫组化方法研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶2(COX-2)的表达变化.方法 通过制备新生大鼠左脑的HIBD模型,应用免疫组化方法研究2、6、24、72 h、7 d时不同时相点脑皮层及海马CA1区COX-2免疫化学阳性细胞的表达及免疫细胞化学阳性数表达变化.结果 7日龄Wistar大鼠对照组可见微量COX-2阳性表达,HIBD 2 h后即见明显增高,并于6～24h出现表达高峰,其后出现下降,并可维持明显表达至7d.结论新生鼠HIBD可诱导COX-2表达,并可能参与HIBD后的神经毒性损伤.     

BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型的建立

目的 建立近交系BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型。方法 采用自体移植法将小鼠自体子宫组织块移植到腹膜,复制子宫内膜异位症模型,将术后的小鼠随机分为4组,手术+雌激素+缩宫素组、手术+雌激素组、手术+缩宫素组、手术组,并设假手术组和雌激素+缩宫素组,术后1～12 d采用不同方案诱发小鼠扭体反应,记录扭体潜伏期及扭体次数,并取异位灶行HE染色和病理组织学观察,筛选建立内异症痛经模型的最佳方案。结果 除假手术组、雌激素+缩宫素组外,各组小鼠移植物均生长良好,镜下可见子宫内膜腺体及间质细胞,证实内异症造模成功,与手术+缩宫素组、手术组相比,手术+雌激素+缩宫素组、手术+雌激素组移植物体积明显增大,差异有显著性（P<0.01）;手术+雌激素+缩宫素组扭体发生率100%,雌激素+缩宫素组扭体发生率80%,手术+缩宫素组扭体发生率50%,其余组未出现扭体反应,组间差异有显著性（P<0.01）;与手术+缩宫素组、雌激素+缩宫素组相比,手术+雌激素+缩宫素组扭体潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）,扭体次数明显增多（P<0.01,P<0.05）,差异有显著性。结论 手术+雌激素+缩宫素组为建立内异症痛经模型的最佳方案,方法简单易行,可用于内异症痛经发病机制及药物治疗研究。     

选择性COX-2抑制剂NS398干预对HIBD新生鼠脑细胞凋亡的影响

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后不同时段脑原位细胞凋亡的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,腹腔注射NS39820mg/kg,同时设未注射组及假手术组对照,应用TUNEL染色方法及图像分析软件研究于HI后24h、7d脑皮层及海马TUNEL染色阳性细胞百分率变化。结果假手术组组脑组织中偶见TUNEL染色阳性细胞;未注射组缺氧缺血(HI)后24hTUNEL染色阳性细胞数较多,至HI后7d明显减少;NS398干预组染色阳性细胞数较未注射组明显减少。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398于HIBD新生鼠,可以有效减少HI后凋亡细胞,提示NS398对发育期脑组织缺氧缺血损伤存在保护作用。     

缺血低氧性脑损伤对未成熟新生大鼠神经元和髓鞘的影响

目的探讨大鼠缺血低氧脑损伤对于神经元和髓鞘的影响情况。方法将3日龄SD新生大鼠随机分为对照组和缺血低氧处理组,对照组不予任何特殊处理,缺血低氧处理组大鼠行左颈总动脉结扎术后休息1~2 h入封闭容器,充以8%O_2+92%N_2的混合气体,处理时间为120 min,之后恢复正常氧供。待造模完成后3 d时进行尼氏小体染色探讨两组大鼠神经元的情况,造模后7 d进行劳克坚牢蓝染色探讨两组大鼠的髓鞘情况。结果尼氏染色结果提示,与对照组相比,缺血低氧处理之后大鼠脑组织中的神经元尼氏小体染色密度明显降低;劳克坚牢蓝染色结果显示,与对照组相比,缺血低氧处理组的髓鞘明显受损。结论大鼠缺血低氧性脑损伤对脑组织的神经元和髓鞘造成了一定程度的影响,进而导致脑组织相关的功能损伤。     

小鼠左肺原位移植模型的建立

目的：通过显微外科技术建立小鼠原位肺移植模型,为肺移植研究提供动物模型。方法：采用C57BL/6小鼠作为供、受体,行同基因小鼠原位左肺移植,使用Cuff套管法进行气管及血管吻合。术后7天、14天、21天、28天取移植肺及原肺,行HE染色,评价肺移植后效果。结果：学习曲线后, 共30例小鼠移植,手术成功率89%, 小鼠成活率100%。供体手术时间：35.2?.81min,受体手术时间：24.6?.42min,冷缺血时间是：46.6?.92min,热缺血时间是：17.2?.08min。同基因移植物大体及病理无明显改变,病理显示与原肺无差别。结论：本技术能够方便快捷建立小鼠肺移植模型,成功率高,可重复性强,符合原位肺移植临床生理,是研究肺移植发病机制和治疗的良好动物模型。