从PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路探讨复方当归注射液对拟缺血神经元的作用

[目的] 探讨复方当归注射液（CAI）干预拟缺血损伤脑微血管内皮细胞（BMECs）后的条件培养液对拟缺血损伤神经元的影响及作用机制。[方法] 原代培养SD大鼠BMECs及皮层神经元,免疫荧光鉴定两种细胞,收集正常BMECs条件培养液（N-CM）、拟缺血损伤BMECs条件培养液（I-CM）及CAI低、中、高剂量干预后的拟缺血损伤BMECs条件培养液（IC-CM,1.25、2.5、5 μL/mL）,分别作用于正常神经元和拟缺血损伤神经元,用CCK8法检测各组神经元活性、蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）信号通路Akt的磷酸化水平[磷酸化Akt（p-Akt）/Akt]、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外信号调节激酶（Erk）信号通路Erk的磷酸化水平[磷酸化Erk（p-Erk）/Erk]。[结果] 与N-CM处理组相比,I-CM处理组神经元活性显著降低（P<0.01）、Akt磷酸化水平下降（P<0.05）、Erk磷酸化水平显著上升（P<0.01）;CAI干预后IC-CM低剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平高于I-CM处理组（P<0.05）,IC-CM中、高剂量处理组神经元活性、Akt磷酸化水平显著高于I-CM处理组（P<0.01）,各IC-CM处理组较I-CM处理组的Erk磷酸化水平变化不明显（P>0.05）。[结论] CAI可通过干预拟缺血损伤内皮细胞进而对拟缺血损伤神经元达到保护作用,该保护作用可能与活化PI3K/Akt信号通路存在相关性,与MAPK/Erk信号通路关联不大。     

沉默氯离子通道蛋白1基因表达对胃癌细胞的影响

目的 观察沉默细胞内氯离子通道蛋白1（chloride channel protein 1,CLIC1）的基因表达后对胃癌BGC-823细胞增值、侵袭、迁移以及周期和凋亡的影响。方法 化学合成针对CLIC1的靶向siRNA （CLIC1 siRNA组）,以转染脂质体试剂细胞（MOCK组）和空白细胞（CTRL组）作为对照。用MTT、流式细胞术以及Transwell分别观察细胞的增值、周期、凋亡、侵袭和迁移能力的变化。结果 转染24h、48h和72h后,CLIC1 siRNA组与MOCK组、CTRL组相比,其增殖能力均显著增强（P<0.05）;转染48h后CLIC 1siRNA组G₂/M期细胞明显增多（P<0.05）、凋亡率显著降低（P<0.05）、侵袭及迁移细胞数明显下降（P<0.05）。结论 CLIC1在胃癌的发生、发展及侵袭迁移中过程发挥重要作用。     

复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究

[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞（BMECs）的影响,从微小RNA-320（miRNA-320）调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和胰岛素样生长因子受体-1（IGF-1R）基因表达水平,通过甲臜化合物（MTS）检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高（P<0.01）,同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。     

雷公藤红素抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及上皮间质转化

目的 研究雷公藤红素在鼻咽癌细胞增殖、迁移及上皮间质转化中的作用。方法 使用终浓度为1.8 μmol/L的雷公藤红素处理人鼻咽癌HNE1、CNE2细胞，并设二甲基亚砜（DMSO）对照组。用CCK-8法检测HNE1、CNE2细胞的增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，细胞克隆形成实验检测细胞的克隆形成数，细胞黏附与分离实验检测细胞的黏附、分离能力，蛋白质印迹法检测细胞上皮间质转化蛋白（E-钙黏蛋白、β-连环蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白）的表达。结果 与DMSO对照组比较，采用1.8 μmol/L雷公藤红素处理24、48、72 h后，HNE1细胞的增殖能力均降低（P均<0.05），处理48、72 h后，CNE2细胞的增殖能力均降低（P均<0.05）；处理48 h后，HNE1、CNE2细胞的迁移能力均下降（P均<0.05）；处理2周后，HNE1、CNE2细胞的克隆形成数均减少（P均<0.05）；处理1 h后，HNE1、CNE2细胞的黏附率降低（P<0.05）；处理24 h后，HNE1、CNE2细胞的分离率降低（P<0.05）；处理6 h后，HNE1、CNE2细胞中E-钙黏蛋白、β-连环蛋白的表达升高（P<0.05），N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达降低（P均<0.05）。结论 雷公藤红素可抑制鼻咽癌HNE1、CNE2细胞的增殖、迁移及上皮间质转化。     

