足细胞分子分布和表达与足突形态变化和蛋白尿发生的关系

目的:探讨裂孔隔膜分子nephrin、podocin和足细胞骨架蛋白α-actinin及足突形态变化与蛋白尿发生的关系.方法:建立嘌呤霉素(PAN)大鼠肾病模型,用体视学方法检测足突形态改变;用免疫荧光染色、图像分析和实时定量PCR方法动态观察PAN注射后不同时间点各分子蛋白及mRNA表达量及分布变化.结果:蛋白尿出现前,PAN注射2 d时,足突肿胀、nephrin和podocin分布改变、podocin蛋白减低;5 d时,上述改变进一步加重、nephnn 蛋白及mRNA表达量下降.第10天尿蛋白显著升高[(130.8±30.7)mg/d,P=0.02],足突弥漫融合、nephrin和podocin分布明显异常、蛋白表达量显著减低、mRNA表达量回复至对照组水平.蛋白尿恢复时,足突形态学指标明显恢复、podocin蛋白水平回复至对照组水平、nephrin蛋白水平仍低于对照组、α-actinin蛋白水平显著增加伴分布异常.nephrin和podocin蛋白表达量与足突体积密度呈负相关(rnephrin=-0.78,P=0.000 1;rpodocin=-0.76,P=0.000 1).结论:足突肿胀、足细胞分子nephrin、podocin分布异常及podocin蛋白表达量减低发生在蛋白尿发生前,提示nephrin和podocin的分布及表达量变化和足突形态变化与蛋白尿的发生密切相关.     

锰苯甲酸卟啉在嘌呤霉素氨基核苷诱导的大鼠肾脏病模型中的作用

目的:探讨超氧化物歧化酶类似物锰苯甲酸卟啉(MnTBAP)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的大鼠肾脏病模型中的作用?方法:24只雄性SD大鼠按照每组8只随机分为正常对照组?模型组(一次性尾静脉注射150 mg/kg PAN建立PAN诱导的大鼠肾脏病模型)?MnTBAP治疗组[造模大鼠于造模当天开始腹腔注射MnTBAP 10 mg/(kg·d),共给药14 d]?收集大鼠24 h尿液,Bradford法检测24 h尿蛋白总量;应用透射电镜观察肾小球足细胞的超微结构;实时荧光定量PCR法在mRNA水平检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin的表达量;Western blot在蛋白质水平检测Nephrin和Podocin的表达量?结果:①与正常对照组相比,模型组大鼠的24 h尿蛋白总量明显升高(P < 0.01),肾脏指数升高(P < 0.01);MnTBAP治疗后大鼠24 h尿蛋白总量较模型组下降(P < 0.01),肾脏指数较模型组下降(P < 0.01);②透射电镜观察结果表明,模型组大鼠的肾小球足细胞足突出现广泛融合甚至消失,MnTBAP治疗后这种现象得以改善;③实时荧光定量PCR结果显示,模型组大鼠肾皮质Nephrin和Podocin的mRNA表达较正常对照组降低(P < 0.01),MnTBAP治疗组Nephrin和Podocin的mRNA表达较模型组增加(P < 0.01);④Western blot结果显示,模型组大鼠肾皮质Nephrin和Podocin蛋白的表达较正常对照组降低(P < 0.01),MnTBAP治疗组Nephrin和Podocin蛋白的表达较模型组增加(P < 0.01)?结论:MnTBAP可以降低PAN诱导的肾病大鼠的蛋白尿,并明显减轻足细胞损伤?     

促肝细胞生长素对微小病变型肾病大鼠整合素连接激酶表达的影响

目的 观察促肝细胞生长素(Hepatocyte Growth-promoting Factor,pHGF)对大鼠微小病变肾病(HCD)中整合素连接激酶(Intergrin Linked Kinase,ILK)表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、模型组、pHGF干预组各24只,一次性尾静脉注射阿霉素建立大鼠微小病变肾病模型,pHGF干预模型组于造模2周后腹腔注射pHGF30mg/kg,电镜观察大鼠肾小球足细胞形态学变化,免疫荧光观察各组大鼠在4周内肾小球足细胞中ILK表达情况.结果 ①电镜结果显示:模型组大鼠7天和14天足细胞广泛足突融合;pHGF干预模型组足细胞的足突变形、融合较模型组有所减轻;②与对照组相比,模型组大鼠肾小球ILK蛋白的表达7天减少,14天明显增加,差异有统计学意义(p<0.05);与模型组相比,pHGF干预模型组大鼠肾小球ILK蛋白的表达第21天出现减少,第28天达到最低值,差异有统计学意义(p<0.05);结论①ILK表达增加及分布异常,与足细胞病变密切相关,可能是判断肾小球足细胞损伤及导致蛋白尿原因的一个早期重要指标.②pHGF能抑制微小病变肾病大鼠肾小球ILK蛋白的表达,对MCD在肾脏结构及功能上既有保护作用又有治疗作用.     

