非配套脂蛋白试剂的使用性能验证

目的 对4种应用于自动生化分析仪的免疫透射比浊法检测血脂蛋白(a)[LP(a)]试剂进行分析性能验证,并初步应用于临床。方法 在Olympus AU5800自动生化分析仪上对英国RANDOX、浙江夸克、北京利德曼和北京九强公司生产的免疫透射比浊法LP(a)试剂(标为A,B,C,D)进行性能验证, 对4种试剂的精密度、线性范围、准确度、干扰因素(VC,胆红素、血红蛋白、乳糜)进行评估。结果 试剂A,B,C,D的批内CV分别为0.64%～1.18%,3.59%～4.75%,1.33%～3.05%和1.43%～2.01%,批间CV分别为1.04%～1.7%,3.81%～4.93%,2.16%～4.76%和2.33%～3.21%,均小于试剂盒声明不精密度; 线性范围分别为82～923 mg/L(r²=0.997),130～935 mg/L(r²=0.996 4),120～1 025 mg/L(r²=0.992 1)和117～943 mg/L(r²=0.999 5),线性相关均良好。试验浓度内的4种干扰物(VC≤10 mg/dl,Hb≤200 mg/dl,TBIL≤40 mg/dl,TG≤500 mg/dl)对试剂A和试剂D无显著干扰(偏差<±10%),但是VC≥5 mg/dl,TG≥250 mg/dl对试剂B有干扰,TG≥250 mg/dl对试剂C有干扰。4种试剂检测定值血脂质控品,与靶值偏差分别为-8.07%,1.34%,-8.05%和7.38%,可满足临床需求。结论 应用于自动生化分析仪的4种测定LP(a)试剂盒,具有较高的精密度,可满足临床测试要求,但抗干扰能力存在一定差异。     

方法学评价的设计及对葡萄糖试剂盒的评价

目的 对由希森美康(sysmex)生产的葡萄糖测定试剂盒、校准品、日立7170A组成的葡萄糖测定系统进行了精密度、线性、方法学对比以及干扰实验的研究.方法 分别根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准文件EP5-A,EP6-A,EP9-A2对系统进行精密度评价、线性评价、方法学对比实验,并选取临床常见的五种干扰物质对试剂盒进行干扰实验.结果 精密度:批内不精密度<1.0%,总不精密度<1.2%;线性范围:在0～60 mmol/L,r2=0.998 9;方法学对比:与Roche葡萄糖试剂盒/ROCHE校准品/日立7170A系统测定结果的相关系数r=0.998 3.在选定的医学决定水平,相对偏差小于3%;干扰试验:游离胆红素在20 mg/dl以内、结合胆红素在20 mg/dl以内、乳糜在3 000度以内、抗坏血酸在50 mg/dl以内,血红蛋白在500 mg/dl以内对实验结果无明显影响(偏差在3%以内).结论 该系统精密度好,线性达到说明书的规定指标,和比对系统间的偏差较小;常见干扰物对其无明显干扰.     

新生儿苯丙氨酸荧光分析法的建立及其试剂盒的临床评价

目的建立新生儿苯丙氨酸荧光分析法并评价其试剂盒性能。方法以滤纸为载体制备标准品和质控品干血片,琥珀酸盐缓冲液、L-亮氨酸-L-丙氨酸二肽和茚三酮溶液作为反应液,硫酸铜为主要成分的溶液作为增强剂和稳定剂,应用荧光定量法检测新生儿滤纸干血片中的苯丙氨酸,并对方法进行性能评价。比对试验采用线性回归分析,配对计数资料结果的一致性采用Kappa检验分析。结果自研试剂的曲线线性相关系数r大于0.99,检测限不高于0.5mg/dl,标准品的效价比在0.9667～1.0060,批内、批间的变异系数均不高于10%,20mg/dl以内的常见的氨基酸干扰物对检测方法无明显影响;2～8℃保存的试剂可以稳定13个月;与国外试剂比对,回归方程为Y(自研试剂盒)=0.8565X(AniLabsystemsKIT)+0.1448,r=0.9853;不同包装规格的试剂比对检测,线性回归方程Y(96人份/盒)=1.0101X(960人份/盒)-0.0098,r=0.9854。国内外的检测仪器比对检测,回归方程为Y(TAKEEN)=1.011X(1420)-0.0058,r=0.9948;Y(TAKEEN)=1.027X(FLUOROSKAN)-0.011,r=0.9937;参考值定为2.0mg/dl;临床研究评价一致程度百分比可达99.81%。结论自研试剂盒灵敏度高,特异性强,准确度好,精密度好,稳定性良好,与AniLabsystems的试剂盒比对试验检测结果的相关性好,符合率高,不同包装规格的试剂盒分析性能一致,并且适合于国内外的检测仪器,自建方法和自研试剂盒能满足临床新生儿苯丙酮尿症筛查的需要。     