富含半胱氨酸蛋白61对子宫内膜癌细胞增殖及细胞周期的影响及其机制研究

目的 研究富含半胱氨酸蛋白61（CYR61）对子宫内膜癌（EC）细胞株HEC-1B增殖及细胞周期的影响，并探讨其机制。方法 取对数生长期HEC-1B细胞，随机分为Control组（不处理）、pcDNA3.1-NC组（转染pcDNA3.1-NC）、pcDNA3.1 CYR61组（转染pcDNA3.1 CYR61）、pcDNA3.1 CYR61+ LiCl （Wnt/β-catenin通路激活剂）组（转染pcDNA3.1 CYR61，并加入LiCl使其终浓度为60 mmol/L）。转染48 h后采用MTT法检测增殖抑制率，PI染色法检测细胞周期占比，Western blotting检测细胞β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达。结果 与Control组、pcDNA3.1-NC组比较，pcDNA3.1 CYR61组CYR61、β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1蛋白相对表达量、G₀/G₁期占比升高（P <0.05），S、G₂/M期占比降低（P <0.05）；与pcDNA3.1 CYR61组比较，pcDNA3.1 CYR61+ LiCl组CYR61、β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1蛋白相对表达量、G₀/G₁期占比降低（P <0.05），S、G₂/M期占比升高（P <0.05）。4组24 h、48 h、72 h增殖抑制率比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点增殖抑制率有差异（F =25.416，P =0.000）；②3组增殖抑制率有差异（F =46.962，P =0.000），pcDNA3.1 CYR61组增殖抑制率较高，增殖抑制效果好；③3组增殖抑制率变化趋势有差异（F =37.541，P =0.000）。结论 上调CYR61可抑制EC细胞株HEC-1B增殖，阻滞其细胞周期，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

正常和缺氧条件下磁场对人脑微血管内皮细胞增殖的影响

[目的] 观察不同强度的永磁磁场对正常和缺氧条件下人脑微血管内皮细胞（HBMEC）增殖的影响。[方法] 采用正常和缺氧两种条件体外培养HBMEC,实验分为10组,即对照组、药物组（银杏叶注射液350 mg/L）、不同强度磁场组（3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT）,各组细胞于磁场作用48 h后收集样本,用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞增殖。[结果] 正常和缺氧条件下,与对照组相比较,药物组有统计学意义（P<0.05）,各磁场组差异均无统计学意义（P>0.05）;磁场组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）.[结论] 正常和缺氧条件下,磁感强度3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT的磁场对人脑微血管内皮细胞的增殖无影响。     

舒肝明目汤含药血清调节HIF1α-VEGF-Notch1通路活性影响脉络膜血管新生作用的研究

[目的] 探讨舒肝明目汤含药血清对大鼠脉络膜血管内皮细胞（CECs）增殖的影响及与HIF1α-VEGF-Notch1通路相关的调节机制。[方法] CECs细胞在常氧和低氧条件下进行培养,检测低氧条件下舒肝明目汤含药血清对CECs增殖移行能力的影响;并采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）技术检测细胞中低氧诱导因子1α（HIF1α）、血管内皮生长因子（VEGF）和Notch1 mRNA和蛋白表达的水平。[结果] 与正常组相比,低氧组CECs的增殖移行能力明显提高（P<0.01）,CECs中HIF1α、VEGF和Notch1 mRNA及蛋白表达明显增多（P<0.01）.经含药血清处理后,CECs增殖移行能力较低氧组显着下降（P<0.01）,同时HIF1α和VEGF mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.05）,而Notch1表达进一步增高（P<0.01）.[结论] 舒肝明目汤含药血清通过上调Notch1表达及下调HIF1α-VEGF通路活性抑制CECs增殖迁移,从而减少脉络膜新生血管生成。     

