冻融后小鼠休眠胚胎超微结构的变化

目的 从亚细胞超微结构的角度揭示其抗冻能力优于正常孵化胚胎的原因.方法 利用透射电子显微镜观察小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎在细胞连接和各细胞器形态与分布上的差异,以及冻融培养后的变化,并进行相关比较分析.结果 通过亚细胞结构对比分析发现：冷冻前小鼠休眠胚胎为紧缩状,处于能量代谢较低的“基态”,通过冻融后培养,细胞器结构恢复与正常孵化胚胎冷冻前相似;而正常孵化胚胎经过冻融后,线粒体数量减少,细胞核松散,异染色质增多.结论 小鼠休眠胚胎与正常孵化胚胎冻融后相比,其细胞状态更有利于物质储存及能量代谢,表明小鼠休眠胚胎从亚细胞超微结构的角度比其正常孵化胚胎更具抗冻性.     

牛体内囊胚经体外共培养诱导子宫内膜上皮细胞整合素αv,β3基因差异的表达

目的 利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式,探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv,β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24 h体外共培养,利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αv,β3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示,共培养前、后均有整合素αv,β3的表达;共培养I组(囊胚组),其共培养后诱导整合素αv,β3基因的表达与未共培养对照组二者之间差异无显著性(P > 0.05);共培养Ⅱ组(孵化囊胚组),其共培养后整合素αv,β3基因的表达显著高于对照组和共培养I组(P < 0.05)。结论 牛体内孵化囊胚经体外共培养诱导牛子宫内膜上皮细胞表达整合素αv,β3的效果,明显优于早期囊胚;整合素αv,β3基因具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

Z-藁本内酯对人脐静脉内皮细胞保护作用及其机制研究

目的 通过观察Z-藁本内酯对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）及核因子-κB（NF-κB）表达的影响,探讨其对炎性因子损伤内皮细胞的保护作用及其机制。方法 向体外培养的HUVEC中加入TNF-α 10 ng/mL造成细胞损伤,同时加入不同浓度（5、10、20 μmol/L）的Z-藁本内酯,共同孵育24 h,MTT法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞培养液中ICAM-1和VCAM-1的量,Western blotting法检测各组细胞NF-κB蛋白表达。结果 与对照组比较,TNF-α可造成HUVEC明显损伤（P＜0.05、0.01）,显著增加HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的表达（P＜0.01）。与模型组比较,Z-藁本内酯可以剂量相关地降低ICAM-1（P＜0.01）和VCAM-1（P＜0.05）的表达,显著减少细胞NF-κB蛋白的表达（P＜0.05）。结论 Z-藁本内酯可减轻TNF-α对HUVEC的损伤,其作用机制可能与通过抑制NF-κB的激活,进而减少ICAM-1和VCAM-1的表达有关。     

Kruppel样因子6对肝癌HepG2细胞的作用及其缺失对斑马鱼肝脏发育的影响

目的 探讨Kruppel样因子6（KLF6）低表达对肝癌细胞凋亡及迁移能力的影响,并以斑马鱼作为动物模型,研究klf6基因沉默对肝脏发育的作用。方法 构建敲除KLF6基因质粒,转染肝癌细胞（HepG2）及正常人肝细胞（L-02）,通过免疫印迹（WB）、凋亡及细胞周期测定、划痕实验检测KLF6基因敲除后对HepG2细胞的影响;设计合成沉默KLF6基因的吗啉代寡核苷酸（Morpholino）,显微注射入转基因斑马鱼Tg（lfabp：eGFP）胚胎中,通过免疫荧光法观察KLF6蛋白表达的变化以及对转基因斑马鱼胚胎肝脏发育表型的影响。结果 体外实验表明,L-02细胞中的KLF6蛋白的表达量明显高于HepG2细胞;敲除KLF6基因后,HepG2细胞KLF6蛋白表达明显减少、凋亡减弱、细胞周期主要集中于S期、迁移能力增强;体内实验表明,klf6基因沉默后,斑马鱼胚胎肝脏中的KLF6蛋白表达量减少,肝脏发育明显迟缓。结论 KLF6基因低表达促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,减少凋亡;且影响斑马鱼肝脏的正常发育。探讨KLF6基因低表达及其功能,可为以后斑马鱼肝癌模型建立及药物筛选提供理论基础。     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