改良后的长春恒晓脂蛋白相关磷脂酶A2活性检测试剂性能验证

目的评价改良后的长春恒晓脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检测试剂在Beckman AU5800自动生化分析仪上的分析性能。方法收集2017年9~10月北京协和医院110例患者及40例表观健康人临床检测剩余血清,分别用于Lp-PLA2方法学比对及参考区间验证。参考CLSI相关文件,评价精密度、线性范围及常见干扰(结合胆红素、游离胆红素、血红蛋白和乳糜)。结果 Lp-PLA2活性测定试剂重复性CV(%)和实验室内不精密度CV(%)分别为1.2%~4.4%和1.5%~5.1%;线性范围为40~550U/L,相关系数(r)为0.998。低Lp-PLA2活性混合血清在试验浓度内的四种干扰物(乳糜≤1 000FTU,游离胆红素≤40mg/dl,结合胆红素≤40mg/dl,血红蛋白≤8g/L)对该试剂无干扰;高Lp-PLA2活性混合血清在试验浓度内的三种干扰物(乳糜≤3 220FTU,游离胆红素≤38.2mg/dl,结合胆红素≤38.2mg/dl)对该试剂无干扰。方法学比对中回归方程的决定系数R2为0.995,相关系数(r)为0.997。该实验室初步临床评估建立的LpPLA2活性的参考区间为68~374U/L。结论改进后的Lp-PLA2活性测定试剂的基本性能明显提高。     

自建新生儿苯丙氨酸荧光定量检测系统的应用评价

目的 为推动国内新生儿苯丙嗣尿症(PKU)筛查技术的发展和新生儿PKU筛查的普及,自建新生儿苯丙氨酸荧光定量检测系统,并对自建系统进行基本的分析性能进行评价.方法 参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件和相关文献,以labsystems配套检测系统作为可溯源参比系统,对自建系统的精密度、灵敏度、线性进行评价,并用临床样本进行比对试验和偏倚评估,回归相关系数大于0.975,偏倚以中国卫生部临检中心苯丙氨酸室间质评的1/4允许系统误差(靶值±30%)作为检测系统可比性的临床接受标准;通过检测1 353例正常新生儿样本,建立参考值,并对引用参考值进行确认.结果 自建检测系统分析内、分析间不精密度均小于15%;检测灵敏度为0.55 mg/dl;在1.00～15.00 mg/dl内,回归系数r=0.999 1;与参比系统比对试验回归方程为Y(自建)=1.007 8X(参比)-0.041 6,r=0.998 7,相对偏倚小于7.50%.参考值可以直接引用2.00 mg/dl作为切值判断.结论 自建新生儿苯丙氨酸荧光定量检测系统的基本性能可以满足临床需要,值得推广应用.     

载脂蛋白 A_Ⅰ、B 的 ELISA 测定法

载脂蛋白的测定有助于了解体内脂肪代谢和动脉粥样硬化的情况.我们建立了载脂蛋白A_I(apoA_I)和载脂蛋白B(apoB)的ELISA 测定法,初步临床应用表明此法有实用价值.一、材料和方法1.apoA_I 和apoB 抗血清和定值血清南京军区总院产品,批号8701.定位血清apoA_I122mg/dl、apoB66mg/dl.2.纯化抗体及酶标抗体apoA_I 及apoB 抗血清经二次硫酸铵沉淀.获得纯化抗体分别称为NA 和     

HPLC法测定尿白蛋白方法的建立和初步临床应用

目的 建立HPLC法测定尿白蛋白(Alb)的方法并做初步临床应用.方法 采用Agilent 4.6 mm×250 mm、5 μm的C18反相柱,优化流动相并选择合适的检测波长,评价该法的各项性能指标;测定46例糖尿病患者尿Alb.结果标准品和尿液Alb均在13.1 min出峰,在1 820 mg/L范围内标准曲线的直线性非常好,r值达到0.999 7,生物检测限为4.2 mg/L;24.5 mg/L和546.9 mg/L浓度时的批内和批间变异系数(CV)分别为3.36%、4.12%和1.93%、1.97%;回收率为96.3%、98.2%和97.5%.在46例糖尿病患者尿中,HPLC法能检出25例(54.3%)的微量白蛋白尿,比免疫散射比浊法(12例,占26.1%)检出更多.结论 HPLC法比免疫法能检出更多的微量白蛋白尿,在目前尚无方便可靠的方法测定尿总自蛋白前,HPLC法可用于常规尿微量白蛋白的测定,也可用于有关糖尿病肾病等的科研用途.     