加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞表达VEGF的影响

目的 探讨加减驻景方含药血清对AKT基因转染后人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）细胞表达VEGF的影响。方法 制备SD大鼠加减驻景方含药血清及空白血清,建立AKT基因转染ARPE-19细胞模型,体外培养,分为5个组,正常组为ARPE-19细胞常规培养,转染模型组（模型细胞,常规条件培养）,含药血清组（模型细胞,给予含药血清干预培养）、空白血清组（模型细胞,给予空白血清干预培养）和阳性对照组（模型细胞,给予康柏西普干预培养）。设立不同时间和不同浓度,通过CCK-8法检测各组血清及阳性组药物对细胞毒性、增殖的影响;通过ELISA检测各组细胞上清液中VEGF的表达。结果 蛋白质印迹法（Western blot）显示,转染模型组与正常组比较,AKT蛋白的表达量明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8示,细胞培养24、48h后,AKT基因转染可促进ARPE-19细胞增殖（P<0.05）,培养72h后,对细胞增殖影响不大（P > 0.05）。10、20μg/ml康柏西普及5%、10%的含药血清对模型细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,各浓度空白血清组对模型细胞组的增殖影响不大（P > 0.05）。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测显示：转染模型组细胞上清液中VEGF表达量高于正常组（P<0.05）,康柏西普组与含药血清组均显著低于模型组（P<0.05）,其中康柏西普组低于含药血清组,差异有统计学意义（P<0.05）。空白血清组与模型组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 AKT基因转染后可诱导ARPE-19细胞的增殖,促进VEGF的表达。加减驻景方含药血清对AKT基因转染后ARPE-19细胞的增殖及VEGF的表达有抑制作用。加减驻景方可能通过抑制VEGF的过度表达发挥干预CNV生成的作用。     

48 h腹水量联合血钙对重症急性胰腺炎的早期诊断价值

目的 探讨48 h腹水量联合血钙对重症急性胰腺炎（SAP）的早期诊断价值。方法 回顾性分析2019年1月至2020年6月在中国科学技术大学附属第一医院（安徽省立医院）急诊外科收治的106例有腹膜炎症状的中度重症急性胰腺炎（MSAP）及SAP患者的临床资料,按急性胰腺炎患者脏器衰竭持续时间是否超过48 h,将患者分为MSAP组（n=68）与SAP组（n=38）,分析发生SAP的危险因素,绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析危险因素对SAP的诊断效能。结果 SAP组患者48 h腹水量、降钙素原高于MSAP组,而血钙、血清白蛋白低于MSAP组,差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素logistic回归分析显示,48 h腹水量是发生SAP独立危险因素（OR=1.187,P=0.000）,而血钙是发生SAP的保护因素（OR=0.056,P=0.008）。48 h腹水量、血钙及二指标联合预测SAP的敏感度分别为0.789、0.868和0.763,特异度分别为0.809、0.662和0.882,ROC曲线下面积分别为0.826、0.778和0.860,48 h腹水量、血钙的截断值分别为1 240 mL和1.87 mmol/L。结论 48 h腹水量联合血钙能够早期准确预测SAP的发生。     

乳康饮及拆方对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究乳康饮及拆方对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 采用乳康饮及拆方含药血清处理人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别在24、48、72h时间点,用cell counting kit-8（CCK-8法）检测乳康饮及拆方在不同时间点对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,FCM法（流式细胞术）检测乳康饮及拆方诱导MDA-MB-231细胞凋亡。结果 各组中药处理48h后,细胞增殖出现明显抑制,抑制率分别为46.05%、31.85%、41.24%,相对氟尿嘧啶组抑制作用时间有明显延迟,乳康饮组在48h与氟尿嘧啶组抑制率之间差异无统计学意义（P=0.076）。各处理组48h凋亡率分别为40.7%、16.3%、23.2%、57.5%,比空白对照组凋亡率显著增加（P<0.05）,乳康饮组与氟尿嘧啶组凋亡率差异无统计学意义,但高于拆方2组（P=0.000）。结论 乳康饮及其拆方能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。     