HE4蛋白与OPN蛋白对子宫内膜癌患者预后的影响

目的 探讨正常子宫内膜组、癌前病变组和子宫内膜癌（endometrial carcinoma,EC）组中人附睾分泌蛋白4（HE4）和骨桥蛋白（OPN）的表达和相关性,及其对EC手术预后的影响。方法 采用免疫组化（SP）法,检测分析2009年1月~2015年6月期间就诊于邯郸市中心医院的正常组、癌前病变组及癌组中HE4、OPN的表达情况,采用Kaplan-Meier生存分析法和Log-rank检验来评价各因素与EC患者生存时间的关系,并用COX风险模型进行多因素分析。结果 正常组、癌前病变组和癌组的子宫内膜组织中,HE4蛋白的阳性表达率逐渐升高分别为13.33%、32.00%、70.76%,OPN蛋白的阳性表达率也逐渐升高分别为10.00%、24.00%、63.74%,且组间比较差异有统计学意义（P < 0.05）。HE4蛋白及OPN蛋白的阳性表达率在手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及有无淋巴结转移组中比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）。Spearman相关分析显示,EC中HE4蛋白的表达与OPN蛋白的表达呈正相关（r=0.397,P < 0.05）。Kaplan-Meier分析显示手术-病理分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、HE4阳性表达及OPN阳性表达5个因素与预后相关（P < 0.05）,年龄、组织学分级、组织学类型与预后不相关（P > 0.05）。COX多因素逐步分析显示,手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润深度、HE4阳性表达、OPN阳性表达是影响预后的显著因素,但组织学分级影响最不明显（P=0.049）。结论 HE4和OPN蛋白在EC中高表达且正相关,手术-病理分期晚、组织学分级高、肌层浸润深、HE4表达阳性、OPN表达阳性者预后差,HE4和OPN有望成为评价EC预后的重要标记。     

鹰嘴豆异黄酮提取物对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的影响

目的 探讨鹰嘴豆异黄酮提取物（CIE）对D-半乳糖致衰老模型小鼠学习记忆能力的影响。方法 sc 10% D-半乳糖6周建立衰老小鼠模型,同时ig给予CIE（25、50、100 mg/kg）,对照组和模型组给予等量的生理盐水。用Morris水迷宫试验检测小鼠的学习记忆能力,同时检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活力以及丙二醛（MDA）水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力降低,脑组织SOD活力下降,MDA水平增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）。ig给予不同剂量的CIE后,小鼠各检测指标均明显改善,与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05、0.01）结论 CIE可改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与CIE具有抗氧化能力有关。     

利用CRISPER/Cas9技术构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠

目的：通过 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑技术构建卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lecithin-cholesterol acyltransferase， LCAT）基因敲入C57BL/6小鼠并与肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠配繁得到肝脏特异性敲入Lcat基因C57BL/6小鼠模型。 为Lcat基因在肝脏相关代谢疾病发生机制的研究提供动物模型。方法：利用CRISPR/Cas9技术构建Lcat基因敲入小鼠；利用肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠与Lcat基因敲入小鼠交配得到肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠；通过PCR法鉴定小鼠的基因型 ；利用实时荧光定量 PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）和 Western blot 技术验证 Lcat 基因的 mRNA 水平和蛋白水平。 结果：PCR结果显示肝脏特异性敲入Lcat基因的小鼠模型构建成功；qPCR结果显示Lcat基因在肝脏中特异性高表达；WB结果显示，与对照组小鼠相比，LCAT蛋白在肝脏特异性敲入Lcat的小鼠肝脏中有明显更高的表达。结论：成功构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠，为在动物水平探索Lcat基因在肝脏相关代谢疾病中的功能及相关发病机制提供研究平台。     

