血管生成素2与肿瘤血管生成及抗血管生成治疗

血管生成素2 (Angiopoietin-2,Ang2)在肿瘤血管生成中扮演重要的角色,近年随着研究的深入,发现这种细胞因子对受体、细胞的影响以及在血管生成过程不同阶段所起的作用愈发复杂,同时,针对Ang2的抗肿瘤治疗,目前也取得了一定的进展.本文对Ang2在肿瘤血管生成及抗血管生成治疗中的作用和机制进行综述.     

Survivin与胶质瘤研究进展

Survivin是凋亡抑制因子蛋白(inhibitor of apoptosis protein.IAP)家族的一个新成员,其N端仅包含一段单一的杆状病毒IAP重复区序列(baculovirus IAP repeat,BIR)而C端无RING(really interesting new gene)指状结构。Survivin在大多数肿瘤组织中表达而在成人终末分化组织不表达。Survivin具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重作用,通过下调Survivin的表达可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖。最近,已有学者开始研究它在脑胶质瘤中的表达,为胶质瘤的诊断和治疗提供了新的方向。     

脑转移瘤血管内皮生长因子与脑水肿和血管形成的关系

目的 研究血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）在脑转移癌中的表达,探讨ＶＥＧＦ与脑水肿和微血管形成的关系。方法 应用免疫组化技术检测１６例脑转移癌组ＶＥＧＦ蛋白表达和微血管计数,通过ＭＲＴ Ｔ２像或ＣＴ扫描估计水肿程度。结果 ＶＥＧＦ阳性１５例,平均表达系数为２．５３,瘤周脑水肿平均系数为２．６９,微血管计数每０．７２３ｍｍ平均为５１．７６个,ＶＥＧＦ染色阳性系数与瘤周脑水肿（ＰＶＢＥ）系数（ｒ＝０     

心肌梗死大鼠血管生成过程中血管生成素1及其Tie2受体的表达**☆

目的：通过检测正常心肌组织及心肌梗死后血管生成素1及其受体Tie2受体 mRNA的表达水平，探讨其在心肌梗死后的血管新生过程的作用。 方法：实验于2006-04/2007-04在北京大学医学部生物化学与分子生物学基因组实验室完成。将40只雄性SD大鼠随机分为急性心肌梗死组和假手术组，急性心肌梗死组通过结扎前降支建立心肌梗死模型，假手术组只穿线不结扎。于术后3，7，14，28 d 四个时间点，每组取5只处死，取心脏左室前壁同一部位，提取总RNA，用RT-PCR的方法，以GAPDH基因为内参，进行半定量分析检测正常心脏及梗死后血管生成素1及Tie2 mRNA的表达；同时用免疫组化的方法检测各时间点梗死区域以及梗死周边区域血管数量。实验过程中动物处置符合动物伦理学标准。 结果：40只大鼠进入结果分析。血管生成素1及Tie2在正常心肌组织中均有所表达。在心肌梗死后的28 d内，血管生成素1维持在相对不变的水平，而Tie2的表达在心肌梗死后3 d略有升高，于7 d后达顶峰，14 d后恢复正常；急性心肌梗死后7 d, 梗死区及梗死周边区域的血管数量均明显增多，并不随时间的延长而改变，维持在同一水平。 结论：心肌梗死后Tie2受体的表达上调，与血管生成的时间相吻合，提示其在心肌梗死后的血管生成和稳定过程中起了一定的作用。     

血管形成素对血脑屏障通透性的影响

酪氨酸激酶受体Tie-2表达于血管内皮细胞（EC）和早期造血细胞．具有免疫球蛋白样环形结构和表皮生长因子同源结构域，曾经被认为是孤儿受体。Davis等1996年首次报道其配体血管形成素（angiopoietin，Ang）-1结合到Tie-2引起受体磷酸化，通过增强EC与血管周围支持细胞联系来促进血管成熟和稳定。     

