电磁脉冲对海马神经元的损伤及其对[Ca2+]i的影响

背景:电磁脉冲照射可影响实验大鼠的学习记忆功能,并造成大鼠海马组织损伤和超微结构改变。目的:观察电磁脉冲对离体培养的海马神经元的损伤效应及其对[Ca2 ]i的影响,以深入分析电磁脉冲致脑损伤的可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院病理教研室。材料:Wistar乳鼠若干只,雌雄各半。电磁脉冲辐射源:高场强电磁脉冲模拟源。方法:实验于2004-03/12分别在军事医学科学院和承德医学院完成。Wistar乳鼠若干只,麻醉下断头取脑,分离海马组织,调整细胞悬液浓度至5×108L-1接种。分组:①培养细胞分为对照组和照射组,于照射后即刻(0h)收集细胞进行形态学观察和胞内游离钙离子浓度测定;②另培养细胞分为对照组和照射后0h组和12h组,进行细胞凋亡和坏死率的测定。(培养细胞用量:每项检查每组1个培养瓶,重复3次。)电磁脉冲辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20ns,脉宽为30μs,频率为2.5脉冲/min,作用2min。原代培养的海马神经元经电磁脉冲辐射后,倒置相差显微镜下观察照射前后神经元形态学变化;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:神经元形态学变化;细胞凋亡率和坏死率;胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。结果:①电磁脉冲辐射后即刻,神经细胞逐渐发生液化,神经元突起回缩、变性。②电磁脉冲辐射后12h凋亡率较辐射后即刻有所恢复,但与对照组相比均显著增加[(59.27±1.27)%,(72.17±6.21)%,(17.45±5.63)%,P<0.05]。③在辐射后即刻和12h坏死率比对照组升高,但差异无统计学意义[(13.71±2.31)%,(11.96±1.04)%,(8.45±0.67)%,P>0.05]。④电磁脉冲辐射后即刻[Ca2 ]i荧光强度显著高于对照组(107.34±26.14,54.93±16.08,P<0.05)。结论:电磁脉冲致海马神经元形态学损伤、坏死与凋亡率增加,神经元内的Ca2 荧光强度明显增加。     

电磁脉冲对海马神经元的损伤效应及其对［Ca2+］i的影响

目的观察电磁脉冲(EMP)对海马神经元的损伤效应及其对[Ca2+]i的影响,以深入探讨EMP致脑损伤的机制. 方法 EMP辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20 ns,脉宽为30 μs,频率为2.5脉冲/min,作用2 min.原代培养的海马神经元经EMP辐射后,采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度,即[Ca2+]i. 结果细胞被EMP辐射后0～6 h活力明显下降(P<0.05),12 h开始回升,24 h基本接近正常水平;EMP辐射后0～12 h细胞凋亡率显著升高,坏死也有增加;EMP辐射后即刻引起神经元内的Ca2+荧光强度明显增加. 结论 EMP致海马神经元活力下降、凋亡增加、胞内钙超载.     

纳洛酮对神经元GluR2表达的影响及缺氧损伤保护作用

目的：研究纳洛酮对缺氧损伤神经元膜表面AMPA（amino-3-hyoroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid，α-氨基-3-羟基-5甲基-4-异噁唑丙酸）受体在谷氨酸受体第二亚单位（GluR2，glutamic acid receptor 2）表达的影响及其对神经细胞凋亡的保护作用。方法：取体外培养12d的大鼠海马神经元，建立缺氧再灌注损伤模型，分别采用流式细胞和双重免疫荧光技术定量观察神经元凋亡数量、胞膜表面GluR2含量变化及纳洛酮的调节作用。结果：纳洛酮可上调缺氧损伤后神经元膜GluR2的含量（P〈0.05），减少缺氧诱导的神经元凋亡的数量（P〈0.01）。结论：纳洛酮通过上调神经元膜表面GluR2含量，减少神经元凋亡，减轻继发性脑损害。     