胸腹水唾液酸测定及临床意义的探讨

本文介绍胸、腹水及血清唾液酸不用亚砷酸盐又不需抽提的改良Aminoff测定法。唾液酸(Sialic acid,下称SA)呈色的腐尔吸光系数为80.3×10~3(光径10mm,波长550nm岛津UV250型)比Aminoff法a=70.7×10~3的灵敏度高,回收率为97.5～102.0%;OCV=1.8%,RCV=3.2%,SA20～200mg/dl成线性。血清正常参考值为54.8±12(2SD)mg/dl(1.77±0.39mmol/L)。作者对不同疾病胸腹腔积液患者,进行胸(腹)水及血清SA同时测定,认为胸(腹)水SA的高低及与血清SA比值的差异有助于恶、良性胸(腹)水的鉴别。     

免疫比浊法测定的胱抑素C试剂盒性能验证和评价

目的对使用免疫比浊法测定的胱抑素C(Cys-C)试剂盒进行实验室验证和评价,以确定该试剂盒分析性能的可靠性,评价其是否符合临床应用需要。方法根据美国临床实验室标准协会颁布的《临床化学设备操作精密度评价核准指南》、《定量分析方法的线性核准指南》、《临床化学干扰试验核准指南》要求,分别对使用免疫比浊法Cys-C试剂盒的准确度、精密度、线性范围、抗干扰物质进行试验。结果准确度测量:高水平质量控制偏差为2.76,低水平质量控制偏差为0.42,偏差10%。精密度测量标准差为0.32,变异系数为0.45%,偏差5%。线性范围:在理论水平0~200范围内,相关系数Y=0.991 7 X+0.468 1,r2=1呈线性关系。干扰物质血红蛋白测量值最高105.5 mg/L,最低102.5 mg/L;胆红素测量值最高104.0 mg/L,最低41.0mg/L;抗坏血酸测量值最高104.0mg/L,最低86.0mg/L;未对试验产生干扰。结论该试验使用的Cys-C检测试剂盒在准确度、精密度、线性范围、抗干扰物质试验等方面分析性能可靠,能满足临床应用需要和保证课题数据准确性的要求。     

胱抑素C测定试剂盒的分析性能评估

目的 评价胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的各项分析性能,了解其是否满足临床要求.方法 评价胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的精密度、灵敏度、特异性、线性范围,并进行方法 学比对.结果 四川新成生物公司的胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)的批内不精密度CV≤3.73%,批间不精密度CV≤4.05%;测定范围0.20～10.00mg/L;灵敏度LLD=0.20mg/L;试剂特异性好;与日本生研株式会社试剂盒比对相关性良好,y=1.0191x+0.022,R2=0.9969.结论 四川新成生物公司的胱抑素C测定试剂盒(免疫比浊法)精密度好、灵敏度高、特异性强、可测定范围广,能够满足临床实验室的需要.     

应用EP10—A对Bayer脱氧吡啶酚试剂盒的评价

目的评价Bayer脱氧吡啶酚(DPD)试剂盒相关指标。方法应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的《定量临床实验室方法初步评价核准指南(EP10-A》对Bayer DPD试剂盒进行初步评价。结果低、中、高三种浓度的DPD质控检测偏差分别为0．94nmol／L,1．25nmol／L和3．88nmol，L．远低于标定偏差的10．70nmol／L,16．40nmol／L和42．00nmol/L；检测三种浓度的DPD质控总不精密度CV分别为4．618％。1．819％和1．175％，均小于NCCIS文件规定的5％。与ELISA法相关良好(r=0．9247)。结论Bayer DPD试剂盒准确度和精密度良好，未见交叉污染、线性漂移等因素有明显影响，性能指标可靠，适合临床实验室使用。     