聚酰胺树形分子高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸诱导血管内皮细胞凋亡*☆

目的：观察聚酰胺树形分子高聚合物作为survivin反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，asODN）传递系统的可行性以及对人脐血管内皮细胞的survivin表达、细胞生长的影响。 方法：实验于2005-05/2006-03在上海交通大学微纳米科学技术研究院微纳制造技术国家重点实验室完成。①将200 μg/L surviving-asODN和3.66 μg/L 聚酰胺制备聚酰胺反义基因复合物，同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照。②透射电镜观察复合物的形态、粒径，zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位，离心法和紫外分光分度仪测定复合物的包封率、载药率和体外DNA释放速度。③将上述两种基因载体复合物转染人脐血管内皮细胞，测定其转染效率；Western blotting检测转染后细胞中survivin蛋白的表达；流式细胞术检测两组细胞的凋亡率。 结果：①成功制备聚酰胺反义基因载体系统聚酰胺-survivin-asODN。该复合物的粒径小于脂质体-survivin-asODN复合物 (P < 0.01)，但zeta电位高于后者（P < 0.05）；两者基因载药率、包封率无显著差异（P > 0.05）；聚酰胺对DNA持续释放14 d，但脂质体只持续5 d。②聚酰胺-survivin-asODN 转染人脐血管内皮细胞的效果强于脂质体-survivin-asODN（P < 0.05），转染后人脐血管内皮细胞siurvivin蛋白的表达低于脂质体复合物（P < 0.05），该细胞的凋亡率高于脂质体复合物（P < 0.05）。 结论：聚酰胺能将Survivin-asODN高效递送到人脐血管内皮细胞，降低survivin蛋白的表达并诱导血管内皮细胞凋亡。     

人星形细胞瘤TGF—α表达与血管形成的研究

目的探讨TCF-α在人脑星形细胞瘤中表达，研究其在肿瘤血管形成中的作用。方法用SP免疫组化法检测50例人脑星形细胞瘤标本中TCF-α蛋白表达；用抗CD34相关抗原单克隆抗体免疫组化染色显示肿瘤组织微血管，并以微血管密度（miemvessel density，MVD）测定肿瘤血管生成。结果实验组50例人脑星形细胞瘤TGF-α表达总阳性率64％（32／50）；总MVD38.88±19．13，显著高于正常脑组织组9．30±3．74（P〈0．01）。随着人脑星形细胞瘤级别增高，MVD数值呈现增高趋势。TGF-α与MVD呈显著线性正相关性（r=0．869，P〈0．01））。结论TGF-α在人脑星形细胞瘤中高表达，可能参与人脑星形细胞瘤的血管形成．     

脑肿瘤的血管生成和抗血管生成治疗

血管生成对原发性脑肿瘤和脑转移瘤的生长、转移起关键性作用。抗血管生成治疗通过对抗肿瘤血管生成 ,切断肿瘤的血供 ,从而遏制肿瘤的生长和转移 ,为难以控制的恶性脑肿瘤提供了一新的治疗策略。多种脑肿瘤 ,特别是原发恶性脑肿瘤是人体血管活性表达最强的肿瘤 ,是最理想的抗血管生成治疗对象。本文对脑肿瘤血管生成及抗血管生成治疗的研究进展做一综述。     

血管内皮细胞特异性生长因子与胶质瘤血管生成

实体性肿瘤是血管依赖性的,肿瘤细胞需要新生血管带来氧和养料及带走代谢产物维持其较高的代谢率,如果肿瘤血管生成不能满足肿瘤生长的需要,肿瘤细胞会发生坏死或凋亡.肿瘤血管生成包括内皮细胞的增殖、迁移、细胞外基质溶解及募集周围细胞形成成熟血管,涉及多种生长因子及细胞因子参与.     

