盲肠不同部位结扎穿孔致脓毒症模型的建立研究

目的 通过盲肠不同部位结扎穿孔致脓毒症模型的研究,探索符合临床病理过程的脓毒症模型.方法 50只KM雄性6周龄小鼠分为5组,空白对照(NC)组、假手术(Sham)组、轻度脓毒症(Min)组、中度脓毒症(Mod)组和重度脓毒症(Sev)组.Sham组仅进行开腹、关腹程序;Min组、Mod组和Sev组以盲肠结扎穿孔术处理,...     

脓毒症心肌损害新生大鼠模型的建立

【摘要】 目的 建立一种具有良好稳定性及重复性的能模拟新生儿脓毒症（NS）心肌损害的新生大鼠动物模型,为研究NS致病机制及防治提供模型动物。方法 选取出生10天的健康雄性SD新生大鼠54只,随机分为正常对照组、假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孔术组（CLP组）,每组各18只。通过观察血培养菌落生长,采用酶联免疫吸附法（ELISA）对血清肌钙蛋白I（cTNI）浓度、心肌组织肿瘤坏死因子α（TNF α）和白细胞介素1β（IL 1β）含量进行检测,光镜下观察HE染色后心肌组织的病理变化。结果 正常对照组和Sham组新生大鼠的血培养结果均为阴性,CLP组新生大鼠的血培养中检出以大肠杆菌为主的菌落。正常对照组新生大鼠的血清cTNI浓度、心肌组织TNF α和IL 1β含量和Sham组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;CLP组新生大鼠的血清cTNI浓度、心肌组织TNF α和IL 1β含量较Sham组明显增加（P＜0.05）。正常对照组和Sham组的心肌组织HE染色示心肌细胞均未出现炎性改变,但CLP组心肌细胞周围出现了炎性细胞浸润等病理改变。结论 通过盲肠结扎穿孔可建立较为理想的脓毒症心肌损害新生大鼠模型。     

盲肠结扎穿孔术——脓毒症模型研究的金标准

脓毒症是一个高发病率、高病死率的疾病。其发病特点是全身炎性反应失调引起的免疫功能障碍,因此如何选择最佳动物模型对研究脓毒症至关重要。盲肠结扎穿孔术(CLP)是目前研究脓毒症应用最广泛、最具代表意义的一种模型,更类似于人类脓毒症的进展和特点。尽管CLP不能完全复制临床的脓毒症,但其仍为脓毒症发病机制和防治研究提供了大量有意义的基础数据。该文对CLP的研究应用予以综述,以促进实验研究与临床试验间的转化。     

组蛋白去乙酰酶抑制剂下调脓毒症小鼠肝内粘附分子表达

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对脓毒症小鼠肝内粘附分子表达及炎症细胞浸润的影响.方法:小鼠经腹腔注射组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TrichostatinA或丁酸钠)后,行盲肠结扎穿孔术以诱导小鼠脓毒症.18 h后处死小鼠并收集血清和肝组织,检测血清转氨酶活性及肝组织匀浆髓过氧化物酶活性;常规石蜡切片HE染色观察组织病理学...     

两种麻醉方法建立大鼠盲肠结扎穿孔术脓毒症模型的比较

目的 探讨两种麻醉方法对大鼠盲肠结扎穿孔术(Cecal ligation-peferation,CLP)脓毒症模型的影响.方法 60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分成2组,每组30只,分别采用传统戊巴比妥钠腹腔注射(T组)和利多卡因、阿托品、咪达唑仑麻醉复合剂(E组)腹腔注射的方法进行麻醉,采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒...     

小鼠烧伤创面脓毒症模型的建立与评价

目的 建立一种稳定的小鼠烧伤创面脓毒症模型,检测其病理生理指标,为烧伤脓毒症相关研究提供标准化的动物模型。方法 将小鼠背部侵入90℃水面接触8 s建立小鼠Ⅲ度烫伤模型,烫伤面积约15%～20%。2 h后痂下注射100μL浓度为0.75×10⁵ CFU/mL的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)造伤后创面脓毒症。连续12 d观测记录小鼠的体重、采食量、生存率和一般状态指标。在注射后1、2、3、5、7 d取小鼠外周血和肝组织,测定血清生化和炎症因子指标,观察肝组织病理改变。结果 模型组建模后12 d的死亡率为30.2%。血清生化指标中ALT、AST、UREA和CREA均较建模前显著上升(P<0.05或P<0.01),TP和TBIL指标无明显变化。血清炎症指标中TNF-α、IL-6在建模后第1天升至最高值(P<0.01),随后逐日递减,分别至第3、7天恢复至造模前水平。肝组织病理切片结果显示在各个时相点均出现肝损伤表现。结论 建立了操作简便可控、严重程度适宜的烧伤脓毒症模型,符合烧伤脓毒症的病理生理特点,可为相关机制研究和...     