胃蛋白酶原Ⅰ乳胶增强免疫比浊分析方法学评价

目的:对胃蛋白酶原I检测试剂盒进行方法学初步评价.方法:依据临床和实验室标准协会(CLSI)颁布的<定量临床检验方法的初步评价,批准指南第二版(EP10-A2)>提供的方法,按特定的顺序连续测定低、中、高浓度的质控血清5 d,从而对该试剂盒检测方法进行初步评价.结果:当胃蛋白酶原I低、中、高浓度的质控血清的靶值分别为28.2、48.8、68.3 ng/mL时,PGI测定的线性回归方程为γ=1.074 8x-3.191 3,相关系数为0.999 8:绝对偏倚分别是-0.8、0.1、2.1.ng/mL;总不精密度(CV%)分别为1.32%、1.98%、2.19%.结论:胃蛋白酶原I检测试剂盒检测方法的线性、偏倚、总不精密度和抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件的标准,符合临床应用要求.     

干、湿生化分析仪部分测定值的比对分析和偏倚评估

目的根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件,对日立7600-020湿化学分析系统(以下简称7600-020系统)和美国强生Vitros-950干化学分析系统(以下简称Vitros-950系统)进行方法学比对、相关性分析和预期偏倚评估,为向临床解答2种生化分析系统测定结果差异的可接受性提供实验依据。方法按照NCCLS EP9-A2文件的要求,以7600-020系统为比较方法,以Vitros-950系统为实验方法,对患者样本的尿素(Urea)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)和血糖(Glu)4个较常用的项目进行方法学比对、相关性分析和预期偏倚评估,并判断偏倚是否可以接受。结果Urea、ALT、Glu和CK比对结果的相关系数(r)均高于EP9-A2文件规定的要求(r≥0.975),有较好的相关性;除Urea测定在医学决定水平2.5和6.4 mmol/L处偏倚不可接受外,其余项目的测定结果预期偏倚均未超出要求范围。结论在做好质控的基础上,7600-020系统和Vitros-950系统对ALT、Glu、CK和高浓度的Urea的检测能得到一致的结果,两者无明显差异。     

临床常用线性评价方案的应用比较

目的熟悉美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A线性评价方案的应用;探讨美国临床病理学家协会设备委员会(CAP-IRC)法、EP6-P、EP6-A线性评价方案的区别及适用性。方法按照EP6-A对采用电化学发光法检测的甲胎蛋白(AFP)、速率法检测的尿素和丙氨酸转氨酶(ALT)、免疫比浊法检测的载脂蛋白B(apo B)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)进行线性评估;以尿素为例建立检测线性范围;比较CAP-IRC法、EP6-P、EP6-A方案评价apo B线性结果的异同。结果按照EP6-A,AFP、ALT和HBV DNA(对数)可直接判断呈线性;尿素的真实线性范围为5.305~46.975 mol/L。apo B目测法可判断呈线性;EP6-P判断呈非线性;CAP-IRC法判断呈非线性但在临床可接受范围;EP6-A判断呈非线性,但在一定范围内呈线性。结论推荐临床实验室使用EP6-A线性评价方案对各个检测项目进行线性评价保证检测结果的准确可靠。     

干、湿生化分析仪部分测定值的比对分析和偏倚评估

目的根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP9-A2文件,对日立7600-020湿化学分析系统（以下简称7600-020系统）和美国强生Vitros-950干化学分析系统（以下简称Vitros-950系统）进行方法学比对、相关性分析和预期偏倚评估,为向临床解答2种生化分析系统测定结果差异的可接受性提供实验依据。方法按照NCCLS EP9-A2文件的要求,以7600-020系统为比较方法,以Vitros-950系统为实验方法,对患者样本的尿素（Urea）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）和血糖（Glu）4个较常用的项目进行方法学比对、相关性分析和预期偏倚评估,并判断偏倚是否可以接受。结果Urea、ALT、Glu和CK比对结果的相关系数（r）均高于EP9-A2文件规定的要求（r≥0.975）,有较好的相关性;除Urea测定在医学决定水平2.5和6.4 mmol/L处偏倚不可接受外,其余项目的测定结果预期偏倚均未超出要求范围。结论在做好质控的基础上,7600-020系统和Vitros-950系统对ALT、Glu、CK和高浓度的Urea的检测能得到一致的结果,两者无明显差异。     

胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ的不精密度和线性观察

目的对胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)进行初步方法学评价,为临床应用提供依据。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A及EP10-A2文件提供的方法,对胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ进行初步的评价。结果 PGⅡ的低值样本批内变异系数(CV)为2.05%、批间CV为1.60%、日间CV为3.92%、总CV为4.70%;高值样本批内CV为1.70%、批间CV为1.21%、日间CV为3.79%、总CV为4.32%。当PGⅡ浓度分别为9.6、24.7、39.8μg/L时,相对偏倚分别为-0.18、-0.47、-0.39μg/L,总不精密度分别为4.98%、2.39%、2.71%。测试间的携带污染差异无统计学意义(P>0.05)。线性回归方程为Y=0.975 7X-0.016 8,决定系数(R2)=0.998 7。结论胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ的精密度符合EP5-A文件标准,具有良好的重复性。线性、偏倚、总不精密度及抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件标准,符合临床应用要求,适用于实验室常规测定。     

非均相免疫法测定氨基端前B型钠尿肽的分析性能验证

目的验证非均相免疫法(HIA)测定氨基端前B型钠尿肽(NT-proBNP)的各项性能参数及参考范围并初步应用于临床。方法连续测定10次NT-proBNP的0水平校准品和3次低水平血浆,计算功能灵敏度。采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6-A、EP15-A、EP7-P提供的方案对该方法的线性范围、精密度、干扰进行验证,并与电化学发光法进行比对及偏差评估。测定345名表面健康人及无相关疾病人群的NT-proB-NP,对参考范围进行验证。测定63例慢性心力衰竭患者及急性冠状动脉综合征患者的NT-proBNP水平并评价其分布。结果本方法功能灵敏度为22.3 ng/L;线性范围为45~28 150 ng/L,r=0.998 6;批内不精密度为3.3%~5.2%,总不精密度为5.4%~7.1%;胆红素、血红蛋白、乳糜在试剂说明书提供的浓度对测定均无明显干扰(平均差异均<10%);与电化学发光法比对,相关方程为Y=0.81X-72.9,r=0.999,平均百分偏差为-11.6%。NT-proBNP随年龄增加呈上升趋势,65岁以上各年龄组差异有统计学意义(P均<0.05);各年龄组女性显著高于男性(P=0.015)。结论HIA测定NT-proBNP的各项性能指标良好,符合临床需要。目前各年龄性别组参考范围接近国外人群,适用于本实验室。     

精浆天门冬氨酸氨基转移酶活性检测及方法学评价

目的建立精浆天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性的检测方法及方法学评价。方法根据检测血清AST活性的方法建立检测精浆AST活性的方法。参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的EP5-A和EP6-A文件,观察其精密度、线性检测范围及不同技术人员检测结果之间的差异以评价方法的可接受性。结果低水平样本批内变异系数(CV)为1.93%,批间CV为2.77%,天间CV为3.45%,总CV为4.84%;高水平样本批内CV为0.48%,批间CV为0.53%,天间CV为0.53%,总CV为0.89%。线性检测范围达1 652 U/L。2位技术人员的检测结果差异无统计学意义(P=0.423)。结论通过血清AST检测方法可以建立可接受的精浆AST活性检测方法。     

肌钙蛋白I检测系统评价及临床应用

目的对强生电化学发光系统检测肌钙蛋白I(cTnI)的方法进行评估和初步应用。方法连续测定10次cTnI0水平标准,计算分析灵敏度;用不同浓度低值血浆连续检测10d,检测功能灵敏度;用美国临床实验室标准化委员会EP15-A提供的方案对该方法的线性、不精密度进行研究;最后对标本的稳定性和临床应用进行研究。结果该方法的分析灵敏度为0.036μg/L;功能灵敏度为0.12μg/L;线性范围为0～95.4μg/L,r=0.9996;批内不精密度为1.0%～3.9%,总不精密度为2.0%～4.3%;循证检验医学研究发现血清cTnI假阳性为10.0%(3/30),4℃保存72h不发生变化;临床诊断符合率为97.2%。结论强生电化学发光系统检测cTnI各项性能指标良好,符合要求,系统推荐用肝素锂抗凝血浆进行检测。     

两台仪器检测NT-proBNP结果比对分析

目的通过Cobas h232和Roche Elecsys E170测定N-末端前脑钠肽(NT-proBNP)的方法比对,探讨两台仪器间测定数据是否具有可比性和一致性。方法依据美国国家临床实验室标准委员会EP9-A2文件要求,对两台仪器检测结果进行比对和偏差评估。结果 Cobas h232与Roche Elecsys E170相比较,r2≥0.95,相对偏倚小于12.5%。结论两台仪器测定具有很好的相关性,结果具有可比性。