地塞米松和维生素B12干预下小鼠胚胎腭突Shh相关信号因子的研究

目的：　探讨地塞米松及其拮抗剂维生素B₁₂干预妊娠关键期孕鼠后,小鼠胚胎腭突上Shh信号通路重要因子、细胞周期调控因子及初级纤毛解聚相关因子的调控及三者间的变化关系。方法：　予特定孕期C57BL/6J孕鼠腹腔注射一定剂量的生理盐水（空白对照组）、地塞米松（地塞米松组）、维生素B₁₂（维生素B₁₂组）、地塞米松+维生素B₁₂（地塞米松+维生素B₁₂组）,观察妊娠17.5 d和13.5 d各组小鼠胚胎腭突融合情况;Western blot检测妊娠13.5 d各组小鼠胚胎腭突中Smo、Ptch1、Cyclin D1、Aurora A的表达变化并进行统计学分析。结果：　地塞米松延缓胚胎腭突发育而导致腭裂发生,而维生素B₁₂干预后,可部分恢复胚胎腭突发育。Western blot结果显示,与对照组相比,Ptch 1、Aurora A、Cyclin D1的表达在地塞米松组中明显降低（均P=0.000）,Smo无明显改变（P=0.695）;地塞米松+维生素B₁₂组中Ptch 1、Aurora A、Cyclin D1的表达与地塞米松组相比,均不同程度上调（均P=0.000）,Smo无明显改变（P=0.818）;维生素B₁₂组中各目的蛋白表达与对照组无统计学差异（P=0.879、0.399、0.645、0.168）。结论：　地塞米松影响小鼠胚胎腭突Shh下游信号传递和初级纤毛解聚,从而抑制Cyclin D1表达使小鼠胚胎腭突细胞增殖降低,维生素B₁₂可通过上调相关因子蛋白含量拮抗这一抑制效果。     

基于TWEAK/Fn14信号通路探讨大黄酚对OVA诱导哮喘小鼠的保护作用

[目的] 观察大黄酚对卵清蛋白（OVA）诱导哮喘小鼠模型的保护作用,并探讨肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子（TWEAK）/成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）信号通路与其保护作用的关系。[方法] 60只C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常对照组（CON组）、模型组（OVA组）、地塞米松阳性对照组（DEX组）、大黄酚低剂量组（RHU-L组）、大黄酚中剂量组（RHU-M组）和大黄酚高剂量组（RHU-H组）,每组10只。实验结束后,对各组小鼠的哮喘症状进行评分;Diff-Quick染色法计量各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞数。苏木精-伊红（HE）染色法观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附法检测各组小鼠BALF中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;免疫组化法检测各组小鼠肺组织中TWEAK蛋白的表达水平。蛋白免疫印迹法检测各组小鼠肺组织TWEAK/Fn14信号通路蛋白TWEAK和Fn14的表达水平。[结果] 大黄酚可明显降低哮喘症状评分（P<0.05）,减少哮喘小鼠BALF中总细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的数量（P<0.05）,改善肺组织的病理学变化,降低BALF中IL-4、IL-5、TNF-α和IL-1β炎症因子的水平（P<0.05）,减少肺组织中TWEAK和Fn14蛋白表达（P<0.05）。[结论] 大黄酚对OVA致哮喘小鼠模型具有较好的保护作用,其可能与调节TWEAK/Fn14信号通路有关。     

小剂量右美托咪定缓解大鼠慢性疼痛相关抑郁样行为及对前额叶皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基的影响

目的 观察小剂量右美托咪定对慢性疼痛大鼠抑郁样行为及前额叶皮质（PFC）N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的影响。方法 将22只成年大鼠随机分为假手术组（Sham组,n=6）、保留性神经损伤组（SNI组,n=6）、保留性神经损伤+生理盐水组（SNI+NS组,n=5）和保留性神经损伤+右美托咪定组（SNI+DEX组,n=5）。SNI+NS组及SNI+DEX组在建模后第8~14天腹腔注射等体积生理盐水或小剂量DEX（20 μg/kg）。采用von Frey纤维评估大鼠疼痛缩足阈值（PWT）,强迫游泳实验（FST）评估大鼠抑郁样行为,蛋白质印迹法检测大鼠PFC中NR2B蛋白的表达。结果 与Sham组相比,SNI组大鼠术后第1、3、7、14天PWT降低,术后第15天FST中右腿不动时间延长、PFC中NR2B蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.05）。与SNI+NS组相比,SNI+DEX组大鼠术后第1~14天PWT无明显变化（P>0.05）,术后第15天FST中右腿不动时间缩短、PFC中NR2B蛋白表达增加（P<0.01、P<0.05）。结论 腹腔内注射小剂量DEX可缓解大鼠慢性疼痛相关的抑郁样行为,其机制可能与PFC中NR2B蛋白的增加有关。     