嘌呤霉素氨基核苷肾病肾脏中RANK-RANKL的表达

目的探讨RANK-RANKL在嘌呤霉素氨基核苷肾病（PAN）大鼠动物模型肾脏中的表达。方法36只SD大鼠被分配为
PAN组及对照组,单次静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（PA,100 mg/kg）制作PAN动物模型。大鼠于第3、7、14天检测蛋白尿及血肌
酐。检测肾脏病理,并分析RANK和RANKL变化。结果（1）在PAN SD大鼠动物模型中,第3、7、14天时蛋白尿与对照组比较
有显著差别,第7天达到高峰;（2）用Western blotting及RT-PCR定量检测发现RANK-RANKL蛋白及mRNA在PAN模型组高
于对照组;（3）用激光共聚焦技术显示足细胞标记蛋白Synaptopodin与RANK完全重合,提示RANK主要在足细胞表达;（4）免
疫电镜发现RANK在PAN模型组明显增多,且主要定位于足突的顶部胞膜和胞质内。结论在PAN SD大鼠动物模型足细胞异
常表达RANK-RANKL,提示RANK及RANKL在足细胞损伤中可能发挥重要作用。     

SRT1720对实验性肾病大鼠足细胞的保护作用

目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)激活剂SRT1720对嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用?方法:雄性SD大鼠一次性腹腔注射150 mg/kg嘌呤霉素氨基核苷建立PAN肾病大鼠模型,设正常对照组?模型组?SRT1720治疗组[模型组大鼠给予SRT1720 100 mg/(kg?d)灌胃]?Bradford法检测大鼠的24 h尿蛋白总量;应用透射电镜观察足细胞超微结构;实时定量RT-PCR?Western blot 检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin及Podocin的表达?结果:①与正常对照组相比,PAN注射后第3天,模型组大鼠尿蛋白的排泄量开始增加(P < 0.01),至第7天达最高峰,尿蛋白总量达259.73 mg/24 h;SRT1720治疗组在治疗3 d后尿蛋白明显降低(P < 0.01),第7天则降到52.47 mg/24 h;②模型组大鼠血清白蛋白显著降低[(22.14 ± 3.05)g/L]而胆固醇则显著升高[(7.03 ± 1.64)mmol/L],SRT1720治疗后显著提高模型组大鼠血清白蛋白水平[(35.48 ± 3.96)g/L]并降低胆固醇水平[(2.81 ± 0.41)mmol/L];③透射电镜结果显示模型组大鼠肾小球足细胞足突广泛融合?消失,SRT1720治疗显著减轻足细胞足突的融合;④与正常对照组相比,模型组大鼠肾组织中Nephrin和Podocin核酸和蛋白表达均显著降低,SRT1720治疗组肾组织中Nephrin和Podocin表达显著上调,能够恢复到正常组的85%~90%?结论:SRT1720能够降低PAN大鼠蛋白尿,改善低蛋白血症和高胆固醇血症,并明显减轻足细胞损伤?     

坎地沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞保护作用的研究

目的 探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞超微结构及其相关分子nephrin表达的变化,以及坎地沙坦对其干预的影响,为DN的防治提供理论依据.方法 选择健康雄性SD大鼠36只,按随机数字表法分为A组(正常对照组)、B组(DN组)和C组(DN+坎地沙坦组),每组12只.B、C组尾静脉注射链脲佐菌素(30 mg·kg-1)制备DN大鼠模型,于DN模型成模1周后将3组大鼠分别在代谢笼中喂养,C组给予坎地沙坦5 mg·kg-1·d-1灌胃,A组及B组给予等量生理盐水灌胃.用药后第4周和第7周检测各组大鼠的血糖、体质量、24 h尿蛋白和内生肌酐清除率(Ccr),于第7周取肾组织行光学显微镜及电子显微镜观察肾脏病理改变、RTPCR法检测nephrin-mRNA表达.结果 与A组比较:B组24 h尿蛋白排泄增多(P＜0.05),Ccr在7周时下降(P＜0.05);肾组织内nephrin-mRNA表达下调(P＜0.05);肾组织足细胞足突宽度增加并出现融合,肾小球基底膜增厚.与B组比较:C组24 h尿蛋白排泄量降低(P＜0.05),Ccr升高(P＜0.05);肾组织内nephrin-mRNA表达增加(P＜0.05),足细胞足突宽度及肾小球基底膜厚度变小.结论 DN时存在足细胞分子nephrin表达异常和超微结构改变,坎地沙坦对肾脏的保护作用机制可能是通过增加nephrin表达、改善足细胞超微结构而实现.     