心导管留置术后盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症动物模型的建立

目的采用留置心导管采血法检测盲肠穿孔术（CLP）后脓毒症模型大鼠血清学指标并观察肝肺组织病理学形态的变化,为用于治疗脓毒症药物的活性评价的动物模型的建立奠定了实验基础。方法采用改良的心导管留置术结合盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症大鼠模型,术前和术后2、6、12、24、48 h共6个时相点采血,动态浊度法鲎试验检测血浆内毒素（LPS）水平,ELISA法检测血浆TNF-α和IL-6值,全自动血细胞分析仪检测全血白细胞（WBC）及血小板（PLT）值,术后48 h观察大鼠肝、肠、肺的病理学形态改变。结果术后大鼠的血浆LPS、TNF-α、IL-6及全血WBC水平均于术后6 h后逐渐升高,12 h达到高峰,之后逐渐下降,于48 h达到正常水平;PLT水平6 h内无明显变化,随后逐渐下降,24 h达最低值,之后逐渐升高,于48 h接近正常水平;肝、肠、肺组织则呈现以肿胀、炎性细胞浸润为主的病理学改变。结论通过心导管留置术采血观察CLP模型大鼠血细胞和细胞因子、LPS的动态变化是一稳定可靠的实验方法。     

青蒿素对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察青蒿素(artemisinin, ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72 h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide, LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P＜0.05,P＜0.01),24 h肺组织的病理损伤明显减轻.结论 青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤.     

脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究

目的 探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells, CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系.方法 利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型.观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变.并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系.结果 CLP 6 h后动物肝细胞明显肿胀,24 h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死.CLP 3 h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高.而CLP 6 h后AST、ALT才出现明显增高.CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0.774 和-0.734(P＜0.01).用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的最佳拟合曲线为幂函数(P＜0.05),其方程为ALT=33.052 681 24.097 309 CEC -1.CEC数量对AST的最佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607).结论 在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程.当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤.因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗.     

δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠肺功能的保护作用

目的 探讨δ阿片受体激动剂DADLE(D-AIa~2-D-Leu~5-enkephali)对脓毒症大鼠肺功能保护作用及其机制.方法 SD大鼠72只,分为假手术组(SO组)、脓毒症组(SEP组)和DADLE给药组(DADLE组),每组24只.采用改良盲肠结扎穿孔方法 (CLP)建立大鼠脓毒症模型,SO组除不结扎、刺穿盲肠外,其余操作同SEP组,DADLE组模型建立后立即按5 ml/kg体重静脉注射浓度为0.5 mg/ml的DALDE.于手术后2、6、10 h开腹取血行动脉血气分析;测定肺组织湿/干重(W/D)比值;测定肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)含量;检测血浆中肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;观察并比较各组肺组织病理改变.结果 与SEP组相比,DADLE组PaCO_2、PaO_2均明显提高(P<0.05);W/D值明显降低(P<0.05);肺组织MPO、MDA含量明显降低(P<0.05),ATP含量明显升高(P<0.05);血浆TNF-α和IL-6含量明显降低(P<0.05);肺组织病理学改变明显减轻.结论 δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肺功能具有一定的保护作用.     

