抗雄激素条件下癌相关成纤维细胞对前列腺癌LNCaP细胞增殖的影响

目的体外研究抗雄激素条件下癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞增殖能力的影响。方法体外原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs,并用抗雄激素制剂氟他胺(Flutamide)进行处理,制备出条件培养液CAFs-Flu-CM。CAFs原代培养液制备出另一条件培养液CAFs-CM作为对照研究。观察LNCaP细胞在RPMI-1640培养液、CAFs-CM培养液和CAFs-Flu-CM培养液中的生长增殖能力和差异性。结果与RPMI-1640培养液培养的LNCaP细胞相比,10-6mol/L Flutamide可抑制其生长(76.55±7.1 vs 114.51±9.8,P<0.05);浓度为0.75g/L的CAFs-CM却可显著提高LNCaP细胞的增殖能力(237.26±18.3 vs 114.51±9.8,P<0.05)。经10-6mol/L Flutamide处理后,CAFs-Flu-CM刺激LNCaP细胞增殖的能力明显减弱(32.73±5.6 vs 237.26±18.3,P<0.05)。结论源于人前列腺癌基质的CAFs可提高LNCaP细胞的增殖能力,但经抗雄制剂处理后,CAFs功能受到干扰,刺激LNCaP细胞增殖的能力明显减弱。联合靶向CAFs的肿瘤治疗策略可能会提高前列腺癌内分泌治疗的有效性,可作为临床治疗前列腺癌新的靶点。     

胃癌相关成纤维细胞及人胃黏膜成纤维细胞生物学特性比较

目的 观察胃癌相关成纤维细胞(GCAF)及人胃黏膜成纤维细胞(HGMF)生物学特性的差异.方法 植块法原代培养和鉴定GCAF及HGMF.选择第3代的GCAF及HGMF,观察两种细胞光镜和透射电镜下的形态特点;CCK-8法检测细胞增殖活性;BCA法检测细胞总蛋白;流式细胞术检测细胞周期.每组实验重复3次,计算平均值进行比较.结果 与HGMF对比,光镜下GCAF胞体变大,细胞不规则,多见大胞体细胞、双核及多核细胞;电镜下可见畸形核,多个核仁,核浆比增加,线粒体、滑面内质网增多.GCAF增殖活性在第2、4、5、6、7天明显增强(P＜0.05);1×106个GCAF和HGMF蛋白浓度分别为(1.0018±0.0940)g/L和(0.7688±0.0441)g/L(P＜0.01);GCAF和HGMF的增殖指数分别为(42.0200±2.7314)%和(35.2520±4.4368)%(P＜0.05);两种细胞的SPF分别为(19.5040±2.7944)%和(9.3180±2.2068)%(P＜0.01).结论 HGMF和GCAF不仅在形态学上存在较大差异,GCAF的增殖能力、蛋白合成能力以及细胞周期活性均高于HGMF.     

人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。     

癌相关成纤维细胞外泌体微小RNA-520e通过Hippo通路增强前列腺癌PC-3细胞多西他赛耐药性

目的:探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-520e对前列腺癌细胞多西他赛耐药性的影响及其机制。方法:2019年5月至2019年12月,从福建医科大学附属第一医院泌尿外科前列腺癌手术患者癌旁组织获取原代CAFs,提取并鉴定CAFs外泌体后,将其与PC-3细胞共培养,细胞计数试剂盒(CCK-8)...     

癌相关成纤维细胞在乳腺癌转移及耐药作用的研究进展

目的 总结癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）在乳腺癌侵袭转移及耐药方面的最新研究进展及相关机制,以寻求乳腺癌转移及耐药患者的最佳治疗策略。方法 检索近年来有关乳腺癌中CAFs研究的文献并进行综述。结果 CAF是肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）中的主要基质细胞,通过改变TME从而改变CAFs的生物学特性,诱导乳腺癌细胞的生长和侵袭;乳腺癌中的CAFs通过与炎性因子的相互作用,以及促进转移前生态位的形成来促进乳腺癌细胞的侵袭及转移,并且CAFs通过分泌各种细胞因子介导乳腺癌的化疗耐药、靶向耐药、内分泌耐药以及放射抗性。结论 目前,在乳腺癌中CAFs的相关研究已取得一些进展,但离临床应用还有一定差距。CAFs具有多种功能表型,因此在研究新的抗CAFs治疗策略时,需确定和表征特定的CAFs亚型。且已有研究证明将CAFs作为乳腺癌治疗的特异性靶标具有巨大潜力,但CAFs仍缺乏特异性的生物学标志物。因此深入了解CAFs的生物学特性及其异质性,可为开发靶向CAFs的药物提供可靠的理论依据。     