血清血管生成素1水平与急性脑梗死严重程度的相关性

目的 探讨患者血清血管生成素1(Ang-1)水平与急性脑梗死的严重程度的相关性,为临床早期病情评估提供依据.方法 收集西安市第九医院诊断为急性脑梗死的患者为病例组,同时收集本院同期体检中心的健康体检者为对照组.收集所有研究对象的一般临床资料,并测定血清Ang-1水平.病例组分别根据美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分及MRI最大梗死直径分组.比较病例组与对照组一般临床资料的差异.采用Logistic回归分析病例组的发病危险因素.通过ROC曲线评估血清Ang-1水平的诊断价值.采用Spearman相关分析脑梗死严重程度与Ang-1的相关性.结果 病例组患者的吸烟史、高血压病史、糖尿病史及心房纤颤病史的比例高于对照组,而血清Ang-1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).Logistic回归分析显示,糖尿病史及血清Ang-1水平是急性脑梗死的危险因素(P<0.05).ROC曲线分析显示血清Ang-1水平在诊断急性脑梗死患者时的曲线下面积为0.791(95%CI=0.751~0.830).NIHSS评分为轻度、中度及重度组患者的血清Ang-1水平分别为(1.65±0.22)ng/ml,(1.45±0.24)ng/ml和(1.26±0.27)ng/ml,差异有统计学意义(F=47.940,P<0.01).MRI显示大梗死、中梗死及小梗死组患者的血清Ang-1水平分别为(1.38±0.23)ng/ml,(1.49±0.30)ng/ml和(1.71±0.23)ng/ml,差异有统计学意义(F=40.911,P<0.01).Spearman相关性分析显示急性脑梗死患者入院时NIHSS评分及MRI梗死最大直径与血清Ang-1水平均呈负相关(r=-0.498,-0.459;P<0.01).结论 脑梗死患者的血清Ang-1水平下降,并与脑梗死的严重程度密切相关.     

人脑胶质瘤中Survivin、Ki-67的表达及其临床意义

目的探讨Survivin和Ki-67抗原在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测10倒正常脑组织和68例人脑胶质瘤中Survivin和Ki-67的表达。结果Survivin和Ki-67在正常脑组织中均不表达,而在各级别的人脑胶质瘤中均有表达,差异极显著（P％0.01）,Survivin和Ki-67的表达在高级别胶质瘤中显著高于低级别胶质瘤（P％0．01）,且Survivin和Ki-67的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论Ki-67可以作为评估胶质瘤细胞增殖的良好指标,Survivin和Ki-67的表达可以判断胶质瘤的恶性程度,为临床病理分级提供有意义的依据。     

脑胶质瘤中细胞凋亡及相关基因Fas、Survivin表达研究

目的探讨脑胶质瘤中细胞凋亡及Fas、Survivin在凋亡中的意义.方法应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated-deoxy uridine-5'- triphosphate-X nick end labeling, TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物 (strept avidin-biotin peroxidase complex, SABC)法检测Fas、Survivin和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA).结果凋亡指数(apoptosis index, AI)随胶质瘤的恶性程度增高而增高(P<0.001).AI/PI则随着胶质瘤级别增高而减小(P<0.001).Fas阳性组的AI较Fas阴性组显著增高(P<0.01).Survivin阳性组的AI较Survivin阴性组显著减低(P<0.05).低AI(<0.94)组与高AI(>0.94)组的术后1年生存率的差异有显著意义(P<0.05).死亡组与存活组的AI差异无显著意义(P=0.34),而两组的AI/PI有显著差异(P<0.001).多因素Logistic回归模型分析显示,病理、Fas、Survivin、AI、AI/PI和手术与预后相关(P<0.01).结论 AI可作提示预后的指标,对脑胶质瘤的生物学行为及肿瘤分级有指导意义.肿瘤级别较低、Fas 阳性、Survivin阴性、AI<0.94%、AI/PI较大、手术全切的患者预后较好.     

siRNA对人脑胶质瘤细胞Survivin基因表达的影响

目的 探讨siRNA敲除Survivin基因的可行性,并观察其对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响.方法 采用人工合成的小干扰RNA(siRNA)体外阻抑人脑胶质瘤细胞T98和SF767 Survivin基因的表达,即时定量PCR方法检测Survivin mRNA表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 Survivin siRNA转染后24 h,T98、SF767细胞中Survivin mRNA表达水平同阴性对照相比下调分别达92.6%、89.5%,48 h后表达量则下降了 80.1%、67.6%.T98细胞在干扰后24、48 h平均凋亡率分别达50.2%、38.4%,SF767分别达40.1%、25.6%,同阴性对照相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 针对Survivin的siRNA Oligo能有效抑制Survivin基因的表达,并诱导细胞凋亡,为RNA干扰技术用于胶质瘤的临床治疗打下了基础.