人参皂苷 Rb1对谷氨酸导致海马神经元损伤的保护作用

目的在体外研究人参皂苷Rb1（ GRb1）对谷氨酸漏出所导致海马神经元损伤的保护作用,并探讨可能的作用机制。方法培养至10 d的海马神经元分为谷氨酸损伤组和GRb1治疗组,以MTT法测定细胞存活率,以Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）测定细胞氧化损伤程度。结果与正常对照组比较,谷氨酸（1.25、2.5、5、10μmol/L ）作用2 h后细胞活力下降,分别为（93.9±2.1）％、（82.3±1.4）％、（51.2±1.2）％、（32.7±1.3）％。其中谷氨酸5μmol/L作用2 h后存活（51.2±1.2）％的细胞（与对照组比较,P＜0.01）,接近对照组的50％。与对照组相比,给予5μmol/L谷氨酸作用2 h后,谷氨酸组脂质过氧化产物MDA水平上升[（7.52±0.11）nmol/mg pro vs．（3.93±0.36）nmol/mg pro];抗氧化的SOD活性明显下降[（37.28±1.72）NU/mg pro vs．（55.39±1.73）NU/mg pro]。同时观察到大量的凋亡细胞出现[（34.5±1.8）％,与对照组比较,P＜0.01]。而与谷氨酸组（5μmol/L,2 h）相比, GRb1（1、10、100、200μmol/L）能够明显提高细胞存活率,分别是（64.9±1.7）％、（72.3±2.2）％、（70.4±3.2）％、（71.6±2.3）％,P＜0.01,GRb11、10、100μmol/L组可以观察到MDA水平的轻度下降,但与谷氨酸组比较没有统计学差异,GRb110、100μmol/L可以提高SOD活性（ P＜0.01）,GRb11μmol/L组未观察到该效应。给予GRb11、10、100μmol/L 干预后细胞凋亡率下降,分别为（27.3±1.7）％、（19.4±1.2）％、（23.5±1.9）％,P＜0.01。结论 GRb1具有良好的神经保护作用,其保护作用与抗氧化及抗凋亡有关。     

枸杞糖肽对缺氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的：研究低氧心肌细胞内游离钙([Ca^2+]i)浓度的变化，枸杞糖肽减轻缺氧诱导的心肌细胞钙超载以及对缺氧心肌的保护作用。方法：实验选用出生两三天的SD乳大鼠80只进行心肌细胞培养，建立心肌缺血模型，实验分3组：对照组；缺氧组：细胞缺氧6h；枸杞糖肽组：先加入终浓度为50mg／L的枸杞多糖，再行缺氧6h。以Fluo／AM荧光指示剂负载，通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou-3／AM荧光指示剂标记技术，观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。结果：心肌细胞经缺氧处理6h后，细胞之间相互连接减少，大部分细胞肿胀，折光性减弱，部分细胞甚至呈圆形，少部分细胞胞膜破裂，提示心肌细胞损伤。枸杞糖肽处理组心肌细胞经缺氧后，可见部分细胞肿胀，内有颗粒，折光性减弱，但较缺氧模型组有一定的改善作用。心肌细胞Fluo-3／AM负载后在激光共聚焦显微镜下观察，细胞的分布和外形与倒置显微镜下所见相符，呈不规则棱形、多角形、星形细胞，轮廓清晰，成群的细胞出现自发性，同步性、有节律的搏动。经Flu3-AM标记后，细胞出现规律性闪烁。对照组心肌细胞[Ca^2+]i荧光强度和吸光度(A值)较低，缺氧6h荧光强度明显增加(P&;lt;0．05)；枸杞糖肽组心肌细胞[Ca^2+]i荧光密度(62．86&;#177;28．71)低于缺氧组(156．76&;#177;55．39)(P&;lt;0．01)。结论：低氧导致心肌细胞钙超载，而枸杞糖肽能减轻钙超载。     

类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞分化的影响及其可能机制

目的：研究类缺血损伤的皮质神经元对外源性神经干细胞分化的影响作用，并初步探讨其中可能的机制。方法：2002-09／2003-03在解放军第四军医大学西京医院神经内科实验室和解放军第四军医大学全军神经生物研究所进行。类缺血处理后的小鼠皮质神经细胞与同种异体神经干细胞共培养，通过特异性细胞染色、计数的方法观察神经干细胞分化情况。结果：与缺血处理后的皮质神经细胞共培养的神经干细胞在共培养6～8d后，其分化趋势以及其向神经元分化的趋向均有增强(P&;lt;0．05)。结论：类缺血处理后的皮质神经元对外源性神经干细胞的分化有促进作用，并能促进其向神经元分化。     

钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋内流的作用机制

【目的】探讨钙调蛋白在介导大鼠结肠平滑肌细胞中Ca^2＋内流的作用机制。【方法】将酶解分离好的大鼠结肠平滑肌细胞,随机分为以下4组：①对照组;②EGTA组;③EGTA＋Veraparmil组;④EGTA＋W7组。荧光探针Fura-2／AM标记细胞内游离Ca^2＋,荧光分光光度计检测大鼠结肠平滑肌细胞Ca^2＋浓度。【结果】在无Ca^2＋缓冲液中加入EGTA（1mmol／L）使Ca^2＋浓度由静息时（82．24±3．65）nmol／L升高至（267．45±4．86）nmol／L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca^2＋（1．5mmol／L和3．0mmol／L）,导致Ca^2＋浓度进一步升高,分别为（470．23±4．21）hmol／L、（945．32±3．56）nmol／L．上述升高效应对L型电压操纵性钙通道阻滞剂维拉帕米（verapamil,5μmol／L）不敏感（P〉0．05）,但钙调蛋白抑制剂W7对上述升高效应有抑制作用（P〈0．01）。【结论】钙调蛋白参与大鼠结肠平滑肌细胞的钙内流。钙调蛋白抑制剂W7能抑制由EGTA引起的细胞钙内流。这对于进一步深入研究钙通道活性改变,为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病具有重要意义。     

旋转磁场作用对大鼠骨钙代谢的影响

背景：已有研究证明旋转磁场干预能使大鼠骨密度显著增加，并且能维持相当长的一段时间而不下降，且与性激素无关。目的：研究旋转磁场对大鼠骨钙含量的影响，以及与血清骨碱性磷酸酶(bone—specific alkaline phosphatase，BAP)和尿脱氧吡啶交联(deoxypyridinoline crosslinks，DPD)的相关性。设计：以实验动物为对象的随机对照实验。单位：一所大学生命科学院。材料：实验于2004—03／10在深圳市微生物基因工程重点实验室完成。健康成年SD大鼠90只，雌性60只，体质量(259&;#177;70)g．雄性30只，体质量(351&;#177;104)g。按雌雄随机分9组，雌性假手术组、去卵巢常钙对照组、去卵巢低钙对照组，去卵巢低钙实验组、去卵巢常钙实验组、去卵巢低钙中药实验组、雄性对照组、雄性低钙实验组、雄性常钙实验组。每组10只。干预：雌性大鼠除假手术组以外均切除卵巢，去卵巢对照组单纯去卵巢，去卵巢实验组手术15d体内残存雌激素代谢尽后，开始旋转磁场处理15d，1次／d，2h／次。雄性大鼠除对照组外均行磁场处理15d，1次／d，2h／次。分别给予常钙(含钙0．26％的食物)、低钙(含钙0．1％的食物)和辅以中药(补骨脂、黄芪、淫羊藿、肉苁蓉免煎粉剂等)饲料饲养。旋转磁场处理后，继续饲养15d，处死后取其股骨测量各组大鼠骨钙含量，取血清测量BAP含量，取尿液测DPD含量。主要观察指标：各组大鼠骨钙含量及血清BAP和DPD变化。结果：纳入90只大鼠，实验过程中死亡4只，进入结果分析86只。①经旋转磁场处理后大鼠骨钙含量增高：去卵巢低钙中药实验组及去卵巢低钙对照组分别为(0．226&;#177;0．015)，(0．206&;#177;0．015)g／g，两组比较t=4．63，P&;lt;0．05；雄性常钙实验组及雄性对照组分别为(0．206&;#177;0．031)，(0．199&;#177;0．014)g／g，两组比较t=4．21，P&;lt;0．05。②经旋转磁场处理后大鼠血中BAP含量增高：去卵巢常钙实验组及去卵巢常钙对照组分别为(20．52&;#177;1．78)，(15．68&;#177;3．68)U／L，两组比较t=4．76，P&;lt;0．05；雄性低钙实验组及雄性对照组分别为(17．69&;#177;3．78)，(8．53&;#177;2．54)U／L，两组比较t=4．59，P&;lt;0．05。③经旋转磁场处理后实验组大鼠尿中DPD下降：去卵巢低钙中药实验组及去卵巢低钙对照组分别为(86．97&;#177;37．19)，(401．57&;#177;79．34)nmol／L，两组比较t=7．45，P&;lt;0．01；雄性常钙实验组及雄性对照组分别为(97．87&;#177;31．97)，(168．71&;#177;53．19)nmol／L，两组比较t=8．31，P&;lt;0．01。结论：磁场能够在短时间内(15d)有效的促进大鼠的骨钙含量增加，且增加与血BAP升高及尿DPD下降成正相关。     