小鼠鼻腔滴入重组人乳铁蛋白对变应性鼻炎的作用及其机制

目的 研究小鼠鼻腔滴入重组人乳铁蛋白对变应性鼻炎的防治作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用卵清蛋白建立BALB/c 小鼠变应性鼻炎动物模型,用苏木素-伊红,高碘夫稀,肥大细胞染色方法分析鼻黏膜嗜酸性粒细胞,杯状细胞和肥大细胞浸润的情况。用荧光定量 RT-PCR 和酶联免疫方法检测小鼠鼻腔中T 淋巴细胞亚群转录因子和细胞因子以及乳铁蛋白基因和蛋白的表达水平。用Spearman分析鼻腔中的乳铁蛋白表达水平和嗜酸性粒细胞的相关性。结果 与正常小鼠相比,嗜酸性粒细胞,杯状细胞和肥大细胞的数量,Th2、Th17、Treg基因和蛋白表达水平在变应性鼻炎小鼠鼻腔显著增加（P<0.05）,但是在卵清蛋白激发前和激发后鼻腔给予重组人乳铁蛋白后均显著减少（P<0.05）。Th1相关基因和蛋白表达水平在正常小鼠和模型小鼠之间差异无统计学意义,但是给予重组人乳铁蛋白治疗后明显上调（P<0.05）。与正常小鼠相比,内源性乳铁蛋白的基因和蛋白表达水平在变应性鼻炎小鼠鼻腔显著下调（P<0.05）,但是给予重组人乳铁蛋白治疗后明显上调（P<0.05）。Spearman相关分析显示乳铁蛋白表达水平和嗜酸性粒细胞数量呈负相关（r=-0.920,P<0.05）。结论 内源性乳铁蛋白在变应性鼻炎小鼠鼻腔中表达下调,该蛋白表达不足可能与变应性鼻炎的发生和发展相关。外源性乳铁蛋白抑制了小鼠变应性鼻炎的炎症,其机制可能与增强了内源性乳铁蛋白的表达,促进了Th1 细胞活性和抑制Th2 以及Th17 细胞反应有关。     

调气消积汤对Lewis肺癌小鼠免疫功能影响的实验研究

[目的]探讨调气消积汤对Lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。[方法]C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺癌,随机分为:荷瘤对照组(MG)、调气消积汤组(TG)、顺铂组(DG)、综合组(ZG);健康的小鼠组成空白对照组(CG),每组10只。观察各组对脾脏指数的影响,计数小鼠外周血T淋巴细胞转化率及脾T淋巴细胞的增殖情况,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。[结果]调气消积汤可使荷瘤小鼠的脾脏指数降低并趋向正常,与空白组比较无差异(P>0.05)。从小鼠T淋巴细胞转化率及增殖活性来看,调气消积汤组比荷瘤对照组明显升高,差异显著(P<0.01)。调气消积汤组移植瘤TNF-α蛋白的表达,与荷瘤对照组比较无明显差异(P>0.05)。[结论]调气消积汤对Lewis肺癌小鼠的免疫器官(脾)有一定的保护作用;可以通过提高荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞转化率、脾T淋巴细胞增殖活性,来增强荷瘤小鼠的免疫功能;对肿瘤组织中TNF-α蛋白的表达无明显促进和抑制作用。     

TLR2和NOD2在金黄色葡萄球菌肺炎小鼠中的表达

目的 观察小鼠肺部感染金黄色葡萄球菌后肺组织模式识别受体TLR2及NOD2的表达, 探讨其在金黄色葡萄球菌肺炎中的作用。方法 30只C57BL/6J小鼠, 随机分为两组, 对照组小鼠滴鼻接种无菌磷酸缓冲盐溶液, 金黄色葡萄球菌肺炎组小鼠滴鼻接种5×10⁸ CFU/50μl。滴鼻接种72h后, 获取肺组织标本, HE染色观察病理形态学改变, 免疫组化和Western blot法检测TLR2及NOD2蛋白的表达变化, QRT-PCR法检测TLR2和NOD2 mRNA的表达。结果 金黄色葡萄球菌滴鼻接种72h后, 小鼠肺组织TLR2和NOD2蛋白表达水平显著升高(P<0.05), 并且上调TLR2和NOD2 mRNA表达(P<0.01)。结论 金黄色葡萄球菌感染能上调小鼠肺组织TLR2和NOD2的mRNA及蛋白表达。     