体外共培养条件下毛囊神经嵴干细胞促进神经束膜细胞迁移和增殖

目的 探索体外培养神经束膜细胞的有效方案,并初步研究毛囊神经嵴干细胞(hfNCSC)对神经束膜细胞的激活作用.方法 采用"限时消化-差速贴壁-化学药物"方法对大鼠坐骨神经束膜细胞进行培养和纯化,同时培养大鼠触须垫hfNCSC,并对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定.借助Transwell小室建立hfNCSC与神经束膜细胞的共培养模型,在Transwell上室接种神经束膜细胞,下室接种hfNCSC(hfNCSC共培养组)或不接种细胞(对照组),共培养6、12和18 h后进行结晶紫染色,观测神经束膜细胞的迁移情况.取hfNCSC条件培养基(hfNCSC条件培养基组)和含2％FBS的DMEM培养基(对照组)分别作用于神经束膜细胞,24、48和72 h后用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况.结果 本方案可在2周的时间内获得纯度高达(97.66±2.08)％的神经束膜细胞.将神经束膜细胞与hfNCSC共培养6、12和18 h后,可见hfNCSC共培养组神经束膜细胞的迁移数较对照组增多,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).以hfNCSC条件培养基作用于神经束膜细胞24 h和48 h后,hfNCSC条件培养基组与对照组神经束膜细胞的细胞活力差异无统计学意义(P均>0.05);但作用72 h后,hfNCSC条件培养基组神经束膜细胞的细胞活力高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 "限时消化-差速贴壁-化学药物"方法可成功培养和纯化神经束膜细胞;hfNCSC可激活神经束膜细胞,促进其迁移和增殖.     

脐带间充质干细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)抑制人卵巢癌SKOV3细胞增 殖及促进其凋亡的作用。方法：采用Transwell共培养观察UC-MSCs向卵巢癌细胞靶向归巢的作用;MTT 实验检测UCMSCs 条件培养基抑制SKOV3细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测其凋亡率;实时PCR检测与SKOV3细胞增殖 和凋亡相关基因Ki-67,Bax,Bcl-2的表达。结果：UC-MSCs体外向SKOV3细胞靶向归巢。MTT 结果显示UC-MSCs条件 培养基明显抑制SKOV3细胞的增殖(P<0.01)。Annexin V-FITC/PI双染法提示75%条件培养基组的凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。实时PCR发现增殖相关基因Ki-67的表达明显下降(P<0.01),凋亡相关基因Bcl-2的表达明显降低(P<0.01), Bax的表达明显增加(P<0.01)。结论：UC-MSCs体外能向卵巢癌细胞靶向归巢,通过调节增殖相关基因Ki-67的表达, 抑制SKOV3细胞增殖;通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,促进SKOV3细胞凋亡。     

Effect of Tongluojiunao injection made from Sanqi (Radix Notoginseng) and Zhizi (Fructus Gardeniae) on brain microvascular endothelial cells and astrocytes in an in vitro ischemic model

ObjectiveTo explore the effect of Tongluojiunao injection (TLJN) prepared with Sanqi (Radix Notoginseng) and Zhizi (Fructus Gardeniae) on the interaction between brain microvascular endothelial cells (BMECs) and astrocytes in an in vitro ischemic model.MethodsFirst, an in vitro model of cerebral ischemia in BMECs or astrocytes was established by oxygen-glucose deprivation (OGD). TLJN was used as a medicine of intervention. The OGD-injured BMECs were cultured in various astrocyte-conditioned media. Cell activity, alkaline phosphatase (AKP) and γ-glutamyl transpeptidase (γ-GT) activity, interleukin-1 beta (IL-1β), and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) content in BMECs were determined. Additionally, OGD-injured astrocytes were cultured in various BMEC-conditioned media. Cell activity, as well as expression of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) in astrocytes, were detected.ResultsThe results of paracrine signaling of normal BMECs or astrocytes showed a protective effect on each other: conditioned media from normal astrocytes improved cell viability, AKP, and γ-GT activity, and reduced IL-1β and TNF-α content of injured BMECs; conditioned media from normal BMECs improved cell viability and expression of BDNF and GDNF in injured astrocytes. However, once the BMECs or astrocytes were injured by OGD, the protective effect decreased or disappeared. The above-mentioned protective induction was effectively recovered by TLJN intervention.ConclusionThe therapeutic benefit of TLJN was achieved by recovering two-way induction between BMECs and astrocytes, enhancing activity of injured BMECs and astrocytes, stabilizing enzymatic barriers, promoting expression of neurotrophic factors, and inhibiting inflammatory cytokines.     