微波辐射对大鼠海马神经元的损伤效应及其机制研究

目的 观察微波辐射对海马神经元的损伤效应及其对细胞膜和[Ca^2＋]的影响，以探讨微波致海马损伤的机制。方法 采用10mW／cm^2微波辐射源辐射原代培养的海马神经元，采用MTT法测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率；Fluo232AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度；原子力显微镜观察细胞膜的改变。结果 辐射后6h，海马神经元生长活力下降（P〈0．01）；辐射后1d，细胞凋亡和坏死率增加（P〈0．01）；辐射后即刻，神经元内[Ca^2＋]荧光强度增加（P〈0．01），细胞膜穿孔。结论 微波辐射后海马神经元生长活力下降，凋亡和坏死率增加；神经元膜穿孔及胞内[Ca^2＋]增加是其损伤重要机制。     

中度低温体外循环后大鼠海马mcl-2和bax的表达与神经元凋亡

背景：海马损伤被广泛认为与神经认知功能障碍有关，大鼠体外循环模型的建立使关于体外循环相关的海马损伤的研究得以进行。目的：旨在研究中度低温、血液稀释体外循环对大鼠海马bcl-2和bax基因表达及神经元凋亡的影响。设计：以实验动物为研究对象，完全随机分组设计，探索性研究。单位：一所大学医院麻醉科。材料：实验选用30只雄性SD大鼠，随机将大鼠分为体外循环组和假体外循环组，每组各15只。方法：体外循环组大鼠经历60min中度低温非搏动性体外循环通过使用蠕动泵和膜式氧合器，体外循环预充用20mL 1:1晶胶液；另外15只假体外循环组大鼠除不进行体外循环外其他操作与体外循环组完全相同。每组中6只大鼠在手术后1h断头取海马+匀浆，采用逆转录聚链酶反应方法测定bcl-2和bax mRNA表达，表达强度以bcl-2或bax聚合酶链反应产物密度与看家基因β-actin比值来表示。每组中6只在手术后6h处死，采用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达，脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法染色法测定神经元凋亡，蛋白表达强度以阳性面积占整个测量面积百分比表示。每组中其余3只在手术后6h采用电子显微镜观察海马神经元超微结构变化。主要观察指标：①两组大鼠海马bcl-2和bax基因表达、蛋白Bcl-2和Bax表达。②两组大鼠海马脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法法神经元凋亡以及神经元电镜超微结构改变。结果：手术后1h，体外循环组大鼠海马bcl-2和bax mRNA表达，bax与bcl-2 mRNA表达比值明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。手术后6h，体外循环组大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。TUNEL染色显示，术后6h，体外循环组海马CA1区神经元凋亡(染色阳性面积占整个测量面积的百分比)明显高于假体外循环组，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。电子显微镜超微结构显示，体外循环后6h，体外循环组海马神经元超微结构出现明显异常，如部分线粒体中度或重度肿胀、空泡变性、嵴减少或消失。一些神经元出现典型的凋亡早期形态学变化，如神经元固缩、核不规则有切迹、染色体浓缩及核仁边集等。结论：中度低温、血液稀释体外循环可导致大鼠海马bax和bcl-2基因表达及神经元凋亡，这可能部分解释体外循环后神经认知功能障碍的机制。     

白藜芦醇对认知损伤老年小鼠海马凋亡相关蛋白的影响

目的：观察白藜芦醇对异氟醚吸入诱导的认知损伤老年小鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响。方法15月龄雄性C57BL/6小鼠24只随机分为4组（n＝6）：对照组（A组）、异氟醚组（B组）、白藜芦醇＋异氟醚组（C组）、白藜芦醇组（D组）。A和B组分别于连续7 d腹腔注射生理盐水后吸入氧气和1.5%异氟醚;C和D组分别于连续7 d腹腔注射白芦藜醇后吸入1.5%异氟醚和氧气。第8天进行条件恐惧性实验,行为学测试后取小鼠海马组织,检测caspase-3、Bax和Bcl蛋白水平。结果与A组相比,B组环境诱发僵直时间百分比下降（P＜0.05）;与B组相比,C组环境诱发僵直时间百分比升高（P＜0.05）;各组间声音诱发僵直时间百分比差异无统计学意义。与A组相比,B组小鼠海马中的caspase-3和Bax水平升高（P＜0.05）,Bcl水平下降（P＜0.05）;与B组相比,C组小鼠海马中的caspase-3和Bax水平下降（P＜0.05）,Bcl水平升高（P＜0.05）。结论白藜芦醇可能通过调节老年小鼠海马凋亡相关蛋白的表达,改善异氟醚吸入诱导的认知功能损伤。     