小鼠循环肝癌细胞模型的建立与评价

目的 采用小鼠肝癌Hepa 1-6细胞建立小鼠肝癌循环肿瘤细胞（CTCs）模型。方法 采用雄性C57BL/6小鼠108只,按照体重分为3组,每组36只。3个组分别每只尾静脉接种0.2 mL的浓度为1×10⁶、5×10⁶和1×10⁷个/mL的小鼠肝癌Hepa 1-6细胞单细胞悬液。各组分别于接种后第1、5、9、13、17、21天检测采血,采用流式细胞术检测,计算2万个有核细胞中CTCs数目及比例、相对CTCs抑制率,记录动物死亡率。②采用雄性C57BL/6小鼠80只,按体重分为2组,分别为模型对照组、甲苯磺酸索拉菲尼组,每组40只。每只尾静脉接种0.2 mL的浓度为5×10⁶个/mL的Hepa 1-6细胞单细胞悬液,接种后第2天开始灌胃给予甲苯磺酸索拉菲尼（50 mg/kg）,连续21 d,并于给药第3、8、15、21天采血进行CTC检测。结果 ①接种浓度为1×10⁶个/mL的细胞悬液后,第1、5、9、13、17、21天的动物CTCs比例为：25.1%、18.1%、8.9%、4.4%、2.9%、0.3%,未出现动物死亡;接种浓度为5×10⁶个/mL的细胞悬液后,第1、5、9、13、17、21天的动物CTCs比例为：40.4%、35.4%、15.4%、9.0%、6.6%、4.1%,未出现动物死亡;接种浓度为1×10⁷个/mL的细胞悬液后,第1、5天的动物CTCs比例为：39.1%、33.5%,在接种完毕之后立即出现动物死亡,且所有动物在接种后第7天全部死亡。②甲苯磺酸索拉菲尼给药期间D₃、D₈、D₁₅、D₂₁相对循环肿瘤细胞清除率分别为：-7.5%、4.6%、55.3%、-94.5%,与模型对照组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论 采用浓度为5×10⁶个/mL小鼠肝癌细胞Hepa 1-6悬液尾静脉注射可建立小鼠肝癌CTC模型,可用于抑制循环肿瘤细胞药物的筛选与评价。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠全身感染模型的建立与评价

目的建立稳定、可靠的MRSA全身感染小鼠模型,为MRSA疫苗的研发提供参考依据,并对系统研究MRSA感染的发病机制及其防治策略奠定实验基础。方法在采用国际标准株MRSA-252建立OD₆₀₀-CFU标准曲线的基础上,经尾静脉注射途径感染BALB/c小鼠,从感染剂量的选择、小鼠的生存率和体重变化、血液及多脏器的细菌定植量以及主要组织器官病理学变化等多个层面进行时相性监测,对建立的小鼠模型进行系统评价。结果经此途径建立的小鼠模型,致死剂量为每只5.0×10⁹ CFU,亚致死剂量为每只1.0×10⁹ CFU(生存率为60%~70%)。感染后小鼠生存率下降;体重下降;血液及肝脏、脾脏和肾脏均有细菌定植,定植量在感染后第3天达到高峰;心、肝、肺和肾等主要脏器中有较明显的细胞坏死和炎性细胞浸润。结论小鼠模型的建立,将为进一步研究 MRSA疫苗的有效性和安全性评价等提供可靠的技术手段。     

副溶血弧菌毒力评价小鼠模型的建立与应用

目的建立用于评价副溶血弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法将适宜浓度的菌液经腹腔感染4～5周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠的症状及死亡数。结果高盐(2%NaCl)条件下培养的强毒株RIMD2210633,经腹腔感染10⁷CFU 的菌量,小鼠存活率为20%～30%,而环境无毒株S251的小鼠存活率为100%。结论建立了评价副溶血弧菌毒力的实验小鼠模型,并应用于不同盐分浓度培养的强毒株与环境无毒株的毒力比较实验。     

BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型的建立

目的 建立近交系BALB/c小鼠子宫内膜异位症痛经模型。方法 采用自体移植法将小鼠自体子宫组织块移植到腹膜,复制子宫内膜异位症模型,将术后的小鼠随机分为4组,手术+雌激素+缩宫素组、手术+雌激素组、手术+缩宫素组、手术组,并设假手术组和雌激素+缩宫素组,术后1～12 d采用不同方案诱发小鼠扭体反应,记录扭体潜伏期及扭体次数,并取异位灶行HE染色和病理组织学观察,筛选建立内异症痛经模型的最佳方案。结果 除假手术组、雌激素+缩宫素组外,各组小鼠移植物均生长良好,镜下可见子宫内膜腺体及间质细胞,证实内异症造模成功,与手术+缩宫素组、手术组相比,手术+雌激素+缩宫素组、手术+雌激素组移植物体积明显增大,差异有显著性（P<0.01）;手术+雌激素+缩宫素组扭体发生率100%,雌激素+缩宫素组扭体发生率80%,手术+缩宫素组扭体发生率50%,其余组未出现扭体反应,组间差异有显著性（P<0.01）;与手术+缩宫素组、雌激素+缩宫素组相比,手术+雌激素+缩宫素组扭体潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）,扭体次数明显增多（P<0.01,P<0.05）,差异有显著性。结论 手术+雌激素+缩宫素组为建立内异症痛经模型的最佳方案,方法简单易行,可用于内异症痛经发病机制及药物治疗研究。     