癌相关成纤维细胞及其在胃肠道肿瘤演进中的作用

目的了解癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）及其在胃肠道肿瘤演进中的作用。方法查阅国内外近年来有关CAFs及其在胃肠道肿瘤演进中作用的文献并做综述。结果CAFs是肿瘤微环境中最多且最重要的基质细胞,在胃肠道肿瘤中,CAFs通过分泌各种细胞因子使细胞微环境稳态失衡,促进肿瘤代谢的重构和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的重塑,进而促进肿瘤细胞生成、增殖、侵袭和转移。结论CAFs在胃肠道肿瘤生成演进中的重要作用使得其自身及其分泌的众多具有相对特异性的分子物质成为预后判断及靶向治疗的新目标,这为胃肠道肿瘤及其他肿瘤的综合诊疗提供了新思路。     

人结肠癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性

目的 探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异.方法 采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养;选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量.结果 结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达;与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强;ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137) μg/L和(1.499±0.151) μg/L(P ＜0.01),TGF-β分别为(331.203±12.203) ng/L和(315.391±12.998) ng/L(P＜0.01),VEGF分别为(17.216±0.632) ng/L和(14.887 ±0.661) ng/L(P＜0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192) μg/L和(1.436±0.102) μg/L(P ＜0.01).结论 通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs;两者在形态结构、增殖活性和蛋白表达等方面差异有统计学意义,这些差异可能是人结肠CAFs发挥其促结肠癌发生发展作用的生物学基础.     

雄激素非依赖性前列腺癌发生的机制

转移性前列腺癌依然是潜在的致死性肿瘤。虽然雄激素剥夺性治疗（androgen deprivation therapy,ADT）至今仍被认为是前列腺癌最为有效的治疗手段,但大多数患者会最终发展成激素非依赖性前列腺癌而死亡。众所周知,引起雄激素受体（andro-gen-independent,AR）活化的机制在激素非依赖性前列腺癌发生过程中发挥着十分重要的作用。最新研究表明,癌干细胞（canc-er stem cells,CSC）或癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）也会促进激素非依赖性前列腺癌的进展。鉴于前列腺癌向激素非依赖性发展途径的多样性,可以想象,在改善患者生存方面取得的真正进展必将依赖于针对各种雄激素非依赖性进展途径的联合治疗。因此,本文就前列腺癌向激素非依赖性进展的相关潜在机制作一综述。     

肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源树突状细胞分化的影响

目的研究肝癌相关成纤维细胞(hCAF)在单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)分化过程中所起到的作用。方法采用酶消化法从肝癌组织中分离培养获得人hCAF;采用密度梯度离心法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经密度梯度离心及磁珠分离法从健康人外周血浓缩白细胞中获得CD14+Mo。hCAF-CD14+Mo(1∶10)和CD14+Mo细胞在第1日及第4日均加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(20 ng/ml)和白细胞介素4(20 ng/ml),共诱导6 d。两组细胞分为两份,一半加入脂多糖(LPS)200 ng/ml刺激3 d,另一半不加入LPS作为对照。最后细胞共分为4组:hCAF-Mo组、hCAF-Mo+LPS组、不成熟DC(iDC)组及成熟DC(mDC)组。采用倒置荧光显微镜观察4组细胞的形态变化。各组细胞分为两部分,一部分细胞采用流式细胞术检测细胞表面分子CD83、CD80、CD1a的表达情况,另一部分细胞分别与预染CFSE的淋巴细胞共培养5 d,采用流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况。结果倒置显微镜结果显示在hCAF干扰下Mo不能分化为DC。CD83、CD1a、CD80的表达在iDC组分别为(3.2±0.7)%、(61.7±8.4)%、(30.1±0.9)%,mDC组分别为(80.1±2.8)%、(83.2±6.0)%、(96.1±1.9)%,hCAF-Mo组分别为(1.6±0.9)%、(1.8±0.9)%、(16.0±3.2)%,hCAF-Mo+LPS组分别为(9.0±1.2)%、(1.1±0.4)%、(58.4±3.6)%。hCAF-Mo组与iDC组的CD1a、CD80表达差异均有统计学意义(均为P0.01)。iDC组的CD83表达极低,因此hCAF-Mo组与iDC组的CD83表达差异没有统计学意义(P0.05)。hCAF-Mo+LPS组与mDC组的3种表型表达差异均有统计学意义(均为P0.01)。iDC组的T淋巴细胞增殖率为(3.3±0.9)%,mDC组为(34.5±7.3)%,hCAF-Mo组为(5.3±1.2)%,hCAF-Mo+LPS组为(7.0±1.2)%。与iDC组相比,mDC组能有效地刺激T淋巴细胞增殖。hCAF-Mo组和hCAF-Mo+LPS组刺激T淋巴细胞增殖的能力均较弱,与mDC组相比差异有统计学意义(均为P0.01)。结论 hCAF可明显抑制Mo分化成DC,在肝癌的免疫逃逸过程中发挥重要的作用。     

瘢痕形成对成纤维细胞生长因子生物学行为的影响

目的 探讨成纤维细胞生长因子(FGF)对瘢痕生物学行为的影响及其对瘢痕形成和增生的作用机制.方法 对28个瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞标本进行体外培养,采用倒置显微镜、噻唑蓝(MTT)测定、流式细胞术等方法进行观察、分析,探讨FGF对瘢痕生物学行为的影响.结果 测定结果显示,与相应的对照组比较,加入FGF后均对细胞起明显的促增殖作用(P＜0.05).结论 FGF对成纤维细胞的生长趋势与增殖活性有明显的促进作用,刺激了胶原纤维的合成、增生和沉积.     

雄激素非依赖性前列腺癌的治疗进展

前列腺癌是男性泌尿生殖系常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率虽较低,但近年来随着人口老龄化及生活条件的改善,发病率有明显增加的趋势。几乎所有一开始对内分泌治疗敏感的前列腺癌最终都将发展成雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)。AIPC是指对内分泌治疗无反应或内分泌治疗后反而促进疾病进展,导致不可逆的临床进展恶化,直至患者死亡。有关AIPC的发病机制以及治疗策略仍缺乏统一的认识,现就此作一综述。     

Incidence of Lymph Node Metastasis and its Impact on Long-term Prognosis in Clinically Localized Prostate Cancer

Background: Pelvic lymph node dissection (PLND) is an important staging method for men with clinically localized prostate cancer. We report our experience with staging PLND and the impact of lymph node metastasis on long-term prognosis.
Methods: One hundred forty-eight consecutive patients who underwent staging PLND for clinically localized prostate cancer were retrospectively studied. Patients were evaluated for the presence and number of lymph node metastases, treatment (prostatectomy vs. radiotherapy), and endocrine therapy, and analyzed with respect to disease progression and survival. The mean follow-up period was 52.9 months (range, 2.3 to 165.8 months).
Results: Thirty-two patients (21.6%) had pelvic lymph node metastases, the incidence of which markedly decreased from 32.3% in 1982 to 1987 to 6.7% in 1994 to 1997. The intervals to disease progression and cancer death were significantly shorter in patients with positive lymph nodes ( P < 0.001). In stage D1 disease, patients who underwent a radical prostatectomy tended to be free of progression longer than those receiving radiotherapy or conservative therapy ( P = 0.0546). Other factors, such as early endocrine therapy, the extent of lymph node involvement and the Gleason score of the primary tumor did not predict disease progression or survival.
Conclusion: These data suggest a decreasing trend in the incidence of lymph node metastasis in the PSA era. Although longer disease-free intervals were observed in radical prostatectomy-treated patients, the impact of an aggressive approach to stage D1 disease awaits further studies.     