次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响

目的：探讨8Hz，90dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法：将48只雄性SD大鼠单纯随机分为6个组，即对照组、次声作用1，7，14，21，28d组，每组8只。采用急性细胞分离技术，通过流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡状况。结果：频率8Hz，声压级90dB次声分别作用2h／d后，次声暴露组与对照组比较，1d组未见海马细胞凋亡增高(P&;gt;0．05)，7d组可见海马细胞凋亡增高(F=42．18，P&;lt;0．01)，14d组明显升高(F=42．18，P&;lt;0．01)，21d组凋亡细胞较14d组明显减少(F=42．18，P&;lt;0．01)但仍高于对照组(F=42．18，P&;lt;0．05)，至28d组与对照组已差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：次声8Hz，90dB作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量有不同程度增高；随作用时间延长，海马细胞对次声作用产生适应性。8Hz，90dB次声作用对大鼠海马细胞具有一定的损伤效应。     

热休克蛋白27对人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：观察热休克预处理诱导的热休克蛋白27对晶状体上皮细胞的保护作用。 方法：实验于2004—01／12在中国医科大学卫生部小儿先天畸形重点实验室完成。体外培养人晶状体上皮细胞系HLB—C3细胞，随机分为4组：①正常对照组。②氧化损伤组：细胞中加入200μmol／LH2O2作用6h。③热休克处理组：42℃预热30min后，37℃恢复2h，处理同氧化损伤组。④放线菌酮组：预热前30min加入放线菌酮（25mg／L），其余处理同热休克处理组。观察各组细胞存活率、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性；DNA ladder和Annexin V—FITC流式细胞仪检测晶状体上皮细胞凋亡率；免疫印迹法检测各组中热休克蛋白27和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 结果：①细胞活力：氧化损伤组低于正常对照组（0．24&;#177;0．02，0．28&;#177;0.04，P〈0．01），热休克处理组高于氧化损伤组（0．27&;#177;0．04，P〈0．05），放线菌酮组低于热休克处理组（0．23&;#177;0．01，P〈0．01）。②细胞凋亡率：氧化损伤组高于正常对照组[（15．69&;#177;1．54）％，（4．17&;#177;0．83）％，P〈0．01]；热休克处理组低于氧化损伤组[（8．34&;#177;1．19）％，P〈0．01]；放线菌酮组高于热休克处理组[（13．58&;#177;1．21）％，P〈0．01]。③超氧化物岐酶和过氧化氢酶活性：氧化损伤组低于正常对照组（P〈0．01），热休克处理组高于氧化损伤组（P〈0．05），放线菌酮组低于热休克处理组（P〈0．01）。④热休克蛋白27表达：正常对照组细胞中略有表达，氧化损伤组表达稍有增加，热休克处理组表达明显增多，放线菌酮组未见表达。⑤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达：正常对照组细胞表达较弱，氧化损伤组表达增多，热休克处理组的表达少于氧化损伤组。 结论：热休克预处理诱导的热休克蛋白27对氧化损伤的晶状体上皮细胞起着保护作用。其保护机制可能是：①对与晶状体抗氧化有关的酶防御系统的影响：②小分子热休克蛋白对抗细胞凋亡。     

维生素E对鼠海马神经元细胞的抗氧化损伤作用

目的 观察维生素E对老年痴呆(Alzheimer’s disease)的治疗作用，研究氧化损伤对鼠海马神经元细胞的损伤作用及维生素E对其氧化损伤的保护作用。方法 用氧化(H202)、维生素E处理后氧化的方法对鼠海马神经细胞(HT-22)进行分组处理。用二维电泳法、蛋白银染法及特殊氧化蛋白免疫染色法探测被氧化的蛋白。结果 氧化处理12h后出现细胞生存率明显下降31．19％；经维生素E处理后再氧化处理的细胞生存率几乎达到正常组水平。经H202氧化处理的鼠海马神经元细胞的氧化蛋白数目增加了，而维生素E提前处理过的那组没有增加。结论 维生素E对鼠神经元细胞的氧化损伤起保护作用，是有效的抗氧化治疗剂。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