Nehrin在微小病变型肾病大鼠模型中的表达

目的:观察nephrin在大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型(PAN)中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生中的作用。方法:通过建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组织化学技术和RT鄄PCR观察nephrin在不同时间点肾病模型大鼠蛋白水平和mRNA水平表达改变情况。结果:①PAN注射后第1天和第3天,大鼠24h尿蛋白的排泄量较对照组无显著差异;第10天达高峰,较对照组有显著差异(P<0.01);第20天,尿蛋白排泄量逐渐下降,较对照组仍有显著差异(P<0.05);②在PAN肾病模型第3和第10天,透射电镜显示足细胞足突融合;③nephrin蛋白和mRNA水平的表达在大鼠PAN肾病模型第1天即出现下降,第3天出现明显下降,第10天下降到最低点,第20天,随着蛋白尿的恢复nephrin的表达也逐渐恢复;④肾小球足细胞nephrin表达的变化与肾病模型大鼠24h尿蛋白定量的变化呈负相关。结论:①nephrin表达的改变与大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型蛋白尿的发生密切相关;②nephrin是判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。     

1,25(OH)_2D_3对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的 观察1,25(OH)2 D3 对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用并探讨可能的作用机制.方法 72只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、PNA组(PAN)和1,25(OH)2D3治疗组(T).一次性尾静脉注射PAN 100 mg/kg体重建立PAN肾病动物模型.于3、7、14、21d分批处死动物,分别检测不同时间点24 h尿蛋白和肾功能,PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT-PCR、免疫组化、western-blot分别检测nephrin,BMP-7,p-Smau1/5/8的表达.结果 (1)PAN大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、血肌酐均高于同期的NC组,且足细胞足突增宽融合;T组各时间段24 h尿蛋白和肾功能较PAN组显著降低(P＜0.05),肾脏病理改变减轻.(2)与NC组比PAN大鼠nephrin表达减少并由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团快状改变.T组大鼠nephrin的表达显著增强且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布.(3)PAN组BMP-7 mRNA和蛋白的表达以及p-Smaa1/5/8的表达均低于NC组;T组BMP-7 mRNA和蛋白的表达以及p-smad1/5/8的表达显著升高.结论 1,25(OH)2 D3能有效的抑制嘌呤霉素氨基核苷酸诱导的足细胞损伤,减少蛋白尿;1,25(OH)2D3对足细胞损伤的保护作用可能与调控BMP-7信号的活化有关.     

尿足细胞数量及podocalyxin蛋白与IgA肾病的相关性

目的 探讨尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达与IgA肾病发病、发展的相关性,探索IgA肾病的诊断、病情和预后评估提供的新指标.方法 采用间接免疫荧光法检测陕西省第四人民医院体检的健康人群和150例IgA肾病患者尿足细胞数量及podocalyxin蛋白表达水平,观察健康人群和IgA肾病患者尿足细胞数量差异和不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达水平差异,分析不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量和podocalyxin蛋白表达与肾小球滤过率、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮等临床指标的相关性.结果 健康人群组尿沉渣细胞涂片染色标本未见尿足细胞,而IgA肾病组尿沉渣细胞涂片染色标本尿足细胞数量为每20个高倍视野(12.54±2.89);不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者的尿足细胞数量、podocalyxin蛋白表达和24 h尿蛋白定量比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且不同肾脏病理Lee分级IgA肾病患者尿足细胞数量与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.835 3,P＜0.05),podocalyxin蛋白表达与24 h尿蛋白定量呈负相关(r =0.886 8,P＜0.05).结论 尿足细胞数量、podocalyxin蛋白表达与IgA肾病的发病、发展密切相关.     