阿霉素对模式生物斑马鱼中abcb4基因表达的影响

目的 选择斑马鱼作为实验对象,研究阿霉素(doxorubicin,DOX)对其abcb4基因表达的影响,进一步了解abcb4基因在斑马鱼多药耐药机制中可能的作用。方法 分别以2 mL/L二甲基亚砜（DMSO）,10 μmol/L DOX及含2 mL/L DMSO的10 μmol/L DOX对斑马鱼胚胎进行药物处理,另以Eggwater处理的胚胎作为对照组。将正常发育的4~16个细胞期斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,药物处理至120 hpf。收集药物处理下的斑马鱼不同时期胚胎运用实时荧光定量PCR和胚胎原位杂交技术,检测abcb4基因在斑马鱼中的表达变化情况。结果 相较于对照组,药物处理的斑马鱼胚胎abcb4基因mRNA表达水平升高(P<0.05),而abcb5基因mRNA表达情况则无明显变化。通过斑马鱼胚胎原位杂交,均在斑马鱼120 hpf胚胎小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且药物处理的斑马鱼胚胎在脑及心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号。结论 DOX能诱导斑马鱼胚胎abcb4基因表达水平增高,对阐明abcb4基因在斑马鱼多药耐药产生机制中的作用具有重要意义。     

α-硫辛酸合锌对痴呆模型小鼠学习记忆能力的影响

目的 观察α-硫辛酸合锌对东莨菪碱致痴呆模型小鼠学习记忆能力及氧化应激的影响。方法 将32只昆明小鼠随机均分成模型对照组、硫辛酸组、硫酸锌组、α-硫辛酸合锌组。每组每天分别给予生理盐水、硫辛酸、硫酸锌和α-硫辛酸合锌,每次给药5h后进行Y迷宫训练,连续8天后各组均给予5mg/kg 东莨菪碱,半小时后进行记忆能力测试。测定小鼠匀浆后脑组织内还原型谷胱甘肽和蛋白含量及超氧化物歧化酶的活力。结果 与模型对照组及其他各组相比,α-硫辛酸合锌组小鼠错误次数明显减少,脑组织内还原型谷胱甘肽和蛋白质含量明显升高(P<0.05),超氧化物歧化酶活力明显降低(P<0.01)。结论 α-硫辛酸合锌可以显著提高痴呆小鼠的学习记忆能力,降低脑组织内氧化应激水平。     

缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 分析缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达差异,探讨缺氧状态以及这2种蛋白在子宫内膜癌发生、发展中的临床意义。方法 选择2011年1月至2012年12月在同济大学附属同济医院接受手术治疗的子宫内膜癌患者128例,采用免疫组织化学法检测术后癌组织和配对癌旁组织中HIF1-α和VEGF蛋白表达,并对患者进行定期随访,分析这2种蛋白表达与患者预后的关系。构建人子宫内膜癌细胞缺氧模型,检测细胞中HIF1-α和VEGF蛋白表达,并观察细胞增殖、侵袭及凋亡情况。结果 子宫内膜癌组织中HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率均高于癌旁组织（P均<0.05）,HIF-1α蛋白在淋巴结转移阳性、高组织学分级、肿瘤最大径≥4 cm和孕激素受体阳性的患者中阳性率较高（P均<0.05）,VEGF蛋白在淋巴结转移阳性、高组织学分级、肌层浸润较深、肿瘤最大径≥4 cm、雌激素受体阳性、孕激素受体阳性和高病理分期的患者中阳性率较高（P均<0.05）;HIF-1α阴性患者的5年总生存率高于阳性患者（P<0.05）,VEGF阴性患者5年总生存率与阳性患者相比差异无统计学意义（P>0.05）。人子宫内膜癌细胞缺氧模型中,HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加（P均<0.05）,细胞增殖和侵袭能力均增强（P均<0.05）,凋亡减少（P<0.05）。结论 HIF-1α和VEGF蛋白与子宫内膜癌的发展有关,HIF-1α蛋白表达阳性提示预后不良。     