背景：神经细胞的电活动以细胞膜离子通道的活动为基础。神经元异常放电是癫痫的基本特征，其基础是细胞膜离子通道的激活与离子的跨膜运动，然而马桑内酯致病机制中是否存在钙激活钾通道的激活还不清楚。目的：以大鼠海马锥体神经元为靶细胞，了解马桑内酯在其致痫机制中对神经元钙激活钾通道的作用。设计：非随机对照实验。单位：四川大学华西医院神经内科和泸州医学院心肌电教研室。材料：实验于2000—05／12在四川省泸州医学院完成。选择出生24h之内Wistar乳鼠100只。方法：Wistar乳鼠在麻醉状态下和无菌条件下分离出海马组织，以培养第7～10天，生长良好、形态典型的锥体神经元进行膜片钳试验。将培养皿随机分成9组：①正常对照组，19皿，加入DMEM培养基，给以不同的钳制电压，以后加入四乙基胺。②10^-8，10^-7，10^-6 mol／L钙浓度组；加入含不同浓度钙离子的DMEM培养基，以后加入四乙基胺，每一浓度8皿，共24皿；马桑内酯0，0．25．0．5,1．0，2．0mL／L致痫组，加入不同浓度含马桑内酯的DMEM培养基．以后加入四乙基胺。每一浓度26皿，共130皿。运用膜片钳制技术贴附式和内面向外式方法记录神经元单通道电活动，并分析通道活动的开放概率、平均开放时间、平均关闭时间、电流幅值等。主要观察指标：①观察并记录正常，不同钳制电压、不同钙离子浓度对锥体神经元钙激活钾通道的激活作用和四乙基胺的影响。②观察并记录致痫剂马桑内酯对锥体神经元细胞膜钙激活钾通道的激活作用及四乙基胺的影响。结果：①在钳制电压为0mV时，锥体神经元钙激活钾通道有少量的随机开放，具有明显的电压依赖性，通道电导值为（122．79&;#177;21．68）pS，可被钾通道阻断剂四乙基胺所阻断。②在内面向外式膜片下，钙激活钾通道表现出钙离子的浓度依赖性。当钙浓度为10^-8，10^-7，10^-6 mol／L时，平均开放概率分别为0．022&;#177;0．006，0．040&;#177;0．007，0．142&;#177;0．049（P〈0．01）。③在细胞贴附式膜片下，浴液中游离钙离子浓度10^-8mol／L，膜电位在20mV时，发现马桑内酯能明显增加钙激活钾通道的开放概率。④与马桑内酯0ml／L比较，马桑内酯1．0ml／L能增加钙激活钾通道平均开放时间（1．867&;#177;0．210,6．900&;#177;0．120，P〈0．01），减少平均关闭时间（78．505&;#177;7．192，6．233&;#177;0．854，P〈0．01）。结论：在马桑内酯诱导的癫痫发病中，钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响及其作用规律

目的：探讨8Hz，130dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法：将雄性SD大鼠48只随机分为6个组，即对照组、次声作用1，7，14，21，28d组，每组8只。采用急性细胞分离技术、荧光染色和流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡率。结果：频率8Hz，声压级130dB次声分别作用2h／d后，次声暴露组与对照组比较，1d组和7d组未见海马细胞凋亡率增高(P&;gt;0．05)，14d组海马细胞凋亡率显著升高(F=423．05，P&;lt;0．01)，21d组凋亡细胞稍有回落，但仍显著高于对照组(F=423．05，P&;lt;0．01)，至28d组与对照组差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：8Hz，130dB次声作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量显著增高；8Hz，130dB次声作用对大鼠海马细胞具有损伤效应。随作用时间延长，海马细胞对次声作用产生一定适应性。     

