脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用

目的:研究蟾酥中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵三种成分单体及配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基单体不同浓度和时间点,三种成分两两配伍以及三种成分配伍对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用。结果:蟾毒灵对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用最强,其次是华蟾酥毒基,脂蟾毒配基的作用最弱;脂蟾毒配基不能增强华蟾酥毒基、蟾毒灵的作用,且有抑制作用的趋势;华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用与单独使用的抑制作用无明显区别。结论:欲发挥三种成分的抗肿瘤作用,应该单独使用,或者华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用。     

脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵不同配伍的镇痛作用比较

目的:研究蟾酥中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵三种成分配伍后的镇痛效果,以筛选出三种成分的最佳配伍方式。方法:采用醋酸致小鼠扭体法进行镇痛实验研究。结果:蟾毒灵的镇痛作用最强,其次是华蟾酥毒基,脂蟾毒配基的作用最弱;脂蟾毒配基用量较大时,与华蟾酥毒基配伍表现为相互的抑制作用,用量较小时则为协同作用;脂蟾毒配基与蟾毒灵配伍表现为相互的抑制作用;华蟾酥毒基与蟾毒灵配伍主要表现为蟾毒灵的镇痛作用;三者共同配伍时,未表现出相互间的协同或抑制作用。结论:欲发挥三种成分的镇痛作用,应该单独使用,或者华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用,以保证其安全性、有效性和质量可控性。     

分子对接虚拟筛选蟾毒灵结合蛋白

目的 预测抗肿瘤活性成分蟾毒灵的结合蛋白.方法 采用分子对接方法 搜索结合蛋白,部分高分值靶标进行单独分子对接确证,并与已报道药理活性进行比较.结果 计算机搜索13个蛋白与蟾毒灵发生分子对接,验证分析显示二氢叶酸还原酶、PARP具有较高可信度.结论 二氢叶酸还原酶、PARP可能是蟾毒灵发挥抗肿瘤、抗炎活性的2个结合蛋白.     

HPLC法同时测定蟾灵膏中华蟾毒精、酯蟾毒配基和蟾毒灵成分的含量

目的:建立蟾灵膏中华蟾毒精、酯蟾毒配基和蟾毒灵3种化学成分含量测定的高效液相色谱法.方法:样品经甲醇回流提取后过滤,挥干后,滤液用水饱和正丁醇萃取,将正丁醇层挥发加甲醇定容即得样品.采用Eclipse XDB-C18(5μm4.6×250mm)色谱柱,流动相为乙腈:0.3％乙酸(46:54),柱温为30℃,流速为1ml...     

蟾毒灵通过激活内质网应激通路诱导HCT116细胞凋亡

目的 研究蟾毒灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响,并探讨内质网应激(ERS)在此过程中的作用。方法 采用CCK-8法测定蟾毒灵对HCT116细胞增殖活性的影响;不同浓度蟾毒灵作用HCT116细胞48 h后,采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况,同时用Western blot法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况;将HCT116细胞分为对照组、蟾毒灵组和联合组(蟾毒灵+4-苯基丁酸),Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果 CCK-8法检测结果显示蟾毒灵对HCT116细胞的增殖活性有抑制作用;细胞凋亡实验表明蟾毒灵能引起HCT116细胞的凋亡;Western blot实验结果显示,蟾毒灵能够上调促凋亡蛋白Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,同时也能诱导ERS并激活P...     

蟾毒灵对CAPAN-2胰腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 研究蟾毒灵在胰腺癌CAPAN-2细胞系中的抗肿瘤作用,探讨其在胰腺癌中的抗肿瘤分子机制。方法 CCK-8法测定蟾毒灵对人胰腺癌CAPAN-2细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测蟾毒灵对细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting法检测蟾毒灵作用于CAPAN-2细胞后Caspase-3酶原(pro-caspase-3)、Bcl-2、Bax、CDC25C、cyclinB1、CDC2蛋白表达水平的变化情况。结果 蟾毒灵对胰腺癌CAPAN-2细胞有抑制增殖的作用,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵未能诱导CAPAN-2细胞凋亡,但经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞周期被阻滞在G2/M期;经蟾毒灵处理后,CAPAN-2细胞中CDC25C、cyclinB1、CDC2等关键周期蛋白的表达量显著下降,但是pro-caspase-3、Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白的表达没有发生明显改变。结论 蟾毒灵可显著抑制胰腺癌CAPAN-2细胞增殖,通过诱导G2/M细胞周期阻滞而非诱导细胞凋亡,在CAPAN-2细胞中发挥抗肿瘤作用。     

蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基大鼠体内药动学研究

目的 建立检测大鼠血浆中3种蟾蜍甾烯类化合物蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的HPLC法,并用于蟾酥在大鼠体内的药动学研究。方法 分别于大鼠尾iv给予蟾酥提取物0.8 mg/kg后2、5、10、15、20、30、45、60、90 min,眼眶取血,采用乙腈沉淀蛋白与液液萃取相结合方法进行血浆样品预处理,以HPLC法测定大鼠血浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的质量浓度,以Kinetica软件拟合药动学参数。结果 蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基均得到很好的分离,重现性、精密度、线性关系良好,达到体内分析要求;经非房室模型拟合,得到蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基在大鼠体内主要药动学参数;iv给药30 min时,血药浓度均降至C_max的1/5以下。结论 建立的蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基血药浓度测定方法操作简单、结果准确可靠;蟾蜍甾烯类成分在大鼠体内代谢较为迅速,所得数据可为蟾酥提取物的药动学研究提供参考。     

蟾毒灵平衡溶解度和表观油水分配系数的测定

目的 :测定蟾毒灵的平衡溶解度及表观油水分配系数。方法 :采用高效液相色谱(HPLC)法测定蟾毒灵在水和各种有机溶剂中的平衡溶解度,采用摇瓶法测定蟾毒灵在正辛醇-水/缓冲盐溶液中的表观油水分配系数。结果:25℃、37℃条件下,蟾毒灵平衡溶解度碱性环境下大于酸性环境,但均大于10μg/m L;蟾毒灵的溶解速度较慢,需34 h才能达到饱和。p H对蟾毒灵的表观油水分配系数影响较小,不同p H环境中,蟾毒灵log P为2.5~3.0。结论:蟾毒灵的平衡溶解度、表观油水分配系数能够满足成药性的要求。     

六神丸中蟾毒内酯化合物的HPLC分析

六神丸具有清热、解毒、消炎、退肿等功效,蟾酥为六神丸的主药之一,其有效成分为一些骨架相同的甾体化合物,总称蟾毒内酯。含蟾酥成药制剂中蟾毒内酯化合物的分析方法有紫外分光光度法、薄层扫描法、气相色谱法等,高效液相色谱法分析蟾酥单味药中蟾毒内酯化合物已有研究,但在含蟾酥成药制剂中尚未见报道。本文建立了六神丸中蟾毒内酯化合物的RP-HPLC分析方法。     

蟾酥抗肿瘤有效成分的活性追踪分离及急性毒性研究

目的 从传统中药蟾酥中寻找抗肿瘤活性强而毒性低的化合物。方法 采用追踪分离的方式,以体外肿瘤细胞生长抑制强度为活性指标,同时结合小鼠急性毒性实验,对蟾酥的主要化学成分进行初步研究。结果 采用活性追踪分离方式,从蟾酥中分离得到具有抑制肿瘤细胞生长活性同时对小鼠急性毒性较低的化合物蟾毒它灵,其对人非小细胞肺癌A549细胞具有较好的生长抑制作用,小鼠iv给药的LD₅₀约为蟾毒灵的4倍,而且稳定性较好。结论 综合化合物的活性、毒性及稳定性等因素,初步判断蟾毒它灵较其他同类化合物具有更好的抗肿瘤药物开发前景。     

雷公藤内酯及蟾毒配基类化合物的生物转化研究进展

生物转化(biotransformation)是利用生物体系或其产生的酶对外源性化合物进行结构修饰的生物化学过程,其本质为酶催化反应[1,2].生物转化反应具有选择性强,催化效率高,反应条件温和,反应类型多,以及环境污染小等特点,且往往可用于催化有机合成方法难以完成的化学反应,易于得到结构新颖的化合物.因此,生物转化技术作为合成方法的有力补充,已成为有机化学家的重要研究工具之一.目前采用生物转化技术已获得了大量新颖的化学结构,包括很多天然产物衍生物,为新药的研制与开发提供了极有价值的先导化合物.有的生物转化反应还达到了工业化生产的规模,创造了巨大的经济效益[3].     

蟾毒灵对黑色素瘤A375细胞的作用及其机制研究

目的 探讨蟾毒灵(Bufalin)对黑色素瘤A375细胞的作用及其机制研究.方法 体外培养黑色素瘤A375细胞,采用CCK-8法检测不同浓度的蟾毒灵对A375细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测和细胞周期分布情况;JC-1法检测蟾毒灵对A375细胞对线粒体膜电位的影响;采用分光光度...     