混合谱系激酶结构域样蛋白在小鼠妊娠早期子宫及蜕膜中的表达及调控

目的 探讨混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）在小鼠妊娠早期子宫及蜕膜组织中的表达规律。方法 构建小鼠早期妊娠模型、人工诱导子宫蜕膜化模型、雌二醇和（或）孕酮处理子宫模型;体外培养人子宫内膜基质细胞,应用雌二醇、醋酸甲羟孕酮和二丁酰环腺苷酸诱导其蜕膜化。通过实时荧光定量PCR、原位杂交和蛋白质印迹法分析小鼠早期妊娠子宫、蜕膜化子宫和激素处理子宫中MLKL mRNA和蛋白的表达规律,通过实时荧光定量PCR检测MLKL mRNA在体外诱导的人蜕膜化细胞中的表达。结果 （1）在小鼠早期妊娠子宫中,MLKL mRNA及蛋白在妊娠第1~4天的子宫腔上皮表达量较低且不规律,在妊娠第5天的子宫腔上皮及其周围的蜕膜细胞中表达,妊娠第6~8天主要集中在蜕膜组织中表达,着床后表达量逐日增高并在妊娠第7天达到最高峰,妊娠第8天表达稍有下降。（2）在人工诱导蜕膜化的小鼠子宫中,MLKL mRNA表达量很高,整个蜕膜区域均有表达,而在对照组小鼠子宫中则无明显表达。MLKL蛋白的表达与mRNA相一致。MLKL mRNA在体外诱导的人蜕膜化细胞中的表达量高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）在孕酮处理的小鼠子宫中MLKL mRNA及蛋白表达量增高,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 MLKL受孕酮的调控参与哺乳动物胚胎着床和蜕膜化过程。     

PRKAG2基因G100S新突变对小鼠心肌细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶活性的影响

目的 探讨位于非胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase,CBS）区域的PRKAG2基因G100S突变对小鼠心肌细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）活性的影响。方法 建立人源PRKAG2（G100S）转基因小鼠模型,分别随机选取N4代4周龄、12周龄的转基因小鼠和同窝野生型小鼠各6只,用磷酸化检测试剂盒检测小鼠心肌细胞中AMPK活性,比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠AMPK活性的差异,并观察随着周龄的增长转基因小鼠AMPK活性的变化。结果 4周龄和12周龄的转基因小鼠心肌细胞中AMPK活性均低于同窝野生型小鼠（0.042±0.013 vs 0.063±0.013,0.032±0.008 vs 0.062±0.018）,差异均有统计学意义（P=0.019,P=0.004）。12周龄和4周龄的转基因小鼠心肌细胞中AMPK活性差异无统计学意义（P=0.135）。结论 PRKAG2基因G100S突变可导致转基因小鼠心肌细胞AMPK活性下降,而且AMPK活性并不随着转基因小鼠周龄的增长而变化。     

长链非编码RNA-H19特异性吸附微RNA-760调控nanog基因表达促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）-H19对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移的影响及分子机制。方法 收集2015年10月至2016年5月海军军医大学（第二军医大学）长海医院确诊的20例NSCLC患者手术切除的NSCLC组织及相应的癌旁正常组织。通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测NSCLC组织及癌旁正常组织,人NSCLC细胞系A549、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中lncRNA-H19的表达。在A549细胞中过表达lncRNA-H19后,采用CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。利用生物信息学分析预测lncRNA-H19与微RNA（miRNA）-760的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA-H19对miRNA-760的吸附作用,采用qPCR和蛋白质印迹法分别检测lncRNA-H19过表达对miRNA-760及下游靶基因nanog表达的影响。通过对A549细胞转染miRNA-760模拟剂过表达miRNA-760后,检测过表达miRNA-760对lncRNA-H19促进NSCLC细胞增殖和迁移作用的影响。结果 LncRNA-H19在NSCLC组织和A549、NCI-H1299细胞中均呈高表达,分别与其在癌旁正常组织和BEAS-2B细胞中的表达水平相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。与对照组相比,过表达lncRNA-H19后A549细胞的增殖能力增强（P<0.05）、迁移能力提高（P<0.01）。在线数据库starBase v3.0预测分析结果显示lncRNA-H19能特异性吸附miRNA-760。双荧光素酶报告基因检测结果显示lncRNA-H19与miRNA-760之间存在特异性结合。与对照组相比,过表达lncRNA-H19可抑制A549细胞中miRNA-760的表达（P均<0.05）,并促进其下游基因nanog在mRNA和蛋白水平的表达（P均<0.01）。过表达miRNA-760可抑制lncRNA-H19对A549细胞增殖和迁移的促进作用,与lncRNA-H19过表达组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 LncRNA-H19可通过特异性吸附miRNA-760调控nanog基因表达,从而促进NSCLC细胞增殖和迁移。