Brain Metastasis from Prostate Cancer: A Case Report

Brain metastases from prostate cancer are rare in postmortem examinations, and even rarer in clinical series. We report an unusual case of brain metastasis from prostate cancer confirmed by antemortem diagnosis in a 72-year-old man. The metastatic brain tumor was surgically resected and the patient was kept stable for more than 19 months after diagnosis of the brain metastasis.     

苦参碱对雄激素依赖性前列腺癌细胞的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine）对雄激素依赖性前列腺癌细胞株（LNCaP）凋亡及前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）表达的影响。方法：分别用0.5g／L、1.0g／L、1.5g／L、2.0g／L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12h、24h、36h后MTT法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞凋亡的变化;24h后Western印迹法检测细胞内Bel-2和Bax的表达;12h、24h、36h后化学发光法检测LNCaP细胞培养液中PSA的变化。结果：苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。苦参碱诱导LNCaP细胞凋亡,各浓度组凋亡细胞比例均显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;LNCaP细胞内Bcl-2含量呈浓度依赖性下降,Bax含量呈浓度依赖性升高（P〈0.01）;LNCaP细胞培养液中PSA的表达显著下降（P均〈0.05）。结论：苦参碱能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,诱导其凋亡,并抑制PSA的表达。     

金属基质蛋白酶2和9在前列腺癌中表达的意义

目的探讨金属基质蛋白酶2(MMP2)和MMP9在前列腺癌中表达的意义及和临床的关系。方法采用免疫组化的方法对51例前列腺癌手术标本及10例前列腺增生手术标本进行MMP2、MMP9检测及分析。结果在10例前列腺增生病例中只有2例MMP2和MMP9表达阳性,与前列腺癌中的表达具有差异显著性;并且MMP2和MMP9的表达与前列腺癌的病理分级、Gleason评分及转移密切相关,但与血清前列腺特异性抗原(PSA)水平无关。结论MMP2和MMP9的表达可能在前列腺癌的发展及转移过程中起重要作用。     

黄酮类化合物对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用

黄酮类化合物是广泛存在于植物中的一类多酚类化合物,具有广泛的生物活性,近年来研究发现其在抗肿瘤方面具有显著疗效,主要表现在抗细胞增殖、诱导细胞凋亡、干预细胞信号转导和增强抑癌基因活性及抑制癌基因表达等方面。本文就黄酮类化合物诱导前列腺癌细胞凋亡的作用机制进行综述。     

前列腺癌组织中前列腺癌抗原-1的表达及临床意义

目的:探讨PCa组织中前列腺癌抗原-1(PCA-1)的表达及其临床意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测45例PCa组织、30例前列腺高分级上皮样内瘤样病变组织(HG-PIN)、43例BPH组织和39例其他肿瘤组织标本中PCA-1 mRNA的表达。免疫组织化学检测不同前列腺组织中PCA-1蛋白的表达。结果:PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1 mRNA的阳性表达率分别为80.0%(36/45)和60.0%(18/30),BPH组织及其他肿瘤组织中均未见PCA-1 mRNA的表达。PCA-1 mRNA表达与PCa的临床病理参数之间无明显相关性,差异均无统计学意义(P>0.05)。PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1蛋白的阳性表达率分别为75.6%(34/45)和50.0%(15/30),BPH组织及其他肿瘤组织中未见PCA-1蛋白阳性表达。结论:PCA-1仅在PCa组织中表达,且与PCa的临床病理参数无关,有可能作为特异性的肿瘤标志物对PCa进行早期诊断。     