彩色多普勒超声对中孕期胎鼠心肌细胞凋亡的影响及其远期效应

目的：探讨彩色多普勒超声照射对中孕期胎鼠心肌细胞凋亡的影响及其远期效应，从而为彩色多普勒超声临床安全应用提供实验依据。方法：将24只孕14d SD大鼠按取材时间不同随机等分为胚胎组和幼仔组，再各自等分为照射30min组和对照组。胚胎组于照射后24h剖宫取胎鼠心肌标本，幼仔组于出生后10d取材。HE染色光镜观察组织细胞结构，TUNEL法检测凋亡细胞，激光共聚焦显微图像分析仪检测荧光强度，透射电镜观察超微结构的变化。结果：各组光镜下观察未见心肌组织细胞结构异常；TUNEL法检测结果，胚胎对照组心肌组织内可见散在凋亡细胞，幼仔各组心肌组织内凋亡细胞则更稀少；胚胎照射30min组凋亡细胞较易观察到，部分区域可见较密集的凋亡细胞。胚胎照射30min组[(0．48&;#177;0．42)IU]与胚胎对照组荧光强度[(4．08&;#177;0．54)IU]比较，差异有显著性意义(t=2．45，P&;lt;0．05)；幼仔照射30min组和幼仔对照组荧光强度差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。胚胎照射30min组心肌电镜检查发现染色质浓缩边集、线粒体、内质网肿胀等超微结构变化。结论：彩色多普勒超声照射30min以上可引起中孕胎鼠心肌细胞凋亡，但这种影响在幼仔期消失。     

MCMV感染对小鼠海马[Ca2+]i及线粒体膜电位的影响

目的:观察鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠海马细胞内游离Ca2+浓度(犤Ca2+犦i)及线粒体膜电位的影响。方法:将BALB/C乳鼠同母鼠随机分为实验对照组(24只)和病毒组(35只),感染后56d应用荧光分光光度计和流式细胞仪分别检测两组小鼠海马的犤Ca2+犦i及线粒体膜电位。结果:病毒感染组小鼠海马犤Ca2+犦i增高及线粒体膜电位明显下降,与实验对照组比较差异有显著性(P值均<0.01)。结论:巨细胞病毒感染所引起的小鼠海马犤Ca2+犦i及线粒体膜电位的改变可能是其导致神经系统功能紊乱的机制之一。     

神经节苷酯GM1对BCL-2及BDNF蛋白表达的调控在原代培养大鼠海马神经元放射性损伤防护中的意义

[目的]研究神经节苷酯GM1对原代培养大鼠海马神经元放射性损伤的保护作用及机制,为放射性脑损伤的预防提供理论依据及新的方法.[方法]30 Gy 的X射线单次照射培养至12d的海马神经元,用DAPI染核法检测海马神经元凋亡,用免疫组化法检测海马神经元BCL-2及BDNF蛋白表达情况.实验分组：0Gy组,单纯神经节苷酯GM1预处理组,30Gy组,30Gy＋神经节苷酯GM1预处理组.[结果]在照射后24 h,30Gy组核固缩百分数为（24.5±3.80）%,较0Gy组（2.00%±0.10%）有显著性差异（P〈0.01）;30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组核固缩百分数为（7.43±0.61）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.30Gy组海马神经元BCL-2表达阳性率为（32.89±2.82）%,较0Gy组[（93.42±2.70）%]有显著性差异（P〈0.01）,30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组海马神经元BCL-2表达阳性率为（77.43±0.69）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.30Gy组海马神经元BDNF表达阳性率为（88.18±3.50）%,较0Gy组[（24.28±2.96）%]有显著性差异（P〈0.01）,30Gy＋神经节苷酯GM1 100 ng/mL组海马神经元BDNF表达阳性率为（77.86±0.91）%,较30Gy组（P〈0.01）及0Gy组（P〈0.01）均有显著性差异.[结论]应用神经节苷酯GM1可以分别通过上调及下调X线照射后BCL-2及BDNF的表达而显著减少神经元的凋亡.     

黄芪皂苷Ⅳ对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨黄芪皂苷Ⅳ对大鼠缺血/再灌注损伤后海马神经元Bc l-2、Bax及神经元细胞凋亡表达的影响。方法实验动物随机分为假手术组、模型组、黄芪皂苷Ⅳ组、尼莫地平对照组。线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,免疫组织化学方法检测大鼠海马Bc l-2、Bax蛋白表达,TUNEL方法检测神经元细胞凋亡。结果与模型组和尼莫地平对照组比较,黄芪皂苷Ⅳ组Bax蛋白表达和细胞凋亡指数明显降低(P<0.05),Bc l-2蛋白表达及Bc l-2/Bax比值明显上调(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ能够促进海马神经元Bc l-2表达,抑制Bax表达,升高Bc1-2/Bax比值,降低细胞凋亡指数,这可能是其抑制脑缺血后神经元凋亡的机制之一。