气雾攻击法感染结核病小鼠模型的建立及其综合评价

目的模拟自然感染方式建立结核病小鼠模型,并对其病理变化进行综合评价。方法通过气雾攻击方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至C57BL/6J小鼠体内。在感染后的4周、6周、8周对小鼠进行micro-CT活体动态扫描,无菌分离肺脏和脾脏,肉眼观察病变情况,活菌菌落计数,组织病理检测(HE和抗酸染色)。结果肉眼观察和micro-CT扫描发现,不同时间小鼠肺部感染情况逐渐加重,至感染后第8周时病变弥漫至整个肺部;HE染色肺组织出现弥漫性肉芽肿样实变;抗酸染色可见结核分枝杆菌。结论通过大体病变、病理、影像、菌落计数几个方面对建立的小鼠模型进行综合分析,证明利用气雾攻击法感染的结核病小鼠模型建立成功;该模型在形成病变时与结核患者的情况存在一定差异,对其完善的综合评价有助于在相关研究中对该小鼠模型的合理应用。     

小鼠左肺原位移植模型的建立

目的：通过显微外科技术建立小鼠原位肺移植模型,为肺移植研究提供动物模型。方法：采用C57BL/6小鼠作为供、受体,行同基因小鼠原位左肺移植,使用Cuff套管法进行气管及血管吻合。术后7天、14天、21天、28天取移植肺及原肺,行HE染色,评价肺移植后效果。结果：学习曲线后, 共30例小鼠移植,手术成功率89%, 小鼠成活率100%。供体手术时间：35.2?.81min,受体手术时间：24.6?.42min,冷缺血时间是：46.6?.92min,热缺血时间是：17.2?.08min。同基因移植物大体及病理无明显改变,病理显示与原肺无差别。结论：本技术能够方便快捷建立小鼠肺移植模型,成功率高,可重复性强,符合原位肺移植临床生理,是研究肺移植发病机制和治疗的良好动物模型。     

II型糖尿病并发结核病小鼠模型的建立及评价

目的 建立II型糖尿病并发结核病小鼠模型,对其肺组织病变过程进行评价。方法 高脂高糖饲料喂养C57BL/6J小鼠,腹腔注射STZ,建立II型糖尿病小鼠模型。采用滴鼻的方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至糖尿病小鼠体内,建立糖尿病并发结核病小鼠模型。分别于感染后的1-8周、10周及12周解剖小鼠,肉眼观察小鼠肺脏病变情况,活菌菌落计数,肺组织行HE及抗酸染色,镜下观察病理学改变。结果 肉眼观察发现,随着感染时间的增长肺部感染情况逐渐加重,至第8周时病灶达到全肺的80%,第10周时病变范围开始缩小;感染8周后HE染色肺组织出现典型的肉芽肿结构,至第10周部分病变肺组织出现修复现象;抗酸染色可见结核分枝杆菌。结论 从大体病变、菌落计数及病理改变等方面对小鼠模型进行评价,发现糖尿病并发结核病小鼠模型较单一的结核病小鼠模型具有发病早,病程进展快等特点,与临床患者表现类似,因此实验构建的糖尿病并发结核病小鼠模型基本成功。     