三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响

目的比较人羊膜上皮细胞（（human amniotic epithelial cell, H-AEC））、羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal
cell, HA-MSC）和脐带间充质细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC）分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞
系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组,比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和
RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力;检测各
组细胞分泌一氧化氮（NO）的水平;用实时定量多聚酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞经典激活的巨噬细胞（classically
activated macrophage, M1 macrophage）相关的促炎基因如白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死基因а（TNFа）、一氧化氮合成酶-2
（NOS-2）以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶（Arg-1）、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36）表达情况。
结果（1）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC 处理后RAW264.7 的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%,与对照组
（31.1%±11.0%）相比,3 种细胞的条件培养基处理后RAW264.7 的迁移率均降低,差异具有显著性（P<0.05）;（2）H-AEC、
HA-MSC、UC-MSC共培养后RAW264.7 细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76 μmol/L,与对照组
（45.65±1.78 μmol/L）相比,H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降（P<0.05）;（3）促炎基因与抑炎基因的表达改变：（A）H-AEC
处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调,与对照组相比有显著差别;HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表
达下调显著,其余基因均上调表达;抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调;（B）3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、
CD206、CD36表达均上调,与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细
胞向M2型分化,但其效果和机制存在不同。
     

消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt通路的影响及机制

目的 探讨消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt信号通路的影响及机制.方法 将MCF-10AT细胞分为消痰解郁方组、PI3K激酶选择性抑制剂LY294002组(抑制剂组)、消痰解郁方+抑制剂组和对照组.给予相应药物干预24、48 h后,采用CCK-8法观察各组细胞增殖及生长情况;药物干预48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞周期变化,用蛋白质印迹法检测各组细胞PTEN、PI3K、Akt蛋白表达变化.结果 药物干预24和48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞增殖受到抑制,且消痰解郁方+抑制剂组抑制率高于消痰解郁方组和抑制剂组,差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后.消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中消痰解郁方+抑制剂组与其他各组相比差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组、消痰解郁方+抑制剂组PI3K、p Akt蛋白表达较对照组减弱,PTEN蛋白表达较对照组增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 肖痰解郁方可能通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥其对MCF10AT细胞的抑制及促凋亡作用.     

中性粒细胞上清液对人脐带间充质干细胞迁移的影响

目的:探讨中性粒细胞上清液和人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养后,对MSCs迁移的影响,为MSCs更好地应用于炎症性疾病的治疗提供理论依据.方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs和中性粒细胞按不同比例共培养后,提取中性粒细胞上清液,UC-MSCs单独培养的为对照组(1:0),UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中进行培养的为实验组,选择18 h和40 h作为培养时间,根据四甲基偶氮唑盐(MTT)的实验结果,选择具有统计学意义的1:0、1:1、1:50分组和18 h作为实验对象,采用划痕的方法观察24 h内不同时间点MSCs的迁移情况.结果:划痕实验观察到1︰50实验组细胞的迁移较1:0和1:1实验组明显增快.结论:高浓度的中性粒细胞的上清液促进人脐带MSCs的迁移.     

血清剥夺促进成纤维细胞向内皮细胞转分化的体外研究

目的 模拟体内急性心肌梗死缺血缺氧微环境,探讨血清剥夺是否能激活心肌成纤维细胞向内皮细胞转分化.方法 取新鲜分离的C57BL/6新生小鼠心脏组织,获取成纤维细胞进行培养,用白血病抑制因子(LIF)促进成纤维细胞自我更新、长程维持干性和抑制其向终末分化.将第3代成纤维细胞分为:对照组[DMEM+10％胎牛血清(FBS)培养]、血清剥夺24 h组(不含FBS的DMEM培养24 h)、血清剥夺48 h组(不含FBS的DMEM培养48 h)、血清剥夺72 h组(不含FBS的DMEM培养72 h).经过不同处理后,采用qPCR法检测各组细胞谱系特异性基因的表达变化,采用体外血管新生实验和Dil-Ac-LDL吞噬实验检测血清剥夺后成纤维细胞的功能学变化,采用ELISA法检测血清剥夺后成纤维细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的情况.结果 血清剥夺不同时间组成纤维细胞形成血管分叉的数目与对照组相比均增加(P＜0.05),但均未发现诱导细胞吞噬Dil-Ac-LDL的现象.与对照组比较,血清剥夺48 h组成纤维细胞中内皮特异性基因CD31和VE-herin的表达均升高(P＜0.05);其中血清剥夺48 h组成纤维细胞中CD31的表达是对照组的13.7倍(P＜0.05),血清剥夺72 h组是对照组的2倍(P＜0.05).ELISA检测结果显示,血清剥夺48 h组成纤维细胞分泌的VEGF是对照组的7倍(P＜0.05),血清剥夺72 h组是对照组的3.7倍(P＜0.05).结论 血清剥夺可以激活心肌成纤维细胞向内皮细胞谱系的转分化.     