汉黄芩素抗肿瘤作用机制中的主要信号通路研究进展

汉黄芩素是黄芩的主要有效成分,已有较多研究表明,汉黄芩素具有多种现代药理学作用,如抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗微生物等,其中明显的抗肿瘤作用一直是研究热点,汉黄芩素不仅可抑制肿瘤细胞增殖,还可诱导肿瘤细胞凋亡,并能调节肿瘤细胞侵袭及血管生成等多方面活性,而多条信号通路在其中发挥了重要调控作用。本文即对汉黄芩素抗肿瘤所涉及信号通路的作用进行综述,以期为其在抗肿瘤方面的作用机制研究提供相关理论基础。     

蟾毒灵白蛋白纳米粒与蟾毒灵在大鼠体内的药代动力学比较研究

目的：建立高效液相-串联质谱法测定大鼠血浆中蟾毒灵的浓度,评价和比较蟾毒灵白蛋白纳米粒和蟾毒灵在大鼠体内的药代动力学特征。 方法：30只大鼠随机分为6组,每组5只,尾静脉单次分别注射蟾毒灵纳米粒和蟾毒灵,均设高、中、低剂量组。分别于给药后1、5、8、10、15、20、30、45、60、120、180、300和480 min从大鼠眼眶静脉丛取血,高效液相-串联质谱法测定不同时间点血浆中药物浓度,并测定药代动力学参数。 结果：本实验所建立的高效液相-串联质谱法具有良好的线性、精密度和准确度。蟾毒灵纳米粒组的血浆药-时曲线下面积和平均滞留时间、半衰期分别是蟾毒灵组的1.19~1.81倍、2.12~3.61倍和2.17~2.94倍。 结论：蟾毒灵白蛋白纳米粒可延长蟾毒灵在血中的存留时间,具有缓释作用。     

低氧环境下蟾毒灵联合顺铂抗食管癌ECA109细胞研究

目的观察低氧环境下蟾毒灵联合顺铂对人食管癌ECA109细胞生长的影响,探讨蟾毒灵增加顺铂抗食管癌ECA109细胞抗肿瘤作用的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定顺铂(2.5、5.0、7.5、10.0 mg·L-1)在低氧及常氧环境下对人食管癌ECA109细胞增殖的影响,低氧环境下顺铂(2.5、5.0、7.5、10.0 mg·L-1)与蟾毒灵(10 nmol·L-1)联合对人食管癌ECA109细胞增殖的影响;Western blot法检测顺铂单药及蟾毒灵联合顺铂作用于人食管癌ECA109后凋亡相关蛋白表达的变化情况。结果常氧环境下,不同浓度的顺铂对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均显著高于空白对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05);低氧环境下,不同浓度的顺铂对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均高于空白对照组(P<0.05),也呈浓度依赖性(P<0.05),但同一浓度顺铂对人食管癌ECA109细胞生长的抑制作用在低氧环境较常氧环境下显著减弱(P<0.05);低氧环境下,不同浓度的顺铂+蟾毒灵对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均高于空白对照组(P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05),且同一浓度顺铂+蟾毒灵10 nmol·L-1对人食管癌ECA109细胞生长的抑制作用较不加蟾毒灵和常氧环境下显著增强(P<0.05)。低氧条件下,顺铂单药组随着顺铂药物浓度的增加,Bcl-2蛋白表达轻度下调,Bax表达轻度升高;联合蟾毒灵后,Bcl-2表达随着顺铂药物浓度的增加明显下调,Bax表达明显升高。结论低氧环境使人食管癌ECA109细胞对顺铂产生耐药,而蟾毒灵可逆转ECA109细胞对顺铂的耐药。     

蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响

目的：探讨蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响。方法：建立裸鼠人胰腺癌模型,随机分为4组：对照组（NS）、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）、蟾毒灵组（Bu）、蟾毒灵加5-氟尿嘧啶组（Bu／5-Fu）。分别腹腔注射生理盐水（NS）20ml／kg、5-Fu24mg／kg、Bu1mg/kg、Bu1mg／kg＋5-Fu24mg／kg。用药后第7天处死,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL法检测瘤体凋亡指数,免疫组化S-P法检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达。结果：与NS组相比,各药物干预组瘤体体积均显著缩小（P〈0．05）,凋亡指数明显增高（P〈0．01）,Survivin蛋白的表达显著降低（P〈0．01）。其中Bu／5-Fu组瘤体体积明显小于Bu组、5-Fu组（P〈0．05）;Bu／5-Fu组凋亡指数明显高于Bu组、5-Fu组（P〈0．01）;Bu／5-Fu组Survivin蛋白的表达明显低于Bu组、5-u组（P〈0．01）。结论：蟾毒灵能够抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,联合5-Fu可起到增效的作用。其作用机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