替米沙坦对高血压大鼠肾脏保护作用和足细胞Podocalyxin表达的影响

目的:研究替米沙坦对醋酸去氧皮质酮(DOCA)高血压大鼠肾脏保护作用和足细胞Podocalyxin蛋白表达的影响。方法:18只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、高血压组(B组)和替米沙坦治疗组(C组)。单肾切除后皮下注射DOCA(5 mg/只,2次/周)和饮用盐水(1%Nacl+0.2%KCl)建立高血压模型。C组用替米沙坦[5mg/(kg.d)]灌胃。测定第4、8周尿蛋白。8周后处死动物,测血肌酐(SCr)、血钠、血钾,取肾组织PAS染色观察病理变化,免疫组化法检测肾脏podocalyxin表达变化。结果:B组4周始血压和尿蛋白较A组逐渐升高(P<0.05)。B组肾小球硬化指数和间质纤维化指数均明显高于A组(P<0.05),podocalyxin蛋白表达较A组降低。C组血压、尿蛋白和病理损伤较B组减轻,podocalyxin表达显著高于B组(P<0.05)。结论:替米沙坦通过上调足细胞podocalyxin表达,减轻DOCA高血压大鼠肾损伤。     

CD2AP在大鼠肾病模型中的表达及意义

目的：观察CD2-associated protein(CD2AP)在大鼠氨基核苷肾病模型。肾小球中的表达变化及其意义。方法：通过建立大鼠氨基核苷肾病模型，采用免疫组织化学技术观察CD2AP在不同时间点。肾病模型大鼠。肾小球中的表达和分布变化。结果：①。肾小球足细胞CD2AP的表达在。肾病模型建立的早期即有下调；在大鼠肾病模型蛋白尿的高峰期，CD2AP的表达明显下降；在肾病模型大鼠的疾病恢复期，CD2AP的表达逐步恢复正常；②肾小球足细胞CD2AP表达量的变化与肾病模型大鼠24h尿蛋白定量的变化存在着负相关。结论：①CD2AP是判断。肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标；②CD2AP在足细胞中表达量的改变可能是肾小球滤过屏障功能异常的病理生理基础。     

雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷（PAN）肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体（VEGFR）表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组（单次尾静脉注射PAN造模,n=8）、雷帕霉素干预组（单次尾静脉注射PAN造模＋雷帕霉素干预,n=8）和对照组（单次尾静脉注射PBS,n=8）.各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组〉雷帕霉素干预组〉对照组,组间差异均有统计学意义（P〈0.05）.电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组〉雷帕霉素干预组〉对照组（P〈0.05）,且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关（P〈0.05）.结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体(VEGFR)表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组(单次尾静脉注射PAN造模,n=8)、雷帕霉素干预组(单次尾静脉注射PAN造模+雷帕霉素干预,n=8)和对照组(单次尾静脉注射PBS,n=8).各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组(P<0.05),且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(P<0.05).结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

Rac1及Cdc42在肾上腺髓质肽(AM)缓解嘌呤霉素氨基核苷(PAN)所诱导足细胞损伤中作用机制的初步探讨

目的 观察肾上腺髓质肽（adrenomedullin,AM）对嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）所诱导受损足细胞的作用以及Rac1/Cdc42表达变化,初步探讨其可能机制。方法 将小鼠肾足细胞株分为对照组、PAN处理组（100 μg/mL）、PAN联合AM处理组（10^-7 mol/L）及PAN联合AM和蛋白激酶A（PKA）抑制剂H89（10^-6 mol/L）处理组。经一次性腹腔注射PAN（150 mg/kg）建立大鼠足细胞损伤模型,每天经尾静脉注射AM蛋白（66 μg/kg）进行干预。SDS-PAGE法检测尿蛋白水平,电镜观察足细胞足突宽度变化,双重免疫荧光染色及/或Western blot观察足细胞特异性骨架蛋白（synaptopodin、nephrin）、Rac1及Cdc42的蛋白表达水平,实时定量PCR（qRT-PCR）检测synaptopodin、nephrin的mRNA表达,谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验（GST-pull down assay）法检测Rac1及Cdc42活性变化。结果 PAN在体内、外均显著降低synaptopodin、nephrin的蛋白或/及mRNA表达水平,且显著升高desmin表达;大鼠PAN肾病模型的尿蛋白水平显著升高,足突宽度显著增加;PAN显著降低Rac1、Cdc42总蛋白及活性水平。上述由PAN所介导的效应被AM显著抑制;H89显著阻断AM的体外作用。结论 AM主要通过PKA通路促进受损足细胞的修复,该保护机制与AM调控Rac1/Cdc42表达密切相关。     