中重度脓毒症长期生存大鼠模型的建立

目的建立中重度脓毒症长期生存大鼠模型,观察脓毒症自然转归的过程,为研究脓毒症提供新思路和方法。方法将40只SD大鼠分为对照组(sham组,8只)与盲肠结扎穿孔术组(cecal ligation and puncture,CLP组,32只),所有操作均在小动物麻醉机,七氟烷吸入麻醉下完成。所有大鼠在其右颈部建立动静脉通路。术后恢复24 h后,CLP组大鼠通过盲肠结扎穿孔术致脓毒症。手术完毕后将大鼠转移到恢复室(室内温度22~25℃),单笼饲养。术后静脉补液按1∶1比例分别给予6%HEAS和5%葡萄糖注射液,第1、2天补液量为20 m L/kg/12 h,之后液体减半直至大鼠开始饮食。根据大鼠生存情况CLP组大鼠自然分为生存组(survival组)和死亡组(dead组)。观察术后大鼠至30 d,记录大鼠的症状表现、体重变化、IL-10血浆浓度的变化,并解剖观察腹腔内脏器改变。结果 (1)CLP组术后24 h内生存率为75%,72 h内生存率为62.5%,7 d内生存率为50%。(2)根据脓毒症严重程度评估系统,32只CLP组大鼠在术后24 h均达到中重度脓毒症程度。(3)手术后,survival组与sham组体重均有下降。survival组大鼠从第4天开始体重下降明显(P=0.017)。survival组大鼠在术后第6天体重下降至最低,较原体重下降(8.51±2.23)%;sham组则在术后第4天体重最低,较原体重下降(2.73±1.82)%,两组差异具有统计学意义(P=0.026)。两组大鼠在术后第30天时,体重的最大升高率(sham组(16.16±2.39)%与survival组(13.03±3.74)%比无明显差异(P=0.29)。(4)术后1 d与术前(0 d)相比,三组IL-10血浆浓度均有升高,survival组(P=0.000)和dead组升高明显(P=0.010)。(5)腹部解剖见:dead组大量恶臭血性腹水,结扎肠管紫黑,无包裹,无粘连。survival组腹腔广泛粘连,大网膜失去原有形态及光泽,趋向结扎肠管,但无脓肿包裹。sham组解剖未见异常。survival组大鼠脾脏占体重的(2.64±0.37)‰,sham组大鼠脾脏占体重的比例为(1.63±0.20)‰,两者差异具有统计学意义(P=0.032)。结论本实验为建立CLP中重度脓毒症长期生存者模型提供可靠的控制CLP的措施和筛选模型的方法,使其基本符合脓毒症的发生发展规律。     

饮酒小鼠动物模型建立及其对雌性激素的影响

目的建立模拟人类饮酒的小鼠动物模型,并以此动物模型进一步研究酒精对小鼠雌激素水平及乳腺癌的影响。方法SPF级C57BL/6雌性小鼠,随机分对照组和酒精组两组,酒精组20:00到次日8:00给予含有一定浓度酒精的饮用水,其他时间给予常规饮用水,对照组全天给予常规饮用水。观察两组小鼠的饮水量及体重变化;用ANALOX AM1酒精分析仪检测小鼠凌晨2∶00和8∶00血液的酒精浓度(BEC);酶联免疫法(ELASA)检测两组小鼠血清中雌激素水平的差异。结果饮酒组小鼠血液BEC明显增高,类似人类饮酒水平,饮酒组小鼠的饮水量及体重无明显变化;饮酒组小鼠体内雌激素的水平明显高于对照组。结论成功的建立模拟人类饮酒的动物模型,并通过此动物模型初步证实酒精刺激可以增加小鼠体内血清雌激素的水平。     

幽门螺杆菌感染小鼠慢性胃炎模型的建立及评价

目的建立幽门螺杆菌(H.pylori)感染动物模型,评价H.pylori相关慢性胃炎胃黏膜病理变化。方法灌胃H.pylori SS1菌株建立在体感染,感染后第2周后采用快速尿素酶法和PCR法检测感染成功率;确认感染成功后再分别继续饲养至6周和12周,建立H.pylori相关慢性胃炎动物模型。实验结束后,取胃腺体组织别进行HE和硼酸美兰染色,分析胃炎程度及H.pylori感染程度;生化法检测胃组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialdehyde,MDA)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量变化;RT-q PCR法检测胃组织中COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达的变化。结果与正常组相比,模型6周和12周组胃组织内可见H.pylori定植,并且黏膜层有不同程度的慢性炎性细胞浸润,腺体萎缩和肠化生情况;同时组织中CAT和SOD的含量明显下降,MPO和MDA的水平和COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达均有显著上升(P0.05或P0.01)。结论通过灌胃给菌的方法可以成功将H.pylori定植于小鼠体内,并在定植的6周和12周后均可引起慢性炎性细胞的浸润,并使增强胃腺体组织内氧化应激水平和促炎基因的表达,但12周模型感染程度更深,出现腺体萎缩和肠化生的情况。