Abstract：

Objective This study was to investigate the feasibility ofknockdown of Survivin gene with small interfering RNA and to observe the apoptosis in gliomas which was influenced by siRNA.Methods Survivin specific siRNA oligonucleotides were designed and synthesized artificially.This siRNA were transfected into human glioma cells T98 and SF767 to inhibit the expression of Survivin RNA in vitro.The mRNA level of Survivin was detected by real- time quantitative polymerase chain reaction (PCR) and the apoptosis of cells was assayed by flow cytometry (FCM).Methods The expression of Survivin mRNA in siRNA- transfected samples decreased by 92.6% and 89.5% in T98,SF767 cells respectively in 24 hours after transfected with siRNA oligos.The expression amount was declined by 80.1% and 67.6% in 48 hours after RNAi.The apoptosis rate of T98 cells was 50.2% in 24 hours after interfere,and was 38.4% in 48 hours.The apoptosis rate of SF757 cells were 40.1% and 25.6% respectively.There was a significant difference between the RNAi cells and negative controls(P ＜0.01 ).ConclusionThe specific siRNA oligo which was aim to Survivin could knockdown the expression of Survivin mRNA,and induce apoptosis in human glioma cells.The experiment had made the foundation of the clinical RNA interfering technique.     

Survivin、PTEN蛋白在脑星形细胞瘤中的表达及其相关性

目的 探讨Survivin、PTEN蛋白在脑星形细胞瘤中的表达及其相关性.方法 应用免疫组化SP法,检测65例脑星形细胞瘤患者的肿瘤标本中Survivin、PTEN蛋白的表达.结果 不同级别间的脑星形细胞瘤Survivin 蛋白的表达阳性率差异有统计学意义,Ⅱ级显著低于Ⅲ级与Ⅳ级(均P＜0.05);不同级别间PTEN蛋白表达的阳性率差异有统计学意义,Ⅱ级显著高于Ⅲ级与Ⅳ级(P＜0.05,P＜0.001);两者在脑星形细胞瘤中的表达呈负相关(r=-0.5367,P＝0.002).结论 Survivin、PTEN蛋白的表达与脑星形细胞瘤形成有关,抑癌基因PTEN的突变与Survivin基因的表达可能在星形细胞瘤的恶性进展中起协同作用.     

重组人促红细胞生成素对大鼠颅脑损伤后 Survivin表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(r-HuEPO)对大鼠颅脑损伤后伤侧脑组织核因子-κB(NF-κB)和Survivin表达的影响,探讨其脑保护机制.方法 选取78只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(6只)、颅脑损伤对照组(36只)及r-HuEPO治疗组(36只).采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型,应用Epics XL流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用免疫组织化学SP法检测Survjvin和NF-κB表达的变化.结果 与假手术组相比,颅脑损伤对照组的细胞凋亡率及Survivin、NF-κB的表达水平明显升高(P＜0.01);与颅脑损伤对照组相比,r-HuEPO治疗组除在伤后6 h和7 d外,其它各时相点的细胞凋亡率均明显降低(P＜0.05),且在伤后1、2、3、5d的Survivin表达及伤后各时间点的NF-κB表达均较明显升高(P＜0.05).结论 r-HuEPO可促进NF-κB及抗凋亡因子Survivin的表达而减少颅脑损伤后的细胞凋亡,发挥脑保护作用.     