前列腺癌组织中前列腺癌抗原-1的表达及临床意义

目的：探讨PCa组织中前列腺癌抗原-1（PCA-1）的表达及其临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测45例PCa组织、30例前列腺高分级上皮样内瘤样病变组织（HG-PIN）、43例BPH组织和39例其他肿瘤组织标本中PCA-1 mRNA的表达。免疫组织化学检测不同前列腺组织中PCA-1蛋白的表达。结果：PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1 mRNA的阳性表达率分别为80.0%（36/45）和60.0%（18/30）,BPH组织及其他肿瘤组织中均未见PCA-1 mRNA的表达。PCA-1 mRNA表达与PCa的临床病理参数之间无明显相关性,差异均无统计学意义（P〉0.05）。PCa与HG-PIN组织标本中PCA-1蛋白的阳性表达率分别为75.6%（34/45）和50.0%（15/30）,BPH组织及其他肿瘤组织中未见PCA-1蛋白阳性表达。结论：PCA-1仅在PCa组织中表达,且与PCa的临床病理参数无关,有可能作为特异性的肿瘤标志物对PCa进行早期诊断。     

前列腺癌细胞株Du145裸鼠胫骨部骨肿瘤转移模型的建立

目的:建立一种裸鼠前列腺癌骨转移模型,观察肿瘤局部生长和远处转移情况,并进一步探讨其应用价值。方法:9只6周龄雄性BALB/C裸鼠麻醉后,将前肢及左后肢固定,以1 m l TB针筒-29G针头从胫骨头关节窝,刺入骨髓腔缓缓注入人前列腺癌Du145细胞悬液30μl(约5×106个细胞)至骨髓腔,以建立前列腺癌骨转移模型。观察裸鼠生命体征变化。于濒死状态下处死,取右后肢及其附近淋巴结、肺脏和肝脏等标本,用40 m l/L甲醛固定、石蜡包埋、苏木精-伊红染色后显微镜下观察。结果:9只裸鼠中有6只模型建立成功。接种后平均48 d裸鼠出现跛行现象,右后肢胫骨部可触及米粒大小的包块,质硬,进一步发展至小鼠行走障碍。55 d后出现恶病质,解剖后发现右后肢胫骨部骨质疏松,局部有“腐肉”样组织突出髓腔,填塞肌肉间隙,病理证实为肿瘤组织。肝脏泛黄、被膜皱缩,镜下呈急性重型肝炎的病理改变。结论:胫骨内注射细胞悬液制作裸鼠前列腺癌骨转移模型较好地模拟了人前列腺癌在骨骼微环境中的生长及转归情况,是研究前列腺肿瘤骨转移的适宜模型。     

Human Prostate Fibroblasts Induce Growth and Confer Castration Resistance and Metastatic Potential in LNCaP Cells

Background

The tumor microenvironment is important for progressive and metastatic disease.

Objective

To study the hypothesis that prostate fibroblasts have differential ability to induce castration-resistant prostate cancer (PCa) and metastatic progression and whether this effect might vary depending on the zonal origin of the fibroblast.

Design, setting, and participants

Human prostate fibroblasts from the peripheral (PZ), transition (TZ) and central (CZ) zones of radical prostatectomy specimens (n = 13) were isolated and compared for their ability to promote androgen independence and metastatic progression in androgen-responsive PCa lymph node carcinoma of the prostate (LNCaP) cells in vivo.

Interventions

By coinoculating marginally tumorigenic LNCaP cells with PZ or TZ and by altering host hormonal milieu, a series of tumorigenic and metastatic LNCaP epithelial sublines–P4, P4-2 (derivatives from interaction with PZ), T4, and T4-2 (derivatives from interaction with TZ)–were established and characterized.

Measurements

In vivo and in vitro evaluation of induction of tumor growth and metastatic potential.

Results and limitations

1) LNCaP sublines were permanently altered in their cytogenetic and biologic profiles after cellular interaction with prostate stromal fibroblasts. LNCaP sublines grew faster under anchorage-dependent and -independent conditions, expressed 1–12-fold more prostate-specific antigen in vitro than LNCaP cells, and gained metastatic potential; 2) zonal differences of stromal fibroblasts in their ability to induce the growth and progression of LNCaP tumors as xenografts in mice may exist but need further analysis; 3) PZ-conditioned medium induced more anchorage-independent growth of LNCaP cells in vitro. TZ had a higher growth rate and were more sensitive to dihydrotestosterone.

Conclusions

We demonstrate that prostate fibroblasts have growth inductive potential on PCa cells and affect their subsequent progression to castration resistance and development of a metastatic phenotype.