氧糖剥夺条件下p75神经营养素受体在人神经母细胞瘤细胞中的表达和作用

目的 探讨氧糖剥夺（OGD）条件下p75神经营养素受体（p75NTR）在人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）中的表达变化和作用。方法 SH-SY5Y细胞OGD模型的建立采用三气培养箱无糖无血清培养方法。模型成功建立后设立3组：无血清常规培养组（对照组）、OGD组和OGD+p75NTR竞争性阻断剂LM11A-31处理组（OGD+LM11A-31组）。在细胞培养12 h时用利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测3组细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）活力检测试剂盒测定LDH释放活力,流式细胞术检测凋亡细胞比例,蛋白质印迹法检测p75NTR的蛋白表达。结果 成功构建SH-SY5Y细胞OGD模型。细胞培养12 h时,对照组、OGD组和OGD+LM11A-31组细胞存活率分别为（94.80±4.06）%、（50.34±5.55）%、（64.68±4.59）%,LDH释放活力分别为（46.93±5.49）U/L、（353.09±30.67）U/L和（282.20±25.60）U/L,凋亡细胞比例分别为（1.82±0.45）%、（14.98±2.59）%和（7.36±1.98）%,p75NTR蛋白相对表达量分别为0.06±0.01、0.41±0.02和0.19±0.03,差异均有统计学意义（F=67.94、142.10、36.28、221.20,P均<0.05）。多重比较显示,OGD组细胞存活率低于对照组,LDH释放活力高于对照组,凋亡细胞比例高于对照组,p75NTR蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）;而LM11A-31处理后OGD+LM11A-31组细胞存活率高于OGD组,LDH释放活力低于OGD组,凋亡细胞比例低于OGD组,p75NTR蛋白表达低于OGD组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）。结论 OGD条件下p75NTR在人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中表达增加,可能促进了神经损伤和凋亡。     

半乳糖凝集素1在脐带来源间充质干细胞调控类风湿关节炎患者T细胞功能中的作用

目的：明确半乳糖凝集素1（galectin-1）在脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs）调控类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者T细胞功能中的作用。方法： 应用慢病毒构建galectin-1低表达的UC-MSCs,即UC-MSCs(Gal-1-),采用直接接触培养方式分别将UC-MSCs、UC-MSCs(Gal-1-)与RA患者的CD4+ T细胞共培养。设立阴性对照组（CD4+ T）、阳性对照组［CD4+ T培养过程中加入植物血凝素（phytohae-magg lutinin,PHA）2 mg/L］、UC-MSCs-CD4+ T共培养组、UC-MSCs(对照shRNA)-CD4+ T共培养组及UC-MSCs(Gal-1-)-CD4+ T共培养组。MTS法检测CD4+ T细胞增殖,ELISA方法检测共培养上清液中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factors α, TNF-α）水平,流式细胞术检测Th1/Th2/Th17细胞亚型。结果： UC-MSCs和UC-MSCs(对照shRNA)与CD4+ T细胞共培养组可显著抑制PHA诱导的CD4+ T细胞增殖及TNF-α表达,而UC-MSCs(Gal-1-)组对此无明显抑制作用。与阴性对照组（8.51%±2.04%）相比,UC-MSCs及UC-MSCs(对照shRNA)组可显著抑制Th1细胞分化（分别为4.83%±1.37%和5.13%±0.87%,P值分别为0.012和0.018）,而UC MSCs(Gal-1-)组对此无明显抑制作用（6.41%±0.96%,P=0.101）。与阴性对照组相比,UC-MSCs及UC-MSCs(对照shRNA)组可上调Th2并下调Th17比例,但差异并无统计学意义,UC-MSCs(Gal-1-)组的这一作用不明显。结论： UC-MSCs可抑制RA患者CD4+ T细胞的增殖、活化并可降低Th1细胞比例,但敲低galectin-1分子的表达后该作用减弱,提示galectin-1参与了UC-MSCs抑制RA患者CD4+ T细胞功能的过程。