白细胞介素24对大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)基因对荷瘤大鼠脑胶质瘤细胞Survivin表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只,分别接种IL-24/C6细胞(转染IL-24基因的C6鼠脑胶质瘤细胞)和C6鼠脑胶质瘤细胞。接种21 d后,采用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测两组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白的表达,采用流式细胞学检测肿瘤细胞凋亡率。结果 RT-PCR检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.01)。Western blot及免疫组化法检测显示:实验组大鼠脑肿瘤组织中Survivin的蛋白水平明显低于对照组(P<0.01)。流式细胞学结果显示:实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。结论 IL-24可抑制大鼠胶质瘤中Survivin mRNA和蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长。     

NF-κB与Survivin基因在脑胶质瘤中的表达

目的探讨细胞核因子KB和Survivin基因在胶质瘤中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法分别采用原位杂交和免疫组织化学S—P法检测80例星形细胞瘤患者和10例正常脑组织Survivin mRNA和NF—KB的表达，用末端转移标记法（TUNEL）检测肿瘤组织的凋亡并计算其凋亡指数（AI）。结果星形细胞瘤组织中Survivin mRNA的阳性表达率明显高于对照组（P〈0．01），高度恶性组的阳性率明显高于低度恶性组（P〈0．01）；AI在星形细胞瘤中明显高于对照组（P〈0．01），而Survivin mRNA阳性组低于阴性组（P〈0．01）；NF—kB在星形细胞瘤中的表达明显高于对照组（P〈0．01），且Survivin mRNA阳性组明显高于阴性组（P〈0．05）。结论NF-kB与Survivin在星形细胞瘤中的表达密切相关，NF-kB的过表达可能通过上调Survivin mRNA的表达抑制星形细胞瘤细胞的凋亡．从而在肿瘤的发生、发展和治疗中发挥重要作用。     

重组人生长激素对大鼠脑缺血/再灌注损伤后缺血侧大脑皮质Survivin和Caspase-3表达的影响

目的 观察重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对大鼠脑缺血/再灌注损伤后缺血侧大脑皮质存活素(Survivin)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3 (Caspase-3)表达的影响.方法 采用大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,将72只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、对照组和治疗组.分别于模型制作成功后1、3、5、7 d处死大鼠,采用连续切片免疫组织化学技术分别检测缺血侧大脑皮质Survivin 和Caspase-3的表达.结果 治疗组Survivin表达较对照组明显增多,而Caspase-3表达较对照组显著减少.结论 脑缺血/再灌注损伤早期应用rhGH可上调Survivin表达及下调Caspase-3表达,抑制神经元的凋亡.     

脑胶质瘤的凋亡和相关基因Survivin的表达

目的明确Survivin在脑胶质瘤中的表达和细胞凋亡及微血管密度的相关性。方法检测Survivin在91例脑胶质瘤、20例颅内良性肿瘤的表达用免疫组化法,用流式细胞仪检测其表达和凋亡的关系。用CD34标记及图像定量分析微血管密度。结果Survivin在脑胶质瘤(WHO分级)中阳性率35?91(38.5%),随着脑胶质瘤的恶性程度增高,检出Survivin的阳性率就越高,其中I～II级为6?41(14.6%),III级为12?27(44.4%),IV级为17?23(73.9%)。III级以上恶性脑胶质瘤Survivin表达阳性显著高于II级以下脑胶质瘤(P<0.01)。20例颅内良性肿瘤仅1例表达(5%);Survivin表达强度和CD34标记及图像定量分析的微血管密度呈显著正相关(P<0.05);Survivin阳性比Survivin阴性患者术后生存期缩短(P<0.05)。结论Survivin对脑胶质瘤发生、恶化可能和抑制细胞凋亡、肿瘤血管的形成起重要的作用。     

Survivin、VEGF、MVD的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系

目的探讨凋亡抑制基因Survivin、血管内皮生长因子（VEGF）、微血管密度（MVD）的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系。方法采用免疫组化S-P法检测上述三者在50例垂体瘤中的表达。结果侵袭组和非侵袭组的Survivin、VEGF、MVD表达均有显著性差异,Survivin的高表达将直接导致血管发生显著增强,其高表达与肿瘤细胞的侵袭性呈正相关．VEGF具有促进肿瘤新生血管形成的作用,MVD则是血管形成的量化指标。结论Survivin、MVD、VEGF可作为判断垂体腺瘤侵袭性和评估预后的良好生物学指标。