单次静脉注射嘌呤霉素氨基核苷所致大鼠肾病模型的优化及评价

目的明确大鼠嘌呤霉素氨基核苷(puromycinaminonucleoside,PAN)肾病模型的适宜条件和病程演变,为该模型更好地用于肾病综合征、肾硬化发病机制及治疗的研究奠定基础。方法用6周龄雄性Wistar大鼠,一次性颈静脉注射PAN,分别以2、3、4、5、7、9mg/100g体重的剂量给药,以等量生理盐水作对照,测定2周内不同时间点的尿蛋白排泄量;另以9mg/100g体重的剂量给药,观察28周内尿蛋白、血清胆固醇和三酰甘油的变化及肾组织的病理改变。结果各个剂量的PAN均可引起不同程度的蛋白尿,约在10~14d达到高峰,最高达(592.0±61.0)mg/24h。28周连续观察的结果显示,PAN组动物的尿蛋白呈现典型的双相曲线,即第2周达到高峰,伴有血清胆固醇及三酰甘油的升高,此后逐渐降至接近正常,但自第12周起尿蛋白再度逐渐上升,第28周可达急性期峰值的一半。结论6周龄雄性Wistar大鼠,一次性颈静脉注射适量PAN可建立不同程度的肾病模型,成功率极高,方法简单,用药量省,动物价廉易得,且急性期发病快而周期短,不失为研究人类相应疾病的良好模型。     

嘌呤霉素致足细胞损伤细胞模型的建立

目的:建立小鼠足细胞损伤的细胞模型,为进一步从细胞、分子水平研究足细胞的牛物学作用,以及足细胞特别是裂孔隔膜(slit diaphragm)分子在蛋白尿发生、发展中的分子机制提供稳定、可靠的足细胞损伤模型.方法:应用不同浓度的嘌呤霉素(15 ms/L、45 ms/L和75 ms/L)作用于足细胞,通过流式细胞仪检测作用24 h和48 h后足细胞的凋亡情况,以确定嘌呤霉索的作用浓度和时间,建立足细胞损伤的细胞模型;并以噻唑蓝(MTT)检测足细胞损伤后的活力,应用免疫荧光染色观察裂孔隔膜关键分子Nephrin、Podocin以及骨架蛋白F-actin在足细胞损伤中的分布来评价足细胞损伤.结果:45 mg/L嘌呤霉素作用48 h以及75 ms/L嘌呤霉素作用24 h或48 h,足细胞明显凋亡.结论:嘌呤霉素可以呈时间和剂量依赖件诱导小鼠足细胞凋亡,45 mg/L嘌呤霉素作用 48 h后诱导的足细胞损伤模型稳定、可靠,可应用于足细胞损伤的研究.     

Tbxa2r基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响

目的: 观察足细胞血栓素A2受体（Tbxa2r）基因敲低对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞凋亡的影响。方法: 通过目标序列设计4条siRNA,评价细胞转染效率后,RT PCR检测siRNA干扰效果,蛋白质印迹法检测Tbxa2r蛋白表达,流式细胞仪检测PAN诱导的MPC5足细胞的凋亡情况。结果： 目标序列在转染24 h后几乎没有干扰效果,而在48 h时第3条siRNA(Tbxa2r mus 1677)干扰序列作用效果最好;在干扰72 h后,Tbxa2r蛋白表达量明显降低。PAN刺激48 h后,空白组与阴性对照组MPC5足细胞没有明显的凋亡现象,阳性对照组与Tbxa2r基因敲低PAN组细胞凋亡和坏死现象明显。结论： PAN能促进Tbxa2r基因敲低的足细胞发生凋亡和坏死。     

血管紧张素Ⅱ输注诱导大鼠足突滤孔膜改变增加蛋白尿产生

目的:通过直接输注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的方法观察大鼠尿蛋白及足细胞足突和裂孔结构损伤的变化,分析这些改变与足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达改变的相互关系。方法:Wistar大鼠随机分为两组,AngⅡ组通过皮下埋置渗透性微泵(osmotic minipump)以400 ng/(kg.min)持续给予AngⅡ,对照组由生理盐水代替AngⅡ。大鼠每周检测24 h尿蛋白并收集肾组织标本,连续4周。电镜观察并计算肾小球足突宽度。Nephrin蛋白和mRNA检测分别应用免疫荧光及RT-PCR的方法。结果:AngⅡ组大鼠在第1周即出现蛋白尿,且与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),并且随试验的进展蛋白尿逐渐增加。肾小球形态学显示在第1周时肾小球基底膜被拉伸变薄,裂孔膜宽度增加,nephrin表达增加;至第2周可见足细胞足突数量明显增多,单位长度基底膜上的裂孔数量增加,同时观察到nephrin的表达较对照组明显增加(P<0.05);到第3,4周时,随着足细胞进一步损伤,基底膜出现有不规则增厚和裸露,足突出现部分的融合和足突裂孔膜的消失,nephrin的表达逐渐下降至低于对照组水平。结论:AngⅡ可以直接导致足细胞结构完整性的破坏,引起蛋白尿,并与肾小球内nephrin的表达密切相关。表明在某些肾小球疾病或损伤中,足突裂孔膜结构和蛋白表达异常是蛋白尿产生的主要原因。