叶酸修饰蟾毒灵阳离子脂质体的制备及体外评价

目的 制备叶酸修饰蟾毒灵阳离子脂质体（FA-BF-CLs）,并对其进行质量评价及抗肝癌研究。方法 采用薄膜-超声分散法制备FA-BF-CLs,以粒径、Zeta电位及包封率等为指标,采用单因素和Box-Behnken响应面分析法对处方及工艺进行优化。透射电镜观察脂质体显微形态,并考察其体外释放过程、溶血性及空白阳离子脂质体体外细胞安全性。采用CCK-8法比较FA-BFCLs、BF-CLs（未加叶酸修饰的蟾毒灵阳离子脂质体）及BF-solution（蟾毒灵溶液）的体外细胞毒性。结果 最佳条件为磷脂与药物质量比14.17∶1、磷脂与胆固醇质量比3.8∶1、超声时间13 min,制备得到脂质体粒径（135.5±1.40） nm,多分散系数0.192±0.025,Zeta电位（16.23±0.46） m V,包封率69.42%±2.18%。体外释放研究表明,FA-BF-CLs具有明显的缓释效果,溶血试验结果显示该载体材料无溶血现象。体外细胞安全性结果显示阳离子脂质体浓度在0～20μmol/L范围内安全无毒。体外细胞毒性表明FA-BF-CLs对HepG2肝癌细胞的抑制作用大于BF-CLs和BF-s...     

蟾毒灵抑制肿瘤相关成纤维细胞介导的转移

目的 探究蟾毒灵对肿瘤相关成纤维细胞(CAF)介导的肿瘤转移的作用机制。方法 从结肠癌患者组织中提取原代CAF,命名为CAF-1和CAF-2,并在共聚焦荧光显微镜下观察其形态和表面标志物表达。同时通过Western blot检测CAF表面标志物成纤维细胞激活蛋白(FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)的表达来确认CAF身份。收集CAF条件培养基,通过ELISA实验检测条件培养液中的白细胞介素6(IL-6)分泌水平。选取人结肠癌细胞HCT116,分为HCT116组、HCT116加CAF条件培养基组,用Western blot检测HCT116上STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、STAT3表达情况,通过Western blot检测HCT116上皮间充质转化(EMT)的情况,再通过划痕实验和Transwell实验明确HCT116迁移和侵袭能力的改变。将HCT116分为对照组和蟾毒灵组,两组均用CAF条件培养基刺激,观察STAT3信号通路激活情况、EMT和侵袭能力的改变。结果 原代细胞呈长梭形,并表达CAF表面标志物FAP、α-SMA和VIM。ELISA实验显示C...     

蟾毒灵抑制M2型巨噬细胞介导的结直肠癌迁移和上皮间质转化

目的 探讨蟾毒灵(BU)抑制M2型巨噬细胞介导结直肠癌转移的作用。方法 用佛波酯(PMA)诱导人急性白血病单核细胞(THP-1)分化为M0型巨噬细胞,48h后用含有白细胞介素-4(IL-4)和IL-13的培养基处理M0型巨噬细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、形态学、实时荧光定量(RT-qPCR)实验观察其表面标志物和形态变化,RT-PCR和ELISA实验检测M2型巨噬细胞的表面标志物转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10。通过ELISA实验比较M2型巨噬细胞和结直肠癌细胞HCT116上清液中IL-6分泌水平,通过Transwell实验、划痕实验、RT-qPCR和Western blot实验检测条件培养基对结直肠癌细胞HCT116的的影响。在条件培养基中加入BU后,通过Western blot、Transwell实验、划痕实验、和RT-qPCR实验观察可以HCT116中AKT/PI3K蛋白以及迁移和上皮间质转化能力的变化。结果 将THP-1成功诱导成为M2型巨噬细胞。M2型巨噬细胞通过分泌IL-6激活了HCT116中AKT/PI3K蛋白磷酸化,促进了其迁移和上皮间质转化能力。BU可以抑制M2巨噬细胞介导的HCT116迁移和上皮间质转化。结论 M2型巨噬细胞释放IL-6激活了结直肠癌细胞AKT/PI3K信号通路,促进了其迁移和上皮间质化。此外,BU可以抑制其促迁移和上皮间质化作用。     

三氧化二砷基于促分裂原活化的蛋白激酶信号通路的抗肿瘤作用研究进展

三氧化二砷(As_2O_3)抗肿瘤作用明显,能够明显诱导多种肿瘤细胞的凋亡,其作用与丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路密切相关。通过概述MAPK通路的3条途径(细胞外信号调节激酶、P38蛋白激酶和c-Jun N-末端激酶)在As_2O_3诱导胃癌、肺癌、骨髓癌、白血病等肿瘤细胞凋亡中的重要作用,为肿瘤细胞凋亡机制的研究及为恶性肿瘤的治疗提供重要的理论和实验基础。